緒論1.1百香果葉的概述百香果生長在熱帶，是一種香氣誘人，味道酸甜可口的高營養(yǎng)價值水果；其葉子不僅有很高的營養(yǎng)價值，而且保健效果出色。其功效與作用如下:（1）消炎殺菌百香果葉中的生物堿和維生素c是天然消炎殺菌物質(zhì)，人體存在多種致病菌，把新鮮的百香果葉子切碎后使用，或者用來泡水喝，都能吸收這些消炎物質(zhì)，將人體內(nèi)的炎癥消除，具備明顯的預(yù)防作用。（2）清腸排毒、潤腸通便葉中含有豐富的果膠以及大量的纖維素和一些膳食纖維，這些物質(zhì)都能促進腸胃蠕動，而且能夠吸水膨脹，吸附在腸道壁上的垃圾和毒素的表面，隨身體代謝排出體外，所以人們經(jīng)常食用百香果葉子既能清腸排毒，又能潤腸通便。（3）淡化色斑、美白作用葉中還含有黃酮、生物堿、酚類等多種抗氧化有效成分，可以提高人體內(nèi)超氧化物歧化酶的活性，增強人體肌膚的抗氧化能力，另外它還能防止色素在皮膚表層淤積，可以防止色斑生成，面部有色斑的人群，經(jīng)常用百香果葉子泡水喝，能淡化色斑，能起到明顯美白作用。（4）減肥瘦身百香果的葉子是一種低熱量食材，它含有的纖維素能增加人類腸胃的保護感，而且能抑制人體對熱量的攝入，另外人們食用百香果葉子以后，還能促進身體里的膽固醇轉(zhuǎn)化成膽汁，盡快排出體外，能防止它們在身體內(nèi)堆積，平時經(jīng)常吃一些百香果葉子能減肥瘦身，能讓人們的身材變得越來越苗條，形態(tài)姿態(tài)越來越優(yōu)美。1.2黃酮類化合物的概述1.2.1黃酮類化合物的分類及結(jié)構(gòu)植物體內(nèi)的抗氧化有效成分多為黃酮類化合物。根據(jù)三碳鍵結(jié)構(gòu)的氧化程度和B環(huán)的連接位置等特點，黃酮類化合物可分為下列幾類：黃酮和黃酮醇；異黃酮；二氫異黃酮；二氫黃酮和二氫黃酮醇；澳咔；查耳酮；二氫查耳酮；黃烷和黃烷醇；黃烷二醇。黃酮類化合物在植物體內(nèi)的形成，是由葡萄糖分別經(jīng)過莽草酸途徑和乙酸-丙二酸途徑生成羥基桂皮酸和三個分子的乙酸，然后合成查爾酮，再衍變?yōu)楦黝慄S酮類化合物。黃酮類化合物具有2-苯基色原酮結(jié)構(gòu)，它們分子中有一個酮式羰基，第一位上的氧原子具堿性，能與強酸成鹽，其羥基衍生物多具黃色，故又稱黃堿素或黃酮。黃酮類化合物在植物體中通常與糖結(jié)合成苷類，小部分以游離態(tài)(苷元)的形式存在。1.2.2黃酮類化合物的功效絕大多數(shù)植物體內(nèi)都含有黃酮類化合物，它在植物的生長、發(fā)育、開花、結(jié)果以及抗菌防病等方面起著重要的作用。黃酮類化合物是一種多功能的物質(zhì)，它的功效與作用如下：（1）清除自由基、抗氧化作用黃酮類物質(zhì)能夠有效的清除氧自由基，延緩細胞衰老，阻止細胞老化。黃酮類化合物的一些藥理活性往往與其抗氧化自由基相關(guān)。（2）抗腫瘤活性作用黃酮類化合物的抗腫瘤機制多種多樣，如槲皮素的抗腫瘤活性與其抗氧化作用、抑制相關(guān)酶的活性、降低腫瘤細胞耐藥性、誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡及雌激素樣作用等有關(guān);水飛薊素的抗腫瘤活性與其抗氧化作用、抑制相關(guān)酶活性、誘導(dǎo)細胞周期阻滯等有關(guān)。常服用含黃酮類化合物的食物亦可阻止癌癥的發(fā)生。（3）降低膽固醇、軟化血管黃酮類物質(zhì)具有降低膽固醇的功效，能夠降低血管硬化度、對心絞痛、冠心病、糖尿病等疾病也有顯著的療效。（4）其他功效及作用除此之外，黃酮類化合物也有提高機體免疫力、抗菌消炎、清熱解毒、促進愈合、鎮(zhèn)靜止痛、鎮(zhèn)咳祛痰、利尿、瀉下、解痙等功效。同時，黃酮類化合物作為天然產(chǎn)物，其具有安全性好，毒性小的優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品等行業(yè)。因此，對于黃酮類化合物的提取及相關(guān)性質(zhì)測定有相當(dāng)重要的研究意義。1.3本實驗的研究背景、目的和內(nèi)容1.3.1研究背景社會經(jīng)濟的快速發(fā)展，使人們的生活方式有了極大的變化，環(huán)境污染、飲食不健康，年齡增長等問題導(dǎo)致抗氧化酶和抗氧化劑的水平下降，過量的紫外線輻射以及抽煙等一系列的內(nèi)、外因素都會導(dǎo)致過多的自由基產(chǎn)生，從而破壞人體自身抗氧化劑和自由基的平衡。