專題09生物技術(shù)與工程

〔五年考情?探規(guī)律）c

考點5年考情（202L2025）命題趨勢

2023?廣東“0

考點1發(fā)酵工程2022?廣東-選考21

2021.廣東-選考21

2025?廣東-7從近五年廣東省高考試題來

2025?廣東-21看，發(fā)醉工程主要考察微生物的接

2024?廣東-4種方法、培養(yǎng)基的配置和微生物的

2022?廣東-12篩選等。細(xì)胞工程主要考察植物體

考點2基因工程

2024?廣東-21細(xì)胞雜交技術(shù)、植物組織的培養(yǎng)及

2023?廣東-20基本過程、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)等。

2022?廣東-選考22基因工程相關(guān)知識是高考的必考

2021?廣東-選考22內(nèi)容，也是高考難點，基因表達(dá)載

體的構(gòu)建、PCR擴增的原理與過程

2025?廣東-5

考點3細(xì)胞工程這些考點常在非選擇題中出現(xiàn)。

2023?廣東-5

考點4胚胎工程2023?廣東3

（五年真題?分點精準(zhǔn)練）

考點01發(fā)酵工程

1、（2023?廣東-10）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)

堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是（）

Q

0123456

堆肥時間（天）

A.a點時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基

B.b點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基

C.b點時取樣、蛋白凍氮源培養(yǎng)基

D.c點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基

2、（2022?廣東-選考21）研究深海獨特的生態(tài)環(huán)境對于開發(fā)海洋資源具有重要意義。近期在“科學(xué)號”考察

船對中國南海科考中，中國科學(xué)家采集了某海域1146米深海冷泉附近沉積物樣品，分離、鑒定得到新的微

生物菌株并進一步研究J'其生物學(xué)特性。

(

-。纖維素

K、

U

-*■木聚糖

<O-

一?果膠

)

菰

理?甘露聚箱

思?淀粉

回答下列問題:

（1）研究者先制備富集培養(yǎng)基，然后采用法滅菌，冷卻后再接入沉積物樣品，28c厭氧

培養(yǎng)一段時間后，獲得了含擬桿菌的混合培養(yǎng)物，為了獲得純種培養(yǎng)物，除了稀釋涂布平板法，還可采用

法。據(jù)圖分析，擬桿菌新菌株在以為碳源時生長狀況最好。

（2）研究發(fā)現(xiàn)，將采集的樣品置于各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，仍有很多微生物不能被分離篩選出來，推測其原因

可能是o（答一點即可）

（3）藻類細(xì)胞解體后的難降解多糖物質(zhì)，通常會聚集形成碎屑沉降到深海底部。從生態(tài)系統(tǒng)組成成分的角

度考慮，擬桿菌對深海生態(tài)系統(tǒng)碳循環(huán)的作用可能是，

（4）深海冷泉環(huán)境特殊，推測此環(huán)境下生存的擬桿菌所分泌的各種多糖降解酶，除具有酶的一般共性外,

其特性可能還有。

3、（2021?廣東-選考21）中國科學(xué)家運用合成生物學(xué)方法構(gòu)建了一株嗜鹽單胞菌H,以糖蜜（甘蔗榨糖后的

廢棄液，含較多蔗糖）為原料，在實驗室發(fā)酵生產(chǎn)PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整體

利用價值。工藝流程如圖。

回答下列問題:

（1）為提高菌株H對蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液體培養(yǎng)基中將蔗糖作為,并不斷提

高其濃度，經(jīng)多次傳代培養(yǎng)（指培養(yǎng)一段時間后，將部分培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入新配的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)）以獲得目

標(biāo)菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用的方法進行菌落計數(shù)，評估菌株增殖狀況。此外，選育優(yōu)良

菌株的方法還有等。（答出兩種方法即可）

（2）基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強等特性，研究人員設(shè)計了一種不需要滅菌的發(fā)酵系統(tǒng)，其培養(yǎng)基鹽

濃度設(shè)為60g/L,pH為10,菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上。該系統(tǒng)不需要滅菌的原因是0（答

出兩點即可）

（3）研究人員在工廠進行擴大培養(yǎng)，在適宜的營養(yǎng)物濃度、溫度、pH條件卜.發(fā)酵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中菌株

H細(xì)胞增殖和PHA產(chǎn)量均未達(dá)到預(yù)期，并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì)，說明發(fā)酵條件中可能是高密

度培養(yǎng)的限制因素。

（4）菌株H還能通過分解餐廚垃圾（主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等）來生產(chǎn)PHA,說明其能分泌。

