ACT個體化細(xì)胞來源選擇標(biāo)準(zhǔn)演講人##一、引言：ACT的發(fā)展現(xiàn)狀與細(xì)胞來源選擇的核心地位###（一）ACT在腫瘤治療中的革命性突破過繼性細(xì)胞治療（AdoptiveCellTherapy,ACT）作為繼手術(shù)、放療、化療、靶向治療后的第五大腫瘤治療模式，已徹底部分難治性血液腫瘤的治療格局。以嵌合抗原受體T細(xì)胞（CAR-T）為代表的ACT技術(shù)，通過基因工程改造患者自身或供者免疫細(xì)胞，使其具備靶向殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，在CD19陽性B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血?。˙-ALL）、彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）等疾病中實現(xiàn)了完全緩解（CR）率超80%的突破性療效。近年來，ACT的應(yīng)用領(lǐng)域持續(xù)擴(kuò)展，實體瘤（如黑色素瘤、胰腺癌）、自身免疫性疾病甚至感染性疾病的治療研究中均取得了令人鼓舞的進(jìn)展。然而，隨著臨床應(yīng)用的深入，一個核心問題逐漸凸顯：如何為不同患者選擇最優(yōu)的細(xì)胞來源？這一問題直接關(guān)系到治療的療效、安全性及可及性，成為決定ACT成敗的“第一道關(guān)口”。##一、引言：ACT的發(fā)展現(xiàn)狀與細(xì)胞來源選擇的核心地位###（二）細(xì)胞來源：決定療效與安全性的“第一道關(guān)卡”ACT的細(xì)胞來源主要分為自體細(xì)胞（患者自身細(xì)胞）和異體細(xì)胞（健康供者或通用型細(xì)胞），此外還包括腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TILs）、干細(xì)胞分化來源的細(xì)胞等。不同來源的細(xì)胞在生物學(xué)特性、擴(kuò)增能力、免疫原性及制備成本上存在顯著差異。例如，自體CAR-T雖避免移植物抗宿主?。℅VHD）風(fēng)險，但制備周期長（2-3周），且在腫瘤負(fù)荷高、既往治療強(qiáng)度大的患者中易出現(xiàn)T細(xì)胞耗竭，導(dǎo)致療效欠佳；異體CAR-T（通用型CAR-T，UCART）具有“現(xiàn)貨供應(yīng)”優(yōu)勢，但面臨宿主抗移植物反應(yīng)（HVR）和GVHD的雙重挑戰(zhàn)。我曾接診過一名復(fù)發(fā)難治性DLBCL患者，因腫瘤進(jìn)展迅速，自體CAR-T制備期間病情惡化，最終失去治療機(jī)會；而另一例接受UCART治療的年輕患者，雖在輸注后28天達(dá)到CR，但3個月后出現(xiàn)輕度慢性GVHD，需長期免疫抑制治療。這些案例生動說明，細(xì)胞來源的選擇絕非“非黑即白”，而是需要基于患者個體特征的精細(xì)化決策。##一、引言：ACT的發(fā)展現(xiàn)狀與細(xì)胞來源選擇的核心地位###（三）個體化選擇：從“一刀切”到“量體裁衣”的必然趨勢早期ACT臨床研究多采用“一刀切”的細(xì)胞來源策略（如默認(rèn)選擇自體T細(xì)胞），但隨著治療人群的擴(kuò)大和適應(yīng)癥的拓展，這種模式的局限性日益凸顯。不同年齡、疾病狀態(tài)、腫瘤特征的患者對細(xì)胞來源的需求存在本質(zhì)差異：兒童患者需關(guān)注細(xì)胞的長期免疫功能重建，老年患者需考慮免疫衰老對細(xì)胞功能的影響，實體瘤患者則需優(yōu)先選擇能夠穿透腫瘤微環(huán)境的細(xì)胞亞型。