這些過量的極不穩(wěn)定的自由基通過損害細胞膜和健康的DNA，從而加速人體的老化。除此之外，過多的自由基還會導(dǎo)致一系列疾病，如心臟病、血液病、中風(fēng)，甚至是癌癥等等。人的身體會產(chǎn)生一些抗氧化劑，以對抗由正常的身體機能形成的自由基。通過健康的飲食，也可以從中得到一部分抗氧化劑?？寡趸c抗衰老密不可分，因此為了增加更多的抗氧化劑，人們會選擇服用抗氧化劑來補充。由于合成抗氧化劑對人體健康有潛在危害，如二丁基羥基茴香醚（BHA）在動物實驗中是致癌的，因此在植物中尋找安全的天然抗氧化物質(zhì)及其應(yīng)用的研究工作引起了人們的重視。1.3.2研究目的自然界中存在的植物中，其抗氧化有效成分主要有黃酮類、多糖類、多酚類化合物、維生素、皂苷類、生物堿等等。因為百香果葉中的有效成分豐富，作為天然產(chǎn)物研究與開發(fā)有很好的價值。百香果葉有效成分中的黃酮類化合物在自然界中廣泛存在，并且具有多種不同的生物活性，它不僅可以作為一種強抗氧化劑，對羥自由基（—OH）、對超氧陰離子自由基（O2-）都具有一定的清除作用，還可以阻止細胞老化，延緩衰老等等。因為百香果樹的種植適應(yīng)性良好,果實大、香氣佳，因此其種植產(chǎn)地很多，例如廣東、廣西、福建等地區(qū)都是百香果種植大戶的聚集之地。現(xiàn)在，百香果是廣大人民喜愛的水果之一，其需求量增多，果樹種植量也相應(yīng)增多，隨之增多的百香果葉棄之可惜，造成極大的資源浪費。因此，通過提取百香果葉中的有效成分，對其有效成分的抗氧化效果進行研究，將百香果葉制成茶葉。1.3.3研究內(nèi)容1對不同地區(qū)的百香果葉子有效成分進行定性分析采用水提取法、醇提取法和酸性醇液提取法對不同地區(qū)百香果葉的有效成分進行提取，并用顯色反應(yīng)對其進行全面的定性鑒定，確定百香果葉有效成分的具體種類。通過黃酮類化合物進行專項鑒定，確定黃酮類化合物的具體種類。2對有效成分黃酮類化合物進行提取采用超聲波輔助提取法，提取廣東、福建、廣西三個地區(qū)中百香果葉的黃酮類化合物。制作蘆丁對照曲線，采用紫外分光光度法測定提取物中的總黃酮含量。3對不同地區(qū)的百香果葉提取液進行抗氧化分析采用DPPH法、水楊酸法以及總抗氧化法三種方法測定不同地區(qū)百香果葉的抗氧化性，探究其抗氧化機理、比較不同地區(qū)百香果葉的抗氧化效果。

2材料與方法2.1材料及儀器2.1.1實驗材料產(chǎn)自廣東、福建、廣西三個不同地區(qū)的新鮮百香果葉，購自淘寶2.1.2主要試劑無水乙醇分析純廣州化學(xué)試劑廠95%乙醇分析純廣州化學(xué)試劑廠75%乙醇由分析純95%乙醇配置石油醚分析純廣州化學(xué)試劑廠蘆丁分析純廣州化學(xué)試劑廠亞硝酸鈉分析純廣州化學(xué)試劑廠硝酸鋁分析純廣州化學(xué)試劑廠氫氧化鈉分析純天津市大茂化學(xué)試劑廠鹽酸分析純廣州化學(xué)試劑廠硫酸亞鐵分析純廣州化學(xué)試劑廠水楊酸分析純廣州化學(xué)試劑廠過氧化氫分析純廣州化學(xué)試劑廠DPPH分析純廣州化學(xué)試劑廠水楊酸分析純廣州化學(xué)試劑廠四水合鉬酸銨分析純廣州化學(xué)試劑廠2.1.3主要儀器實驗過程中使用的設(shè)備儀器主要有以下幾種：HH?S電熱恒溫水浴鍋，上海博泰實驗設(shè)備有限公司；FZ102微型植物粉碎機，天津市泰斯特儀器有限公司；FA2204B電子分析天平，上海衡平儀器儀表廠；DHG-9140A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥機，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；KQ2200DA超聲波細胞粉碎機，廣州市榮清生物有限公司；SHZ-D3循環(huán)水式多用真空泵，邦西儀器科技（上海）有限公司；UV-1800PC紫外分光光度計，上海美譜達儀器儀表有限公司；RE-205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海振捷實驗設(shè)備有限公司；FD-1KW可調(diào)封閉電爐，方科儀器（常州）有限公司；KQ-100DE數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。