ICS65.020.01

CCSB25

15

內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)

DB15/T3364—2024

沙蒿籽多糖含量測(cè)定

分光光度法

Determinationofartemisiaseedpolysaccharides——

Spectrophotometricmethod

2024-02-23發(fā)布2024-03-23實(shí)施

內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB15/T3364—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC19）歸口。

本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院。

本文件主要起草人：孫海洲、李勝利、金鹿、張春華、張崇志、楊鼎、薩初拉、王博、劉威、寶華、

付樂(lè)、李文婷。

I

DB15/T3364—2024

沙蒿籽多糖含量測(cè)定

分光光度法

1范圍

本文件確定了分光光度法測(cè)定沙蒿籽多糖含量的方法。

本文件適用于多糖制品中多糖含量的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

沙蒿籽多糖artemisiaseedpolysaccharide

在沙蒿籽表面覆蓋的多糖類(lèi)大分子物質(zhì)，約占種子質(zhì)量的20%，是一種常見(jiàn)的食品添加劑。

4原理

多糖類(lèi)成分在濃硫酸作用下，先水解成單糖，并迅速脫水形成糠醛衍生物，然后與苯酚反應(yīng)生成橙

黃色溶液，在490nm處有最大吸收峰，吸光度值與多糖含量成正比。

5試劑和材料

試劑

5.1.1本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

5.1.2濃硫酸（H2SO4）。

5.1.3D-無(wú)水葡萄糖（C6H12O6）。

5.1.4苯酚（C6H6O）。

試劑配制

苯酚溶液：苯酚使用重蒸苯酚，稱(chēng)取重蒸苯酚10g，加水150mL，置于棕色瓶中，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1

DB15/T3364—2024

標(biāo)準(zhǔn)品

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（C6H12O）：純度≥98%。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

5.4.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1mg/mL）：取干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品50mg，精密稱(chēng)定，用水溶解并

定容至50mL，搖勻即可。4℃以下保存。

5.4.2葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分別

置50mL容量瓶中，用水定容，搖勻，得濃度為20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100

μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。

6儀器和設(shè)備

分析天平，感量0.0001g。

恒溫水浴鍋，精度±0.5℃。

離心機(jī)，5000r/min。

干燥箱，RT+10℃～250℃。

實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)或研缽。

分光光度計(jì)，規(guī)格185nm～900nm。

7沙蒿籽多糖的提取

稱(chēng)取50g沙蒿籽于燒杯中，加入100mL水至恒溫水浴鍋內(nèi)100℃浸提2h。過(guò)濾后在上清液中加入

4倍體積95%乙醇，靜置過(guò)夜后在離心機(jī)上5000r/min離心10min，去上清液，將沉淀復(fù)溶于50mL水中。

加入相同體積95%乙醇，5000r/min離心10min，留取沉淀。置沉淀于干燥箱內(nèi)65℃烘干，粉碎或研

磨后過(guò)1mm篩，混勻，裝入密閉容器中，保存?zhèn)溆谩?/p>

8分析步驟

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

8.1.1準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液各1.00mL分別置于20mL具塞試管中，各加水1.00mL至2.00

mL，再加苯酚溶液1.00mL，迅速滴加濃硫酸5.00mL，搖勻后放置5min，置沸水浴中加熱15min，

取出冷卻至室溫。

8.1.2同上操作蒸餾水為空白對(duì)照。

8.1.3于490nm處測(cè)定吸光度。

8.1.4以吸光度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于

0.99，待測(cè)樣液的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)。

樣品的測(cè)定

8.2.1稱(chēng)取約0.1g（精確至0.0001g）備用樣品，加500mL水溶解，過(guò)濾殘?jiān)ㄈ葜?000mL得

到樣品溶液。

8.2.2準(zhǔn)確吸取樣品溶液1.00mL，按8.1.1測(cè)定吸光度。

8.2.3根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)液中葡萄糖的含量。

2

DB15/T3364—2024

9多糖含量計(jì)算

試樣中沙蒿籽多糖的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示，按式（1）計(jì)算：

mV

X=110.910?4………………（1）

m2V2

式中：

X——試樣中多糖的含量，單位為質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）。

m1——由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到樣品測(cè)定液中的多糖含量，單位為微克（μg）。

V1——樣品定容體積，單位為毫升（mL）。

m2——樣品質(zhì)量，單位為克（g）。

V2——比色測(cè)定時(shí)所移取樣品測(cè)定液的體積，單位為毫升（mL）。

0.9——葡萄糖換算成葡聚糖的校正系數(shù)。

結(jié)果表示

取兩次測(cè)定的算數(shù)平均值作為結(jié)果，保留兩位小數(shù)。

重復(fù)

每試樣稱(chēng)取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)