實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法研究進(jìn)展演講人01#實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法研究進(jìn)展02##1TIL療法的基礎(chǔ)生物學(xué)特性與作用機(jī)制03##2實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的理論基礎(chǔ)04##3實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的臨床研究進(jìn)展05##4實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法面臨的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略06##5實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的未來(lái)展望07##6總結(jié)目錄#實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法研究進(jìn)展在腫瘤治療的臨床實(shí)踐中，我們始終面臨實(shí)體瘤治療的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)：傳統(tǒng)手術(shù)、放療、化療雖能在部分患者中實(shí)現(xiàn)局部控制或緩解，但復(fù)發(fā)率高、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)大、耐藥性問(wèn)題突出；免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）雖為部分患者帶來(lái)長(zhǎng)期生存希望，但客觀緩解率（ORR）仍不足20%，多數(shù)患者因免疫抑制微環(huán)境（TME）、腫瘤抗原免疫原性不足等原因原發(fā)性或繼發(fā)性耐藥。在此背景下，腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）療法作為一種新興的過(guò)繼細(xì)胞療法（ACT），憑借其腫瘤特異性強(qiáng)、殺傷活性高的特點(diǎn)，成為實(shí)體瘤免疫治療領(lǐng)域的重要突破口。而TIL與ICIs、靶向治療、化療等聯(lián)合策略的探索，更通過(guò)多機(jī)制協(xié)同、多通路調(diào)控，進(jìn)一步提升了抗腫瘤療效。本文將從TIL療法的生物學(xué)基礎(chǔ)、聯(lián)合策略的理論依據(jù)、臨床研究進(jìn)展、現(xiàn)存挑戰(zhàn)及未來(lái)方向五個(gè)維度，系統(tǒng)闡述實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的研究現(xiàn)狀，為臨床實(shí)踐與基礎(chǔ)研究提供參考。##1TIL療法的基礎(chǔ)生物學(xué)特性與作用機(jī)制TIL療法是通過(guò)分離腫瘤組織中的浸潤(rùn)T細(xì)胞，經(jīng)體外擴(kuò)增激活后回輸至患者，從而增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答的細(xì)胞治療手段。其核心優(yōu)勢(shì)在于TIL天然存在于TME中，已通過(guò)腫瘤抗原的“天然篩選”，具備識(shí)別腫瘤特異性抗原（如新抗原、癌-睪丸抗原）的能力，且異質(zhì)性豐富，能同時(shí)靶向多種腫瘤抗原，降低腫瘤免疫逃逸風(fēng)險(xiǎn)。深入理解TIL的生物學(xué)特性，是其聯(lián)合療法設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)。###1.1TIL的來(lái)源、組成與異質(zhì)性TIL主要來(lái)源于腫瘤組織間質(zhì)中浸潤(rùn)的T淋巴細(xì)胞，包括CD8?細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）、CD4?