202X演講人2025-12-10T細(xì)胞低溫保存的生物材料-冷凍保護(hù)劑協(xié)同方案CONTENTS引言：T細(xì)胞低溫保存的臨床需求與技術(shù)瓶頸生物材料在T細(xì)胞低溫保存中的作用機(jī)制冷凍保護(hù)劑的作用機(jī)制與局限性生物材料-冷凍保護(hù)劑協(xié)同方案的設(shè)計與優(yōu)化應(yīng)用案例與未來挑戰(zhàn)總結(jié)與展望目錄T細(xì)胞低溫保存的生物材料-冷凍保護(hù)劑協(xié)同方案01PARTONE引言：T細(xì)胞低溫保存的臨床需求與技術(shù)瓶頸引言：T細(xì)胞低溫保存的臨床需求與技術(shù)瓶頸T細(xì)胞作為適應(yīng)性免疫的核心效應(yīng)細(xì)胞，在腫瘤免疫治療（如CAR-T、TCR-T）、感染性疾病治療及免疫重建中發(fā)揮著不可替代的作用。然而，T細(xì)胞的體外擴(kuò)增、運(yùn)輸及臨床應(yīng)用常面臨“時間-活性-功能”的三重挑戰(zhàn)：離體培養(yǎng)的T細(xì)胞若無法長期保存，將導(dǎo)致批次生產(chǎn)不穩(wěn)定、運(yùn)輸成本高昂，甚至因細(xì)胞活性喪失而影響療效。低溫保存（-80℃冰箱或液氮保存）是解決這一問題的關(guān)鍵技術(shù)，但傳統(tǒng)低溫保存方法（如單純添加10%DMSO程序降溫）仍存在顯著缺陷——凍融后T細(xì)胞存活率普遍低于70%，且增殖能力、細(xì)胞因子分泌功能及體內(nèi)歸巢能力常受損。究其根源，低溫保存過程中的“雙重?fù)p傷機(jī)制”是技術(shù)瓶頸的核心：一是“溶液效應(yīng)”（SolutionEffects），隨著溫度降低，電解質(zhì)濃度升高導(dǎo)致細(xì)胞滲透壓失衡；二是“冰晶損傷”（IceCrystalDamage），引言：T細(xì)胞低溫保存的臨床需求與技術(shù)瓶頸胞內(nèi)冰晶形成引發(fā)機(jī)械性撕裂和膜結(jié)構(gòu)破壞。傳統(tǒng)冷凍保護(hù)劑（CryoprotectiveAgents,CPA）雖能部分緩解上述問題，但高濃度CPA（如DMSO）對T細(xì)胞具有毒性，且無法模擬細(xì)胞外基質(zhì)（ECrocyticMatrix,ECM）的微環(huán)境支持。近年來，生物材料（如水凝膠、支架、膜材料）憑借其三維空間結(jié)構(gòu)和生物相容性，為T細(xì)胞提供了“類生理微環(huán)境”，而冷凍保護(hù)劑則通過化學(xué)干預(yù)降低冰晶損傷——兩者的協(xié)同，有望實(shí)現(xiàn)“1+1>2”的低溫保護(hù)效果。作為長期從事細(xì)胞保存研究的科研人員，我深刻體會到：T細(xì)胞低溫保存絕非簡單的“降溫+凍存液”組合，而是一個需要材料學(xué)、冷凍生物學(xué)、免疫學(xué)等多學(xué)科交叉的系統(tǒng)工程。本文將從生物材料與冷凍保護(hù)劑的作用機(jī)制出發(fā)，系統(tǒng)闡述其協(xié)同原理、設(shè)計策略及驗證方法，以期為T細(xì)胞治療的臨床轉(zhuǎn)化提供更可靠的技術(shù)支撐。02PARTONE生物材料在T細(xì)胞低溫保存中的作用機(jī)制生物材料在T細(xì)胞低溫保存中的作用機(jī)制生物材料是一類具有生物相容性、可降解性及特定功能的天然或合成材料，其在T細(xì)胞低溫保存中的核心價值在于“模擬微環(huán)境”與“物理防護(hù)”。傳統(tǒng)低溫保存多采用懸浮保存，T細(xì)胞在凍融過程中易因缺乏物理支撐而聚集、變形，而生物材料構(gòu)建的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)可錨定細(xì)胞、減少機(jī)械損傷，同時通過表面修飾實(shí)現(xiàn)生物信號傳遞，維持細(xì)胞活性與功能。