50mL、100mL燒杯，實驗室提供；50mL、100mL錐形瓶，實驗室提供；100mL容量瓶，實驗室提供。試管，實驗室提供；比色管，實驗室提供；布氏漏斗，實驗室提供；移液管，實驗室提供。2.2實驗方法2.2.1百香果葉的預(yù)處理將不同地區(qū)的百香果葉的葉柄用剪刀剪掉，用純凈水清洗干凈，并用紗布把百香果葉表面的水分吸干，放置于陽光下晾曬一天，然后放置于60℃的電熱恒溫鼓風(fēng)干燥機內(nèi)進行烘干，等到百香果葉完全烘干失去水分后，用剪刀把樹葉剪碎，接著用微型植物粉碎機進行粉碎，將百香果葉粉末過40目數(shù)的篩，最后將粉末放于透明密封袋中，貼好標簽，密封放置于陰涼處備用。整個過程需注意將不同地區(qū)的百香果葉區(qū)分開來，避免混在一起。2.2.2定性方法采用水提取法、醇提取法和酸性醇液提取法對不同地區(qū)百香果葉的有效成分進行了提取，并用顯色反應(yīng)對其進行全面的定性鑒定。1、百香果葉提取液的制備以水為溶劑供試液的制備:取不同地區(qū)百香果葉粉末各10.00g，倒入三個大燒杯中，做好標記，分別加入100mL蒸餾水浸泡12小時，用布氏漏斗過濾后，取出10mL濾液，供檢驗蛋白質(zhì)、氨基酸及多糖；剩余濾液液放置于60℃水浴鍋中，水浴中加熱20分鐘取出，用于檢測布氏漏斗過濾，濾液做有機酸、酚類、糖類、苷類等類型成分。以乙醇為溶劑供試液的制備:因百香果葉中的葉綠素較多，為避免干擾實驗檢測應(yīng)先除去。取不同地區(qū)百香果葉粉末各5.00g于三個蒸餾燒瓶中，加入95%乙醇加熱回流，提取液加水使其含醇量為70%，置分液漏斗中，用等體積的石油醚提取兩次，分出70%乙醇提取液，減壓濃縮至糖漿狀冷卻，過濾，濾液再進行定性檢查。取去除葉綠素的百香果葉粉末各5．00g，倒入三個大燒杯中，做好標記，分別加入95%乙醇60mL，放置于60℃水浴鍋中加熱回流30分鐘，用布氏漏斗過濾后，再將濾液置于蒸餾裝置中，蒸去乙醇直至無醇味，然后加入適量蒸餾水溶解，用于檢測黃酮類化合物、有機酸、蒽醌、皂苷、鞣質(zhì)、甾體、香豆素等類型成分。酸性醇提取液:取三個燒杯，分別加入不同地區(qū)百香果葉粉末各2.00g，加入0.5%鹽酸乙醇液30mL，置于60℃水浴鍋上，水浴加熱回流30分鐘，用布氏漏斗過濾后，濾液置于蒸餾裝置中，蒸去乙醇直至無醇味，再加適量蒸餾水溶解，用于檢測生物堿。2、定性鑒定方法①黃酮類化合物的檢測與濃硫酸反應(yīng):取三支小試管，分別加入1mL不同地區(qū)百香果葉醇提液，再加入1mL濃硫酸，觀察樣品顏色變化。鹽酸-鎂粉實驗:取三支小試管，分別加入1mL不同地區(qū)百香果葉醇提液，加入少許鎂粉，振蕩，再滴加數(shù)滴濃鹽酸，觀察顏色變化。與氫氧化鈉溶液反應(yīng):取三支小試管，分別加入1mL不同地區(qū)百香果葉醇提液，再加入2滴10%氫氧化鈉，觀察樣品顏色變化。硼氫化鈉實驗:取三支小試管，分別加入1mL不同地區(qū)百香果葉醇提液，再加入1mL硼氫化鈉甲醇溶液，靜置一分鐘后，加入幾滴濃鹽酸，觀察樣品顏色變化。表2.1黃酮類化合物的顯色反應(yīng)Tab.2.1colorreactionofflavonoids試劑黃酮橙酮查爾酮二氫黃酮黃酮醇異黃酮濃硫酸黃/橙紅/洋紅橙橙/紫黃/橙黃鹽酸-鎂粉黃/紅--紅/藍/紫紅/紫紅-氫氧化鈉溶液黃紅/紫紅橙-紅黃-橙深黃黃硼氫化鈉藍-紫紅--②有機酸的檢測用吸管分別吸取不同地區(qū)百香果葉提取液于pH試紙上，看是否呈弱酸性。然后加入2-3滴溴酚藍指示液，觀察樣品顏色變化。③皂苷類的檢測皂苷類具有起泡沫的性質(zhì),將三個不同地區(qū)的百香果葉水提液置于試管中，用力震蕩后，能產(chǎn)生至少十分鐘的持久性泡沫,其泡沫量應(yīng)不少于液體體積的三分之一，加熱后泡沫不消失。泡沫實驗：取三支小試管，分別加入2mL不同地區(qū)百香果葉水提液,用力振搖2分鐘,靜置,觀察泡沫的高度和消失的時間。加熱后,再用力震蕩，看泡沫是否消失。④蒽醌類的檢測硼酸法：取三支小試管，分別加入1mL不同地區(qū)百香果葉醇提液，再加入1%硼酸水溶液1mL，觀察樣品顏色變化。氫氧化鉀法：取三支小試管，分別加入1mL不同地區(qū)百香果葉醇提液，再加入5%氫氧化鉀溶液1mL，觀察樣品顏色變化。堿液試驗：取三支小試管，分別加入1mL不同地區(qū)百香果葉醇提液，再加入2%氫氧化鈉溶液1mL，觀察顏色變化。