ICS67.120

C53

DB34

安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB34/T824—2020

代替DB34/T824-2008

動(dòng)物組織中鹽酸克倫特羅的殘留測(cè)定

膠體金免疫層析法

DeterminationofclenbuterrolhydrochlorideresidueinanimaltissuesColloidal

goldimmunochromatographicmethod

文稿版次選擇

2020-08-03發(fā)布2020-09-03實(shí)施

安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB34/T824—2020

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)代替DB34/T824-2008《動(dòng)物組織中鹽酸克倫特羅的殘留測(cè)定—膠體金免疫層析法》，除編

輯性修改外主要技術(shù)變化如下：

——修改了標(biāo)準(zhǔn)名稱，刪除了標(biāo)準(zhǔn)名稱中的連接符“—”；

——修改了試劑和材料內(nèi)容（見第4章）；

——增加了儀器設(shè)備（見第5章）；

——修改“實(shí)驗(yàn)步驟”為“檢測(cè)步驟”，并修改了部分內(nèi)容，優(yōu)化了樣品制備（見第6章）；

——修改了結(jié)果判斷內(nèi)容，“方法確認(rèn)”改為“有效性確認(rèn)”（見第7章）；

——修改結(jié)果確認(rèn)方法表述（見第8章）；

——增加了附錄A（見附錄A）。

本標(biāo)準(zhǔn)由安徽省獸藥飼料監(jiān)察所提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由安徽省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：安徽省獸藥飼料監(jiān)察所、寧國(guó)市金東坊農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司、合肥譜尼測(cè)試科技有

限公司、望江縣畜牧獸醫(yī)局、合肥市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心、合肥市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所、寧國(guó)市自然資

源和規(guī)劃局、安徽省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站、銅陵市義安區(qū)畜牧獸醫(yī)局。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：許世富、吳昊、趙家喜、司宏富、何廣、徐勇、許曉靖、孫德祥、何為俊、胡

林林、王振。

I

DB34/T824—2020

動(dòng)物組織中鹽酸克倫特羅的殘留測(cè)定膠體金免疫層析法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物肌肉、肝臟、腎臟中鹽酸克倫特羅殘留測(cè)定的膠體金免疫層析法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于動(dòng)物肌肉、肝臟、腎臟中鹽酸克倫特羅殘留的快速檢測(cè)。

本標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)限為3μg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3原理

本方法采用膠體金競(jìng)爭(zhēng)抑制法。將氯金酸用枸櫞酸鈉還原法制成一定直徑的金溶膠顆粒，標(biāo)記抗體。

硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛細(xì)管作用，將樣本滴加在膠體金檢測(cè)條樣品墊一端，使液體慢

慢向吸水紙另一端滲移。在樣本移動(dòng)的過程中，會(huì)發(fā)生相應(yīng)的抗原抗體反應(yīng)，并通過免疫金的顏色而顯

示出來。樣本中的克倫特羅在流動(dòng)的過程中與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和硝酸纖維素