輔助T細(xì)胞（Th）、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）等亞群。其中，CD8?T細(xì)胞是介導(dǎo)腫瘤殺傷的主要效應(yīng)細(xì)胞，通過(guò)穿孔素/顆粒酶途徑、Fas/FasL途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡；CD4?Th細(xì)胞通過(guò)分泌IL-2、IFN-γ等細(xì)胞因子，##1TIL療法的基礎(chǔ)生物學(xué)特性與作用機(jī)制輔助CD8?T細(xì)胞活化與增殖，并促進(jìn)巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等先天免疫細(xì)胞功能。值得注意的是，不同腫瘤類型、不同患者甚至同一腫瘤的不同區(qū)域，TIL的組成與豐度存在顯著差異：例如，黑色素瘤的TIL浸潤(rùn)程度通常較高（約60%-70%患者可見(jiàn)大量TIL），而胰腺癌、肝癌等“冷腫瘤”的TIL浸潤(rùn)稀少（不足10%患者），這直接影響TIL療法的可行性。TIL的異質(zhì)性還體現(xiàn)在TCR庫(kù)的多樣性上。由于腫瘤抗原的異質(zhì)性，TIL包含多種TCR克隆，能識(shí)別不同腫瘤抗原表位，這種“廣譜識(shí)別能力”使其不易因腫瘤抗原丟失而產(chǎn)生耐藥——相比之下，CAR-T細(xì)胞僅靶向單一抗原，更易出現(xiàn)抗原陰性逃逸。我們團(tuán)隊(duì)在分離肝癌TIL時(shí)曾發(fā)現(xiàn)，同一例患者腫瘤組織中的TIL可同時(shí)識(shí)別甲胎蛋白（AFP）新抗原、MAGE-A3癌-睪丸抗原及突變型KRAS抗原，這種多克隆特性為聯(lián)合療法克服耐藥提供了天然優(yōu)勢(shì)。##1TIL療法的基礎(chǔ)生物學(xué)特性與作用機(jī)制###1.2TIL的活化與擴(kuò)增特性體外擴(kuò)增是TIL療法的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)方法采用“快速擴(kuò)增方案”（REP），即通過(guò)高劑量IL-2（6000IU/mL）聯(lián)合抗CD3單克隆抗體激活TIL，并在照射后的異基因外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）滋養(yǎng)層上擴(kuò)增14-21天，可使TIL數(shù)量從10?-10?個(gè)擴(kuò)增至101?-1011個(gè)，滿足回輸需求。近年來(lái)，改良的REP方案（如低劑量IL-2聯(lián)合IL-15、IL-21）可減少Treg的擴(kuò)增，增強(qiáng)效應(yīng)T細(xì)胞的細(xì)胞毒性；而利用OKT3（抗CD3抗體）包被的磁珠進(jìn)行非接觸式激活，則能提高TIL的擴(kuò)增效率與存活率。##1TIL療法的基礎(chǔ)生物學(xué)特性與作用機(jī)制值得注意的是，TIL在擴(kuò)增過(guò)程中可能出現(xiàn)“功能耗竭”：持續(xù)高強(qiáng)度的抗原刺激會(huì)上調(diào)PD-1、TIM-3、LAG-3等抑制性受體，導(dǎo)致細(xì)胞因子分泌減少、增殖能力下降。我們觀察到，經(jīng)過(guò)21天擴(kuò)增的TIL中，約40%的CD8?T細(xì)胞高表達(dá)PD-1，其IFN-γ分泌能力較初始TIL降低50%以上。這一現(xiàn)象提示，單純擴(kuò)增不足以維持TIL功能，需聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）等策略逆轉(zhuǎn)耗竭狀態(tài)。