ICS65.020.20

CCSB16

DB2305

雙鴨山市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB2305/T036—2024

大豆灰斑病田間接種及抗性評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)程

2024-08-30發(fā)布2024–09-30實(shí)施

雙鴨山市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

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前??言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起

草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由雙鴨山市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本文件起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院佳木斯分院、寶清縣小城子鎮(zhèn)鄉(xiāng)村振興發(fā)展服務(wù)中心、蕪湖

職業(yè)技術(shù)學(xué)院、黑龍江農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院、寶清縣朝陽(yáng)鎮(zhèn)鄉(xiāng)村振興發(fā)展服務(wù)中心、寶清縣夾信子鎮(zhèn)鄉(xiāng)村

振興發(fā)展服務(wù)中心。

本文件主要起草人：楊曉賀、顧鑫、丁俊杰、于昌紅、劉偉、姚亮亮、畢永彬、高雪冬、邱磊、張

茂明、王自杰、張家智、王囡囡、孟慶英、朱寶國(guó)、申宏波、陶淑敏。

I

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大豆灰斑病田間接種及抗性評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了在人工接種條件下，大豆灰斑病抗性田間鑒定和評(píng)價(jià)的技術(shù)要求。

本文件適用于大豆品種對(duì)灰斑病抗性的田間鑒定和評(píng)價(jià)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文

件。

GB4404.2糧食作物種子第2部分：豆類

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

大豆灰斑病

由大豆尾孢菌引起的葉部癥狀為主的大豆病害，又稱蛙眼病。田間癥狀見(jiàn)附錄A。

3.2

抗病性

植物與病原在長(zhǎng)期進(jìn)化和相互作用的復(fù)雜過(guò)程中，逐漸形成和表現(xiàn)出各種抵御有害病原物的特征和能

力。

3.3

鑒定圃

種植大豆品種進(jìn)行田間接種的試驗(yàn)區(qū)。

3.4

接種體

用于接種以引起病害的病原物或病原物的一部分。

1

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3.5

人工接種

在人工條件下，將接種體置于植物體適當(dāng)部位并使之發(fā)病的過(guò)程。

3.6

接種懸浮液

用于接種的含有定量接種體的液體。

3.7

抗性評(píng)價(jià)

根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判定寄主植物對(duì)特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的定性描述。

4品種種植

將供試品種在鑒定圃內(nèi)按編號(hào)順序排列，每隔19份鑒定材料播種1行感病對(duì)照品種，每個(gè)品種播

一小區(qū)，小區(qū)面積2.8m2，人工單粒點(diǎn)播，株距5cm，行距0.65m。種子符合GB4404.2標(biāo)準(zhǔn)。

5病原物接種體制備

5.1病原菌的來(lái)源

選擇經(jīng)權(quán)威部門(mén)純化和鑒定的大豆尾孢菌病株。

5.2培養(yǎng)基的配制

5.2.1馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）

將去皮馬鈴薯200g切成小塊，加水1000mL煮沸25min，用四層紗布過(guò)濾，過(guò)濾后加入瓊脂20g，

再煮沸后加入葡萄糖20g，加水定容至1000mL，121℃下濕熱滅菌25min。

5.2.2高粱粒培養(yǎng)基

挑選大小均勻、飽滿的高粱粒，清洗后文火煮40min～60min，用手碾搓，高粱粒軟而不爛（一捏及

癟），將高粱粒撈出，控水0.5～1d，裝入500mL三角瓶中，裝入量約300mL，121℃濕熱滅菌30min。

滅菌完成后，將裝有高粱粒培養(yǎng)基的三角瓶放置于室溫下冷卻備用。放置期間，一天一次搖三角瓶，防止

大量高粱粒結(jié)塊。

2

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5.3病原菌的活化

將保存?zhèn)溆玫拇蠖刮叉呔鷱?℃冰箱內(nèi)取出，在超級(jí)工作臺(tái)內(nèi)，挑起菌絲接種于滅菌的PDA平板，

25℃培養(yǎng)7d～10d，待菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿后，即完成病原菌的活化。

5.4病原菌繁殖

在超凈工作臺(tái)中，將活化后的病原菌菌塊置于裝有高粱粒培養(yǎng)基的三角瓶?jī)?nèi)，25℃培養(yǎng)30d。待菌

絲長(zhǎng)滿高粱粒后，停止培養(yǎng)。將高粱粒從三角瓶中倒出，洗1～2次，洗去菌絲，將高粱粒放置晾干，

于陰干處保存?zhèn)溆谩?/p>

6接種

6.1孢子誘發(fā)

用無(wú)菌水將保存的高粱粒進(jìn)行浸泡2d，撈出，蓋上無(wú)菌紗布，無(wú)菌水潤(rùn)濕，保濕培養(yǎng)5d左右。誘

發(fā)產(chǎn)生新鮮孢子，制成孢子懸浮液，用兩層紗布過(guò)濾浸泡好的孢子懸浮液，于孢子懸浮液中加入適量3%蔗

糖，孢子懸浮液濃度為顯微鏡10×10視野下5～8個(gè)孢子。

6.2田間人工接種

直接噴霧法將制好的孢子懸浮液，于陰天或傍晚無(wú)風(fēng)時(shí)，噴灑于大豆葉片上，以菌液在葉片上形成均

勻的細(xì)液滴為宜。共進(jìn)行3次接種，間隔時(shí)間約為3～5d。

6.3誘發(fā)條件

遇干旱天氣時(shí)，鑒定圃內(nèi)鋪設(shè)微噴管進(jìn)行水分補(bǔ)充，以利于大豆灰斑病發(fā)生。

7調(diào)查與評(píng)價(jià)

7.1病級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

0級(jí)：葉部無(wú)病斑；1級(jí)：病斑面積占葉面積1%以下；2級(jí)：病斑面積占葉面積1%～5%；3級(jí)：

病斑面積占葉片面積6%～20%；4級(jí)：病斑面積占葉面積21%～50%；5級(jí)：病斑面積占葉面積51%

以上。

7.2調(diào)查方法

接種后30d～40d，調(diào)查發(fā)病情況。每個(gè)品種調(diào)查20株。記錄發(fā)病級(jí)別，計(jì)算病情指數(shù)。計(jì)算公

式如下：

3

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病級(jí)該病發(fā)病株數(shù)

病情指數(shù)100

供試總株數(shù)最高級(jí)代表值（1）

7.3抗性評(píng)價(jià)

計(jì)算病情指數(shù)后，按病情指數(shù)范圍確定抗性。具體抗性情況見(jiàn)表1。

表1大豆灰斑病品種抗性評(píng)價(jià)表

抗性病情指數(shù)范圍

免疫0

高抗≤20%

抗病21%～40%

中抗41%～60%

感病61%～80%

高感≧81%

7.4有效性評(píng)價(jià)

設(shè)置的感病對(duì)照品種表現(xiàn)為感病時(shí)，確定為鑒定有效。

7.5調(diào)查記載表格

大豆灰斑病鑒定結(jié)果記載表格，見(jiàn)表2。

表2大豆灰斑病鑒定結(jié)果記載表

病情分級(jí)

編號(hào)品種名稱來(lái)源病情指數(shù)平均病指抗性評(píng)價(jià)

12345

播種日期接種日期

接種生育期接種病原菌分離物編號(hào)

株系類型調(diào)查日期

4

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附錄A

(規(guī)范性附錄)