ICS65.150

B51

DB2102

大連市地方標準

DB2102/T0005—2020

海帶配子體采苗及育苗技術(shù)規(guī)程

TechnicalSpecificationforGametophyteclonalbreedingofSaccharinajaponica

2020-10-29發(fā)布2020-11-29實施

大連市市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB2102/T0005—2020

前言

本標準按照GB/T1.1—2020給出規(guī)則起草。

本標準由大連市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本標準主要起草單位：大連海寶漁業(yè)有限公司。

本標準主要起草人：冷曉飛、張喜昌、劉劍波、孫穎、許淑芬。

本標準發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，

我們將及時答復(fù)并認真處理，根據(jù)實際情況依法進行評估及復(fù)審。

歸口管理部門：大連市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局

通訊地址：大連市西崗區(qū)新開路87號

聯(lián)系電話/p>

標準起草單位：大連海寶漁業(yè)有限公司

通訊地址：遼寧省大連市旅順口區(qū)鐵山街道柏嵐子村1號

聯(lián)系人：劉劍波

聯(lián)系電話/p>

I

DB2102/T0005—2020

海帶配子體采苗及育苗技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標準規(guī)定了海帶配子體采苗及育苗的環(huán)境與水質(zhì)、設(shè)施、配子體擴增培養(yǎng)、配子體育苗和苗簾出

庫、運輸。

本標準適用于大連地區(qū)室內(nèi)海帶配子體采苗及育苗。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，標注日期的引用文

件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用

于本文件。

NY5052無公害食品海水養(yǎng)殖用水水質(zhì)

NY5362無公害食品海水養(yǎng)殖產(chǎn)地環(huán)境條件

SC/T2024種海帶

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本標準。

3.1

配子體gametophyte

形成配子進行有性生殖世代的藻體（核相n）。

4環(huán)境與水質(zhì)

育苗場址應(yīng)選擇遠離城市污水和工業(yè)污水排放口，附近沒有大型河流入海，巖石或砂質(zhì)底質(zhì)的沿海

區(qū)域，其它環(huán)境條件應(yīng)符合NY5362的規(guī)定，水質(zhì)應(yīng)符合NY5052的規(guī)定。

5設(shè)施

5.1擴增培養(yǎng)室

用于配子體的擴增培養(yǎng)，應(yīng)為配有制冷設(shè)施的保溫室，內(nèi)設(shè)培養(yǎng)臺架和充氣設(shè)備，臺架層高50cm，

各層頂部應(yīng)配備LED燈管。

5.2育苗室

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育苗室設(shè)置應(yīng)為溫室結(jié)構(gòu)，以東西走向為宜。屋頂下設(shè)置可拉伸的黑色和白色布簾各一層，窗口設(shè)

深色布簾。育苗池呈平面并聯(lián)式，單池規(guī)格10m×1.4m×0.5m。池內(nèi)設(shè)攪拌機保持循環(huán)水流。

5.3供排水系統(tǒng)

包括泵房、沉淀池、砂濾罐（塔）、儲水池、回水池等。

5.4制冷系統(tǒng)

包括集成式制冷機、制冷槽、砂濾罐、回水槽等。

6配子體擴增培養(yǎng)

6.1配子體準備

6.1.1游孢子采集與配子體培育

在海帶成熟季節(jié)，參照SC/T2024的規(guī)定選擇種海帶。用消毒剪刀剪下3cm×3cm含有孢子囊的藻體，

以滅菌紗布蘸消毒海水清洗藻體表面浮泥雜藻，陰干1h～3h后，轉(zhuǎn)移到盛有消毒海水的燒杯中放散游

孢子。5min后鏡檢，視野（×100）中游孢子數(shù)量達到10個～20個以上時，取中上層孢子液，接種到多

個加有培養(yǎng)液的消毒培養(yǎng)皿中培養(yǎng)20d，獲得配子體。培養(yǎng)條件為溫度15℃～20℃，光照500lx～1000

lx，光周期L：D=12h:12h。培養(yǎng)液為滅菌海水中添加NaNO3-N10mg/L，KH2PO4-P2mg/L，F(xiàn)/2培養(yǎng)基1

ml/L。

6.1.2配子體雌雄分離與保種

用微細管分離法分離雌雄配子體，分別移到數(shù)個直徑18cm盛有培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)條件