然后加入過氧化氫，看褪色情況，如果不褪色，繼續(xù)酸化，如果紅色消褪，則證明有蒽醌類的存在。⑤酚類的檢測三氯化鐵法：取三只小試管，分別加入1mL不同地區(qū)百香果葉水提液，再加入1－2滴三氯化鐵試劑，觀察樣品顏色變化，如果呈現(xiàn)綠色、污綠色、藍黑色或暗紫色，則證明有酚類的存在。香草醛-鹽酸法：取三片濾紙片，用玻璃棒蘸取不同地區(qū)百香果葉水提液點在濾紙上，待濾紙干后，用噴瓶噴香草醛一鹽酸試液，觀察樣品顏色變化，如果呈現(xiàn)紅色斑點則證明有多元酚類物質(zhì)的存在。⑥甾體的檢測香草醛-硫酸法：取三片濾紙片，用玻璃棒蘸取不同地區(qū)百香果葉水提液點在濾紙上，待濾紙干后，用噴瓶噴香草醛-硫酸試液，觀察樣品顏色變化，如果變紅則證明有甾體的存在。⑦生物堿的檢測將不同地區(qū)百香果葉酸水浸提液放入離心機中離心，轉(zhuǎn)速為1000，離心時間為1分鐘，取剩余酸水浸提液，加碳酸鈉溶液直至溶液呈堿性，放入分液漏斗中，再加入10mL乙醚，用力振搖，靜置10分鐘，然后分出醚層，剩余水層再加入3mL乙醚，振搖靜置后分出醚層，合并兩次萃取的醚液，將乙醚液置于分液漏斗中，加酸水液10mL振搖，靜置分層，分出酸水液，再以酸水液5mL如前提取，合并酸水液，如此酸提液，制備以備實驗反應(yīng)。取以上酸提液各三份于試管中，每根試管分別滴加2mL待測液，然后依次滴加碘-碘化鉀、苦味酸試劑、鞣酸試劑，若均有或大多有沉淀，則證明有生物堿的存在。⑧強心苷的檢測亞硝基鐵氰化鈉法：取三個燒杯，分別加入20mg不同地區(qū)百香果葉粉末，再依次滴加30滴吡啶，然后加入10滴3%亞硝基鐵氰化鈉溶液和10滴2mol/LNaOH溶液，觀察顏色變化，如果溶液顏色逐漸褪去，最后變成姜黃色，則證明有強心苷的存在。堿性苦味酸法：取三支試管，分別加入不同地區(qū)百香果葉粉末，加入乙醇試劑，然后加入氫氧化鈉使溶液呈堿性，最后加入數(shù)滴苦味酸試劑，觀察溶液顏色變化，有時需要反應(yīng)15min。如果靜置反應(yīng)15min后，溶液出現(xiàn)分層，上層變?yōu)槌燃t色，則證明有強心苷的存在。⑨香豆素的檢測：三氯化鐵法：取0.5g不同地區(qū)百香果葉粉末于反應(yīng)瓶中，加入氨水，加至使樣品呈液體狀，再加入數(shù)滴鹽酸，搖勻后加入三氯化鐵試劑，再搖勻，觀察樣品顏色變化。如果加入后產(chǎn)生藍綠色，則證明有香豆素的存在。⑩氨基酸的檢測雙縮脲法：取1mL于試管中，溶于10%氫氧化鈉溶液與1%硫酸銅溶液等體積混合液，搖勻，觀察顏色變化。如果溶液顯紫紅色，則證明有氨基酸的存在。注意雙縮脲試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用。茚三酮法：取0.2g茚三酮溶于100mL正丁醇中，再加3mL冰醋酸。取不同地區(qū)百香果葉冷水浸提液1mL于試管中，加入2-3滴茚三酮試劑，放置于水浴鍋中沸水浴中加熱5分鐘，放至室溫，觀察樣品顏色變化，如果樣品溶液顯藍色或藍紫色，則證明有氨基酸的存在。?糖類的檢測菲林試劑法：取6.93g結(jié)晶硫酸銅溶于100mL水中，34.6g酒石酸鉀鈉、10g氫氧化鈉溶于100mL水中，等量混合在一起，制得斐林試劑。取不同地區(qū)百香果葉熱水提取液1mL，加入4-5滴斐林試劑，在水浴鍋中沸水浴中加熱10分鐘，如果產(chǎn)生磚紅色沉淀，則證明有糖類的存在。如果是檢測多糖，則取1mL樣品水提液，再加入10%鹽酸溶液1mL，在沸水浴中加熱10分鐘，用布氏漏斗過濾，再用10%氫氧化鈉溶液調(diào)至中性，按上述方法進行檢測。三氯化鐵-冰醋酸法：取1%三氯化鐵溶液0.5mL，加冰醋酸至100mL，制得三氯化鐵-冰醋酸試劑。取不同地區(qū)百香果葉乙醇提取液1mL，置于三支試管中，水浴加熱直至乙醇全部蒸去，剩余殘渣用0.5mL三氯化鐵-冰醋酸試劑溶解，再沿試管壁緩緩加入1mL硫酸，靜置數(shù)分鐘，如果溶液分層，上層漸顯藍色，下層顯紅色或棕色或兩液交界面呈紅色環(huán)，則證明有多糖的存在。?鞣質(zhì)的檢測氯化鈉明膠法：取一小燒杯，加入1g明膠，再加入50mL蒸餾水，置于60℃水浴鍋中水浴加熱，接著加入10g氯化鈉，待明膠完全溶解后，倒入100mL容量瓶中，定容至100mL。取不同地區(qū)百香果葉水提液各1mL，加熱至60℃，然后滴加1-2滴氯化鈉明膠試劑，若溶液產(chǎn)生白色渾濁或沉淀，則證明有鞣質(zhì)的存在。