（NC）膜檢測(cè)線上的克倫特羅人工抗原的結(jié)合，使檢測(cè)線不顯顏色，結(jié)果為陽性；反之，檢測(cè)線顯紫紅

色，結(jié)果為陰性。

4試劑和材料

4.1除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。

4.2膠體金免疫層析快速檢測(cè)卡組成

4.2.1鹽酸克倫特羅特異性抗體。

4.2.2膠體金。膠體金溶液采用氯金酸還原法制備，應(yīng)為帶負(fù)電的紫紅色疏水膠體金溶液，金顆粒大

小應(yīng)在30nm～60nm之間。

4.2.3硝酸纖維素膜。硝酸纖維素膜表面應(yīng)平整、光滑、白凈，沒有劃痕、凹印、小孔、水跡、橘皮

狀或其他肉眼能見的瑕疵，無灰塵、油漬或其他雜物。硝酸纖維素膜寬度為25.4±0.5mm，長(zhǎng)度在100±2

mm，厚度在185±19μm，毛細(xì)流速度為180±45s/40mm。

4.2.4聚酯纖維膜。聚酯纖維膜表面形狀應(yīng)為基本均勻的矩形，無明顯歪斜現(xiàn)象。色澤好，白色，表

面潔凈，均勻度好，無破損，無起皺，無污點(diǎn)，無色斑，無霉點(diǎn)，無異味，無雜質(zhì)及灰塵。聚酯纖維膜

重量在98.3±10.0g/m2，厚度在0.42±0.07mm，長(zhǎng)度為305.0±2.5mm，寬度為254.0±2.5mm。

4.2.5吸水紙。

4.2.6底板。

4.2.7塑料盒。

1

DB34/T824—2020

4.2.8塑料吸管。

4.2.9金標(biāo)樣品稀釋液。

4.3陰性對(duì)照：取不含鹽酸克倫特羅的空白樣品，作為空白試料。

4.4陽性對(duì)照：取鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)工作液用水稀釋為10μg/L。

4.5鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品。

5儀器設(shè)備

5.1電子天平：感量分別為0.01mg和1mg。

5.2離心機(jī)：≥3000rpm。

5.3水浴鍋。

6檢測(cè)步驟

6.1樣品制備

取新鮮或解凍后的供試樣品適量（約1g），剪碎，裝入3mL離心管中，蓋緊管蓋，100℃加熱5

min，取出，自然冷卻，3000rpm離心5min，取上清組織滲出液100μL，加入100μL金標(biāo)樣品

稀釋液（4.2.9），混勻，備用。

6.2溶液制備

6.2.1鹽酸克倫特羅儲(chǔ)備液

準(zhǔn)確稱取鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇溶解后稀釋成1mg/mL的儲(chǔ)備液，－18℃冰箱中貯存

備用，有效期3個(gè)月。

6.2.2鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)工作液

取鹽酸克倫特羅儲(chǔ)備液，用水稀釋至100μg/L，4℃中貯存?zhèn)溆?，有效?個(gè)月。

6.3樣品檢測(cè)

6.3.1從包裝袋中取出鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測(cè)卡，置于平整的臺(tái)面上，檢測(cè)卡應(yīng)即開

即用。

6.3.2用塑料吸管（4.2.8）垂直滴加2滴（約60μL～80μL）無氣泡上清液（6.1）于加樣孔（S）

內(nèi)，每批需做陰性對(duì)照和陽性對(duì)照各一個(gè)，加樣方法同待測(cè)樣品。

6.3.3加樣后5min時(shí)觀察結(jié)果。

7結(jié)果判斷

7.1有效性確認(rèn)

7.1.1陰性對(duì)照在檢測(cè)區(qū)（T）出現(xiàn)顯色條帶（參見附錄A，下同），所有陽性對(duì)照在檢測(cè)區(qū)（T）均

不出現(xiàn)顯色條帶，且質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條顯色條帶，說明檢測(cè)卡有效，可進(jìn)行檢測(cè)。

7.1.2如陰性對(duì)照檢測(cè)區(qū)（T）不出現(xiàn)顯色條帶，或陽性對(duì)照檢測(cè)區(qū)（T）出現(xiàn)顯色條帶，或質(zhì)控區(qū)（C）

不出現(xiàn)一條顯色條帶，說明檢測(cè)卡無效，不能進(jìn)行檢測(cè)。

2

DB34/T824—2020

7.2測(cè)定結(jié)果

7.2.1陽性（+）：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條顯色條帶，在檢測(cè)區(qū)（T）內(nèi)無顯色條帶出現(xiàn)。陽性結(jié)果表

明：樣本中含有鹽酸克倫特羅且含量在檢測(cè)限以上。

7.2.2陰性（-）：兩條顯色條帶出現(xiàn)。一條位于檢測(cè)區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)。陰性結(jié)

果表明：樣本中不含鹽酸克倫特羅或其含量在檢測(cè)限以下。

7.2.3無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)顯色條帶，表明本次檢測(cè)無效（失效原因包括操作過程不當(dāng)或檢測(cè)卡

已過有效期等）。在此情況下，應(yīng)再次仔細(xì)閱讀說明書，更換檢測(cè)卡重新檢測(cè)。

8結(jié)果確認(rèn)

陽性樣品應(yīng)使用色譜質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行確認(rèn)。

3

DB34/T824—2020

AA

附錄A

（資料性附錄）

檢測(cè)結(jié)果判斷示意圖