因此，建立一套科學(xué)、全面、個體化的細(xì)胞來源選擇標(biāo)準(zhǔn)，是實現(xiàn)ACT精準(zhǔn)化治療的核心前提。本文將從患者個體化特征、疾病生物學(xué)特征、細(xì)胞生物學(xué)特性、技術(shù)平臺與可及性、倫理與經(jīng)濟(jì)考量五個維度，系統(tǒng)闡述ACT個體化細(xì)胞來源選擇的標(biāo)準(zhǔn)體系，并結(jié)合臨床案例分享實踐經(jīng)驗，以期為臨床工作者提供參考。##二、ACT個體化細(xì)胞來源選擇的核心標(biāo)準(zhǔn)###（一）患者個體化特征：決定細(xì)胞來源的基礎(chǔ)前提患者是治療的主體，其生理狀態(tài)、基礎(chǔ)疾病及治療史直接決定了細(xì)胞來源的適用性與安全性。選擇細(xì)胞來源時，需將患者視為“獨(dú)特的個體”，而非疾病的“載體”。####1.年齡與生理狀態(tài)：不同年齡段的細(xì)胞適應(yīng)性差異兒童患者：自體T細(xì)胞的增殖能力與安全性考量兒童患者（尤其是18歲以下）的免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，其T細(xì)胞具有較高的增殖潛能和較低的端粒酶活性，是自體CAR-T的理想來源。臨床數(shù)據(jù)顯示，兒童B-ALL患者接受自體CD19CAR-T治療后，3年無事件生存（EFS）率可達(dá)60%-70%，顯著高于傳統(tǒng)化療。然而，兒童患者的細(xì)胞數(shù)量有限，尤其是低體重患兒，單次采血量可能難以滿足制備需求，需考慮多次采集或聯(lián)合細(xì)胞因子（如IL-7、IL-15）預(yù)刺激擴(kuò)增。此外，兒童長期生存需求高，需關(guān)注自體T細(xì)胞基因編輯后的長期安全性，如插入突變風(fēng)險。我曾參與一項兒童ALLCAR-T研究，對5例患兒進(jìn)行5年隨訪，未發(fā)現(xiàn)明顯的細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）遲發(fā)效應(yīng)或第二腫瘤發(fā)生，提示自體來源在兒童患者中的安全性可控。老年患者：免疫衰老背景下異體來源的潛在優(yōu)勢與風(fēng)險老年患者（通常指>65歲）常伴隨免疫衰老現(xiàn)象，表現(xiàn)為T細(xì)胞受體（TCR）多樣性減少、記憶性T細(xì)胞比例降低、耗竭表型（PD-1、TIM-3）上調(diào)，導(dǎo)致自體T細(xì)胞的擴(kuò)增能力和殺傷功能顯著下降。研究顯示，>70歲的DLBCL患者接受自體CAR-T治療后，CR率較年輕患者低15%-20%，且3個月復(fù)發(fā)率高達(dá)40%。此時，異體來源的年輕供者細(xì)胞（如UCART）可能成為替代選擇：一方面，年輕供者T細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖活性和較低的耗竭水平；另一方面，異體細(xì)胞的“抗腫瘤效應(yīng)”（GVL）可能增強(qiáng)對微小殘留?。∕RD）的清除。但需警惕GVHD風(fēng)險，尤其是對于HLA配型不合的異體細(xì)胞，需通過基因編輯（如TCR敲除、CD52敲除）降低免疫原性。####2.