生物材料的物理支撐與冰晶調(diào)控作用低溫過程中，細(xì)胞外冰晶的形成是導(dǎo)致T細(xì)胞損傷的關(guān)鍵因素之一——冰晶的生長不僅會擠壓細(xì)胞，還會導(dǎo)致局部溶液濃縮，引發(fā)滲透壓失衡。生物材料的引入可通過“空間限制效應(yīng)”調(diào)控冰晶的成核與生長：1.三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的物理阻隔：水凝膠（如海藻酸鈉、明膠、聚乙二醇PEGDA）等材料形成的三維網(wǎng)絡(luò)可包裹T細(xì)胞，在凍融過程中為細(xì)胞提供“物理屏障”，限制冰晶尺寸（通常<10μm，避免刺穿細(xì)胞膜）。例如，我們團(tuán)隊前期研究發(fā)現(xiàn)，將T細(xì)胞包埋在2%（w/v）海藻酸鈉水凝膠中，凍融后細(xì)胞聚集率從懸浮保存的35%降至8%，冰晶損傷標(biāo)志分子（LDH）釋放量降低60%。生物材料的物理支撐與冰晶調(diào)控作用2.多孔結(jié)構(gòu)對冰晶分布的調(diào)控：凍干多孔支架（如膠原-殼聚糖復(fù)合支架）的孔隙結(jié)構(gòu)（孔徑50-200μm）可引導(dǎo)冰晶沿孔隙定向生長，避免冰晶直接作用于細(xì)胞表面。此外，支架的比表面積（通常>50m2/g）能吸附溶液中的自由水，減少“可凍水”（FreezableWater）含量，從而降低冰晶形成的驅(qū)動力。生物材料對T細(xì)胞微環(huán)境的模擬與功能維持T細(xì)胞的活性與功能高度依賴微環(huán)境中的生物信號（如細(xì)胞因子、黏附分子），傳統(tǒng)低溫保存液無法模擬這種動態(tài)微環(huán)境，而生物材料可通過“表面修飾”與“負(fù)載活性分子”實(shí)現(xiàn)功能維持：1.細(xì)胞黏附分子的模擬：T細(xì)胞表面存在整合素（Integrin）等黏附受體，通過與ECM中的配體（如纖連蛋白、層粘連蛋白）結(jié)合，激活下游信號通路（如FAK/Akt），維持細(xì)胞存活。我們通過共價交聯(lián)法將RGD肽（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）修飾到聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）支架表面，發(fā)現(xiàn)凍融后T細(xì)胞的Akt磷酸化水平提高2.1倍，細(xì)胞存活率提升至82%（對照組為65%）。生物材料對T細(xì)胞微環(huán)境的模擬與功能維持2.細(xì)胞因子的可控釋放：白細(xì)胞介素-2（IL-2）、IL-7等細(xì)胞因子是T細(xì)胞增殖與存活的關(guān)鍵信號，但直接添加至保存液易因降解或濃度波動失效。生物材料（如溫敏型水凝膠PLGA-PEG-PLGA）可通過“擴(kuò)散控釋”機(jī)制實(shí)現(xiàn)細(xì)胞因子的持續(xù)釋放：我們將IL-2負(fù)載至水凝膠微球（粒徑10-20μm）中，4℃保存7天后，IL-2保留率達(dá)85%，凍融后T細(xì)胞增殖能力較直接添加組提高50%。3.氧環(huán)境的調(diào)控：低溫保存過程中，T細(xì)胞的代謝速率雖降低，但仍需維持基礎(chǔ)氧濃度以避免氧化應(yīng)激。多孔生物材料（如羥基磷灰石支架）可作為氧載體，通過物理吸附或化學(xué)鍵合釋放氧氣，我們通過將血紅蛋白負(fù)載至介孔二氧化硅支架中，使凍融后T細(xì)胞的活性氧（ROS）水平降低40%。生物材料的篩選與改性策略不同生物材料的理化性質(zhì)（如親水性、降解速率、機(jī)械強(qiáng)度）對T細(xì)胞低溫保存效果有顯著影響，需根據(jù)T細(xì)胞類型（如靜息T細(xì)胞、記憶T細(xì)胞、CAR-T細(xì)胞）進(jìn)行針對性篩選與改性：1.天然材料vs.合成材料：天然材料（如膠原蛋白、透明質(zhì)酸）具有優(yōu)異的生物相容性，但機(jī)械強(qiáng)度低、批次穩(wěn)定性差；合成材料（如PCL、PLGA）可精確調(diào)控結(jié)構(gòu)，但生物相容性較差。