引言隨著新冠病毒變異株傳播特征的演變、檢測技術的迭代升級及基層防控實踐的深化，核酸檢測作為疫情監(jiān)測、診斷與防控的核心技術手段，其流程規(guī)范性與操作嚴謹性直接關系到檢測結果的準確性與公共衛(wèi)生安全?！逗怂釞z測流程與實施規(guī)范（第三版）》在總結前兩版實施經(jīng)驗的基礎上，針對采樣質(zhì)量控制、混采檢測效率、實驗室生物安全等核心環(huán)節(jié)進行優(yōu)化，進一步明確大規(guī)模篩查、發(fā)熱門診、隔離點等場景的操作細則，旨在提升檢測準確性、縮短報告時效、降低生物安全風險，為疫情防控“早發(fā)現(xiàn)、早處置”提供技術支撐。一、檢測前準備（一）機構與人員要求1.檢測機構資質(zhì)：開展核酸檢測的實驗室需取得臨床檢驗機構資質(zhì)認定（CMA）及生物安全二級（BSL-2）實驗室備案，PCR實驗室需通過省級衛(wèi)生健康部門組織的技術審核，確保實驗環(huán)境、設備及人員符合生物安全要求。2.人員資質(zhì)與培訓：采樣人員需持有醫(yī)師/護士執(zhí)業(yè)證書或核酸采樣培訓合格證書，熟練掌握采樣操作規(guī)范與生物安全防護技能；實驗室檢測人員需具備臨床檢驗技術資格，定期參加核酸檢測專項培訓，考核合格后方可上崗。（二）物資與設備準備1.采樣物資：配備一次性使用采樣拭子（咽/鼻拭子）、含保存液的采樣管（根據(jù)檢測需求選擇滅活/非滅活型）、醫(yī)用防護口罩（N95及以上）、醫(yī)用防護服、面屏/護目鏡、一次性手套、手消毒劑等，所有物資需在有效期內(nèi)，外包裝無破損。2.檢測設備：實驗室需配備實時熒光定量PCR儀、核酸提取儀（或手工提取設備）、生物安全柜、高壓滅菌器、低溫冰箱（-20℃及-80℃）等，設備需定期校準、維護，確保性能穩(wěn)定。（三）環(huán)境準備1.采樣點設置：采樣點應選擇通風良好、相對獨立的區(qū)域，劃分為等候區(qū)、采樣區(qū)、緩沖區(qū)、臨時隔離區(qū)，各區(qū)域設置清晰標識；等候區(qū)需設置“一米線”，配備遮陽、避雨設施及醫(yī)療廢物垃圾桶。2.實驗室分區(qū)：PCR實驗室嚴格按照“試劑準備區(qū)-樣本制備區(qū)-擴增區(qū)-產(chǎn)物分析區(qū)”進行物理隔離，各區(qū)設置獨立的空調(diào)系統(tǒng)與氣流方向（從清潔區(qū)向污染區(qū)流動），避免交叉污染。二、采樣流程規(guī)范（一）采樣點管理采樣點實行“單進單出”動線管理，安排專人引導受檢者有序排隊，查驗健康碼、行程碼（或其他通行憑證），測量體溫，詢問流行病學史；對發(fā)熱、有呼吸道癥狀或健康碼異常者，引導至臨時隔離區(qū)單獨采樣，采樣后立即對環(huán)境進行終末消毒。（二）受檢者準備采樣前30分鐘，受檢者應避免進食、飲水、吸煙、嚼口香糖或使用口腔含漱液，保持口腔清潔；采集鼻咽拭子時，需告知受檢者提前清理鼻腔分泌物，放松面部肌肉，避免過度緊張導致采樣不適。（三）采樣操作規(guī)范1.咽拭子采樣：受檢者頭部微仰，嘴自然張開發(fā)“啊”音，采樣人員一手持采樣管，一手用拭子輕柔越過舌根，在雙側咽扁桃體隱窩及咽后壁各擦拭至少3次，避免接觸舌頭、牙齒及口腔黏膜；采樣后迅速將拭子頭浸入采樣管保存液中，折斷拭子桿（或旋緊管蓋），做好樣本標識。2.鼻拭子采樣：受檢者頭部保持中立位，采樣人員將拭子沿下鼻道底部緩緩插入鼻腔深處（約至鼻咽部附近），沿鼻道壁旋轉至少3圈（停留時間≥15秒），然后取出拭子，按要求浸入采樣管，完成操作。