考點02基因工程

1、（2025"東?7）Solexa測序是一種將PCR與熒光檢測相結(jié)合的高通量測序技術(shù)。為了確保該PCR過程中，

DNA聚合酶催化一個脫氧核甘酸單位完成聚合反應(yīng)后，DNA鏈不繼續(xù)延伸，應(yīng)保護底物中脫氧核糖結(jié)構(gòu)上

的（）

A.堿基B.2：氫C.3：羥基D.5'-磷酸基團

2、（2024?廣東-4）關(guān)于技術(shù)進步與科學(xué)發(fā)現(xiàn)之間的促進關(guān)系，下列敘述正確的是（）

A.電子顯微鏡的發(fā)明促進細(xì)胞學(xué)說的提出

B.差速離心法的應(yīng)用促進對細(xì)胞器的認(rèn)識

C.光合作用的解析促進花期控制技術(shù)的成熟

D.RNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)促進PCR技術(shù)的發(fā)明

3、（2022?廣東?12）X噬菌體的線性雙鏈DNA兩端各有一段單鏈序列。這種噬菌體在侵染大腸桿菌后其

DNA會自連環(huán)化（如圖），該線性分子兩端能夠相連的主要原因是（）

TCCAGCGGCGGG

y_CCCGCCGCTGGA%，環(huán)化,AGGTCGCCGCCC、

gGGGCGGCGACCT5<）

A.單鏈序列脫氧核甘酸數(shù)量相等

B.分子骨架同為脫氧核糖與磷酸

C.單鏈序列的堿基能夠G補配對

D.自連環(huán)化后兩條單鏈方向相同

4、（2025?廣東?21）大腸桿菌是重要工業(yè)菌株之一，其培養(yǎng)過程可分為快速生長期和生長穩(wěn)定期兩個階段。

為了通過調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成與降解速率來動態(tài)調(diào)控代謝途徑關(guān)鍵酶的蛋白量，使細(xì)胞適配不同階段的生產(chǎn)需

求，研究者設(shè)計了兩種質(zhì)粒，并以穩(wěn)定性好的紅色熒光蛋白mKate2為模式蛋白。測試質(zhì)粒功能。回答下列

問題：

（1）研究者首先構(gòu)建質(zhì)粒①（圖a）用于在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)C-末端帶SsrA短肽的mKate2,將質(zhì)粒導(dǎo)入感受態(tài)

細(xì)胞后，在添加抗生素的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)基上菌落的生長狀況，結(jié)合PCR及檢測，篩

選獲得重組菌株W1。

質(zhì)粒①才口畫SsMH終止弄抗性基斯卜

質(zhì)粒②3MlX|SsM商同抗性基因2卜

注：PG,。為大腸桿菌內(nèi)源啟動子，在細(xì)胞快速生K期開啟基

因轉(zhuǎn)錄，但進入生長穩(wěn)定期后即停止基因轉(zhuǎn)錄；SsM基因

編碼SsrA短肽；C?末端帶有SsrA短肽的蛋白質(zhì)可被大腸

桿菌內(nèi)源蛋白酶系統(tǒng)特異性識別并以一定速率降解。

圖a

（2）將WI在適宜條件下進行搖瓶培養(yǎng)，定時取樣檢測培養(yǎng)液口細(xì)胞密度，方法有（答一種）。接種

前需檢測液體培養(yǎng)基的熒光強度，其作用是,培養(yǎng)結(jié)果（圖b）表明，進入生長穩(wěn)定期后熒光強度

快速下降，原因是O

:一細(xì)胞量

!-一熒光強度

快速生長期生長穩(wěn)定期

圖b

（3）研究者選用啟動子Px、X基因（編碼阻遏蛋白X,阻遏Px開啟轉(zhuǎn)錄），重新構(gòu)建質(zhì)粒②（圖a）,導(dǎo)入

野生型大腸桿菌中獲得重組菌株W2。在適宜條件下?lián)u瓶培養(yǎng)，W2的生長趨勢不變，培養(yǎng)期間熒光強度的

變化趨勢為。

（4）莽草酸是一種重要工業(yè)化學(xué)品，其胞內(nèi)合成代謝途徑見圖c。由于野生型大腸桿菌胞內(nèi)酶A活性弱，

且莽草酸會被快速轉(zhuǎn)化為細(xì)胞生長必需物，因此細(xì)胞中無法大量積累莽草酸。為了保證細(xì)胞正常生長，并

在生長穩(wěn)定期實現(xiàn)莽草酸的大量積累，利用上述兩種質(zhì)粒的調(diào)控功能，結(jié)合野生型菌株遺傳物質(zhì)的改造，

提出重組生產(chǎn)菌株構(gòu)建思路：O

碳源f前體皿……―莽草酸些……—細(xì)胞生長必需物

圖C

5、（2024?廣東-21）駒形桿菌可合成細(xì)菌纖維素（BC）并將其分泌到胞外組裝成膜。作為一種性能優(yōu)異的

生物材料，BC腴應(yīng)用廣泛。研究者設(shè)計了酪氨酸酶（可催化酪氨酸形成黑色素）的光控表達(dá)載體，將其轉(zhuǎn)

入駒形桿菌后構(gòu)建出一株能合成BC膜并可實現(xiàn)光控染色的工程菌株，為新型紡織原料的綠色制造及印染工

藝升級提供了新思路（圖一）。

蝴K藍(lán)光處Y理3天

3靜

膜

酒

置

染

培

至

BC轉(zhuǎn)

續(xù)

繼

養(yǎng)..M洗滌，去

池

色

養(yǎng)

培

10天除菌體等

二染色液

培養(yǎng)液培養(yǎng)液培養(yǎng)液（含酪氨

酸等）已染色的BC膜

圖一

回答下列問題：

（1）研究者優(yōu)化了培養(yǎng)基（答兩點）等營養(yǎng)條件，并控制環(huán)境條件，大規(guī)模培養(yǎng)工程菌株后可

在氣液界面處獲得BC菌膜（菌體和BC膜的復(fù)合物）。

（2）研究者利用T7噬菌體來源的RNA聚合酹（T7RNAP）及藍(lán)光光敏蛋白標(biāo)簽，構(gòu)建了一種可被藍(lán)光調(diào)