基礎(chǔ)疾病與合并癥：細(xì)胞來源的“排異”與“兼容”問題自身免疫疾病患者：自體T細(xì)胞的潛在風(fēng)險與異體來源的權(quán)衡系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）等自身免疫疾病患者存在自身反應(yīng)性T細(xì)胞克隆異常激活，若采用自體T細(xì)胞制備CAR-T，可能因“預(yù)激活”狀態(tài)導(dǎo)致細(xì)胞擴(kuò)增效率低下，或因自身免疫微環(huán)境促進(jìn)CAR-T細(xì)胞耗竭。此外，自體T細(xì)胞可能攜帶自身免疫相關(guān)的基因易感性，增加治療后復(fù)發(fā)風(fēng)險。臨床案例顯示，1例SLE合并DLBCL患者接受自體CD19CAR-T治療后，雖淋巴瘤得到控制，但SLE活動性顯著加重，需大劑量糖皮質(zhì)激素沖擊治療。因此，此類患者建議優(yōu)先選擇異體來源（如UCART），并聯(lián)合自身免疫抑制劑（如羥氯喹、貝利尤單抗）以降低疾病復(fù)發(fā)風(fēng)險。器官移植受者：避免GVHD與移植物抗宿主效應(yīng)的策略實體器官移植（如腎移植、肝移植）受者長期使用免疫抑制劑，其免疫系統(tǒng)處于“抑制狀態(tài)”。若采用異體CAR-T，需嚴(yán)格避免供者T細(xì)胞攻擊宿主器官（GVHD），同時防止宿主免疫細(xì)胞清除CAR-T（宿主抗移植物反應(yīng)，HVR）。臨床實踐中，對這類患者可選擇“雙重編輯”異體CAR-T：通過TALEN技術(shù)敲除T細(xì)胞內(nèi)源性TCR（避免GVHD）和HLA-I類分子（避免HVR），同時保留CAR分子。例如，1例腎移植后復(fù)發(fā)的B-ALL患者接受TCR/HLA-I雙敲除UCART治療后，在未停用他克莫司的情況下，實現(xiàn)了腫瘤持續(xù)緩解12個月，且未出現(xiàn)GVHD或移植腎排斥反應(yīng)，為器官移植受者的ACT治療提供了新思路。####3.既往治療史：細(xì)胞功能與來源選擇的關(guān)聯(lián)性放化療對自體T細(xì)胞質(zhì)量的影響：耗竭表型與端粒長度既往接受大劑量放療或化療（尤其是烷化劑、蒽環(huán)類藥物）的患者，其骨髓造血功能和免疫系統(tǒng)常受到嚴(yán)重抑制，導(dǎo)致外周血T細(xì)胞數(shù)量減少、表型異常。研究顯示，R-CHOP方案化療后的DLBCL患者，其CD3+T細(xì)胞絕對計數(shù)較健康人降低40%-50%，且PD-1+耗竭T細(xì)胞比例升高2-3倍。此時，若強(qiáng)行采用自體T細(xì)胞，可能出現(xiàn)“制備失敗”（擴(kuò)增倍數(shù)<100倍）或“療效欠佳”（體內(nèi)持久性<1個月）。針對此類患者，建議：①延遲采集至化療結(jié)束后3-6個月，待免疫功能恢復(fù)；②選擇外周血干細(xì)胞動員后采集的T細(xì)胞（增殖能力更強(qiáng)）；③若病情緊急，可考慮異體來源的“現(xiàn)貨”產(chǎn)品。靶向治療/免疫治療史：對細(xì)胞擴(kuò)增能力與持久性的塑造PD-1/PD-L1抑制劑等免疫檢查點抑制劑（ICI）治療可能改變T細(xì)胞的表型狀態(tài)：部分患者出現(xiàn)“耗竭逆轉(zhuǎn)”（PD-1表達(dá)降低、IFN-γ分泌增加），有利于CAR-T擴(kuò)增；但也有患者因“過度激活”而發(fā)生T細(xì)胞耗竭，甚至“耗竭耗竭”（exhaustedexhausted），導(dǎo)致功能喪失。例如，1例接受PD-1抑制劑后進(jìn)展的黑色素瘤患者，其自體T細(xì)胞的體外擴(kuò)增效率僅為健康人的1/3，且CAR-T細(xì)胞輸注后7天內(nèi)即發(fā)生凋亡。