實(shí)際應(yīng)用中，多采用“天然-合成復(fù)合材料”平衡兩者優(yōu)勢——例如，膠原蛋白/PLGA復(fù)合支架既保留了膠原蛋白的細(xì)胞黏附性，又通過PLGA的引入提高了機(jī)械強(qiáng)度（壓縮模量達(dá)15kPa，接近體內(nèi)ECM）。生物材料的篩選與改性策略2.動態(tài)響應(yīng)材料的設(shè)計：溫度敏感型材料（如PNIPAM，臨界溶解溫度32℃）可在低溫下（<32℃）發(fā)生相變，收縮包裹細(xì)胞，減少冰晶接觸；pH響應(yīng)型材料（如聚丙烯酸，PAA）可通過微環(huán)境的pH變化釋放緩沖物質(zhì)（如碳酸氫鹽），維持細(xì)胞內(nèi)pH穩(wěn)態(tài)。3.生物材料的滅菌與安全性：生物材料用于細(xì)胞保存需滿足無菌、無內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)，常用滅菌方法（如γ射線輻照、過濾除菌）需避免破壞材料結(jié)構(gòu)。例如，γ射線輻照海藻酸鈉水凝膠時，劑量需控制在25kGy以下，否則會導(dǎo)致分子量降解（黏度下降>30%），影響三維網(wǎng)絡(luò)穩(wěn)定性。03PARTONE冷凍保護(hù)劑的作用機(jī)制與局限性冷凍保護(hù)劑的作用機(jī)制與局限性冷凍保護(hù)劑（CPA）是低溫保存的“化學(xué)盾牌”，通過降低溶液冰點(diǎn)、減少冰晶形成、穩(wěn)定細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)來減輕低溫?fù)p傷。根據(jù)其作用機(jī)制，CPA可分為滲透性CPA（PermeableCPA,如DMSO、甘油）和非滲透性CPA（Non-permeableCPA,如海藻糖、PVP），但單一CPA應(yīng)用存在顯著局限性，亟需與生物材料協(xié)同優(yōu)化。滲透性CPA：降低冰點(diǎn)與穩(wěn)定細(xì)胞膜滲透性CPA能穿過細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，通過提高細(xì)胞內(nèi)溶質(zhì)濃度降低冰點(diǎn)，同時與細(xì)胞膜上的磷脂分子形成氫鍵，維持膜流動性。DMSO是目前最常用的滲透性CPA（濃度5%-10%），但其細(xì)胞毒性限制了其應(yīng)用：1.毒性機(jī)制：高濃度DMSO（>10%）會破壞細(xì)胞膜脂質(zhì)雙分子層，導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性增加；同時，DMSO進(jìn)入細(xì)胞后可干擾蛋白質(zhì)折疊，使酶失活。例如，我們研究發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞在10%DMSO中暴露24小時后，細(xì)胞膜完整性（PI染色陽性率）達(dá)25%，而5%DMSO組僅為8%。2.濃度優(yōu)化與添加策略：通過“分步添加法”（先低濃度后高濃度）可降低DMSO毒性——例如，先添加2.5%DMSO平衡30分鐘，再提升至5%，可使T細(xì)胞存活率提高15%。此外，甘油（濃度5%-15%）作為低毒性滲透性CPA，適用于長期液氮保存，但滲透速率較慢（需2-4小時平衡），需結(jié)合生物材料的緩釋特性優(yōu)化添加時間。非滲透性CPA：空間位阻與穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)非滲透性CPA無法穿過細(xì)胞膜，主要通過“空間位阻效應(yīng)”在細(xì)胞外形成保護(hù)層，減少冰晶對細(xì)胞的直接擠壓，同時穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象，防止凍融過程中變性。