控的基因表達(dá)載體（光控原理見圖二a,載體的部分結(jié)構(gòu)見圖二b）。構(gòu)建載體時，選用了通用型啟動子PBAD

（被工程菌RNA聚合酶以別）和特異型啟動子PT7（僅被T7RNAP識別）。為實現(xiàn)藍(lán)光控制染色，啟動子

①②及③依次為,理由是。

藍(lán)光光敏蛋白標(biāo)簽

無活性的T7RNAP

a

/］啟動子①HKETH啟動子姨動子淵

注：基因1編碼酪氨酸酶，基因2編碼T7RNAPN端-nMag,基因3編碼

pMag-T7RNAPC端。

b

圖二

（3）光控表達(dá)載體攜帶大觀霉素（抗生素）抗性基因。長時間培養(yǎng)時在培養(yǎng)液中加入大觀霉素，其作用為

_________________________（答兩點）。

（4）根據(jù)預(yù)設(shè)的圖案用藍(lán)光照射已長出的BC菌膜并繼續(xù)培養(yǎng)一段時間，隨后將其轉(zhuǎn)至染色池處理，發(fā)現(xiàn)

只有經(jīng)藍(lán)光照射的區(qū)域被染成黑色，其原因是o

（5）有企業(yè)希望生產(chǎn)其他顏色圖案的BC膜。按照上述菌株的構(gòu)建模式提出一個簡單思路o

6、（2023?廣東-20）種子大小是作物重要的產(chǎn)量性狀。研究者對野生型擬南芥（2n=10）進行誘變篩選到一

株種子增大的突變體。通過遺傳分析和測序，發(fā)現(xiàn)野生型DV基因發(fā)生一個堿基G到A的替換，突變后的

基因為隱性基因，據(jù)此推測突變體的表型與其有關(guān)，開展相關(guān)實驗。

回答下列問題：

（1）擬采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將野生型DAI基因轉(zhuǎn)入突變體植株，若突變體表型確由該突變造成，則轉(zhuǎn)基因植

株的種子大小應(yīng)與植株的種子大小相近。

（2）用PCR反應(yīng)擴增04/基因，用限制性核酸內(nèi)切酣對PCR產(chǎn)物和進行切割，用DNA連接酶

將兩者連接。為確保插入的DAI基因可以正常表達(dá)，其上下游序列需具備。

（3）轉(zhuǎn)化后，T-DNA（其內(nèi)部基因在減數(shù)分裂時不發(fā)生交換）可在基因組單一位點插入也可以同時插入多

個位點。在插入片段均遵循基因分離及自由組合定律的前提下，選出單一位點插入的植株，并進?步獲得

bl的基因穩(wěn)定遺傳的植株（如圖），用于后續(xù)驗證突變基因與表型的關(guān)系。

［o］農(nóng)桿菌TDNA攜帶at理因和卡那霉素抗性基因）

/花序浸沒于農(nóng)桿函函液進行轉(zhuǎn)化

?四一二

卡那零素選擇培＜=§§＞卞那蓮類選擇培隹＞卞鱉筐會差茸培鎂＞

養(yǎng)基篩選種子養(yǎng)基篩選種子養(yǎng)基篩選種子

T】代T2代13代

①農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化To代植株并自交，將「代種了?播種在選擇培養(yǎng)基I-.,能夠萌發(fā)并生長的陽性個體即表示其基

因組中插入了。

②［代陽性植株自交所得的T2代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，選擇陽性率約%的培養(yǎng)基

中幼苗繼續(xù)培養(yǎng)。

③將②中選出的T2代陽性植株（填“自交”、“與野生型雜交”或“與突變體雜交”）所得的

T3代種子按單株收種并播種于選擇培養(yǎng)基，陽性率達(dá)到%的培養(yǎng)基中的幼苗即為目標(biāo)轉(zhuǎn)基因植株。

為便于在后續(xù)研究中檢測該突變，研究者利用PCR擴增野生型和突變型基因片段，再使用限制性核酸內(nèi)切

酶X切割產(chǎn)物，通過核酸電泳即可進行突變檢測，相關(guān)信息見下，在電泳圖中將酶切結(jié)果對應(yīng)位置的條帶

涂黑O

5rCCTTTTCATT……⑹AGGACTCTGCCTT。TTACAAGTTA3'

野生型,GGAAAAGTAA……CTCCTGAGACGGAA,(150bp)

3A.ATGTTCAAT5

5'CCTTTTCAFTEAGGACTCTGCCTT.......TTACAAGTTA3'

突變型f(150bp)

3GGAAAAGTAA-?TTCCTGAGACGGAA.......AATGTTCAAT5，'"

10-50…………(150bp)

限制性內(nèi)切酶XAAGG;NNNNNNCCTT

識另及切割序列TTCCNNNNNNIGGAA（N代表任意核甘酸）

I

罹電泳圖標(biāo)準(zhǔn)參照物野生型突變型

150bp

100bp

50bp（bpi旨核甘酸時）

7、（2022?廣?東-選考22）“綠水逶迤去，青山相向開”大力發(fā)展低碳經(jīng)濟已成為全社會共識c基于某些梭

菌的特殊代謝能力，有研究者以某些工業(yè)廢氣（含CO2等一碳溫室氣體，多來自高污染排放企業(yè)）為原料，

通過厭氧發(fā)酵生產(chǎn)丙酮，構(gòu)建?種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù)。

