蔬菜水果中多菌靈的快速檢測膠體金免疫層析法國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布1本方法規(guī)定了蔬菜水果中多菌靈的膠體金免疫層析快速檢測方法。橙等蔬菜水果(不適用于豌豆、腌制小黃瓜)中多菌靈殘留的快速定性測定。本方法采用競爭抑制免疫層析法原理。試樣中的多菌靈殘留經提取后與膠體金標記的多菌靈特異性抗體結合，抑制抗體和檢測線(T線)上抗原的結合，從而導致T線顏色深淺的變化。通過T線與控制線(C線)顏色深淺比較，對試樣中多菌靈進行定性判定。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。3.1.2氯化鈉(NaCl)。多菌靈參考物質的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量見表1,純度≥99%。中文名稱CAS號多菌靈樣品提取液(PBS緩沖液，含5%體積分數甲醇):準確稱取8.50g氯化鈉(3.1.2)、5.54g十二水合磷酸氫二鈉(3.1.3)、0.26g二水合磷酸二氫鈉(3.1.4),用水溶解后轉移至1000mL容量瓶中，再準確加入50mL甲醇(3.1.1),用水定容至1000mL。23.4.1多菌靈標準儲備液(50mg/L):精密稱取多菌靈參考物質(3.2)5.0mg(精確至0.01mg),置于成濃度為50mg/L的多菌靈標準儲備液。-20℃冷凍避光保存，有效期6個月。環(huán)境溫度10℃~37℃。取具有代表性的蔬菜水果試樣不少于100g,取樣部位參考GB2763—2021《食品安全國家標準標記。留樣置于-20℃下避光保存。準確稱取6.1中混勻的試樣1.0g(精確至0.01g)于15mL離心管，加入3mL提取液(3.3),渦旋振蕩1min,靜置3min,將上清液按照表2的方案用提取液(3.3)進行限量/(mg/kg)提取液(μL)葉芥菜120(3.4.1)3表2不同基質稀釋比例和加標質控樣品配制方法(續(xù))限量/(mg/kg)提取液(μL)240(3.4.1)360(3.4.1)5注：表中數據為推薦的稀釋比例，實際操作中可按照試劑盒說明書操(6.2)于金標微孔中，用移液器上下抽吸5次～10次至微孔試劑混合均勻，室溫下孵育3min。將試紙(6.2)于檢測卡的加樣孔中，室溫下反應5mi稱取空白試樣，按照6.2和6.3的步驟操作。進行對應濃度添加，作為加標質控試樣(見表2),按照6.2和6.3的步驟同法操作。采用目視法，通過對比控制線(C線)和檢測線(T線)的顏色深淺進行結果判定。目視結果示意圖控制線(C線)顯色，檢測線(T線)顏色比控制線(C線)顏色深或者檢測線(T線)顏色與控制線4(C線)顏色相當，表示試樣中多菌靈含量低于方法檢出限，視為陰性。無效陰性陽性圖1目視結果示意圖7.4質控試驗要求空白試驗測定結果應為陰性，加標質控試驗測定結果應為陽性。當測定結果為陽性時，應采用參比方法對對結果進行確證。9性能指標9.1檢出限西瓜為2mg/kg,番茄、梨為3mg/kg,結球萵苣、橙為5mg/kg。靈敏度≥98%。9.3交叉反應率與苯菌靈和丙硫多菌靈交叉反應率為100%。假陰性率≤2%。9.5假陽性率假陽性率≤5%。5本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時不做限定。方法使用者在使用替代試劑、試劑盒或操作步驟前，應對其進行考察，以滿足本方法規(guī)定的各項性能本方法參比標準為GB/T20769—2008《水果和蔬菜中450種農藥及相關化學品殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質譜法》、GB23200.121—2021《食品安全國家標準植物源性食品中331種農藥及其代謝物殘留量的測定液相色譜-質譜聯(lián)用法》。6(規(guī)范性)定性方法性能指標計算表定性方法各個性能指標計算方法見表A.1。表A.1定性方法性能指標計算表陽性陰性陽性陰性顯著性差異(X2)自由度(df)=1靈敏度(p+)/%pf-=N??/N1.×100=100一靈敏度注：N為任何特定單元的結果數，第一個下標指行，第二個下標指列。例如，N表示第一行，第有的第一行，N.?表示所有的第二列；N??表示第一行，第二列。由參比方法檢驗得到的結果或者試樣中實際的公議值結果。由待確認方法檢驗得到的結果。靈敏度的計算使用確認后的結為方法的檢測結果相對準確性的結果，與一致性分析和濃度檢測趨勢情況綜合評價。本方法起草單位：中國檢驗