演講人：日期:病理科炎癥病變病理制片流程CATALOGUE目錄01樣本接收與初步處理02組織包埋與切片準(zhǔn)備03切片制作技術(shù)要點(diǎn)04常規(guī)染色標(biāo)準(zhǔn)流程05封片與標(biāo)識(shí)規(guī)范06制片質(zhì)控與歸檔01樣本接收與初步處理樣本登記與信息核對(duì)確保每個(gè)樣本均有唯一標(biāo)識(shí)碼，詳細(xì)記錄患者信息、樣本類型及臨床診斷要求，避免混淆或信息遺漏。樣本標(biāo)識(shí)與記錄采用雙人獨(dú)立核對(duì)樣本信息與申請(qǐng)單的一致性，重點(diǎn)核查患者姓名、樣本部位及特殊處理要求，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確無誤。雙人核對(duì)機(jī)制將樣本信息及時(shí)錄入實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)（LIS），生成可追溯的電子檔案，便于后續(xù)流程監(jiān)控和質(zhì)量控制。電子系統(tǒng)錄入010203組織預(yù)處理與修整組織清潔與去污使用生理鹽水或緩沖液輕柔沖洗樣本表面血液或黏液，避免機(jī)械損傷，保持組織原始形態(tài)結(jié)構(gòu)完整性。針對(duì)性修整技術(shù)根據(jù)組織類型（如致密腫瘤或疏松黏膜）選擇不同刀具，修剪多余脂肪或壞死區(qū)域，保留典型病變區(qū)域供制片使用。三維定位標(biāo)記對(duì)定向要求高的標(biāo)本（如切緣組織），采用染色或縫線標(biāo)記方位，確保后續(xù)切片能準(zhǔn)確反映解剖學(xué)關(guān)系。03固定液選擇與固定時(shí)長02特殊組織處理方案對(duì)脂肪組織（如乳腺）添加鈣鹽輔助固定，骨髓組織需先進(jìn)行脫鈣處理，確保后續(xù)切片質(zhì)量達(dá)標(biāo)。動(dòng)態(tài)滲透監(jiān)控通過組織厚度計(jì)算最佳固定時(shí)長（通常1mm/h），使用磁力攪拌裝置加速固定液滲透，定期評(píng)估固定效果并調(diào)整參數(shù)。01中性福爾馬林標(biāo)準(zhǔn)化應(yīng)用常規(guī)組織采用10%中性緩沖福爾馬林固定，其pH值穩(wěn)定在7.2-7.4，可有效保存細(xì)胞核細(xì)節(jié)并防止人工假象產(chǎn)生。02組織包埋與切片準(zhǔn)備脫水梯度與透明處理010203梯度酒精脫水組織需依次經(jīng)過低濃度（如70%）至高濃度（如無水乙醇）酒精梯度脫水，逐步置換水分，避免組織收縮或變形，確保后續(xù)試劑滲透均勻。二甲苯透明化處理脫水后組織需經(jīng)二甲苯透明化，置換酒精并溶解脂類物質(zhì)，使組織呈現(xiàn)透明狀態(tài)，為石蠟浸透創(chuàng)造條件。處理時(shí)間需根據(jù)組織類型調(diào)整，避免過度硬化。特殊組織處理對(duì)富含脂肪或致密結(jié)締組織的樣本，需延長透明化時(shí)間或采用混合透明劑（如二甲苯與苯甲酸甲酯），確保徹底清除殘留水分與脂質(zhì)。透明化后的組織需在熔融石蠟中分階段浸透（如低熔點(diǎn)至高熔點(diǎn)石蠟），每次浸透時(shí)間需嚴(yán)格控制，確保石蠟充分填充組織間隙，避免切片時(shí)產(chǎn)生空洞或碎裂。石蠟浸透與包埋方向石蠟浸透程序包埋時(shí)需根據(jù)組織解剖結(jié)構(gòu)（如腸黏膜、皮膚等）調(diào)整方向，確保切片能完整顯示目標(biāo)病變區(qū)域。例如，皮膚組織應(yīng)垂直包埋以同時(shí)觀察表皮與真皮層。包埋方向優(yōu)化依據(jù)組織大小選擇合適模具，避免組織擠壓或邊緣溢出，同時(shí)需快速冷卻定型以減少石蠟結(jié)晶形成，提升切片質(zhì)量。包埋模具選擇快速冷凍技術(shù)切片時(shí)需配合防卷板平整組織，并在載玻片上涂抹多聚賴氨酸或正電荷粘附劑，增強(qiáng)切片附著力，避免染色過程中脫落。