；輔酶A乙酰乙酸

硫解酶轉(zhuǎn)移酶脫瘦酶

ThlACtfAB,Adc

CO"H+2x乙酰dCoA---------?乙酰da乙酰a*a丙

!乙酰CoA乙酸酮

梭菌細(xì)胞

回答下列問題：

（1）研究者針對每個需要擴增的酶基因（如圖）設(shè)計一對,利用PCR技術(shù)，在優(yōu)化反應(yīng)

條件后擴增得到目標(biāo)酶基因。

（2）研究者構(gòu)建了一種表達(dá)載體pMTL8（）k,用于在梭菌中建立多基因組合表達(dá)庫，經(jīng)篩選后提高丙酮的合

成量。該載體包括了啟動子、終止子及抗生素抗性基因等，其中抗生素抗性基因的作用是,

終止子的作用是O

（3）培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)重組梭菌大量表達(dá)上述酶蛋白時，出現(xiàn)了生長遲緩的現(xiàn)象，推測其原因可能是

，此外丙酮的積累會傷害細(xì)胞，需要進一步優(yōu)化菌株和工藝才能擴大應(yīng)用規(guī)模。

（4）這種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù)，實現(xiàn)了,體現(xiàn)了循環(huán)經(jīng)濟特點。從“碳中和”

的角度看，該技術(shù)的優(yōu)勢在于，具有廣泛的應(yīng)用前景和良好的社會效益。

8、（2021?廣東-選考22）非細(xì)胞合成技術(shù)是一種運用合成生物學(xué)方法，在細(xì)胞外構(gòu)建多酶催化體系，獲得目

標(biāo)產(chǎn)物的新技術(shù)，其核心是各種醉基因的挖掘、表達(dá)等。中國科學(xué)家設(shè)計了4步酶促反應(yīng)的非細(xì)胞介成路

線（如圖），可直接用淀粉生產(chǎn)肌醇（重要的醫(yī)藥食品原料），以期解決高溫強酸水解方法造成的嚴(yán)重污染

問題，并可以提高產(chǎn)率v

薇

磷

丁

磷酸

屣

哈

醇

肌

水

解

酶

成

空

一W

回答下列問題：

（1）研究人員采用PCR技術(shù)從土壤微生物基因組中擴增得到目標(biāo)酶基因。此外，獲得酶基因的方法還有

°（答出兩種即可）

（2）高質(zhì)量的DNA模板是成功擴增出目的基因的前提條件之一.在制備高質(zhì)量DNA模板時必須除去蛋白，

方法有o（答出兩種艮］可）

（3）研究人員使用大腸桿菌BL21作為受體細(xì)胞、pET20b為表達(dá)載體分別進行4種筋的表達(dá),表達(dá)載體轉(zhuǎn)

化大腸桿菌時，首先應(yīng)制備細(xì)胞。為了檢測目的基因是否成功表達(dá)出酶蛋白，需要采用的方法

有o

（4）依圖所示流程，在一定溫度、pH等條件下，將4種酶與可溶性淀粉溶液混合組成一個反應(yīng)體系。若

這些酶最適反應(yīng)條件不問，可能導(dǎo)致的結(jié)果是。在分子水平上，可以通過改變，

從而改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，實現(xiàn)對酹特性的改造和優(yōu)化。

考點03細(xì)胞工程

1、（2025?廣東-5）將人眼瞼成纖綏細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，再培養(yǎng)形成支架，在該支架上接種人口腔黏膜上皮細(xì)

胞，培養(yǎng)一段時間后分離獲得上皮細(xì)胞片層，可用于人工角膜的研究。上述過程不涉及（）

A.制備細(xì)胞懸液

B.置于5%CC>2等適宜條件下培養(yǎng)

C.離心收集細(xì)胞

D.用胰蛋白能消化支架后分離片層

2、（2023?廣東-5）人參皂昔是人參的主要活性成分。科研人員分別誘導(dǎo)人參根與胡蘿卜根產(chǎn)生愈傷組織并

進行細(xì)胞融合，以提高人參皂甘的產(chǎn)率。下列敘述錯誤的是（）

A.細(xì)胞融合前應(yīng)去除細(xì)胞壁

B.高Ca2+—高pH溶液可促進細(xì)胞融合

C.融合的細(xì)胞即為雜交細(xì)胞

D.雜交細(xì)胞可能具有生長快速的無勢

考點04胚胎工程

1、（2023?廣東3）科學(xué)家采用體外受精技術(shù)獲得紫羚羊胚胎，并將其移植到長角羚羊體內(nèi)，使后者成功妊

娠并產(chǎn)仔，該工作有助于恢復(fù)瀕危紫羚羊的種群數(shù)量。此過程不涉及的操作是（）

A.超數(shù)排卵B.精子獲能處理

C.細(xì)胞核移植D.胚胎培養(yǎng)

1年模擬?精選?？碱}

一、單選題

1.（2025?廣東廣州?三模）生產(chǎn)L-谷氨酸主要依賴有氧發(fā)酵，常用菌種谷氨酸棒狀桿菌大多為生物素合成缺

陷型。在各組發(fā)酵罐中分別添加不同濃度的生物素,檢測結(jié)果如下圖。下列敘述錯誤的是（)

2.0ug/L

1.0ug/L

0.5ug/L

0.25pg/L

A.發(fā)酵前用平板劃線法進行谷氨酸棒狀桿菌的純培養(yǎng)

B.發(fā)酵過程將空氣直接通入發(fā)酵罐以保證有氧條件

C.可在添加0.5|ig/L生物素發(fā)酵32h的條件下大規(guī)模生產(chǎn)