2.2.2超聲波輔助提取百香果葉有效成分傳統(tǒng)的黃酮提取方法，用醇類、堿液、系統(tǒng)溶劑或者熱水輔助提取。社會在發(fā)展，科技也在不斷進步，借助科學(xué)儀器的輔助，黃酮的提取方法也在不斷地更新中。新型提取方法包括超微粉粹提取法、微波加熱提取法、超臨界流體萃取提取法、超聲波輔助提取法等等。新興的提取方法相對傳統(tǒng)方法，有以下優(yōu)點：提取時間較短、雜質(zhì)較少、提取出來的有效成分較多、消耗的溶劑更少、步驟更加簡單易操作。根據(jù)實驗室所具備的實驗儀器以及本實驗的目的及要求，選用超聲波輔助提取法來提取不同地區(qū)百香果葉中的黃酮類化合物。超聲波提取法是一種既高效又節(jié)能環(huán)保的現(xiàn)代技術(shù)手段。通過利用超聲波具有的空化效應(yīng)，機械效應(yīng)和熱效應(yīng)，增大介質(zhì)分子的穿透力、增大介質(zhì)的運動速度以提取植物中的有效成分，最終釋放出百香果葉中的黃酮類化合物。合理利用超聲波振動的方法進行提取，使提取溶劑快速地進入百香果葉細胞中，將其中所含的有效成分盡可能完全地溶于溶劑之中，得到多成分混合提取液。利用超聲波輔助提取法來強化提取分離過程，可有效提高提取分離率、降低提取溫度、節(jié)約實驗成本、縮短提取時間、簡化實驗步驟、還能提高產(chǎn)品的質(zhì)量。具體操作方法：(1)因為百香果葉中存在葉綠素及其它干擾黃酮類化合物含量測定的脂溶性雜質(zhì)，所以提取黃酮類化合物前要將其除去，以防干擾接下來的實驗。用分析天平準確稱取2g不同地區(qū)百香果葉粉末各兩份于六個燒杯中，然后分別加入30mL的石油醚進行浸提，時間為30分鐘，然后用布氏漏斗進行減壓抽濾，保留濾渣，濾液回收；(2)取六個燒杯，做好標簽，分別加入上一步石油醚浸提后的濾渣，用95%乙醇試劑按一定比例加入蒸餾水配制75%乙醇150mL，往其中三個燒杯中分別加入50mL75%乙醇試劑，往另外三個燒杯中加入50mL蒸餾水，使料液比為1：25，然后啟動超聲波細胞粉碎機，設(shè)置以下參數(shù)：提取時間為30分鐘，間斷1s，提取溫度為60℃，提取功率為70W。將提取后的濾液用布氏漏斗進行抽濾，然后保留濾液，此時的濾液為百香果葉黃酮的粗提液，棄去濾渣。啟動旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，連接減壓蒸餾裝置和循環(huán)水式多用真空泵，設(shè)置蒸餾溫度為60℃。將不同地區(qū)百香果葉黃酮粗提液進行真空蒸發(fā)濃縮，餾液回收乙醇。(3)因為百香果葉中的氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖類等是水溶性物質(zhì)，極易溶于水，而不易溶于有機溶劑，所以醇提濃縮物中存在氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖類等沉淀物，需要去除以防干擾接下來總黃酮含量的檢測。用95％乙醇溶解以上醇提濃縮物，用布氏漏斗進行減壓抽濾，除去不溶的氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖類物質(zhì)，啟動旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、連接減壓蒸餾裝置和循環(huán)水式多用真空泵，設(shè)置蒸餾溫度為60℃，將濾液進行真空蒸發(fā)濃縮，得到較純的百香果葉黃酮濃縮液，于4℃冰箱中保存待用。2.2.3總黃酮含量的測定方法制作蘆丁標準曲線：用蘆丁標準品配得一定濃度梯度的標準溶液，選擇標準溶液的最大吸收波長作為測定波長，根據(jù)濃度梯度的不同繪制蘆丁標準曲線，可得出吸光度與濃度的對應(yīng)關(guān)系。用紫外分光光度計測出各組百香果葉提取液的吸光度，對照蘆丁標準曲線的回歸曲線方程，可計算出不同地區(qū)百香果葉提取液中的黃酮濃度，從而計算出各組的含量。具體操作方法：(1)蘆丁標準曲線的制作：將蘆丁標準品試劑放入干燥箱中干燥，然后用分析天平精確稱取已經(jīng)充分干燥的蘆丁粉末0.1g于燒杯中，用95%乙醇試劑按一定比例加入蒸餾水配制75%乙醇若干毫升，加入適量75%的乙醇試劑，待蘆丁完全溶解后，如果難以溶解，可以將蘆丁溶液放入超聲波細胞粉碎機中輔助溶解，然后取一個500mL容量瓶，將完全溶解的蘆丁溶液倒入容量瓶中，用75%的乙醇定容，可得0.2mg/mL的蘆丁標準溶液。