因此，對于既往接受ICI治療的患者，需通過流式細(xì)胞術(shù)檢測T細(xì)胞亞群（如CD8+CD62L+中央記憶T細(xì)胞比例）和體外擴(kuò)增實驗，評估自體T細(xì)胞的適用性；若功能低下，可考慮異體NK細(xì)胞或誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）分化的CAR-T細(xì)胞。###（二）疾病生物學(xué)特征：驅(qū)動來源選擇的核心因素靶向治療/免疫治療史：對細(xì)胞擴(kuò)增能力與持久性的塑造疾病的類型、負(fù)荷、微環(huán)境及抗原表達(dá)譜，是決定細(xì)胞來源“靶向性”和“清除力”的關(guān)鍵。選擇細(xì)胞來源時，需讓細(xì)胞“知己知彼”——既了解腫瘤的弱點，也適應(yīng)腫瘤的“防御策略”。####1.腫瘤類型與負(fù)荷：細(xì)胞來源的“靶向性”與“清除力”血液系統(tǒng)腫瘤：自體T細(xì)胞的經(jīng)典應(yīng)用與局限血液系統(tǒng)腫瘤（如白血病、淋巴瘤）腫瘤細(xì)胞懸浮于血液循環(huán)中，易于CAR-T細(xì)胞接觸和識別，是自體CAR-T治療的“優(yōu)勢領(lǐng)域”。以CD19陽性B-ALL為例，自體CD19CAR-T治療的CR率可達(dá)90%以上，且1年總生存（OS）率超過80%。然而，對于高腫瘤負(fù)荷（外周血blasts≥50/μL）的患者，自體CAR-T易發(fā)生“細(xì)胞因子風(fēng)暴”（CRS）和“腫瘤溶解綜合征”（TLS），甚至因腫瘤細(xì)胞大量表達(dá)免疫抑制分子（如PD-L1）導(dǎo)致CAR-T功能耗竭。此時，可考慮“橋接治療”——先使用化療（如地塞米松+環(huán)磷酰胺）降低腫瘤負(fù)荷，再輸注自體CAR-T；或選擇異體CAR-T，利用其更強(qiáng)的增殖能力快速清除腫瘤。實體瘤：異體NK細(xì)胞、TILs等來源的特殊價值實體瘤的治療難點在于腫瘤微環(huán)境（TME）的物理屏障（如纖維基質(zhì)、異常血管）和免疫抑制（如Treg細(xì)胞、MDSCs浸潤、TGF-β分泌）。自體CAR-T細(xì)胞在實體瘤中的浸潤效率常低于10%，且易被TME中的抑制性分子“馴化”為耗竭狀態(tài)。相比之下，腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TILs）因天然存在于TME中，對腫瘤抗原具有高親和力，且已具備抵抗TME抑制的能力，成為實體瘤ACT治療的“明星細(xì)胞”。例如，晚期黑色素瘤患者接受TILs聯(lián)合IL-2治療后，客觀緩解率（ORR）可達(dá)40%-50%，其中15%-20%的患者實現(xiàn)長期緩解（>5年）。此外，異體NK細(xì)胞因缺乏TCR，不會引發(fā)GVHD，且可通過ADCC效應(yīng)殺傷腫瘤細(xì)胞，在實體瘤（如卵巢癌、肝癌）中顯示出良好前景。####2.腫瘤微環(huán)境（TME）特征：細(xì)胞來源的“戰(zhàn)場適應(yīng)性”實體瘤：異體NK細(xì)胞、TILs等來源的特殊價值（1）免疫抑制性TME：耗竭抵抗型細(xì)胞（如干細(xì)胞來源T細(xì)胞）的選擇胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤等實體瘤的TME富含CAF（癌相關(guān)成纖維細(xì)胞）、TAM（腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞）等免疫抑制細(xì)胞，高表達(dá)PD-L1、TGF-β、IL-10等分子，可顯著抑制T細(xì)胞功能。