D.乙~丁組L?谷氨酸產(chǎn)量不與菌體細(xì)胞密度呈正比

2.（2025?廣東?模擬預(yù)測）某同學(xué)用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基進行酵母菌純培養(yǎng)，獲得甲、乙兩個長滿菌落的平板。

下列敘述正確的是（）

A.用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面劃線時需要轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿

B.甲組平板分2個區(qū)劃線，而乙組分3個區(qū)劃線

C.從甲、乙兩組平板都能分離出酵母菌的單菌落

D.只根據(jù)單菌落的大小可反映出酵母菌種類的差異

3.（2025?廣東廣州?二模）研究人員以YMA培養(yǎng)基（10g甘露醇（H）、0.4酵母粉、0.5gK2H2Po4、O.lgNaCk

0.2gMgSO47H2O,定容至IL）為基礎(chǔ)，探究某種大豆根瘤菌的碳源利用情況，實驗結(jié)果如圖。下列敘述錯誤的

是（）

0.6

64

2

O.

對照組葡萄糖蔗糖麥芽糖

A.添加酵母粉作為氮源，原因可能是根瘤菌在體外培養(yǎng)時固氮能力有所下降

B.實驗組需將甘露醉替換為等量的其他碳源，其他條件保持一致

C.測定根瘤菌的數(shù)量可以使用顯微鏡直接計數(shù)法

D.實驗結(jié)果直接證明大豆通過蔗糖的形式向根瘤菌供有機營養(yǎng)

4.（2025?廣東佛山?二模）為提高廚余垃圾分解效率，研究人員以廚余垃圾浸出液為培養(yǎng)基（CY）,對目標(biāo)

菌株Al、A2、A7和A8進行馴化（通過人工措施使微生物逐步適應(yīng)某一條件的方法），以制備高活性微生物

菌劑。相關(guān)實驗結(jié)果如圖所示。卜列分析錯誤的是（）

□LB

■CY

化后

馴化前馴

注：I.R培養(yǎng)基是實驗室常用的細(xì)菌培養(yǎng)基■

A.CY碳源、氮源豐富，比LB更適合大多數(shù)菌株生長

B.可利用稀擇涂布平板法對四種菌株進行篩選和計數(shù)

C.CY馴化培養(yǎng)可使四種菌株的基因頻率發(fā)生定向改變

D.從活菌數(shù)上評價，A2菌株的馴化效果最顯著

5.（2025?廣東清遠(yuǎn)?二模）下列相關(guān)實驗操作正確的是（）

A."酵母菌的純培養(yǎng)〃實驗中，可采用煮沸消毒法對培養(yǎng)基進行滅菌

B."DNA的粗提取與鑒定”實驗中，可用預(yù)冷的95%酒精溶解DNA

C.“植物組織培養(yǎng)〃實驗中，外植體接種后光照培養(yǎng)以形成愈傷組織

D.“PCR擴增目的基因〃實驗中，加入的dNTP可以提供能量加原料

6.（2025?廣東?二模）釀酒主要借助醉母菌的發(fā)酵作用，可以在家庭進行，也可以實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)?？蒲腥?/p>

員進行了關(guān)于雜種酵母菌在不同基質(zhì)中的發(fā)酵測試，結(jié)果見圖，下列敘述錯誤的是（）

4

5%蔗糖溶液+蒸煮過的糯米（甲組）

2

0

8

蒸煮過的糯米（乙組）

6

45%蔗糖溶液兩組）

2

024681012時間/h

A.實驗結(jié)果表明，酹母菌對蔗糖和淀粉的利用效率相近

B.為提高酒精產(chǎn)量，實驗過程應(yīng)該保持嚴(yán)格的無氟條件

C.家庭釀酒可在糯米中加入運量白砂糖以提高發(fā)酵效率

D.家庭釀酒難以嚴(yán)格滅菌，需要通過消毒抑制雜菌生長

7.（2025?廣東深圳?一模）根據(jù)現(xiàn)代生物技術(shù)原理，為解決以下四個問題，采用的相應(yīng)技術(shù)手段是（）

①快速培養(yǎng)名貴花卉②克服遠(yuǎn)緣植物有性雜交不親和的障礙③提高農(nóng)作物的抗病能力④干擾素的工業(yè)化

生產(chǎn)。

技術(shù)組織培養(yǎng)基因工程發(fā)酵工程體細(xì)胞雜交

A①②③④

B②①④③

C①③④②

D④②③①

A.AB.BC.CD.D

8.（2025?廣東?一模）下列關(guān)于培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用的敘述，錯誤的是（）

