原理鼠傷寒沙門氏菌野生型（原養(yǎng)型）人工方法正向誘變鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型（異養(yǎng)型）誘變物作用回復(fù)突變

Ames是檢測遺傳毒理學(xué)的體外試驗，檢測終點是基因突變通過統(tǒng)計回復(fù)突變的菌落數(shù)判斷受試物質(zhì)的致突變性高低S-9混合液的制備過程（使需要代謝激活的物質(zhì)得以活化）25341暴露肝臟，KCL灌注斷頭處死大鼠、放血、去皮取出肝臟，加入KCL剪碎制成勻漿，9000g離心取上清、分裝、凍存1實驗用菌液制備

平板菌落計數(shù)法，是種統(tǒng)計物品含菌數(shù)的有效方法。方法如下：將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細胞，取一定量的稀釋樣液涂布到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個單細胞；統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。2菌株性狀鑒定（1）組氨酸營養(yǎng)缺陷型（2）深粗糙突變測定（3）R因子的鑒定（4）切除修復(fù)缺失鑒定（5）自發(fā)回變量測定（6）回變特性鑒定實驗步驟與方法深粗糙（rfa）特性2紫外線敏感（UvrB）特性3抗氨芐青霉素（R因子）特性4回變特性鑒定6組氨酸需求特性1菌株特性鑒定自發(fā)回變特性51、組氨酸需求特性有細菌生長空白空白組氨酸-生物素賴氨酸空白37℃24h0.1ml菌液頂層底層菌株特性鑒定2、深粗糙（rfa）特性0.1ml菌液頂層普通培養(yǎng)基抑菌環(huán)濾紙片（有結(jié)晶紫）37℃24h菌株特性鑒定3、紫外線敏感特性普通培養(yǎng)基15W紫外燈33cm，8s37℃，24h菌株特性鑒定4、抗氨卞青霉素（R因子）特性37℃，24h青霉素普通培養(yǎng)基菌株特性鑒定5、自然回變特性0.1ml菌液頂層底層37℃，24h菌株特性鑒定菌株基因型組氨酸缺陷脂多糖屏蔽缺失抗氨卞西林抗四環(huán)素uvrB修復(fù)缺陷自發(fā)回變（-S9）TA97+++-+90-180TA98+++-+30-50TA100+++-+120-200TA102+++-+240-320Ames試驗菌株特性6、回變特性鑒定0.1ml菌液0.1ml致突變物0.2-0.5mlS-9頂層底層37℃，24h菌株特性鑒定實驗設(shè)計原則受試物最低劑量為每皿0.1μg一般選用4~5個劑量

每個劑量應(yīng)做2或3個平行平皿

設(shè)立陽性對照和陰性（溶劑）對照

受試物最高劑量為每皿5mgAmes試驗設(shè)計點試法將頂層培養(yǎng)基倒入底層培養(yǎng)基中，凝固后放入濾紙片，將受試物點在紙片上放入底層，37℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果摻入法將受試物0.1ml、菌液0.1ml分別加入頂層培養(yǎng)基中，倒入底層培養(yǎng)基中，凝固后37℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果Ames試驗方法及結(jié)果評價點樣紙片周圍長出一圈密集的His+回變菌落者，受試物即為陽性致突變物質(zhì)。背景菌