ICS65.020

CCSB41

DB63

青海省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB63/T1968—2021

高寒地區(qū)陸生野生動(dòng)物疫病監(jiān)測樣品采集

技術(shù)規(guī)范

2021-10-28發(fā)布2022-01-01實(shí)施

青海省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB63/T1968—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起

草。

本文件由青海省林業(yè)和草原局提出并歸口。

本文件起草單位：青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、青海省野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測總站。

本文件主要起草人：林元清、馬萬軍、闞威、王云平、孫萬桂、趙旭陽、于春梅、何振邦、張總超、

孫生禎、游瀟倩、張曉英、王曉婷、鄧梅、才加、陳繼勇、索南斑久、馬麗婭、馬艷萍。

本文件由青海省林業(yè)和草原局監(jiān)督實(shí)施。

I

DB63/T1968—2021

高寒地區(qū)陸生野生動(dòng)物疫病監(jiān)測樣品采集技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了高寒地區(qū)陸生野生動(dòng)物疫病監(jiān)測采樣對(duì)象、采樣原則、采樣前準(zhǔn)備、樣品采集、樣品

記錄、樣品保存、樣品包裝、樣品運(yùn)送、無害化處理、環(huán)境消毒、安全防護(hù)等技術(shù)內(nèi)容。

本文件適用于開展野生動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢測所需樣品的采集、保存和運(yùn)送。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范

DB63/T1652病害動(dòng)物及病害動(dòng)物產(chǎn)品無害化處理技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

高寒地區(qū)陸生野生動(dòng)物疫病

指高寒地區(qū)陸生野生動(dòng)物所攜帶病原體，可在高寒地區(qū)陸生野生動(dòng)物之間傳播、流行，對(duì)高寒地區(qū)

陸生野生動(dòng)物種群構(gòu)成威脅或者可能傳染給人類、家畜和家禽的傳染性動(dòng)物疫病。

3.2

樣品采集

通過特定的方法，按照特定的程序和要求，對(duì)反映高寒地區(qū)陸生野生動(dòng)物個(gè)體、群體或環(huán)境有關(guān)狀

況的實(shí)驗(yàn)室檢測樣品進(jìn)行收集、處理及整理的過程。

4采樣對(duì)象

高寒地區(qū)常見陸生野生動(dòng)物主要包括：

a)哺乳類：野牦牛、藏野驢、野豬、馬鹿、白唇鹿、盤羊、藏羚羊、巖羊、普氏原羚、雪豹、狼、

豺、獼猴等、狐貍、猞猁、荒漠貓、旱獺、野兔、青海田鼠、高原鼠兔、蝙蝠等。

b)鳥類：漁鷗、鸕鶿、赤麻鴨、綠頭鴨、翹鼻麻鴨、禿鷲、斑頭雁、灰雁、黑頸鶴、血雉、藏馬

雞、雪鴿、巖鴿、原鴿等。

5采樣原則

1

DB63/T1968—2021

5.1活體野生動(dòng)物以捕獲方式采樣，主要采集血液、口鼻、糞便拭子和體液樣品等，采樣前要有正確

的保定措施。死亡野生動(dòng)物應(yīng)盡快解剖后采集各組織樣品，并對(duì)病變部分進(jìn)行描述和記錄。發(fā)現(xiàn)野生動(dòng)

物尸體疑似感染炭疽時(shí)不應(yīng)剖檢。

5.2野生動(dòng)物發(fā)生異常死亡時(shí)，應(yīng)調(diào)查了解異常死亡情況所涉及的野生動(dòng)物種類、種群數(shù)量、死亡數(shù)

量、地理坐標(biāo)和異常事件涉及的地理范圍等。除采集患病或死亡野生動(dòng)物樣品外，還應(yīng)包括周圍水、土

壤、植被等環(huán)境樣品，以及其他被認(rèn)為對(duì)死亡產(chǎn)生作用因素的樣品。

5.3宜使用一次性器皿，玻璃、陶制等器皿以及刀、剪、鑷子等采樣器械使用前應(yīng)煮沸或高壓滅菌。

采集每個(gè)樣品前用酒精擦拭和火焰消毒采樣器械。每份樣品應(yīng)單獨(dú)使用一套器皿。對(duì)采樣部位做好消毒。

6采樣前準(zhǔn)備

6.1采樣工具

采血器、采血管、離心管、無菌棉拭子、樣品袋、剪刀、鑷子、解剖刀、酒精燈、酒精棉、平皿、

玻片、探杯、試管架、冷藏箱、冰袋、采樣單、簽字筆、記號(hào)筆、不干膠標(biāo)簽、記錄本等。

6.2保存液

根據(jù)采樣需要，準(zhǔn)備PH7.4磷酸鹽緩沖液、50%甘油鹽水緩沖液、阿氏液、10%福爾馬林固定液、無

水乙醇等保存液。

6.3防護(hù)及消毒用品

手套、口罩、防護(hù)服、防護(hù)帽、護(hù)目鏡、防水膠鞋、酒精、消毒洗手液、噴霧器、消毒藥等。

7安全防護(hù)

