ICS65.020.20

CCSB05

54

西藏自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)

DB54/T0408—2024

羊肚菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

2024-09-15發(fā)布2024-10-15實(shí)施

西藏自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局??發(fā)布

DB54/T0408—2024

目次

前言............................................................................II

1范圍..................................................................................1

2規(guī)范性引用文件........................................................................1

3術(shù)語(yǔ)和定義............................................................................1

4菌種生產(chǎn)要求..........................................................................1

5母種生產(chǎn)..............................................................................2

6原種生產(chǎn)..............................................................................3

7栽培種生產(chǎn)............................................................................3

8生產(chǎn)檔案..............................................................................4

附錄A（規(guī)范性）檢驗(yàn)要求...................................................5

I

DB54/T0408—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院提出。

本文件由西藏自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本文件起草單位：西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院蔬菜研究所、西藏自治區(qū)高原生物研究所。

本文件主要起草人：謝榮、徐愛(ài)國(guó)、張君麗、白瑪?shù)┰?、孫慧娟、高磊、朱雪峰、王文海。

II

DB54/T0408—2024

羊肚菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了羊肚菌菌種母種、原種、栽培種生產(chǎn)技術(shù)要求及生產(chǎn)檔案。

本文件適用于羊肚菌母種、原種和栽培種生產(chǎn)技術(shù)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

GB50073潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范

GB/T12728食用菌術(shù)語(yǔ)

NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范

NY/T1742食用菌菌種通用技術(shù)要求

NY/T1935食用菌栽培基質(zhì)質(zhì)量安全要求

3術(shù)語(yǔ)和定義

GB/T12728界定的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

羊肚菌

子囊菌亞門、盤菌綱、盤菌目、羊肚菌科、羊肚菌屬統(tǒng)稱。

4菌種生產(chǎn)要求

4.1場(chǎng)地、廠房要求

選擇地勢(shì)高，通風(fēng)供電良好，給排水通暢，交通便利場(chǎng)地。

廠房有各自隔離的攤曬場(chǎng)、原料庫(kù)、配料攪拌區(qū)、裝袋區(qū)、滅菌區(qū)、冷卻區(qū)、接種區(qū)、發(fā)菌區(qū)和冷

藏庫(kù)。地面防水、防腐蝕、防滲漏、防滑，易清洗，有排水排氣系統(tǒng)；墻壁和吊頂應(yīng)防潮、防霉、防水，

易清洗。場(chǎng)地、廠房符合GB50073和NY/T528相關(guān)規(guī)定。水質(zhì)符合GB5749相關(guān)規(guī)定。

4.2生產(chǎn)設(shè)備

電子秤、攪拌機(jī)、裝袋機(jī)、高壓滅菌鍋、臭氧發(fā)生器、超凈工作臺(tái)或接種箱或百級(jí)凈化層流罩、恒

溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架等常規(guī)接種器具齊全。

1

DB54/T0408—2024

5母種生產(chǎn)

5.1菌種來(lái)源

從有相應(yīng)資質(zhì)的供種單位引進(jìn)，選擇種性穩(wěn)定、抗逆性強(qiáng)且適宜本地栽培的菌株，菌種質(zhì)量應(yīng)符合

NY/T1742的規(guī)定。

5.2培養(yǎng)基配方

馬鈴薯20%，葡萄糖2%，瓊脂2%，蛋白胨0.05%，水1000ml。

5.3容器

試管選用15mm×150mm或者18mm×180mm；培養(yǎng)皿選用直徑9cm玻璃培養(yǎng)皿或一次性無(wú)菌塑料培養(yǎng)皿。

5.4培養(yǎng)基配制

馬鈴薯去皮、去芽眼、切塊后，煮至酥而不爛，8層紗布過(guò)濾，加入葡萄糖、蛋白胨、瓊脂，用玻

璃棒攪拌均勻，定容至1000ml。

5.5分裝和滅菌

5.5.1斜面培養(yǎng)基分裝和滅菌

分裝培養(yǎng)基至試管長(zhǎng)1/4處，用棉塞（棉花為梳棉，非脫脂棉）或硅膠塞封口，每7支試管為1把，

牛皮紙包扎棉塞，橡皮筋扎緊，棉塞向上放置于滅菌鍋內(nèi)。壓強(qiáng)0.11MPa～0.12MPa，溫度121℃～122℃，

滅菌20min～30min。

結(jié)束后冷卻至60℃，戴隔熱手套取出試管，在超凈工作臺(tái)上擺斜面，斜面長(zhǎng)度不超過(guò)試管長(zhǎng)度的

2/3，自然降溫凝固后抽取5%的試管，于28℃下培養(yǎng)48h，無(wú)菌落長(zhǎng)出為滅菌合格。

5.5.2平板培養(yǎng)基分裝和滅菌

培養(yǎng)基裝入500ml三角瓶高1/3～1/2處，用棉塞（棉花為梳棉，非脫脂棉）或硅膠塞封口，牛皮紙

包扎，橡皮筋扎緊，玻璃培養(yǎng)皿需用報(bào)紙包好，一并放入滅菌鍋。壓強(qiáng)0.11MPa～0.12MPa，溫度121℃～

122℃，滅菌20min～30min。

結(jié)束后冷卻至60℃，戴隔熱手套取出三角瓶，在超凈工作臺(tái)上分裝至無(wú)菌培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)基占培養(yǎng)

皿面積的2/3。

5.6接種

在超凈工作臺(tái)或接種箱內(nèi)接種，接種前用紫外燈照射30min后，75%的酒精進(jìn)行表面消毒。接種3mm～

5mm菌塊到轉(zhuǎn)接試管斜面和培養(yǎng)皿中央，整個(gè)過(guò)程按照NY/T528規(guī)定嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)皿需石蠟封口