取八個25mL的容量瓶，做好標簽，依次加入75%的乙醇7.0、6.0、5.0、4.0、3.0、2.0、1.0、0.0mL，然后用移液槍準確吸取0.2mg/mL的蘆丁標準溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL于25mL容量瓶中，使各個容量瓶中的乙醇的量相同，制得濃度梯度為0、0.008、0.016、0.024、0.032、0.040、0.048、0.056mg/mL的蘆丁標準液。往每個25mL容量瓶中分別加入5%的亞硝酸鈉溶液1mL，用玻璃棒攪拌混勻，靜置6分鐘，再加入1mL10%硝酸鋁溶液，用玻璃棒攪拌混勻，靜置6分鐘，接著加入10mL10%氫氧化鈉溶液，最后用蒸餾水加至25mL刻度線定容，輕輕晃動搖勻，靜置15分鐘，觀察樣品顏色變化。啟動紫外分光光度計，預(yù)熱20分鐘后，設(shè)置以下參數(shù)：波長λ為510nm。以空白對照作為參比溶液，分三次測定不同濃度的蘆丁標準品的溶液的吸光度，將得到的實驗數(shù)據(jù)記錄下來，求取平均值，并以吸光度為縱坐標，蘆丁標準品的濃度為橫坐標，繪制蘆丁標準曲線見圖2-1。圖2.2蘆丁標準曲線Fig.2.2StandardcurveofRutin其中，A為吸光度，C為不同濃度的蘆丁標準溶液。由圖可知，蘆丁標準曲線的回歸曲線方程為，y=11.461x+0.0081，其中相關(guān)系數(shù)R2=0.9995(2)不同地區(qū)百香果葉水提液、醇提液的黃酮含量測定從冰箱中取出備用的不同地區(qū)百香果葉濃縮液，放至室溫，分別置于6個大燒杯中，水提濃縮液用蒸餾水加至50mL，醇提濃縮液用75%的乙醇加至50mL，用移液槍從中精確抽取出2mL的溶液，往每個燒杯中分別加入5%的亞硝酸鈉溶液1mL，用玻璃棒攪拌混勻，靜置6分鐘，再加入1mL10%硝酸鋁溶液，用玻璃棒攪拌混勻，靜置6分鐘，接著加入10mL10%氫氧化鈉溶液，最后用蒸餾水加至25mL刻度線定容，輕輕晃動搖勻，靜置15分鐘。用紫外分光光度計測量6組百香果葉浸提物中總黃酮的吸光度，將吸光度值代入蘆丁標準曲線的回歸方程，計算各組的黃酮濃度，從而求出各組中的黃酮含量。百香果葉中總黃酮含量Y(mg/g)=C×25/2×50/m式中，C(mg/mL)——由回歸曲線方程得出不同地區(qū)百香果葉中黃酮類化合物的質(zhì)量濃度；25(mL)——測量顯色反應(yīng)時總?cè)芤旱捏w積；2(mL)——測量顯色反應(yīng)時加入的黃酮提取液的體積；m(g)——最開始提取時的百香果葉粉末的質(zhì)量，2g。50(mL)——黃酮濃縮液稀釋后的體積；2.2.4三個不同地區(qū)百香果葉中黃酮的抗氧化研究1、DPPH法測定測定黃酮對自由基清除能力1,1-二苯基-2-苦肼基是一個穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，熔點在127至129℃，為暗紫色棱柱狀結(jié)晶，DPPH自由基具有單電子結(jié)構(gòu)，它在517nm處為最大吸收波長，其乙醇溶液呈紫色。從其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)可以得知DPPH是非常有效的自由基清除劑，它在自由基調(diào)控的聚合反應(yīng)中是一種很強的抑制劑。當(dāng)DPPH溶液中加入自由基清除劑時，由于與孤對電子配對而使其吸收逐漸消失，導(dǎo)致溶液顏色變淺，顯黃色或淡黃色甚至無色。因為其褪色程度與其接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系，所以可以用紫外分光光度計來進行定量分析。溶液在517nm處的吸光度變小，其變化程度與自由基清除程度呈線性關(guān)系，所以可以用清除率來表示抗氧化能力。清除率越大，說明該地區(qū)的百香果葉抗氧化能力越強。為了更直觀的表明百香果葉中有效成分的抗氧化能力，可以選用其他常見的抗氧化劑作為對照，例如維生素C。通過繪制維生素C濃度與清除率之間的對照曲線，用維生素C對照曲線來對比樣品的清除自由基的能力。