7.1在進(jìn)入采樣現(xiàn)場前，應(yīng)充分了解周圍環(huán)境、氣候條件、野生動(dòng)物活動(dòng)和異常情況等，對(duì)可能出現(xiàn)

的安全風(fēng)險(xiǎn)做好預(yù)防措施。

7.2采樣人員和密切接觸野生動(dòng)物人員在開展工作前應(yīng)穿（戴）好防護(hù)用具，結(jié)束后要按正確的程序

脫掉防護(hù)用品，并做好洗手消毒。

7.3采樣期間不應(yīng)進(jìn)行飲水、進(jìn)食、吸煙等活動(dòng)。避免徒手捕捉，防止被動(dòng)物咬傷、抓傷。野生動(dòng)物

疫病采樣和檢測從業(yè)人員應(yīng)定期進(jìn)行健康檢查。

8樣品采集

8.1血液樣品

8.1.1采血部位

大動(dòng)物在頸靜脈、前腔靜脈、耳靜脈、尾靜脈等。小動(dòng)物小量采血可穿刺耳尖、耳廓外靜脈，多量

采血采用心臟采血或剪端尾尖部采血。鳥類在翅靜脈采血或采用心臟采血。

8.1.2血液樣品處理

宜使用一次性采血器采集血液樣品。用加入抗凝劑的采血管，或?qū)⒀鹤⑷爰尤?.1%肝素鈉、阿氏

液或枸櫞酸鈉抗凝劑的采血管中，并充分混勻采集抗凝血。將采血管以15度～30度傾斜角在室溫下靜止

2

DB63/T1968—2021

2h～4h或置4℃冰箱過夜，待血液凝固大部分血清析出后，輕輕吸取上層液分離血清。必要時(shí)可低速

離心分離血清。將抗凝血血細(xì)胞自然下沉或離心分離血漿。

8.2口、鼻、泄殖腔拭子及糞便

用無菌棉簽伸入野生動(dòng)物口、鼻、肛門或泄殖腔沾取分泌物，浸入含保存液的采樣管中剪去露出部

分并蓋緊瓶蓋。野生動(dòng)物糞便須采集新鮮糞便并置于含保存液的采樣管或樣品袋中。

8.3組織樣品

8.3.1病原學(xué)檢測樣品

剝離動(dòng)物皮膚后用消毒器械依次打開腹腔、胸腔以及頭骨，采集淋巴結(jié)、肝、腎、脾、胃、胰腺、

22

心、肺、腦等組織樣品，大小約1㎝～2㎝。進(jìn)行病原分離所需樣品須注意消毒和無菌操作。

8.3.2組織病理學(xué)檢測樣品

采集病健交界處的組織塊，置入10倍于組織塊的10%的甲醛溶液或多聚甲醛中固定。組織厚度不超

過0.5㎝，組織塊不應(yīng)擠壓、刮摸和用水洗。

8.3.3皮膚樣品

有水泡或皮膚病變疾病的野生動(dòng)物，采集病變部位皮膚的碎屑以及未破裂水泡液、水泡皮作為樣品。

8.3.4腸道及內(nèi)容物

腸道應(yīng)選擇病變最明顯的部分。內(nèi)容物用生理鹽水沖洗收集，也可扎穿腸壁用吸管吸取內(nèi)容物，并

在滅菌的30%甘油生理鹽水緩沖液中保存。或?qū)в袃?nèi)容物的腸管兩端雙線結(jié)扎并剪斷保存。

8.4體液樣品

8.4.1精液及尿液

所采精液樣品應(yīng)包括“富精”部分，盛裝于無菌試管中避免防腐劑污染。在野生動(dòng)物排尿時(shí)用潔凈

的容器直接接取中段尿液，或從死亡動(dòng)物膀胱中抽取尿液。

8.4.2子宮陰道內(nèi)分泌物和外生殖器包皮內(nèi)分泌物

將消毒好的吸管插入子宮頸口或陰道內(nèi)，向內(nèi)注射少量營養(yǎng)液或生理鹽水，用吸球反復(fù)抽吸幾次后

注入培養(yǎng)液中。用軟膠管插入公畜的包皮內(nèi)，向內(nèi)注入少量的營養(yǎng)液或生理鹽水，多次揉搓沖洗，收集

沖洗液注入無菌容器中。

8.4.3胃液及呼吸道分泌物

將多孔的胃管送入胃內(nèi)，其外端接在吸引器的負(fù)壓瓶上，加負(fù)壓后胃液自動(dòng)流出。用滅菌棉拭子采

集咽喉或氣管內(nèi)分泌物，沾取分泌物后將拭子浸入保存液中。

8.4.4腦脊液

采用穿刺法，在頸椎環(huán)樞孔和腰椎腰薦孔，術(shù)部經(jīng)剪毛消毒后，用專用的穿刺針垂直緩慢刺入蛛網(wǎng)