膜密封。貼好標(biāo)簽并做好記錄。

5.7培養(yǎng)

生化培養(yǎng)箱10℃～12℃恒溫培養(yǎng)7d～10d，按照NY/T1731規(guī)定，于接種后第3d、第5d和長(zhǎng)滿培養(yǎng)基

后分別進(jìn)行檢查。

5.8貯存

培養(yǎng)好的母種應(yīng)置于2℃～4℃冰箱保存，時(shí)長(zhǎng)不超過(guò)3個(gè)月。

2

DB54/T0408—2024

6原種生產(chǎn)

6.1原料選擇

主料小麥、輔料麩皮、谷殼、棉籽殼、生石灰、石膏、腐殖土應(yīng)符合NY/T1935的相關(guān)要求，水質(zhì)

應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。

6.2培養(yǎng)基配方

——青稞或小麥粒68%、棉籽殼20%、麩皮10%、生石灰1%、石膏1%。

6.3培養(yǎng)基制備

青稞或小麥粒預(yù)先用3%生石灰水浸泡2d～3d，換水沖洗2～3次，控水，加入配方中其他原料，攪拌

均勻，含水量以手緊握培養(yǎng)基指縫有水溢出不下滴為宜，pH值8.0～8.5。

6.4裝袋和滅菌

采用規(guī)格13cm×25cm×0.005cm聚丙烯折角單口開(kāi)菌袋，培養(yǎng)基在4h內(nèi)裝完，袋料上緊下松、料面

平整，袋口用頸環(huán)、套蓋及無(wú)棉蓋體封口。溫度121℃～122℃，壓強(qiáng)0.11MPa～0.12MPa，高溫高壓滅菌

3h。

6.5接種

料袋冷卻至30℃以下，轉(zhuǎn)運(yùn)至接種區(qū)，事先進(jìn)行環(huán)境、人員、母種、菌包消毒，按照NY/T528規(guī)定

嚴(yán)格無(wú)菌操作將母種接到原種菌包中。

6.6培養(yǎng)

室內(nèi)保持避光，每天通風(fēng)2次，每次30min；溫度控制在10℃～20℃，空氣相對(duì)濕度控制在40%～50%，

20d長(zhǎng)滿料袋。

6.7貯存

培養(yǎng)好的原種應(yīng)置于2℃～4℃保存，時(shí)長(zhǎng)不超過(guò)50d。

7栽培種生產(chǎn)

7.1原料選擇

主料小麥、輔料麩皮、谷殼、棉籽殼、生石灰、石膏、腐殖土應(yīng)符合NY/T1935的相關(guān)要求，水質(zhì)

應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。

7.2培養(yǎng)基配方

——青稞或小麥粒90%、谷殼3%、腐殖土5%，生石灰1%、石膏1%。

7.3培養(yǎng)基制備

原料攪拌均勻，含水量以手緊握培養(yǎng)基指縫有水溢出不下滴為宜，pH值7.5～8.5。

7.4裝袋和滅菌

3

DB54/T0408—2024

采用規(guī)格17cm×23cm×0.005cm聚丙烯折角單口開(kāi)菌袋，采用雙沖壓立式機(jī)械裝袋，培養(yǎng)基在4h內(nèi)

裝完，袋料松緊一致、中間打孔、料面平整，袋口用頸環(huán)、套蓋及無(wú)棉蓋體封口。溫度121℃～122℃，

壓強(qiáng)0.11MPa～0.12MPa，高溫高壓滅菌3h。

7.5接種

冷卻至30℃以下，轉(zhuǎn)運(yùn)至接種區(qū)，事先進(jìn)行環(huán)境、人員、固體原種、菌包消毒，按照NY/T528規(guī)定

嚴(yán)格無(wú)菌操作將原種接到栽培種菌包中。

7.6培養(yǎng)

室內(nèi)保持避光，每天通風(fēng)2次，每次30min；溫度控制在10℃～20℃，空氣相對(duì)濕度控制在40%～50%。

7.7貯存

培養(yǎng)好的栽培種應(yīng)置于2℃～4℃保存，時(shí)長(zhǎng)不超過(guò)50d。

8生產(chǎn)檔案

建立生產(chǎn)檔案，對(duì)每批次生產(chǎn)的母種、原種和栽培種長(zhǎng)勢(shì)情況詳細(xì)記錄。檔案保存期不少于2年。

4

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A

A

附錄A

（規(guī)范性）

檢驗(yàn)要求

表1羊肚菌母種感官要求

項(xiàng)目要求

容器潔凈、完整、無(wú)損

棉塞或硅膠塞干燥、整潔、松緊適度、能透氣濾菌

培養(yǎng)基裝入量試管總?cè)莘e1/4,培養(yǎng)皿高的1/3～1/2

菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿斜面或平板

菌菌絲體特征潔白、絨毛狀、有少量淡黃色菌核

種菌絲體分泌物無(wú)

外菌落邊緣整齊

觀雜菌菌落無(wú)

蟲(chóng)（螨）體無(wú)

斜面或平板背面外觀培養(yǎng)基無(wú)干縮，顏色均勻，無(wú)暗斑

氣味羊肚菌特有的清香味、無(wú)異味

表2羊肚菌原種和栽培種感官要求

項(xiàng)目要求

容器潔凈、完整、無(wú)損

棉塞或無(wú)棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、能透氣濾菌

培養(yǎng)基上表面距袋口的距離