3.采樣質(zhì)量控制：每采集10人份樣本，需檢查拭子是否污染、采樣管保存液是否足量；若受檢者有嘔吐、咳嗽等反應，應立即停止操作，更換采樣器具重新采集，確保樣本無外源性污染。三、樣本轉運與接收（一）樣本包裝與轉運1.包裝要求：樣本采用“雙層包裝”，內(nèi)層為密封采樣管，外層為生物安全袋（內(nèi)置吸水墊），袋外粘貼樣本信息標簽（含受檢者姓名、采樣時間、樣本類型、采集點等）；轉運箱需具備保溫、防滲漏功能，內(nèi)放置冰排（保持溫度2-8℃或-20℃以下，根據(jù)保存液類型選擇）。2.轉運要求：樣本轉運需由專人負責，使用專用車輛，轉運時間原則上不超過4小時（常溫保存液樣本應縮短至2小時內(nèi)）；轉運過程中避免劇烈震蕩，嚴禁與其他醫(yī)療廢物混放。（二）樣本接收與登記實驗室接收樣本時，需核對樣本數(shù)量、信息完整性、包裝密封性及樣本狀態(tài)（如是否漏液、渾濁、保存液是否足量）；對符合要求的樣本，登記后立即轉運至樣本制備區(qū)，記錄接收時間、樣本編號等信息；對不符合要求的樣本（如信息缺失、樣本污染），及時聯(lián)系采樣點重新采集，同步記錄異常情況。四、實驗室檢測操作（一）試劑準備1.試劑儲存：核酸擴增試劑、提取試劑需按說明書要求儲存（如-20℃、2-8℃），避免反復凍融；實驗前檢查試劑有效期、批號及外觀（無沉淀、變色），配制好的試劑需在2小時內(nèi)使用。2.試劑配制：在試劑準備區(qū)，按照說明書比例配制擴增反應液，分裝至PCR反應管（每管體積誤差≤5%），操作過程需在生物安全柜內(nèi)進行，避免氣溶膠污染。（二）樣本處理與核酸提取1.樣本前處理：在樣本制備區(qū)，將采樣管放入生物安全柜，渦旋振蕩10-15秒（或手工振蕩30秒），使拭子頭與保存液充分混合；若使用磁珠法提取，需按儀器操作程序加入裂解液、磁珠等試劑，完成核酸提取；手工提取時，嚴格按照試劑盒說明書步驟操作，避免交叉污染。2.核酸純化：提取后的核酸需立即進行擴增，若需暫存，應置于-20℃以下冰箱，保存時間不超過24小時；操作過程中，每處理10份樣本需更換手套、消毒工作臺，防止樣本間交叉污染。（三）核酸擴增與結果判讀1.擴增設置：在擴增區(qū)，將提取的核酸加入PCR反應管，設置擴增程序（如逆轉錄-實時熒光PCR，循環(huán)數(shù)40-45個循環(huán)），同時設置陰性質(zhì)控（無模板水）、陽性質(zhì)控（已知陽性核酸）及弱陽性內(nèi)控（監(jiān)測擴增效率）。2.結果判讀：擴增結束后，根據(jù)熒光曲線的Ct值（循環(huán)閾值）判讀結果：Ct值＜35為陽性，35≤Ct值≤40需重新采樣復核，Ct值＞40或無擴增曲線為陰性；若內(nèi)控未達標（如Ct值＞38），需重新檢測該批次樣本。五、質(zhì)量控制體系（一）室內(nèi)質(zhì)量控制1.質(zhì)控品設置：每批次檢測需設置至少1份陰性質(zhì)控（監(jiān)測污染）、1份陽性質(zhì)控（監(jiān)測試劑有效性）及1份弱陽性內(nèi)控（監(jiān)測檢測靈敏度）；若開展混采檢測，需額外設置混采陽性質(zhì)控（如5混1、10混1陽性樣本）。2.質(zhì)控評估：實驗結束后，分析質(zhì)控品結果：陰性質(zhì)控無擴增曲線，陽性質(zhì)控Ct值在試劑盒標定范圍內(nèi)，弱陽性內(nèi)控Ct值≤38，否則需查找原因（如試劑失效、操作失誤），重新檢測樣本。