膜下腔，拔出針芯，腦脊液自動(dòng)流出或點(diǎn)滴狀流出，盛入消毒容器中。

8.4.5其他液體

3

DB63/T1968—2021

采集膽汁、膿、黏液和關(guān)節(jié)液等樣品時(shí)，消毒采集部位后用采血器插入并吸取內(nèi)部液體材料。也可

用接種環(huán)經(jīng)消毒部位插入，提取病料直接接種到培養(yǎng)基或涂布到玻片上。

8.5胚胎及胎兒

選取無腐敗的胚胎、胎兒或胎兒的實(shí)質(zhì)器官裝入無菌塑料袋。

8.6其他

監(jiān)測環(huán)境樣品，可從遺棄物、巢穴、洞穴等采集有代表性的樣品。

9樣品記錄

9.1對(duì)樣品用記號(hào)筆在樣品袋或器皿上進(jìn)行連續(xù)性編號(hào)，樣品編號(hào)須與送檢（采樣）單中編號(hào)一致。

制成的涂片、觸片上注明編碼并另附說明。

9.2送往實(shí)驗(yàn)室的樣品應(yīng)附有送檢（采樣）單，并備份存檔，參見附錄A。

9.3樣品記錄內(nèi)容包括樣品編號(hào)、動(dòng)物名稱、樣品種類、樣品數(shù)量、采樣地址（坐標(biāo)）、動(dòng)物發(fā)病死

亡時(shí)間、臨床癥狀、預(yù)檢項(xiàng)目、采樣日期、送檢單位等。

10樣品保存

10.1采集的樣品在無法及時(shí)送檢的情況下，應(yīng)根據(jù)不同的檢驗(yàn)要求和所需溫度分類保存于冰箱中。

10.2血清放-20℃凍存，全血暫時(shí)放4℃冰箱保存。血液樣品要盡量減少反復(fù)凍融。

10.3細(xì)菌檢測樣品應(yīng)4℃保存，病毒檢測樣品應(yīng)在0℃以下低溫保存。

11樣品運(yùn)送和包裝

11.1采集的樣品應(yīng)及時(shí)送檢，需低溫保存的樣品送樣時(shí)用放有冰袋的冷藏箱或車載冰箱。

11.2樣品的包裝用主容器、樣品袋、冷藏箱三重包裝的方式，要保證防水、防漏、密封性良好。

11.3血清分離后蓋好離心管，玻璃器皿加墊緩沖材料防止破裂。玻片兩端用細(xì)木條分隔開，層層疊加，

底層和最上層涂面向內(nèi)，用細(xì)線包扎好。

11.4若檢測樣品是用于重大動(dòng)物疫病，如禽流感、口蹄疫、非洲豬瘟等，應(yīng)按照NY/T541規(guī)定執(zhí)行。

12無害化處理

12.1一次性采樣器械應(yīng)進(jìn)行生物安全無害化處理，可重復(fù)使用的器械應(yīng)先清洗消毒后方可再次使用。

12.2樣品采集結(jié)束后無法達(dá)到檢測要求的樣品和殘余尸體以及實(shí)驗(yàn)室廢棄物要進(jìn)行無害化處理。參見

DB63/T1652執(zhí)行。

13環(huán)境消毒

樣品采集結(jié)束后對(duì)現(xiàn)場和污染的環(huán)境進(jìn)行徹底消毒。常用消毒藥有3%氫氧化鈉、0.2%過氧乙酸、0.5%

次氯酸鈉、生石灰等。

4

DB63/T1968—2021

AA

附錄A

（規(guī)范性附錄）

野生動(dòng)物疫病檢測采樣（送檢）單

表A.1給出了野生動(dòng)物疫病檢測采樣（送檢）單

表A.1野生動(dòng)物疫病檢測采樣（送檢）單

樣品動(dòng)物樣品樣品采樣地址動(dòng)物發(fā)病

臨床癥狀預(yù)檢項(xiàng)目備注

編號(hào)名稱種類數(shù)量（坐標(biāo)）死亡時(shí)間