A.采用莖尖組織培養(yǎng)技術(shù)培育脫毒草莓

B.可用無機鹽、瓊脂和石油配制的培養(yǎng)基篩選石油降解菌

C.可用基因組編輯技術(shù)進行“設(shè)計完美嬰兒〃生殖性克隆人研究

D.可用PEG誘導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合成雜交瘤細(xì)胞

9.（2025?廣東廣州?一模）陳醋中的川苜嗪是治療血栓等疾病的新型藥物，能活血化瘀并對己聚集的血小板

有解離作用。研究人員為提高陳醋藥用價值，分別探究了傳統(tǒng)、機械生產(chǎn)工藝對川茸嗪含量的影響，結(jié)果

如下。下列敘述錯誤的是（）

川茸嗪含量/（mg］」）

生產(chǎn)工藝

發(fā)酵后進行傳統(tǒng)熏酷發(fā)酵后進行機械熏酷

發(fā)酵后熏酷前

（8O-9O04-5d）（110-120團12-24h）

傳統(tǒng)醋酸發(fā)酵0.383.1511.18

機械醋酸發(fā)酵1.334.7317.63

A.陳醋發(fā)酵過程中需要提供碳源、氮源并通入空氣

B.傳統(tǒng)熏酷時提高熏酷的溫度可以提高川茸嗪的產(chǎn)量

C.受皮外傷的患者在傷口愈合期間建議減少對陳醋的食用

D.選用機械醋酸發(fā)酵和機械熏酷方式釀造的食醋藥用價值更高

10.（2025?廣東珠海?模擬預(yù)測）一粒小麥（2N=14）和斯氏山羊草（2N=14）是近緣物種，是進行細(xì)胞生物

學(xué)研究的良好材料，下圖是科研人員在實驗室中進行相關(guān)研究的流程圖，A和B分別表示一個染色體組。下

列相關(guān)敘述錯誤的是（）

JLJL原生質(zhì)體融合

G原生質(zhì)體（BB）原生質(zhì)體

植株3

秋水仙素一田加八

X種子----------?植株2

一粒小麥斯氏山羊草種植~~?植株1

A.經(jīng)有性雜交所得植株1為不育異源二倍體

B.種子發(fā)育為植株1能體現(xiàn)細(xì)胞的全能性

C.圖示兩途徑獲得的植株2和3基因型相同

D.植物原生質(zhì)體融合說明細(xì)胞膜具有流動性

11.（2025?廣東湛江?模擬預(yù)測）雜交技術(shù)在生物學(xué)上應(yīng)用廣泛，包括個體水平、細(xì)胞水平和分子水平都可

以運用雜交。下列敘述正確的是（）

A.生產(chǎn)中培育香蕉脫毒苗常用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)

B.構(gòu)建特定疾病模型的動物可用動物細(xì)胞雜交瘤技術(shù)

C.抗原一抗體雜交可檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA

D.DNA分子雜交技術(shù)可以用來比較不同種生物DNA分子的差異

12.（2025?廣東惠州?一模）竹子與水稻同為禾本科不同亞科植物，染色體都是2N=24,但親和性非常差。

我省梅州市農(nóng)藝師鐘章美歷經(jīng)40多年，成功將竹子與水稻進行超遠(yuǎn)緣有性雜交，培育出了高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的新

品種竹稻F,其培育過程如下圖所示。下列敘述正確的是（）

釉稻A

國稻C望一其稻丁”.稻E缶竹稻F

X

粳稻

青皮竹秋水仙素

A.①過程得到中間材料稻C的原理為染色體變異

B.理論上可以用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)獲得竹稻F

C.竹稻F自交能獲得后代，說明竹子和水稻無生殖隔離

D.通過③過程得到竹稻F可穩(wěn)定遺傳，屬于二倍體

13.（2025?廣東清遠(yuǎn)?二模）科學(xué)家為解決馬鈴薯因感染茄科霍爾氏菌導(dǎo)致產(chǎn)量下降問題，利用植物體細(xì)胞

雜交技術(shù)成功獲得了茄子融合親本的青枯病抗性雜種植株。下列相關(guān)說法謂誤的是（）

融合

雜

愈

的

原

種

傷青枯病

混合酶?

生

質(zhì)

細(xì)

I組

|液處短］、抗性雜

胞

織

體種植株

A.混合附液處理過程需要用纖維素陶和果膠前混合去除細(xì)胞壁

B.過程①可利用聚乙二醇、Ca2?載體等方法誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合

C.過程②成功的標(biāo)志是融合的原生質(zhì)體長出新的細(xì)胞壁

D.過程③需對獲得的雜種植株進行篩選

14.（2025?廣東湛江?模擬預(yù)測）Rag2基因缺陷導(dǎo)致大鼠無法產(chǎn)生B、T淋巴細(xì)胞。科研人員將正常大鼠的胚

胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）注射到Rag2基因缺陷大鼠的桑直胚中，使其產(chǎn)生具有正常ES細(xì)胞來源的淋巴細(xì)胞群

的體細(xì)胞嵌合體，從而補充其缺失的淋巴細(xì)胞，其過程如圖所示。下列分析正確的是（）

A.嵌合體大鼠產(chǎn)生的B、T細(xì)胞直接由ES細(xì)胞分化而來

B.獲得的嵌合體大鼠的大部分細(xì)胞的Rag2基因沒有缺陷

C.注入桑其胚的ES細(xì)胞在囊胚期主要存在于內(nèi)細(xì)胞團

D.該實驗最終獲得了嵌合體大鼠證明ES細(xì)胞具有全能性

15.（2025?廣東深圳?二模）胞質(zhì)雄性不育（CMS）是線粒體基因引起的胞質(zhì)功能混亂現(xiàn)象,表現(xiàn)為花粉不育八

經(jīng)V射線處理的蕪普細(xì)胞（AA,A表示染色體組）和甘藍(lán)細(xì)胞（BB,B表示染色體組）融合，可獲得CMS

甘藍(lán)植株（BB）。下列分析埼誤的是（）

A.蕪菁細(xì)胞和甘藍(lán)細(xì)胞融合前需要去除兩者的細(xì)胞壁

B.Y射線照射的作用是促進蕪普細(xì)胞與甘藍(lán)細(xì)胞融合

C.融合后的CMS甘藍(lán)獲得了蕪菁細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)基因

D.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)為培育CMS甘藍(lán)提供一種路徑

16.（2025?廣東廣州,二模）研究發(fā)現(xiàn)，將牛的重構(gòu)胚的染色體組蛋白上特定位點的甲基化去除，可提高重

構(gòu)胚的發(fā)育率和牛體細(xì)胞核移植的成功率。下列說法錯誤的是（）

A.可將供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞中形成牛的重構(gòu)胚

B.向重構(gòu)胚注入去甲基化酹的mRNA可能有助于胚胎正常發(fā)育

C.應(yīng)將重構(gòu)胚培養(yǎng)至囊胚或原腸胚后移植入受體母牛子宮

D.推測表觀遺傳現(xiàn)象是制約體細(xì)胞核移植成功的原因之?