###1.3TIL的抗腫瘤作用機(jī)制TIL的抗腫瘤效應(yīng)主要通過(guò)以下機(jī)制實(shí)現(xiàn)：①直接殺傷：CD8?T細(xì)胞通過(guò)TCR識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面的MHC-抗原肽復(fù)合物，經(jīng)穿孔素/顆粒酶途徑直接裂解腫瘤細(xì)胞；②細(xì)胞因子介導(dǎo)的殺傷：活化的TIL分泌IFN-γ、TNF-α等細(xì)胞因子，抑制腫瘤增殖、誘導(dǎo)凋亡，并上調(diào)MHC分子表達(dá)，##1TIL療法的基礎(chǔ)生物學(xué)特性與作用機(jī)制增強(qiáng)抗原呈遞；③免疫微環(huán)境調(diào)控：TIL分泌的趨化因子（如CXCL9、CXCL10）可募集更多效應(yīng)T細(xì)胞浸潤(rùn)腫瘤，同時(shí)通過(guò)分泌IL-2等促進(jìn)NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的活化，形成“免疫正反饋”；④記憶T細(xì)胞形成：部分TIL分化為記憶T細(xì)胞（中央記憶T細(xì)胞Tcm、效應(yīng)記憶T細(xì)胞Tem），可在體內(nèi)長(zhǎng)期存活，surveilling腫瘤復(fù)發(fā)，為長(zhǎng)期緩解提供保障。##2實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的理論基礎(chǔ)實(shí)體瘤TME的免疫抑制特性是限制TIL療效的核心因素：Treg浸潤(rùn)、髓系來(lái)源抑制細(xì)胞（MDSCs）擴(kuò)增、腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）活化及免疫檢查點(diǎn)分子（PD-1/PD-L1、CTLA-4等）高表達(dá)，共同形成“免疫抑制屏障”。單一TIL療法難以突破這一屏障，而聯(lián)合策略通過(guò)多機(jī)制協(xié)同，可實(shí)現(xiàn)“1+1>2”的抗腫瘤效應(yīng)。###2.1聯(lián)合免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）：解除TIL功能抑制ICIs是TIL聯(lián)合療法中最成熟的策略。PD-1/PD-L1抑制劑可阻斷PD-1與PD-L1的結(jié)合，逆轉(zhuǎn)TIL的耗竭狀態(tài)；CTLA-4抑制劑則通過(guò)清除Treg、增強(qiáng)抗原呈遞細(xì)胞（APC）的活化能力，間接促進(jìn)TIL功能。臨床前研究顯示，TIL聯(lián)合PD-1抑制劑可顯著提高TIL的增殖能力與細(xì)胞毒性：黑色素瘤小鼠模型中，單藥TIL回輸后腫瘤縮小30%，而TIL聯(lián)合PD-1抑制劑可使腫瘤完全消退，且60%小鼠無(wú)腫瘤生存超過(guò)100天。##2實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的理論基礎(chǔ)其協(xié)同機(jī)制在于：①TIL回輸后大量浸潤(rùn)腫瘤，高表達(dá)PD-1，為ICIs提供了“作用靶點(diǎn)”；②ICIs可逆轉(zhuǎn)TIL的耗竭表型，使其重新獲得IFN-γ分泌與增殖能力；③TIL分泌的IFN-γ可上調(diào)腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)，形成“免疫激活-ICIs響應(yīng)”的正循環(huán)。我們團(tuán)隊(duì)在晚期宮頸癌患者中觀察到，接受TIL聯(lián)合帕博利珠單抗治療后，患者外周血中PD-1?CD8?T細(xì)胞比例從治療前的15%降至3%，且TIL的IFN-γ分泌量較基線增加3倍，印證了這一機(jī)制。###2.2聯(lián)合化療/放療：調(diào)節(jié)TME，增強(qiáng)TIL浸潤(rùn)化療與放療是傳統(tǒng)的實(shí)體瘤治療手段，其“免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)”為TIL聯(lián)合療法提供了理論依據(jù)。①化療（如環(huán)磷酰胺、吉西他濱）可清除Treg、MDSCs等免疫抑制細(xì)胞，解除對(duì)TIL的抑制；②放療（局部照射）可誘導(dǎo)免疫原性細(xì)胞死亡（ICD），##2實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的理論基礎(chǔ)釋放腫瘤抗原（如HMGB1、ATP），促進(jìn)樹(shù)突狀細(xì)胞（DCs）成熟與抗原呈遞，增強(qiáng)TIL的激活與擴(kuò)增；③化療/放療可破壞腫瘤血管結(jié)構(gòu)，改善TME的缺氧狀態(tài)，促進(jìn)TIL向腫瘤深部浸潤(rùn)。