——變性、復(fù)性與分子雜交主講人：汪妤平核酸的理化性質(zhì)1.核酸是含磷酸和堿基的兩性電解質(zhì)，通常表現(xiàn)為較強(qiáng)的酸性?？捎秒娪竞碗x子交換分離純化核酸。在堿性條件下，RNA不穩(wěn)定，可在室溫下水解。利用這個(gè)性質(zhì)可以測(cè)定RNA的堿基組成，也可清除DNA溶液中混雜的RNA。一、核酸的一般理化性質(zhì)2.核酸是線性的大分子，其在溶液中的粘度很高。RNA分子比DNA短，在溶液中的粘度低于DNA。3.核酸分子具有強(qiáng)烈的紫外吸收，核酸在波長(zhǎng)260nm處有強(qiáng)烈的吸收，是由堿基的共軛雙鍵所決定的。這一特性常用作核酸的定性和定量分析。一、核酸的一般理化性質(zhì)1.DNA或RNA的定量OD260=1.0相當(dāng)于：50μg/ml雙鏈DNA40μg/ml單鏈DNA（或RNA）20μg/ml寡核苷酸2.判斷核酸樣品的純度DNA純品:

OD260/OD280=1.8RNA純品:

OD260/OD280=2.0一、核酸的一般理化性質(zhì)OD260的應(yīng)用某些理化因素導(dǎo)致DNA雙鏈互補(bǔ)堿基對(duì)之間的氫鍵發(fā)生斷裂，DNA雙鏈解離為單鏈的過(guò)程。DNA變性的本質(zhì)：雙鏈間氫鍵的斷裂二、DNA的變性與復(fù)性變性部分變性DNA的電鏡圖像二、DNA的變性與復(fù)性DNA解鏈時(shí)的紫外吸收變化增色效應(yīng)(hyperchromiceffect)：DNA變性時(shí)其溶液OD260增高的現(xiàn)象。DNA的解鏈曲線連續(xù)加熱DNA的過(guò)程中以溫度相對(duì)于A260值作圖，所得的曲線稱為解鏈曲線。解鏈溫度(meltingtemperature，Tm)解鏈過(guò)程中，紫外吸光度的變化達(dá)到最大變化值的一半時(shí)所對(duì)應(yīng)的溫度。二、DNA的變性與復(fù)性解鏈曲線的變化G+C含量越高，解鏈溫度就越高。二、DNA的變性與復(fù)性當(dāng)變性條件緩慢地除去后，兩條解離的互補(bǔ)鏈可重新配對(duì)，恢復(fù)原來(lái)的雙螺旋結(jié)構(gòu)，這一現(xiàn)象稱為DNA復(fù)性(renaturation)。熱變性的DNA經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，這一過(guò)程稱為退火(annealing)。減色效應(yīng)：DNA復(fù)性時(shí)，其溶液OD260降低。復(fù)性二、DNA的變性與復(fù)性核酸分子雜交(hybridization)不同種類的DNA單鏈分子或RNA分子放在同一溶液中，只要兩種單鏈分子之間存在著一定程度的堿基配對(duì)關(guān)系，在適宜的條件可以在不同的分子間形成雜化雙鏈(heteroduplex)。這種雜化雙鏈可以在不同的DNA與DNA之間形成，也可以在DNA和RNA分子間或者RNA與RNA分子間形成。這種現(xiàn)象稱為核酸分子雜交。二、DNA的變性與復(fù)性核酸分子復(fù)性和雜交二、DNA的變性與復(fù)性核酸分子雜交的應(yīng)用二、DNA的變性與復(fù)性核酸的分子雜交技術(shù)是分子生物學(xué)研究領(lǐng)域中基本和重要的技術(shù)手段，應(yīng)用在核酸分子間序列相似性、靶基因在待測(cè)樣品中存在與否等方面。核酸的理化性質(zhì)包括一般理化性質(zhì)和特殊理化性質(zhì)。一般理化性質(zhì)包括：核酸的特殊理化性質(zhì)通常指的是DNA的變性和復(fù)性。利用DNA分子變性和復(fù)性的理