實驗溶劑的配制：0.08mol/LDPPH溶液：用電子分析天平準確稱取4.0mgDPPH粉末于燒杯中，接著往燒杯中加入無水乙醇，用玻璃棒攪拌，取一個100mL棕色容量瓶，待DPPH完全溶解后轉(zhuǎn)移至100mL棕色容量瓶中，然后用無水乙醇定容至100mL，將制得的0.08mol/LDPPH溶液放置于0℃的冰箱中避光保存，備用。用移液管吸取2mLDPPH溶液于試管中，此時溶液呈深紫色，然后往試管中滴加少量樣品液，先少后多漸加，輕輕晃動試管使溶液混勻，一邊滴加一邊觀察溶液顏色變化，當(dāng)溶液顏色逐漸褪至無色時，記下此時的加樣量，該加樣量是百香果葉提取液的最大加樣量。在此最大加樣量的基礎(chǔ)上，按一定濃度梯度往前設(shè)置5個用量，使樣品溶液的濃度成等差數(shù)列。按照一定的濃度梯度，將不同地區(qū)的百香果葉提取溶液配制成2.0mg/mL、4.0mg/mL、6.0mg/mL、8.0mg/mL、10.0mg/mL的溶液，接著用移液槍分別吸取每個濃度各兩份各1.0mL于5mL的小試管中，然后分別加入2.0mL的DPPH溶液和2.0mL無水乙醇。另取一支小試管，加入1mL無水乙醇，再加入2mLDPPH溶液，作為空白對照組。在常溫下，將全部試管置于暗室中避光反應(yīng)30分鐘，觀察并記錄實驗現(xiàn)象。待反應(yīng)完全后，啟動紫外分光光度計，先預(yù)熱20分鐘，然后設(shè)置以下參數(shù)：波長λ為517nm。測量各組吸光值，記下實驗數(shù)據(jù)。重復(fù)做三次實驗，最后求得清除率的平均值。按以下式子公式計算DPPH自由基清除率。DPPH自由基清除率%=[1-（A1-A2）/A0]×100%其中：A0——2mLDPPH溶液+1mL無水乙醇的吸光值A(chǔ)1——2mLDPPH溶液+1mL樣品溶液的吸光值A(chǔ)2——2mL無水乙醇+1mL樣品溶液的吸光值維生素C對照曲線的制作：用分析天平稱量一定量的維生素C粉末，按一定濃度梯度配制成2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL、8.0μg/mL、10.0μg/mL的溶液。按照以上測量樣品清除率的方法，可得維生素C對DPPH的清除率曲線。以濃度為橫坐標，清除率為縱坐標，制得維生素C對照曲線。2、水楊酸法測定黃酮對羥基自由基清除能力Fenton反應(yīng)式如下：H2O2+Fe2+=·OH+H2O+Fe3+。通過反應(yīng)式可得知Fenton反應(yīng)會產(chǎn)生羥基自由基，此時如果往溶液中加入水楊酸-乙醇試劑，在反應(yīng)體系中的水楊酸會“捕捉”羥基自由基，結(jié)合生成顯色物質(zhì)2,3-二羥基苯甲酸，該物質(zhì)在波長為510nm處有特殊的吸收，即最大吸收值。因此，如果反應(yīng)體系中存在羥基自由基，往其中加入具有“捕捉”羥基自由基的物質(zhì)，來清除羥基自由基，羥基自由基的生成量減少，顯色化合物的生成量也會相應(yīng)減少，在波長為510nm處的吸光值也會隨之減小。通過采用固定反應(yīng)時間法，在510nm處測量溶液的吸光度，以不加樣液為空白對照，探究不同地區(qū)百香果葉中有效成分對羥基自由基的清除作用。實驗溶劑的配制：9mmol/L乙醇-水楊酸溶液的配制：用電子分析天平準確稱量1.243g水楊酸粉末于燒杯中，加入50mL乙醇溶解，取一100mL容量瓶，將完全溶解的水楊酸-乙醇溶液倒進容量瓶中，用乙醇定容至100mL，接著取出10毫升于一大燒杯中，加入90mL乙醇，即稀釋10倍；9mmol/L硫酸亞鐵溶液的配制：用電子分析天平準確稱量2.502g硫酸亞鐵于燒杯中，加入50mL蒸餾水溶解，取一100mL容量瓶，將完全溶解的硫酸亞鐵溶液倒進容量瓶中，用蒸餾水定容至100mL，接著取出10毫升于一大燒杯中，加入90mL蒸餾水，即稀釋10倍。8.8mmol/L過氧化氫溶液的配制：取一燒杯，用電子分析天平準確稱量9.926g30%H2O2溶液于燒杯中，倒入100mL容量瓶中，然后用蒸餾水定容至100mL，接著取出1毫升于一大燒杯中，加入99mL蒸餾水，即稀釋100倍。取六支比色管，分別加入產(chǎn)自廣東、福建、廣西百香果葉水提液和醇提液各1mL，然后依次加入1mL9mmol/L硫酸亞鐵溶液、1mL9mmol/L乙醇-水楊酸試劑、接著加入適量蒸餾水，最后加入1mL8.8mmol/L過氧化氫溶液，然后輕輕晃動比色管使溶液混勻。