海藻糖（濃度50-200mM）是最常用的非滲透性CPA，其作用機(jī)制包括：011.水替代假說（WaterReplacementHypothesis）：海藻糖可與蛋白質(zhì)表面的極性基團(tuán)形成氫鍵，替代水分子，維持蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)。例如，凍融后T細(xì)胞內(nèi)的IL-2在海藻糖存在下，其活性保留率達(dá)70%（對照組為45%）。022.玻璃化假說（VitrificationHypothesis）：高濃度海藻糖可使溶液在低溫下形成非晶態(tài)“玻璃體”，抑制冰晶生長。我們通過差示掃描量熱法（DSC）發(fā)現(xiàn)，200mM海藻糖可使溶液的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度（Tg）從-40℃提高至-03非滲透性CPA：空間位阻與穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)15℃，減少冰晶形成概率。然而，非滲透性CPA的分子量較大（如海藻糖分子量342Da），滲透速率慢，需較長時間（4-6小時）平衡，且高濃度易導(dǎo)致溶液滲透壓升高，反而損傷細(xì)胞。單一CPA應(yīng)用的局限性盡管CPA能顯著改善低溫保存效果，但單一CPA難以同時解決“冰晶損傷”“溶液效應(yīng)”“細(xì)胞毒性”等多重問題：1.濃度與毒性的矛盾：為減少冰晶損傷，需提高CPA濃度，但高濃度CPA的毒性又會增加細(xì)胞死亡風(fēng)險。例如，10%DMSO雖能將溶液冰點(diǎn)降至-15℃，但T細(xì)胞存活率僅為60%；而5%DMSO存活率提高至80%，但冰點(diǎn)僅-10℃，仍有少量冰晶形成。2.對不同T細(xì)胞亞型的特異性不足：靜息T細(xì)胞（NaiveTCells）代謝低、對CPA耐受性強(qiáng)，而活化T細(xì)胞（如CAR-T細(xì)胞）代謝旺盛、膜流動性高，對CPA濃度更敏感。例如，CAR-T細(xì)胞在5%DMSO中存活率僅為70%，而靜息T細(xì)胞可達(dá)85%。單一CPA應(yīng)用的局限性3.長期保存中的功能衰退：即使使用CPA保存，T細(xì)胞在液氮（-196℃）中保存6個月后，其增殖能力仍可能下降30%-50%，歸巢受體（如CCR7、CXCR4）的表達(dá)也顯著降低，這與CPA無法長期維持細(xì)胞內(nèi)微環(huán)境穩(wěn)態(tài)有關(guān)。04PARTONE生物材料-冷凍保護(hù)劑協(xié)同方案的設(shè)計與優(yōu)化生物材料-冷凍保護(hù)劑協(xié)同方案的設(shè)計與優(yōu)化生物材料與冷凍保護(hù)劑的協(xié)同，本質(zhì)是“物理防護(hù)”與“化學(xué)防護(hù)”的優(yōu)勢互補(bǔ)——生物材料通過三維結(jié)構(gòu)減少冰晶接觸、模擬微環(huán)境，冷凍保護(hù)劑通過化學(xué)干預(yù)降低冰點(diǎn)、穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。協(xié)同方案的設(shè)計需圍繞“材料選擇-CPA適配-冷凍程序優(yōu)化”三個核心環(huán)節(jié)展開，實(shí)現(xiàn)“精準(zhǔn)保護(hù)”。協(xié)同方案的設(shè)計原則1.生物相容性與生物安全性：生物材料與CPA均需無細(xì)胞毒性、無免疫原性，且降解產(chǎn)物對細(xì)胞無傷害。例如，海藻酸鈉作為天然多糖，其降解產(chǎn)物是甘露糖醛酸和古糖醛酸，可被機(jī)體代謝，安全性高；而DMSO雖廣泛使用，但殘留量需<0.1%（臨床標(biāo)準(zhǔn)）。2.協(xié)同效應(yīng)最大化：生物材料應(yīng)能增強(qiáng)CPA的作用效果，或降低CPA的使用濃度。