17.（2025?廣東廣州?模擬預(yù)測）研究發(fā)現(xiàn)，哺乳動物胎兒發(fā)育早期，造血干細(xì)胞會大量遷移至胎兒肝臟并

增殖分化。肝細(xì)胞中Fetua基因控制合成胎球蛋白A,該蛋白能架護造血干細(xì)胞基因組穩(wěn)定性，降低突變概

率。下列敘述錯誤的是（）

A.胎兒發(fā)育早期，肝臟可產(chǎn)生多種血細(xì)胞

B.胎兒早期胚胎細(xì)胞與造血干細(xì)胞分化程度相同

C.哺乳動物肝細(xì)胞和造血干細(xì)胞都含F(xiàn)etua基因

D.Fetua基因表達(dá)受阻會增大胎兒免疫功能失調(diào)的風(fēng)險

18.（2025?廣東廣州?模擬預(yù)測）為拯救瀕危野化單峰駱駝，科研人員利用現(xiàn)代生物技術(shù)嘗試進行人工培育,

流程如圖。下列敘述正確的是（）

A野化單峰駱駝（6）B野化單峰駱駝（?）C野化單峰駱駝（?）

12:

精子⑨卵母細(xì)胞……，去核卵母細(xì)胞不體細(xì)胞

]四I____________IIJ⑶?

受精卵重構(gòu)胚

；

早期胚胎，④，D受體（？）早期％胎

i---------1I.........V

E后代F后代（?）

A.過程①中常用促性腺激素處理雌性的馴養(yǎng)單峰駱駝

B.過程②中卵細(xì)胞膜和透明帶先后發(fā)生生理反應(yīng)阻止多精入卵

C.過程③應(yīng)選用M團期的卵母細(xì)胞，過程④移植的應(yīng)為原腸胚

D.E后代和F后代的核遺傳物質(zhì)均有部分來自于B

19.（2025?廣東洪江?模擬預(yù)測）生物學(xué)中重要的發(fā)現(xiàn)都離不開技術(shù)的創(chuàng)新。卜列屬于我國首先突破的科技

成果的是（）

①首次人工創(chuàng)建單條染色體的真成細(xì)胞

②首次在體外進行DNA改造成功構(gòu)建體外重組DNA分子

③首臺用于全肢體中風(fēng)康復(fù)的腦控人工神經(jīng)機器人系統(tǒng)

④首次獲得世界上第一只體細(xì)胞克隆羊

A.①④B.②③C.②④D.①③

20.（2025?廣東佛山?二模）生物工程技術(shù)發(fā)展常常受到自然發(fā)生的生物學(xué)過程啟示。下列對應(yīng)關(guān)系錯誤的

是（）

選項自然發(fā)生的生物學(xué)過程受啟示而發(fā)展的生物工程技術(shù)

A肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化基因工程

B細(xì)胞中DNA的復(fù)制PCR技術(shù)

C同卵雙胞胎的形成過程胚胎分割

D親緣關(guān)系近的植物可雜交植物體細(xì)胞雜交技術(shù)