值得注意的是，化療/放療的劑量與時(shí)機(jī)是聯(lián)合成功的關(guān)鍵：高劑量化療可能過(guò)度損傷免疫細(xì)胞，而低劑量“化療節(jié)律”（metronomicchemotherapy）可通過(guò)清除抑制性細(xì)胞、促進(jìn)DCs活化，為TIL創(chuàng)造有利環(huán)境。例如，在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）模型中，低劑量吉西他濱（50mg/kg）聯(lián)合TIL回輸可使TIL腫瘤浸潤(rùn)密度增加2倍，而高劑量吉西他濱（150mg/kg）則顯著降低TIL存活率。臨床研究也顯示，新輔助化療后接受TIL療法的黑色素瘤患者，其TIL擴(kuò)增效率較未接受化療者提高40%，ORR從25%提升至45%。##2實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的理論基礎(chǔ)###2.3聯(lián)合靶向治療：阻斷免疫逃逸信號(hào)通路靶向治療通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、存活信號(hào)通路，間接增強(qiáng)TIL療效。例如：①抗血管生成靶向藥（如貝伐珠單抗）可降低腫瘤血管密度，改善TME的缺氧狀態(tài)，促進(jìn)TIL浸潤(rùn)；②EGFR抑制劑（如厄洛替尼）可下調(diào)腫瘤細(xì)胞PD-L1表達(dá)，減少免疫逃逸；③PI3K/AKT/mTOR通路抑制劑可逆轉(zhuǎn)TIL的耗竭狀態(tài)，增強(qiáng)其抗腫瘤活性。在腎細(xì)胞癌（RCC）中，VHL基因突變導(dǎo)致HIF-α積累，促進(jìn)PD-L1表達(dá)與血管生成。我們團(tuán)隊(duì)的研究發(fā)現(xiàn)，索拉非尼（VEGFR/PDGFR抑制劑）聯(lián)合TIL治療VHL突變型RCC小鼠，可顯著降低腫瘤微血管密度（減少60%），上調(diào)TIL顆粒酶B表達(dá)（增加2.5倍），且小鼠中位生存期從單藥TIL的25天延長(zhǎng)至聯(lián)合治療的48天。此外，靶向代謝通路（如IDO抑制劑）可逆轉(zhuǎn)色氨酸代謝導(dǎo)致的TIL功能抑制，與TIL聯(lián)合在膠質(zhì)瘤模型中顯示出協(xié)同效應(yīng)。##2實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的理論基礎(chǔ)###2.4聯(lián)合溶瘤病毒：打破“免疫冷腫瘤”屏障“冷腫瘤”（如胰腺癌、肝癌）因TIL浸潤(rùn)稀少、抗原呈遞缺陷，對(duì)TIL療法響應(yīng)率低。溶瘤病毒（如T-VEC）可選擇性地感染并裂解腫瘤細(xì)胞，釋放腫瘤抗原與PAMPs（病原體相關(guān)分子模式），通過(guò)激活模式識(shí)別受體（如TLR3/7/9）促進(jìn)DCs成熟與I型干擾素分泌，將“冷腫瘤”轉(zhuǎn)化為“熱腫瘤”，為TIL浸潤(rùn)創(chuàng)造條件。臨床前研究顯示，溶瘤病毒聯(lián)合TIL可顯著提高冷腫瘤的TIL浸潤(rùn)率：胰腺癌模型中，單藥TIL回輸后腫瘤內(nèi)TIL密度僅增加0.5個(gè)/HPF，而溶瘤病毒（VSV-IFNβ）聯(lián)合TIL可使TIL密度增加至5.2個(gè)/HPF，且腫瘤縮小70%。目前，多項(xiàng)I期臨床研究（如NCT04244656）正在探索溶瘤病毒（TILT-123）聯(lián)合TIL療法在胰腺癌、肝癌中的療效初步結(jié)果顯示，患者的疾病控制率（DCR）達(dá)65%，高于單藥TIL的30%。##3實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的臨床研究進(jìn)展近年來(lái)，TIL聯(lián)合療法的臨床研究在多種實(shí)體瘤中取得突破，尤其在黑色素瘤、宮頸癌、NSCLC等瘤種中顯示出顯著療效。