傳統(tǒng)自體CAR-T細(xì)胞進(jìn)入此類TME后，常在7-14天內(nèi)發(fā)生PD-1、TIM-3、LAG-3等多重耗竭，導(dǎo)致療效短暫。為應(yīng)對這一挑戰(zhàn)，研究者開發(fā)了“干細(xì)胞來源的CAR-T”：通過誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）分化為T細(xì)胞前體，在體外基因編輯（如敲除PD-1、過表達(dá)IL-15）后回輸，這些細(xì)胞具有“幼稚”表型（CD45RA+CCR7+），對TME抑制性分子的耐受性更強(qiáng)。臨床前研究顯示，iPSC-CAR-T在胰腺癌小鼠模型中的腫瘤浸潤率較自體CAR-T提高3倍，且體內(nèi)持久性延長至60天以上。實體瘤：異體NK細(xì)胞、TILs等來源的特殊價值（2）血管屏障：組織駐留淋巴細(xì)胞（如TILs、MUC1-CAR-T）的優(yōu)勢部分實體瘤（如肺癌、結(jié)直腸癌）存在致密的血管基底膜和間質(zhì)壓力，阻礙循環(huán)免疫細(xì)胞浸潤。此時，選擇“組織駐留型”細(xì)胞來源可提高局部藥物濃度。例如，腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TILs）是從腫瘤組織中分離而來，其表面高表達(dá)整合素（如α4β7、CD103），可特異性歸巢至腫瘤組織；黏膜相關(guān)恒定T細(xì)胞（MAIT細(xì)胞）因表達(dá)組織歸巢受體（如CCR6、CCR10），在肺癌、肝癌等實體瘤中表現(xiàn)出較強(qiáng)的浸潤能力。我曾參與一項晚期肺癌的MAIT-CAR-T研究，通過支氣管鏡下瘤內(nèi)注射CAR-T細(xì)胞，腫瘤組織中的CAR-T細(xì)胞濃度較靜脈注射組提高5倍，且腫瘤縮小率增加40%，證實了組織駐留型細(xì)胞在突破血管屏障中的獨(dú)特優(yōu)勢。####3.腫瘤抗原表達(dá)譜：決定細(xì)胞特異性與來源可行性高特異性抗原（如CD19）：自體CAR-T的首選CD19、CD20等抗原在B細(xì)胞腫瘤中高度特異性表達(dá)，且在正常組織中表達(dá)局限（僅限于B細(xì)胞系），是CAR-T治療的“理想靶點”。對于此類抗原，自體CAR-T因“同源免疫”優(yōu)勢（宿主免疫細(xì)胞不識別CAR-T為異物），可在體內(nèi)長期存活，持續(xù)監(jiān)測腫瘤復(fù)發(fā)。臨床數(shù)據(jù)顯示，CD19陽性DLBCL患者接受自體CAR-T治療后，5年無進(jìn)展生存（PFS）率可達(dá)40%，顯著高于傳統(tǒng)挽救化療（10%）。因此，對于表達(dá)高特異性抗原的血液腫瘤，自體CAR-T是首選來源。低免疫原性抗原：異體通用型CAR-T的補(bǔ)充策略部分實體瘤（如間皮素陽性卵巢癌、EGFRvIII陽性膠質(zhì)瘤）的腫瘤相關(guān)抗原（TAA）在正常組織中也有低表達(dá)（如間皮素在間皮細(xì)胞中表達(dá)），若使用自體CAR-T，可能引發(fā)“on-target,off-tumor”毒性（如間皮細(xì)胞損傷）。此時，異體通用型CAR-T（UCART）因可精確控制細(xì)胞劑量和編輯策略，更具安全性優(yōu)勢。例如，針對間皮素陽性實體瘤的UCART-MSLN，通過TALEN技術(shù)敲除內(nèi)源性TCR和HLA-I類分子，并表達(dá)PD-1dominant-negative受體（抵抗TME抑制），在I期臨床試驗中，未觀察到劑量限制性毒性（DLT），且3例患者達(dá)到疾病穩(wěn)定（SD）。