（二）室間質(zhì)量評價實驗室需每季度參加省級及以上衛(wèi)生健康部門組織的室間質(zhì)評，提交檢測結果與原始數(shù)據(jù)；對質(zhì)評不合格項目，需分析原因（如試劑差異、操作偏差），制定整改措施并驗證，確保檢測結果的準確性與可比性。（三）生物安全與廢棄物處理1.實驗室消毒：每日實驗結束后，使用含氯消毒劑（500mg/L）或紫外線（照射時間≥60分鐘）對工作臺、地面、設備表面進行消毒；生物安全柜每周進行一次徹底消毒（如過氧化氫熏蒸），定期檢測高效過濾器完整性。2.醫(yī)療廢物處置：使用后的采樣拭子、采樣管、防護服等醫(yī)療廢物，裝入雙層黃色醫(yī)療廢物袋，噴灑含氯消毒劑（1000mg/L）后密封，由專人轉運至暫存點，48小時內(nèi)交由有資質(zhì)的機構處置；實驗廢液需經(jīng)高壓滅菌（121℃，30分鐘）或化學消毒后排放。六、結果報告與反饋（一）報告時限1.常規(guī)檢測：采樣后12小時內(nèi)出具檢測結果（實驗室收到樣本起算）；大規(guī)模篩查時，可根據(jù)工作量適當延長，但不超過24小時。2.急診檢測：發(fā)熱門診、急診患者樣本需在2小時內(nèi)完成檢測并報告結果，確保臨床救治時效。（二）報告內(nèi)容與解讀檢測報告需包含受檢者基本信息、采樣時間、檢測方法、結果（陽性/陰性/可疑）、Ct值（陽性樣本）、實驗室名稱及報告時間；對“可疑”結果（如Ct值35-40），需備注“建議重新采樣復核”，并附檢測方法學說明（如檢測靶基因、試劑盒靈敏度）。（三）結果反饋與異常處置1.結果通知：檢測機構通過線上平臺（如健康碼系統(tǒng)、醫(yī)院APP）或線下短信、電話等方式通知受檢者，確保結果可及；陽性結果需立即報告屬地疾控部門，同步推送至疫情防控指揮平臺。2.異常復核：對陽性或可疑結果，實驗室需立即啟動復核程序：重新提取核酸、更換試劑/儀器進行擴增，必要時采用不同檢測方法（如不同靶基因引物）驗證；復核仍為陽性的，按規(guī)定流程上報。七、特殊場景應對（一）大規(guī)模核酸篩查1.混采檢測：采用“5混1”“10混1”等混采方式時，需嚴格按照“一人一管一拭子”采集，混樣時做好樣本信息關聯(lián)；混采陽性樣本需立即對對應受檢者進行單采復核，同步追溯采樣、轉運、檢測全流程記錄。2.采樣點調(diào)度：根據(jù)人口密度、交通流量設置采樣點，配備移動采樣車、應急采樣箱，確保2小時內(nèi)完成重點區(qū)域采樣部署；采樣人員實行“2小時輪換制”，避免疲勞操作影響采樣質(zhì)量。（二）發(fā)熱門診與隔離點檢測1.閉環(huán)管理：發(fā)熱門診、隔離點采樣人員需穿戴醫(yī)用防護服、面屏、雙層手套，采樣后立即對采樣臺、器具進行消毒；樣本轉運使用專用通道，避免與常規(guī)樣本混流。2.快速檢測：配備便攜式核酸擴增儀（如POCT設備），實現(xiàn)“采樣-檢測-報告”一站式完成，檢測時間縮短至45分鐘內(nèi)，滿足應急診斷需求。（三）應急檢測保障1.設備與試劑儲備：實驗室需儲備至少3天的檢測試劑、耗材及備用設備（如PCR儀、提取儀），建立應急供應商名錄，確保24小時內(nèi)補充物資。2.人員應急梯隊：組建核酸檢測應急隊伍，定期開展實戰(zhàn)演練（如“試劑短缺”“設備故障”模擬），確保突發(fā)情況下2小時內(nèi)啟動應急預案，保障檢測能力不低于日常的150%。八、附則1.適用范圍：本規(guī)范適用于各級醫(yī)療機構、第三方醫(yī)學檢驗實驗室、疾控機構及基層醫(yī)療衛(wèi)生機構開展