為：溫度15℃～20℃，光照500lx～1000lx。當配子體生長至布滿培養(yǎng)皿底面時，將雌雄配子體用消

毒毛刷刷下，轉(zhuǎn)移到50ml透明試管中，在溫度4℃～8℃，光照低于50lx條件下儲藏保種。每月更換一

次培養(yǎng)液。培養(yǎng)液為在滅菌海水中添加NaNO3-N10mg/L，KH2PO4-P2mg/L。

6.2配子體擴增

配子體擴增應(yīng)在采苗前6個月進行，在適宜的培養(yǎng)條件下，擴增后的配子體生物量每月可翻一倍。

采苗時，一個苗簾需求雌雄配子體各0.5g，因此，可根據(jù)苗簾數(shù)確定配子體需求量和擴增時間。

6.3配子體擴增操作

將低溫儲藏的雌、雄配子體分別移入組織搗碎機中，加滅菌冰海水至1000ml，16000r/min切碎

30s后，按1g/L～1.5g/L的密度，分別接種于5L三角燒瓶中培養(yǎng)。

6.4擴增培養(yǎng)條件

應(yīng)符合以下要求：

——擴增培養(yǎng)用海水應(yīng)為煮沸消毒的砂濾海水；

——培養(yǎng)液溫度應(yīng)控制在15℃～20℃；

——光照應(yīng)控制在1000lx～1500lx，光周期L：D=12h:12h；

——培養(yǎng)瓶應(yīng)24小時連續(xù)充氣；

——新培養(yǎng)液中營養(yǎng)鹽濃度應(yīng)為NaNO3-N10mg/L，KH2PO4-P2mg/L；

——更換培養(yǎng)液或接種前，操作人員雙手和器具應(yīng)消毒。

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6.5擴增培養(yǎng)管理

6.5.1更換培養(yǎng)液

培養(yǎng)液2周更換一次，更換前應(yīng)停止充氣，使配子體自然沉降于燒瓶底部，將燒瓶中上層的舊培養(yǎng)

液倒出。配子體量較多時，用300目篩絹收集倒出的配子體。

6.5.2分瓶擴增培養(yǎng)

配子體生長至15g/L～20g/L時應(yīng)分瓶培養(yǎng)。若配子體呈絮狀，直接分瓶培養(yǎng)。若配子體呈簇團狀，

用300目篩絹濾出配子體，轉(zhuǎn)入組織搗碎機，加滅菌冰海水至1000ml，16000r/min切碎30s后，分瓶

擴增培養(yǎng)。

7配子體育苗

7.1采苗前準備

7.1.1苗簾的組裝

應(yīng)按以下要求進行：

——使用聚乙烯材質(zhì)規(guī)格為68cm×34cm長方形框架，上纏直徑3.0mm～4.0mm，混紡1根～3根

聚乙烯絲的白色維尼綸繩，繩不宜纏得過緊，每簾用繩37m；

——苗簾使用前需用噴燈將苗繩上的細毛烤掉，且使用三道聚乙烯繩均勻的固定好苗簾繩；

——苗簾4簾一組，水平并列綁縛到兩根長1.4m的PVC圓管上。

7.1.2育苗池處理

每個育苗池2個長池壁內(nèi)側(cè)距池底20cm處，設(shè)置托架，用于托放成組的苗種簾。

7.2采苗

7.2.1采苗時間

可根據(jù)海區(qū)養(yǎng)殖季節(jié)來確定，多在8月中旬。

7.2.2配子體切碎

用滅菌的300目篩絹網(wǎng)收集擴增培育養(yǎng)的配子體。每次取50g配子體，轉(zhuǎn)移到組織搗碎機，加滅菌

冰海水至1000ml，16000r/min切碎120s，經(jīng)400目篩絹過濾，未濾出的配子體細胞段繼續(xù)切碎過濾。

重復(fù)切碎4次后，將搗碎機中的配子體細胞段混合到前三次的濾液中備用。

7.2.3附苗

把備好的海帶苗種簾逐組擺放到育苗池壁托架上，9℃～11℃低溫海水浸泡預(yù)冷，池水沒過苗種簾

6cm～8cm。將雌、雄配子體細胞段按照破碎前濕重的1:1混合，用5℃～6℃低溫海水稀釋，按照1g/

簾的配子體用量，均勻潑灑在苗種簾上方的水面，使配子體細胞段沉降到苗種簾上，靜水附著72h，水

溫9℃～13℃。

7.3幼苗培育管理

7.3.1水流、水溫及換水量

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附苗72h后正常流水，流速5cm/s～10cm/s，水溫9℃～11℃。每日補新水。幼孢子體規(guī)格在0.3mm

之前，日補水量30%，規(guī)格在0.3mm～10mm時，日補水量60%，規(guī)格在10mm以上，日補水量100%。

7.3.2光照及營養(yǎng)鹽

配子體期，光照不高于2000lx，營養(yǎng)鹽NaNO3-N3mg/L，KH2PO4-P0.6mg/L，F(xiàn)/2培養(yǎng)基0.3mg/L；

幼孢子體前期，規(guī)格在0.5mm之前，光照不高于3500lx，營養(yǎng)鹽NaNO3-N3mg/L，KH2PO4-P0.3mg/L，

FeC6H5O7-Fe·5H2O0.02mg/L；幼孢子體后期，規(guī)格在0.5mm之后，光照不高于7000lx，營養(yǎng)鹽NaNO3-N

4mg/L，KH2PO4-P0.4mg/L。

7.3.3洗簾

附苗20d內(nèi)不洗涮苗簾；附苗20d后，每3d洗刷苗簾1次。

7.3.4病害及防治

應(yīng)符合表1的要求。

表1育苗期間主要病害及防治方法

名稱癥狀病因防治方法

柄部變細、變脆，抖動后脫落多為幼苗密度大，光照不（1）增加洗刷苗簾的次數(shù)；（2）適當

長脖子病

嚴重，葉片失去光澤。足。提高光照強度；（3）降低水溫。

（1）適當提高光照強度；（2）增加補

葉片從尖端開始變綠、變軟，

綠爛病多為光照不足。水量，加大流速；（3）降低水溫；（4）

逐漸腐爛脫落。