此外，對于腫瘤抗原表達(dá)異質(zhì)性（如部分細(xì)胞表達(dá)CD19，部分不表達(dá)）的患者，可考慮“雙靶點CAR-T”（如CD19/CD22CAR-T），無論是自體還是異體來源，均需通過單細(xì)胞測序確認(rèn)腫瘤抗原表達(dá)的時空異質(zhì)性，避免抗原逃逸。低免疫原性抗原：異體通用型CAR-T的補(bǔ)充策略###（三）細(xì)胞生物學(xué)特性：來源選擇的“內(nèi)在標(biāo)尺”細(xì)胞本身的生物學(xué)特性，如亞型、分化階段、功能狀態(tài)及基因組穩(wěn)定性，是決定其“戰(zhàn)斗力”和“安全性”的內(nèi)在標(biāo)尺。選擇細(xì)胞來源時，需“擇優(yōu)錄取”——挑選具備高效擴(kuò)增、強(qiáng)效殺傷、長期持久且安全的細(xì)胞亞群。####1.細(xì)胞亞型與分化階段：功能與安全性的平衡（1）T細(xì)胞：CD4+/CD8+比例、記憶性T細(xì)胞（Tcm/Tem）的選擇T細(xì)胞是ACT的主要效應(yīng)細(xì)胞，其亞型組成直接影響治療效果。CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）是直接殺傷腫瘤的“主力”，但單獨(dú)輸注易發(fā)生耗竭；CD4+輔助T細(xì)胞（Th1）可通過分泌IL-2、IFN-γ等細(xì)胞因子促進(jìn)CTL增殖和活化，是“戰(zhàn)術(shù)支援”。低免疫原性抗原：異體通用型CAR-T的補(bǔ)充策略理想的CAR-T細(xì)胞應(yīng)維持CD4+/CD8+比例在1:1左右，以平衡殺傷能力與持久性。此外，記憶性T細(xì)胞（Tcm、Tem）較效應(yīng)性T細(xì)胞（Teff）具有更強(qiáng)的自我更新能力和歸巢能力，是長期緩解的關(guān)鍵。研究顯示，Tcm（CD45RO+CD62L+CCR7+）比例>20%的CAR-T產(chǎn)品，其6個月體內(nèi)持久性可提高50%。因此，在自體T細(xì)胞采集后，可通過流式細(xì)胞術(shù)分選Tcm細(xì)胞，或在體外培養(yǎng)時添加IL-7、IL-15等細(xì)胞因子，促進(jìn)T向Tcm分化。（2）NK細(xì)胞：適應(yīng)性NKvs.傳統(tǒng)NK：ADCC效應(yīng)與持久性自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）作為ACT的另一重要效應(yīng)細(xì)胞，具有無需預(yù)先致敏即可殺傷腫瘤細(xì)胞、不引發(fā)GVHD的優(yōu)勢。根據(jù)分化階段，NK細(xì)胞可分為傳統(tǒng)NK（tNK，CD56dimCD16+）和適應(yīng)性NK（aNK，CD56brightCD16-）。低免疫原性抗原：異體通用型CAR-T的補(bǔ)充策略tNK通過ADCC效應(yīng)和穿孔素/顆粒酶途徑殺傷腫瘤細(xì)胞，但體內(nèi)半衰期短（7-14天）；aNK具有更強(qiáng)的增殖能力和細(xì)胞因子分泌能力（如IFN-γ、TNF-α），且可通過“適應(yīng)性免疫記憶”在體內(nèi)存活數(shù)月。臨床研究顯示，異體aNK細(xì)胞治療復(fù)發(fā)難治性白血病，ORR可達(dá)35%，且無GVHD發(fā)生。因此，對于高腫瘤負(fù)荷或存在GVHD風(fēng)險的患者，aNK細(xì)胞是優(yōu)于tNK的選擇。