A.AB.BC.CD.D

21.（2025?廣東廣州?二模）紫外線主要通過誘導(dǎo)DNA/鏈中相鄰的胸腺喀咤形成嗑口定二聚體而損傷DNA。DNA

復(fù)制時，嗒咤二聚體無法作模板，子鏈在此處隨機引入堿基后再進行延伸，導(dǎo)致發(fā)生突變，嚴(yán)重時會導(dǎo)致

細(xì)胞死亡。生物進化過程中形成了多種修復(fù)機制，圖示大腸桿菌兩種常見的修復(fù)喀混二聚體機制，其中光

解的需可見光提供能量。在某DNA損傷只形成一個喀咤二聚體的前提下，下列敘述錯誤的是（）

------------TT-------------------------TT------------

-------------AA---------------------------AA-----------

A.若該損傷的DNA分子未發(fā)生修復(fù)，復(fù)制時無法形成堿基序列正常的DNA

B.DNA修復(fù)機制的存在使大揚桿菌發(fā)生基因突變的頻率下降

C.依賴內(nèi)切酶、外切酶的DNA修復(fù)過程還需DNA連接酶筆的參與

D.用紫外線進行消毒后保持黑暗一段時間，有利于提高消毒效果

二、實驗題

22.（2025?廣東惠州?一模）科學(xué)家們正在開發(fā)一種混有枯草芽胞桿菌泡子的新型復(fù)合塑料，該胞子能耐受

塑料生產(chǎn)工藝中的高溫?zé)崛蹢l件。廢棄復(fù)合塑料內(nèi)的泡子在特定條件下能萌發(fā)產(chǎn)生大量枯草芽抱桿菌，從

而有效分解塑料?；卮鹣铝袉栴}：

⑴在實驗室中培養(yǎng)枯草芽胞桿菌時，可根據(jù)菌落的將它與其他微生物初步區(qū)分開，再將接種有枯

草芽抱桿菌的培養(yǎng)基置于條件下培養(yǎng)來篩選所需的菌株。

⑵適應(yīng)性實驗室進化（ALE）是指通過模擬自然選擇過程，在實驗室中對微生物進行長期培養(yǎng)和篩選，使其

逐漸適應(yīng)特定環(huán)境條件。與其相匕,利用基因工程直接改造微生物的優(yōu)點是。

⑶科學(xué)家對經(jīng)過ALE處理的狗子進行了全基因組測序，發(fā)現(xiàn)fusA突變和abrB突變均能夠顯著提高胞子的耐

熱性。為了進?步探究這兩種突變對提高抱子耐熱性是否存在協(xié)同效應(yīng)，請寫出相關(guān)實驗設(shè)計思

路：O

⑷科學(xué)家將表面蛋白基因cotB與綠色熒光蛋白基因gfp構(gòu)建成基因表達(dá)載體，導(dǎo)入耐熱胞子形成的菌株中

表達(dá)出融合蛋白，從而使綠色熒光能錨定在細(xì)胞表面顯示材料中電子的萌發(fā)狀態(tài)。下圖中最適合的表達(dá)載

體是,判斷理由是___________。

甲乙

注：/%，為氨茉青霉素抗性基因，一表示轉(zhuǎn)錄方向，

UAG、UAA、UGA是終止密碼子，AUG是起始密碼子。

⑸未來若將該技術(shù)應(yīng)用于生產(chǎn)實踐中，還需考慮哪些具體問題：（回答1點即可）。

23.（2025?廣東湛江?二模）研究人員利用基因工程的方法將油料作物紫蘇的二酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酹（DGAT1）

基因?qū)胨奈矕旁澹ú僮鬟^程如圖），獲得轉(zhuǎn)基因的高產(chǎn)油脂四尾柵藻。利用地?zé)釓U水培養(yǎng)該藻，在生產(chǎn)生

物柴油的同時，還能治理地?zé)釓U水。請回答下列問題:

復(fù)制原點

pMD19LacZ復(fù)制原點

氨茶青?霉素克降或粒

抗性基因PMD19-B轉(zhuǎn)化小

篩選大腸桿菌

莪郎f總RNA->cDNAf（zzz2

織細(xì)胞DGAT1基因提取質(zhì)粒

啟動子、，用限制酶酶切

卡那霉素Ba源I

pBH21

抗性基因Xba\、

復(fù)制原點終止子

轉(zhuǎn)化

檢測、鑒定等*

四尾柵藻

注：lacZ基因編碼產(chǎn)物在X-gal和IPTG存在下，可以產(chǎn)生藍(lán)色沉淀，使菌落呈現(xiàn)藍(lán)色，否則菌落呈現(xiàn)白色。

⑴為保證從紫蘇細(xì)胞中獲得的DGAT1基因與pMD19克隆質(zhì)粒相連，可在設(shè)計PCR所用引物時，在引物的一

端加上特定限制酶的識別序列。第一次轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞是大腸桿菌，結(jié)合該細(xì)胞的特點說明這樣做的目的

是。

⑵經(jīng)轉(zhuǎn)化的大腸桿菌可通過________（方法）接種到培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。為篩選目標(biāo)菌株，培養(yǎng)基應(yīng)加入

的成分有。在該培養(yǎng)基中，目標(biāo)菌株的菌落呈________色。

⑶啟動子往往具有物種特異性，在載體PBI121質(zhì)粒中插入紫蘇DCAT1基因，其上游啟動子應(yīng)選擇

（填〃紫蘇DGAT1基因〃、“大腸桿菌〃或“四尾柵藻〃）的啟動子。

⑷為檢測轉(zhuǎn)基因四尾柵藻對地?zé)釓U水的治理能力，研究人員設(shè)計實驗并得到相應(yīng)實驗結(jié)果如下表。該實驗

不能說明轉(zhuǎn)DGAT1基因顯著提高了四尾柵藻的去污能力。請進一步完善實驗設(shè)計：0

表培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因四尾柵蘊的地?zé)釓U水培養(yǎng)基各項指標(biāo)測定結(jié)果

各項指標(biāo)總氮〃（mg?L」）總磷〃（mg-L」）氟化物/（mgl】）

初始23.24.324.56

培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因四尾柵藻11天

1.90.450.84

后

24.（2025?廣東?模擬預(yù)測）高粱是重要的糧食和經(jīng)濟作物。為加速其遺傳改良進程，科研人員進行了一系

列研究。

⑴目的基因進入受體細(xì)胞，并在受體細(xì)胞內(nèi)的過程稱為轉(zhuǎn)化。已有研究發(fā)現(xiàn)，過表

達(dá)植物發(fā)育調(diào)節(jié)因子（WUS、BBM、GRF、GIF等）可有效提高轉(zhuǎn)化效率。

⑵科研人員欲利用上述四種調(diào)節(jié)因子加速高粱的遺傳改良，構(gòu)足了如圖所示的三種基因表達(dá)載體，其中LB

和RB分別是T-DNA的左右邊界，DsRed和NPTH作為用于篩選轉(zhuǎn)化成功的受體細(xì)胞。GIF是

GRF的輔助因子