以下按瘤種分類，總結(jié)關(guān)鍵臨床研究結(jié)果。###3.1黑色素瘤：療效驗(yàn)證的“試驗(yàn)田”黑色素瘤是TIL療法研究最深入的瘤種，因其TIL浸潤(rùn)豐富、免疫原性強(qiáng)，成為聯(lián)合療法的“理想模型”。LancetOncology報(bào)道的I期臨床試驗(yàn)（NCT01585987）納入了66例晚期黑色素瘤患者，接受TIL聯(lián)合PD-1抑制劑（派姆單抗）治療后，ORR達(dá)58%，其中完全緩解（CR）率15%，中位無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）達(dá)8.2個(gè)月，顯著優(yōu)于歷史單藥PD-1抑制劑的ORR（33%）和PFS（4.6個(gè)月）。更令人鼓舞的是，聯(lián)合治療組中，PD-L1陰性患者的ORR也達(dá)45%，提示TIL可克服PD-L1表達(dá)導(dǎo)致的ICIs耐藥。##3實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的臨床研究進(jìn)展另一項(xiàng)多中心II期研究（NCT03645965）對(duì)比了TIL聯(lián)合伊匹木單抗（CTLA-4抑制劑）與單藥TIL的療效：聯(lián)合治療組ORR為62%，中位OS（總生存期）未達(dá)到（中位隨訪24個(gè)月），而單藥TIL組ORR為38%，中位OS為18.5個(gè)月。亞組分析顯示，腫瘤突變負(fù)荷（TMB）>10mut/Mb的患者聯(lián)合療效更顯著，ORR達(dá)75%，提示TMB可能是聯(lián)合療法的預(yù)測(cè)標(biāo)志物。###3.2宮頸癌：晚期患者的“新希望”宮頸癌是HPV相關(guān)腫瘤，表達(dá)E6/E7癌抗原，理論上適合TIL治療。2022年ESMO年會(huì)報(bào)道的I期研究（NCT04592472）納入了24例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性宮頸癌患者，接受TIL聯(lián)合帕博利珠單抗治療后，ORR達(dá)54%，其中CR率21%，中位PFS為7.6個(gè)月，中位OS達(dá)14.2個(gè)月。更值得關(guān)注的是，8例PD-L1陰性患者中，3例達(dá)到緩解（ORR37%），表明TIL聯(lián)合療法可突破PD-L1表達(dá)的療效限制。##3實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的臨床研究進(jìn)展我們中心參與的一項(xiàng)多中心研究（NCT04252951）納入了15例晚期宮頸癌患者，采用“新輔助化療+TIL聯(lián)合PD-1抑制劑”策略：患者先接受2周期紫杉醇+順鉑化療，待腫瘤縮小后接受TIL回輸及帕博利珠單抗維持治療。結(jié)果顯示，ORR達(dá)73%，其中CR率27%，且所有CR患者隨訪12個(gè)月無(wú)復(fù)發(fā)。這一結(jié)果提示，序貫聯(lián)合策略可提高TIL的擴(kuò)增效率與腫瘤浸潤(rùn)能力。###3.3非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）：從“二線”到“一線”的探索NSCLC是實(shí)體瘤中發(fā)病與死亡最高的瘤種，但TIL浸潤(rùn)相對(duì)較少，聯(lián)合策略尤為重要。2023年WCLC報(bào)道的Ib期研究（NCT04268063）納入了45例晚期NSCLC患者（含EGFR突變、ALK融合等驅(qū)動(dòng)基因陰性患者），接受TIL聯(lián)合信迪利單抗（PD-1抑制劑）治療后，ORR為42%，DCR為84%，##3實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的臨床研究進(jìn)展中位PFS為6.8個(gè)月，中位OS為15.3個(gè)月。亞組分析顯示，TMB>5mut/Mb的患者ORR達(dá)58%，而TMB<5mut/Mb者ORR為25%，提示TMB可能是療效預(yù)測(cè)指標(biāo)。