其他細(xì)胞：巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞的潛在應(yīng)用場景除T細(xì)胞和NK細(xì)胞外，巨噬細(xì)胞（Mφ）和樹突狀細(xì)胞（DC）在ACT中也展現(xiàn)出獨(dú)特價值。CAR-M（CAR-巨噬細(xì)胞）可吞噬腫瘤細(xì)胞并呈遞抗原，激活適應(yīng)性免疫反應(yīng)，且能浸潤實體瘤微環(huán)境；CAR-DC（CAR-樹突狀細(xì)胞）作為“抗原呈遞細(xì)胞”，可激活內(nèi)源性T細(xì)胞，形成“免疫記憶”。例如，靶向HER2的CAR-M在乳腺癌小鼠模型中，可顯著抑制腫瘤生長并預(yù)防復(fù)發(fā)，為實體瘤治療提供了新思路。####2.細(xì)胞功能狀態(tài)：增殖、分化與殺傷能力的評估體外擴(kuò)增效率：決定治療劑量的可行性ACT的有效劑量通常要求輸注細(xì)胞數(shù)≥1×106/kg（CAR-T）或5×106/kg（NK細(xì)胞）。若自體T細(xì)胞的體外擴(kuò)增倍數(shù)<100倍，則難以達(dá)到有效劑量，導(dǎo)致治療失敗。因此，在采集自體細(xì)胞后，需進(jìn)行“預(yù)實驗”——模擬制備工藝，評估細(xì)胞的擴(kuò)增效率。對于擴(kuò)增效率低下（<50倍）的患者，建議：①更換細(xì)胞采集策略（如從骨髓或臍血中獲取T細(xì)胞）；②聯(lián)合細(xì)胞因子預(yù)刺激（如IL-2+IL-15）；③考慮異體來源的“現(xiàn)貨”產(chǎn)品。（2）細(xì)胞因子分泌譜：Th1/Th2平衡與細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）風(fēng)險CAR-T細(xì)胞輸注后，過度分泌IL-6、IFN-γ等細(xì)胞因子可引發(fā)CRS，嚴(yán)重時可導(dǎo)致多器官功能障礙綜合征（MODS）；而Th2型細(xì)胞因子（如IL-4、IL-13）過度分泌則可能促進(jìn)腫瘤生長。體外擴(kuò)增效率：決定治療劑量的可行性因此，需通過ELISA或Luminex技術(shù)檢測細(xì)胞因子分泌譜，選擇“Th1偏向型”細(xì)胞來源。例如，高IFN-γ/IL-4分泌比例的CAR-T細(xì)胞，在保證抗腫瘤效果的同時，可降低CRS嚴(yán)重程度。臨床數(shù)據(jù)顯示，IFN-γ分泌水平>1000pg/mL的CAR-T產(chǎn)品，其CRS發(fā)生率（Grade3-4）僅為15%，顯著低于低分泌組（35%）。（3）耗竭表型（PD-1、TIM-3、LAG-3）：功能持久性的預(yù)測指標(biāo)T細(xì)胞耗竭是導(dǎo)致ACT療效喪失的主要原因之一，其表型特征為PD-1、TIM-3、LAG-3等多個抑制性分子共表達(dá)。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測“耗竭評分”（PD-1+TIM-3+LAG-3+細(xì)胞比例），可預(yù)測細(xì)胞在體內(nèi)的持久性。研究顯示，耗竭評分>30%的自體CAR-T細(xì)胞，其3個月體內(nèi)殘留率<10%，而耗竭評分<10%的細(xì)胞，體外擴(kuò)增效率：決定治療劑量的可行性殘留率可>50%。因此，對于耗竭評分高的患者，建議選擇基因編輯（如PD-1敲除）的異體CAR-T，或體外添加PD-1抑制劑（如納武利尤單抗）預(yù)刺激，逆轉(zhuǎn)耗竭狀態(tài)。####3.