防卷板與粘附劑使用異染性組織處理對(duì)易產(chǎn)生冰晶或脆性高的組織（如腦、脂肪），可添加OCT包埋劑保護(hù)結(jié)構(gòu)，并調(diào)整切片厚度至4-6μm，減少人工假象。新鮮組織需在液氮或異戊烷中快速冷凍，防止冰晶形成導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞。冷凍后立即轉(zhuǎn)移至恒冷箱切片機(jī)，維持-20℃至-25℃低溫環(huán)境。冷凍切片特殊處理03切片制作技術(shù)要點(diǎn)切片厚度質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)厚度范圍控制常規(guī)石蠟切片厚度應(yīng)嚴(yán)格控制在3-5微米之間，過厚會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞重疊影響觀察，過薄則易造成組織斷裂或染色不均。切片刀鋒利度檢查修塊平整度調(diào)整定期更換或打磨切片刀，確保刀刃無缺口，避免因刀具鈍化導(dǎo)致組織擠壓或厚度不均。組織塊表面需修切至完全平整，否則切片時(shí)會(huì)出現(xiàn)厚度波動(dòng)，需通過微調(diào)切片機(jī)進(jìn)樣螺絲實(shí)現(xiàn)均勻切削。裱片水溫與防脫片恒溫水浴溫度設(shè)定裱片水浴溫度應(yīng)維持在40-45℃之間，水溫過高易導(dǎo)致組織膨脹變形，過低則無法充分展開皺褶。防脫片劑預(yù)處理用細(xì)針輕柔調(diào)整切片位置，避免暴力操作導(dǎo)致組織撕裂，同時(shí)控制切片在水面停留時(shí)間不超過20秒。載玻片需提前涂覆多聚賴氨酸或APES等粘附劑，并在60℃烘箱中固化30分鐘以增強(qiáng)組織黏附力。組織展片技巧烘片溫度與時(shí)間控制采用階梯式升溫，先60℃烘烤30分鐘初步固定，再升至70℃維持2小時(shí)以徹底去除石蠟。梯度烘片程序?qū)τ谥净蚋缓窃慕M織，烘片溫度需降低至55℃并延長至4小時(shí)，防止高溫導(dǎo)致結(jié)構(gòu)破壞。溫度敏感性組織處理烘烤后的切片需在干燥器中緩慢冷卻至室溫，避免驟冷造成切片脆裂或脫片。烘片后冷卻規(guī)范04常規(guī)染色標(biāo)準(zhǔn)流程蘇木精染液配制需精確稱量蘇木精、氧化劑及穩(wěn)定劑，溶解于乙醇與蒸餾水混合液中，過濾后避光保存，確保染色核質(zhì)對(duì)比清晰。伊紅染液配制選用水溶性或醇溶性伊紅，按比例與冰醋酸、蒸餾水混合，調(diào)節(jié)pH至弱酸性，以增強(qiáng)胞質(zhì)著色特異性。分化液濃度控制鹽酸乙醇分化液需嚴(yán)格按0.5%-1%濃度配制，避免過度分化導(dǎo)致核染色丟失或不足。返藍(lán)液選擇常采用弱堿性溶液（如氨水或Scott液），中和殘留酸性分化液，恢復(fù)細(xì)胞核藍(lán)色顯色效果。HE染色液配制規(guī)范分化返藍(lán)關(guān)鍵步驟分化時(shí)間把控返藍(lán)液作用機(jī)制分化終止操作返藍(lán)效果驗(yàn)證切片浸入分化液時(shí)間控制在5-15秒，需顯微鏡下實(shí)時(shí)觀察至細(xì)胞核與背景分界清晰為止。立即用流動(dòng)自來水沖洗10-20秒，徹底終止分化反應(yīng)，防止過度脫色影響后續(xù)染色質(zhì)量。通過堿性環(huán)境促使蘇木精-金屬復(fù)合物重新結(jié)合DNA，增強(qiáng)核染色強(qiáng)度，操作時(shí)需確保切片完全浸沒。顯微鏡下檢查細(xì)胞核應(yīng)呈現(xiàn)鮮明藍(lán)色，若返藍(lán)不足需重復(fù)處理，避免假陰性結(jié)果干擾診斷。特殊染色應(yīng)用場景結(jié)締組織染色（Masson三色）用于區(qū)分炎癥病變中膠原纖維（藍(lán)色）與肌纖維（紅色），輔助診斷纖維化或肉芽腫性炎。01淀粉樣物染色（剛果紅）在慢性炎癥伴淀粉樣變性時(shí)，通過偏振光下蘋果綠雙折光特性明確淀粉樣蛋白沉積范圍。