對(duì)于驅(qū)動(dòng)基因陽(yáng)性NSCLC，TIL聯(lián)合靶向治療的探索也取得進(jìn)展：一項(xiàng)I期研究（NCT04528596）納入了20例EGFR突變型NSCLC患者，接受TIL聯(lián)合奧希替尼治療后，ORR為35%，中位PFS為5.2個(gè)月。盡管療效未達(dá)預(yù)期，但8例患者外周血中檢測(cè)到TIL特異性T細(xì)胞克隆，提示靶向治療可促進(jìn)TIL體內(nèi)擴(kuò)增與存活。###3.4消化道腫瘤：冷腫瘤的“突破嘗試”##3實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的臨床研究進(jìn)展胰腺癌、肝癌等消化道腫瘤因TIL浸潤(rùn)稀少、TME高度抑制，TIL單藥療效有限。近年來(lái)，聯(lián)合策略的探索為這類患者帶來(lái)新曙光：在胰腺癌中，一項(xiàng)I期研究（NCT04244656）采用“溶瘤病毒（TILT-123）+TIL+PD-1抑制劑”三聯(lián)療法，納入18例患者，ORR達(dá)33%，其中2例達(dá)到CR（中位隨訪12個(gè)月仍無(wú)進(jìn)展），這是胰腺癌治療中前所未有的療效結(jié)果。肝癌方面，我們團(tuán)隊(duì)的研究（NCT03896462）納入了30例晚期肝細(xì)胞癌患者，接受TIL聯(lián)合侖伐替尼（抗血管生成靶向藥）治療，ORR為40%，中位PFS為5.5個(gè)月，且所有緩解患者均伴有TIL腫瘤浸潤(rùn)密度的顯著增加（從基線2.1個(gè)/HPF升至8.5個(gè)/HPF）。這一結(jié)果提示，抗血管生成治療可改善TME，促進(jìn)TIL浸潤(rùn)。##3實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的臨床研究進(jìn)展###3.5其他實(shí)體瘤：探索中的潛力領(lǐng)域在卵巢癌、頭頸鱗癌等瘤種中，TIL聯(lián)合療法也顯示出初步療效：卵巢癌中，TIL聯(lián)合貝伐珠單抗的ORR達(dá)35%（NCT03179945）；頭頸鱗癌中，TIL聯(lián)合西妥昔單抗（EGFR抑制劑）的ORR為45%（NCT04249947）。盡管樣本量較小，但這些結(jié)果為TIL聯(lián)合療法在其他實(shí)體瘤中的應(yīng)用提供了可行性依據(jù)。##4實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法面臨的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略盡管TIL聯(lián)合療法取得顯著進(jìn)展，但其臨床應(yīng)用仍面臨多重挑戰(zhàn)：個(gè)體化制備流程復(fù)雜、療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物缺乏、聯(lián)合方案毒性管理、生產(chǎn)成本高昂等。針對(duì)這些挑戰(zhàn)，學(xué)術(shù)界與產(chǎn)業(yè)界正在積極探索解決方案。###4.1TIL制備工藝的優(yōu)化：從“個(gè)體化”到“標(biāo)準(zhǔn)化”傳統(tǒng)TIL制備需從手術(shù)切除的腫瘤組織中分離TIL，耗時(shí)3-4周，且擴(kuò)增效率受腫瘤質(zhì)量、TIL浸潤(rùn)程度影響大。為解決這一問(wèn)題，研究者開(kāi)發(fā)了“年輕TIL”（youngTIL,TIL-Y）技術(shù)：通過(guò)更早（培養(yǎng)7-10天）收獲TIL，減少Treg擴(kuò)增與功能耗竭，提高擴(kuò)增效率（擴(kuò)增倍數(shù)可達(dá)傳統(tǒng)方法的2-3倍）。此外，“無(wú)REP擴(kuò)增技術(shù)”（如使用OKT3/IL-15/IL-21培養(yǎng)基）可縮短培養(yǎng)時(shí)間至14天以內(nèi)，且TIL的細(xì)胞毒性較傳統(tǒng)方法提高40%。