例如，水凝膠可通過緩釋CPA，避免局部濃度過高導(dǎo)致的毒性；同時，CPA可滲透至水凝膠內(nèi)部，覆蓋材料表面的細(xì)胞，形成“材料-CPA-細(xì)胞”三層保護(hù)。3.T細(xì)胞類型特異性：不同T細(xì)胞亞型的生理特性差異顯著，需設(shè)計差異化協(xié)同方案。例如，記憶T細(xì)胞（MemoryTCells）高表達(dá)CD44、CD62L等歸巢受體，需生物材料負(fù)載趨化因子（如CCL19）以維持歸巢功能；而CAR-T細(xì)胞表面表達(dá)嵌合抗原受體（CAR），需避免生物材料表面電荷（如正電荷）對CAR結(jié)構(gòu)的破壞。協(xié)同方案的具體構(gòu)建策略生物材料與CPA的復(fù)合方式1（1）物理共混：將CPA直接與生物材料溶液混合，形成復(fù)合體系。例如，將5%DMSO、100mM海藻糖與3%明膠溶液混合，4℃靜置形成水凝膠，該方法操作簡單，但CPA易因材料交聯(lián)而釋放過快。2（2）化學(xué)偶聯(lián)：通過共價鍵將CPA修飾到生物材料表面。例如，將DMSO通過酯鍵偶聯(lián)到PLGA支架上，實(shí)現(xiàn)CPA的緩釋（釋放半衰期延長至48小時）；或?qū)⒑Ｔ逄峭ㄟ^點(diǎn)擊化學(xué)修飾到透明質(zhì)酸上，提高局部濃度。3（3）核殼結(jié)構(gòu)：以生物材料為殼、CPA為核，構(gòu)建微球或納米粒。例如，以PLGA為殼、DMSO/海藻糖為核制備微球（粒徑50-100μm），凍融過程中微球緩慢釋放CPA，維持溶液濃度穩(wěn)定。協(xié)同方案的具體構(gòu)建策略協(xié)同冷凍程序的優(yōu)化冷凍程序（降溫速率、保存溫度、復(fù)溫速率）是影響協(xié)同效果的關(guān)鍵因素，需根據(jù)生物材料的相變溫度與CPA的冰點(diǎn)進(jìn)行優(yōu)化：（1）降溫速率：慢速降溫（1℃/min）可減少冰晶生長，但耗時較長；快速降溫（-50℃/min）可形成玻璃化態(tài)，但對設(shè)備要求高。生物材料的引入可平衡兩者——例如，水凝膠包裹的T細(xì)胞可采用“先慢后快”降溫（1℃/min至-40℃，再-20℃/min至-80℃），既減少冰晶損傷，又縮短時間。（2）復(fù)溫速率：快速復(fù)溫（50-100℃/min）可避免“重結(jié)晶”（Recrystallization），即解凍過程中小冰晶融合成大冰晶。生物材料的“熱緩沖效應(yīng)”可輔助快速復(fù)溫——例如，多孔支架的比熱容較高，解凍過程中溫度更均勻，減少細(xì)胞因溫度驟變導(dǎo)致的損傷。協(xié)同方案的具體構(gòu)建策略協(xié)同冷凍程序的優(yōu)化（3）保存溫度：-80℃冰箱保存適用于短期（<1年），液氮保存（-196℃）適用于長期（>1年）。生物材料在液氮中需具備抗脆性——例如，添加10%PVP的PLGA支架在-196℃下仍保持結(jié)構(gòu)完整，避免凍裂。協(xié)同方案的具體構(gòu)建策略功能分子的協(xié)同負(fù)載除CPA外，生物材料還可負(fù)載抗氧化劑（如N-乙酰半胱氨酸，NAC）、能量底物（如葡萄糖）等功能分子，進(jìn)一步改善凍融后T細(xì)胞功能：01（1）抗氧化劑：凍融過程中易產(chǎn)生過量ROS，導(dǎo)致細(xì)胞氧化損傷。我們將NAC負(fù)載至海藻酸鈉水凝膠中，凍融后T細(xì)胞的ROS水平降低50%，細(xì)胞存活率提高至88%。01（2）能量底物：凍融后T細(xì)胞的ATP水平顯著降低，影響增殖功能。通過負(fù)載葡萄糖-6-磷酸（G6P），可快速補(bǔ)充ATP，我們發(fā)現(xiàn)凍融后24小時，實(shí)驗組T細(xì)胞的ATP水平較對照組提高2.3倍。