02微生物染色（PAS/GMS）針對(duì)真菌或細(xì)菌感染性炎癥，PAS染色凸顯多糖莢膜，GMS染色增強(qiáng)黑色素背景對(duì)比度。03含鐵血黃素染色（普魯士藍(lán)）鑒別慢性淤血性炎癥中的鐵沉積，輔助判斷出血性病變或含鐵血黃素沉著癥。0405封片與標(biāo)識(shí)規(guī)范梯度乙醇脫水程序組織塊需依次經(jīng)過低濃度至高濃度乙醇（如70%、80%、95%、100%）進(jìn)行梯度脫水，每道程序需嚴(yán)格控制時(shí)間以避免組織收縮或硬化，確保后續(xù)透明劑充分滲透。脫水透明梯度設(shè)置二甲苯透明處理脫水后組織需轉(zhuǎn)入二甲苯透明液，分兩階段處理（各15-30分鐘），徹底置換乙醇并增強(qiáng)組織透光性，為石蠟浸潤創(chuàng)造條件。操作時(shí)需通風(fēng)防揮發(fā)，避免透明過度導(dǎo)致組織脆化。特殊組織優(yōu)化方案針對(duì)脂肪或纖維豐富組織，需延長高濃度乙醇和二甲苯處理時(shí)間，必要時(shí)添加中間溶劑（如丙酮）以提高脫水效率。中性樹膠封片技巧樹膠濃度與滴加量控制使用中性樹膠（折射率1.52-1.54）時(shí)，需調(diào)整至適宜粘度（通常稀釋至70%-80%），滴加量以覆蓋組織邊緣外1-2mm為宜，避免氣泡或膠體溢出。蓋玻片操作規(guī)范以45度角緩慢覆蓋蓋玻片，利用毛細(xì)作用使樹膠均勻擴(kuò)散，加壓時(shí)使用鈍頭鑷子從中心向邊緣排除氣泡，靜置24小時(shí)固化。環(huán)境溫濕度管理封片環(huán)境需維持溫度20-25℃、濕度<60%，防止樹膠結(jié)晶或潮解。冬季可預(yù)熱載玻片至37℃以改善流動(dòng)性。病理編號(hào)標(biāo)注標(biāo)準(zhǔn)采用耐有機(jī)溶劑油性筆或激光刻錄，在載玻片磨砂端標(biāo)注病例編號(hào)（如“P2023-XXXX”），字高≥2mm，需包含科室代碼和切片序號(hào)。永久性標(biāo)識(shí)要求編號(hào)格式應(yīng)符合醫(yī)院LIS系統(tǒng)規(guī)則，避免特殊字符（如#、&），確保掃描槍可識(shí)別。歸檔系統(tǒng)兼容性編號(hào)須與蠟塊標(biāo)簽、申請(qǐng)單完全一致，封片前后分別由技術(shù)員和質(zhì)檢員核對(duì)，誤差率需<0.1%。雙重核對(duì)機(jī)制06制片質(zhì)控與歸檔染色結(jié)果分級(jí)評(píng)估分級(jí)量化體系采用半定量評(píng)分系統(tǒng)（如0-3+分級(jí)），根據(jù)染色強(qiáng)度、分布范圍及陽性細(xì)胞比例進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化記錄，確保結(jié)果可追溯且可重復(fù)。特異性著色標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估特殊染色（如免疫組化）的特異性，排除非特異性背景著色，重點(diǎn)關(guān)注目標(biāo)抗原表達(dá)部位的顯色強(qiáng)度與定位準(zhǔn)確性。染色均勻性評(píng)估需檢查切片整體染色是否均勻，避免出現(xiàn)局部過染或脫色現(xiàn)象，確保細(xì)胞核與胞質(zhì)對(duì)比清晰，便于病理醫(yī)師觀察診斷。切片完整性檢查項(xiàng)標(biāo)簽與編號(hào)核對(duì)嚴(yán)格匹配切片編號(hào)與申請(qǐng)單信息，防止樣本混淆，同時(shí)檢查標(biāo)簽防脫落性能及耐溶劑性，避免歸檔后信息丟失。厚度與平整度控制切片厚度需符合標(biāo)準(zhǔn)（通常3-5μm），并保證整體平整無氣泡或皺褶，尤其注意脂肪或鈣化組織的特殊處理要求。組織完整性驗(yàn)證檢查切片是否存在組織缺失、折疊或撕裂，確保關(guān)鍵病變區(qū)域（如腫瘤邊緣、浸潤灶）完整保留，避免因制片缺陷導(dǎo)致誤診。歸檔存儲(chǔ)環(huán)境要求溫濕度調(diào)控歸檔室需維持恒溫