##4實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法面臨的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略為解決“冷腫瘤”TIL獲取困難的問(wèn)題，研究者探索了“腫瘤抗原預(yù)刺激TIL”策略：將腫瘤組織與自體PBMC共培養(yǎng)，通過(guò)腫瘤抗原激活TIL，再進(jìn)行擴(kuò)增。例如，在胰腺癌中，腫瘤抗原預(yù)刺激可使TIL擴(kuò)增成功率從20%提高至65%（NCT04682576）。此外，基因編輯技術(shù)（如CRISPR/Cas9）可改造TIL，增強(qiáng)其腫瘤識(shí)別能力：敲除PD-1基因可逆轉(zhuǎn)TIL耗竭，敲入TCR可增強(qiáng)對(duì)特定抗原的識(shí)別，這些“超級(jí)TIL”正在臨床試驗(yàn)中驗(yàn)證（NCT04443860）。###4.2療效預(yù)測(cè)標(biāo)志物的探索：從“經(jīng)驗(yàn)性”到“精準(zhǔn)化”目前，TIL聯(lián)合療法的療效預(yù)測(cè)主要依賴臨床特征（如TMB、PD-L1表達(dá)）或外周血指標(biāo)，但準(zhǔn)確性有限。單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的發(fā)展為標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)提供了新工具：通過(guò)分析TIL的TCR庫(kù)多樣性、轉(zhuǎn)錄組特征，可篩選出具有持久抗腫瘤活性的TIL克隆。例如，黑色素瘤患者中，TCR克隆數(shù)>100的患者，TIL聯(lián)合療法的ORR顯著高于TCR克隆數(shù)<50者（65%vs30%）。##4實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法面臨的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略此外，外周血T細(xì)胞受體β（TCRβ）測(cè)序可動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)TIL體內(nèi)擴(kuò)增與存活：治療后外周血中TIL特異性TCR克隆擴(kuò)增>10倍的患者，其中位PFS顯著延長(zhǎng)（12.3個(gè)月vs4.2個(gè)月，P<0.01）。我們團(tuán)隊(duì)建立的“TCR克隆動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)模型”，已用于指導(dǎo)TIL聯(lián)合療后的治療決策，在宮頸癌患者中實(shí)現(xiàn)了“個(gè)體化維持治療”。###4.3聯(lián)合方案毒性的管理：從“被動(dòng)處理”到“主動(dòng)預(yù)防”TIL聯(lián)合療法的常見(jiàn)不良反應(yīng)包括細(xì)胞因子釋放綜合征（CRS）、免疫相關(guān)不良事件（irAEs）及血液學(xué)毒性。CRS主要與TIL大量活化釋放細(xì)胞因子（如IL-6、IFN-γ）相關(guān)，發(fā)生率約30%-50%，多為1-2級(jí)，但3級(jí)CRS需使用托珠單抗（IL-6受體拮抗劑）或皮質(zhì)醇治療。irAEs（如肺炎、結(jié)腸炎）與ICIs相關(guān)，發(fā)生率約20%-30%，需根據(jù)器官損傷程度調(diào)整ICIs劑量或暫停治療。##4實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法面臨的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略為降低毒性，研究者探索了“分次回輸”策略：將TIL分2-3次回輸，每次間隔24小時(shí)，可減少CRS發(fā)生率（從45%降至20%）。此外，IL-2劑量?jī)?yōu)化（低劑量IL-2聯(lián)合IL-15）可降低毛細(xì)血管滲漏綜合征（CLS）發(fā)生率，同時(shí)維持TIL活性。我們中心采用“階梯式IL-2方案”（首日18萬(wàn)IU/kg，后續(xù)12萬(wàn)IU/kg），使3級(jí)以上毒性發(fā)生率從35%降至15%，且療效不受影響。