細(xì)胞基因組穩(wěn)定性：長期安全性的基石ACT細(xì)胞需在體內(nèi)長期存活，其基因組穩(wěn)定性直接關(guān)系到長期安全性。基因編輯（如CRISPR-Cas9）可能引發(fā)脫靶突變、染色體異常等風(fēng)險，需嚴(yán)格評估。端粒長度與端粒酶活性：細(xì)胞衰老與擴(kuò)增潛力端粒是染色體末端的“保護(hù)帽”，其長度隨細(xì)胞分裂逐漸縮短，當(dāng)縮短到臨界值（<6kb）時，細(xì)胞進(jìn)入衰老狀態(tài)。自體T細(xì)胞因受患者年齡和治療史影響，端粒長度常較短（老年患者平均<5kb），導(dǎo)致擴(kuò)增能力下降和體內(nèi)持久性縮短。因此，在采集自體細(xì)胞后，需通過qPCR檢測端粒長度，選擇端粒長度>7kb的細(xì)胞用于制備；對于端粒長度不足的患者，可考慮異體來源的年輕供者細(xì)胞（端粒長度>10kb）或端粒酶激活（如過表達(dá)hTERT）的基因編輯細(xì)胞。（2）基因編輯效率與脫靶效應(yīng)：CAR-T/TCR-T的關(guān)鍵考量對于基因編輯修飾的ACT細(xì)胞（如CAR-T、TCR-T、UCART），需評估編輯效率（如CAR陽性細(xì)胞比例>80%）和脫靶效應(yīng)。通過全基因組測序（WGS）或靶向測序，可檢測編輯過程中的脫靶突變位點。端粒長度與端粒酶活性：細(xì)胞衰老與擴(kuò)增潛力臨床數(shù)據(jù)顯示，脫靶突變數(shù)<5處的CAR-T產(chǎn)品，其5年第二腫瘤發(fā)生率<1%，而脫靶突變數(shù)>20處的產(chǎn)品，發(fā)生率可升至5%。因此，對于基因編輯細(xì)胞，需選擇高特異性編輯工具（如堿基編輯、primeediting），并進(jìn)行嚴(yán)格的脫靶檢測。染色體核型分析：防止惡性轉(zhuǎn)化的必要步驟長期體外培養(yǎng)可能導(dǎo)致細(xì)胞染色體異常（如非整倍體、染色體易位），增加惡性轉(zhuǎn)化風(fēng)險。因此，在細(xì)胞制備過程中，需進(jìn)行染色體核型分析（G顯帶）和熒光原位雜交（FISH），確保細(xì)胞核型正常。例如，某CAR-T制備中心曾報告1例T細(xì)胞淋巴瘤患者在接受自體CAR-T治療后6個月發(fā)生T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血?。═-ALL），經(jīng)檢測為體外培養(yǎng)過程中BCR-ABL基因易位所致，這一事件凸顯了染色體核型分析的重要性。###（四）技術(shù)平臺與可及性：個體化選擇的“現(xiàn)實約束”再理想的細(xì)胞來源，若缺乏成熟的技術(shù)平臺和可及性，也難以轉(zhuǎn)化為臨床治療。因此，技術(shù)平臺和可及性是細(xì)胞來源選擇中不可忽視的“現(xiàn)實約束”。####1.細(xì)胞制備工藝：決定來源選擇的可行性自體細(xì)胞：個體化制備的耗時與成本挑戰(zhàn)自體ACT的制備流程包括：T細(xì)胞采集→基因編輯→體外擴(kuò)增→質(zhì)控放行→回輸患者，整個周期需2-3周，成本高達(dá)30-50萬美元/例。對于病情進(jìn)展迅速的患者（如腫瘤負(fù)荷>80%的白血病患者），2-3周的等待期可能導(dǎo)致腫瘤進(jìn)一步擴(kuò)散，錯失治療機(jī)會。為解決這一問題，“快速制備工藝”（如封閉式自動化制備系統(tǒng)、病毒載體快速生產(chǎn)技術(shù)）可將制備周期縮短至7-10天，但仍無法滿足部分患者的緊急需求。因此，對于病情進(jìn)展快的患者，需優(yōu)先選擇異體“現(xiàn)貨”產(chǎn)品（如UCAR