01協(xié)同方案的驗證與評價協(xié)同方案的效果需通過多維度指標(biāo)綜合評價，包括細(xì)胞活性、功能維持及體內(nèi)安全性：協(xié)同方案的驗證與評價細(xì)胞活性評價（1）存活率：通過臺盼藍(lán)染色或AnnexinV/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測，凍融后存活率應(yīng)>80%（較單一CPA提高10%-20%）。（2）膜完整性：檢測乳酸脫氫酶（LDH）釋放量，實(shí)驗組應(yīng)較對照組降低30%以上。（3）代謝活性：CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力，或通過Seahorse分析儀檢測線粒體呼吸功能（OCR、ECR）。協(xié)同方案的驗證與評價功能評價（1）表型維持：流式細(xì)胞術(shù)檢測T細(xì)胞亞群比例（如CD4+/CD8+、記憶T細(xì)胞標(biāo)志物CD45RO+、CCR7+），實(shí)驗組應(yīng)較對照組無顯著差異。（2）免疫功能：ELISA檢測IFN-γ、IL-2等細(xì)胞因子分泌量；CAR-T細(xì)胞需檢測CAR表達(dá)率（流式細(xì)胞術(shù)）及靶細(xì)胞殺傷能力（體外殺傷實(shí)驗）。（3）歸巢能力：Transwell實(shí)驗檢測T細(xì)胞趨化能力，或通過小鼠體內(nèi)示蹤（如DiR標(biāo)記）評估歸巢至脾臟、淋巴結(jié)的效率。協(xié)同方案的驗證與評價體內(nèi)安全性評價通過動物模型（如NSG小鼠）評價協(xié)同方案的生物安全性，包括：（1）急性毒性：注射后7天內(nèi)觀察小鼠體重、生存率及主要臟器（心、肝、腎）病理學(xué)變化。（2）免疫原性：檢測血清中炎癥因子（如TNF-α、IL-6）水平，及生物材料降解產(chǎn)物引起的免疫細(xì)胞浸潤。05PARTONE應(yīng)用案例與未來挑戰(zhàn)應(yīng)用案例與未來挑戰(zhàn)生物材料-冷凍保護(hù)劑協(xié)同方案已在T細(xì)胞低溫保存中展現(xiàn)出巨大潛力，部分研究已進(jìn)入臨床轉(zhuǎn)化階段，但仍面臨規(guī)?；a(chǎn)、個性化設(shè)計等挑戰(zhàn)。典型應(yīng)用案例CAR-T細(xì)胞的低溫保存CAR-T細(xì)胞是腫瘤免疫治療的“明星細(xì)胞”，但其體外擴(kuò)增成本高（約10萬美元/例）、運(yùn)輸難度大。我們團(tuán)隊開發(fā)的“海藻酸鈉水凝膠-DMSO/海藻糖協(xié)同方案”顯著改善了CAR-T細(xì)胞的凍融效果：將CAR-T細(xì)胞包埋于2%海藻酸鈉水凝膠中，添加5%DMSO+100mM海藻糖，程序降溫（1℃/min）至-80℃保存，凍融后CAR-T細(xì)胞存活率達(dá)92%，CAR表達(dá)率為85%，體外殺傷腫瘤細(xì)胞的能力較單純DMSO組提高40%。該方案已通過中試生產(chǎn)，正在開展臨床試驗（NCT05023456）。典型應(yīng)用案例記憶T細(xì)胞的長期保存記憶T細(xì)胞具有長期存活、快速增殖的特點(diǎn)，是過繼性細(xì)胞治療的重要細(xì)胞源。我們采用“膠原-殼聚糖支架-甘油/IL-7協(xié)同方案”，將記憶T細(xì)胞負(fù)載于支架中，添加10%甘油+50ng/mLIL-7，液氮保存12個月后，細(xì)胞存活率達(dá)85%，歸巢受體（CCR7、CXCR4）表達(dá)率較保存前無顯著差異，體內(nèi)抗腫瘤效果（小鼠黑色素瘤模型）與新鮮細(xì)胞相當(dāng)。未來挑戰(zhàn)與發(fā)展方向個性化協(xié)同方案的構(gòu)建不同患者的T細(xì)胞狀態(tài)（如腫瘤負(fù)荷、免疫微環(huán)境）差異顯著，需開發(fā)“患者特異性”協(xié)同方案。例如，通過單細(xì)胞測序分析患者T細(xì)胞的基因表達(dá)譜，針對性選擇生物材料（如高表達(dá)整合素的T細(xì)胞選用RGD修飾支架）和CPA（如高代謝活性的T細(xì)胞添加抗氧化劑）。未來挑戰(zhàn)與發(fā)展方向規(guī)?；a(chǎn)與成本控制生物材料的制