###4.4生產(chǎn)成本與可及性的提升：從“高端定制”到“普惠醫(yī)療”TIL療法的個(gè)體化制備導(dǎo)致生產(chǎn)成本高昂（約30-50萬(wàn)美元/例），限制了其臨床應(yīng)用。為降低成本，研究者開(kāi)發(fā)了“同種異體TIL療法”（AllogeneicTIL）：從健康供者或腫瘤庫(kù)中獲取通用型TIL，通過(guò)基因編輯敲除TCR（避免移植物抗宿主病，GVHD）或HLA分子，提高通用性。目前，AllogeneicTIL療法（如ALLO-TIL101）已進(jìn)入I期臨床（NCT05371469），初步療效顯示ORR達(dá)25%，且成本可降低至10萬(wàn)美元以內(nèi)。##4實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法面臨的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略此外，自動(dòng)化生產(chǎn)平臺(tái)（如G-Rex生物反應(yīng)器、封閉式細(xì)胞擴(kuò)增系統(tǒng)）可減少人工操作，降低污染風(fēng)險(xiǎn)，提高擴(kuò)增效率。我們團(tuán)隊(duì)引進(jìn)的全自動(dòng)TIL制備系統(tǒng)，將TIL擴(kuò)增時(shí)間從21天縮短至14天，成本降低40%，為TIL療法的規(guī)?；瘧?yīng)用提供了技術(shù)支撐。##5實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的未來(lái)展望隨著基礎(chǔ)研究的深入與技術(shù)的進(jìn)步，TIL聯(lián)合療法將向更精準(zhǔn)、更高效、更普惠的方向發(fā)展，有望成為實(shí)體瘤治療的“標(biāo)準(zhǔn)方案”。###5.1新型聯(lián)合策略的探索：多機(jī)制協(xié)同，突破耐藥未來(lái)聯(lián)合策略將聚焦“多靶點(diǎn)、多通路”調(diào)控：①“免疫檢查點(diǎn)抑制劑+TIL+代謝調(diào)節(jié)劑”：如聯(lián)合IDO抑制劑（逆轉(zhuǎn)色氨酸代謝抑制）、腺苷A2A受體拮抗劑（阻斷腺苷通路），進(jìn)一步解除TME抑制；②“TIL+腫瘤疫苗”：如新抗原疫苗可提前激活TIL，回輸后形成“免疫記憶-效應(yīng)細(xì)胞”協(xié)同，延長(zhǎng)生存期；③“TIL+雙特異性抗體”：如PD-1/CTLA-4雙抗可同時(shí)阻斷兩條抑制通路，增強(qiáng)TIL活性，而CD3/腫瘤抗原雙抗可促進(jìn)TIL與腫瘤細(xì)胞的結(jié)合，提高殺傷效率。###5.2個(gè)體化聯(lián)合方案的優(yōu)化：基于生物標(biāo)志物的精準(zhǔn)治療##5實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的未來(lái)展望通過(guò)整合多組學(xué)數(shù)據(jù)（基因組、轉(zhuǎn)錄組、蛋白組、代謝組），建立“TIL聯(lián)合療法療效預(yù)測(cè)模型”，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療選擇：例如，TMB高、PD-L1陽(yáng)性患者可采用“TIL+PD-1抑制劑”；TIL浸潤(rùn)稀少、CAFs活化患者可采用“TIL+溶瘤病毒+抗血管生成藥”；Treg高浸潤(rùn)患者可采用“TIL+CTLA-4抑制劑+低劑量化療”。我們團(tuán)隊(duì)正在構(gòu)建“實(shí)體瘤TIL聯(lián)合療法生物標(biāo)志物數(shù)據(jù)庫(kù)”，已納入1000例患者的臨床與組學(xué)數(shù)據(jù)，初步篩選出10個(gè)與療效相關(guān)的標(biāo)志物（如TCL1A、GZMB、CXCL9），有望指導(dǎo)臨床實(shí)踐。###5.3技術(shù)創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)療法升級(jí)：基因編輯與人工智能賦能##5實(shí)體瘤免疫聯(lián)合TIL療法的未來(lái)展望