另取六支比色管，分別加入產(chǎn)自廣東、福建、廣西百香果葉水提液和醇提液各1mL，然后依次加入1mL9mmol/L硫酸亞鐵溶液、1mL9mmol/L乙醇-水楊酸試劑、接著加入適量蒸餾水，然后輕輕晃動比色管使溶液混勻。再取一支比色管，依次加入1mL9mmol/L硫酸亞鐵溶液、1mL9mmol/L乙醇-水楊酸試劑、接著加入12mL蒸餾水，最后加入1mL8.8mmol/L過氧化氫溶液，然后輕輕晃動比色管使溶液混勻。最后再取一支比色管，加入15mL蒸餾水做空白對照。將所有比色管放入水浴鍋中，37℃水浴加熱15分鐘，啟動紫外分光光度計，預(yù)熱20分鐘，測量各組的吸光度值，將數(shù)據(jù)記錄下來。蘆丁溶液對羥基自由基的清除率也按上述方法可得。按上述方法，加入表2.4所示的各溶液，將實驗重復(fù)做三次，求取其平均值。羥自由基清除率(%)=[A0－(Ax－Ax0)/A0]×100A0為硫酸亞鐵溶液+水楊酸-乙醇試劑+蒸餾水+過氧化氫溶液的吸光度；Ax0為提取液+硫酸亞鐵溶液+水楊酸-乙醇試劑+蒸餾水的吸光度；Ax為提取液+硫酸亞鐵溶液+水楊酸-乙醇試劑+過氧化氫溶液的吸光度。表2.4清除羥自由基實驗溶液組成試劑組成/mLA0AxAx0FeSO4111水楊酸111樣品/蘆丁適量適量去離子水12適量適量H2O211注：反應(yīng)溶液的總體積為15mL3、總抗氧化性測定鉬酸銨法之所以能測定抗氧化性，是因為當(dāng)反應(yīng)體系中存在抗氧化活性物質(zhì)時，Mo6＋被還原為Mo5＋，且Mo5＋的磷酸鹽在酸性條件下呈綠色。通過觀察溶液顏色以及對比各反應(yīng)液間的吸光度值，探究不同樣品的抗氧化效果。實驗溶劑的配制：鉬酸銨工作液的配制：用電子分析天平分別準確稱取13.34mL濃硫酸、4.26g磷酸鈉、1.98g四水合鉬酸銨于燒杯中，加入400.0mL蒸餾水，用玻璃棒攪拌充分溶解。因為濃硫酸揮發(fā)性很強，注意配制工作液的整個過程要在通風(fēng)櫥中操作。按照一定的濃度梯度，將不同地區(qū)的百香果葉提取溶液配制成2.0mg/mL、4.0mg/mL、6.0mg/mL、8.0mg/mL、10.0mg/mL的溶液，取30支試管，按一定濃度梯度加入不同質(zhì)量濃度的百香果葉黃酮提取液各0.3mL，然后加入3.0mL鉬酸銨工作液，將所有試管放于水浴鍋中95℃水浴中加熱90分鐘后取出，冷卻至室溫。待溶液冷卻后，啟動用紫外分光光度計，預(yù)熱20分鐘，設(shè)置以下參數(shù)：波長λ為695nm。然后以鉬酸銨工作液作空白，在695nm波長處測定反應(yīng)液的吸光度，記下實驗數(shù)據(jù)。將實驗重復(fù)三次，求得吸光度平均值。用抗壞血酸做標準曲線：用電子分析天平稱量一定量的抗壞血酸粉末，按一定濃度梯度配制成50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、250μg/mL的溶液。取5支試管，按一定濃度梯度加入不同質(zhì)量濃度的抗壞血酸溶液各0.3mL，然后加入3.0mL鉬酸銨工作液，將所有試管放于水浴鍋中95℃水浴中加熱90分鐘后取出，冷卻至室溫。待溶液冷卻后，啟動用紫外分光光度計，預(yù)熱20分鐘，設(shè)置以下參數(shù)：波長λ為695nm。然后以鉬酸銨工作液作空白，在695nm波長處測定反應(yīng)液的吸光度，記下實驗數(shù)據(jù)。將實驗重復(fù)三次，求得吸光度平均值。

3結(jié)果與分析3.1定性鑒定結(jié)果與分析使用試管預(yù)試法鑒定百香果葉中的成分，根據(jù)表3.2的結(jié)果可以初步推斷，廣東、福建、廣西三個地區(qū)的百香果葉中含有氨基酸、蒽醌、有機酸、酚類、糖類、皂苷、鞣質(zhì)、生物堿、黃酮類化合物，不含有甾體、強心苷、香豆素。對百香果葉有效成分黃酮類化合物進行專項鑒定，根據(jù)表3.1的結(jié)果可以初步推斷，百香果葉提取物中的黃酮類化合物的種類可能包括黃酮、黃酮醇、異黃酮類化合物。以上結(jié)果證明，百香果葉的有效成分豐富，具有很高的營養(yǎng)價值，易于采集，作為天然抗氧化產(chǎn)物具有很高的研究和開發(fā)價值。黃酮類化合物專項鑒定結(jié)果如下：表3.1黃酮類化合物專項鑒定結(jié)果鑒定方法現(xiàn)象結(jié)果濃硫酸反應(yīng)呈黃色可能含有黃酮類、異黃酮類、黃酮醇類化合物等鹽酸-鎂粉實驗呈橙紅色可能含有黃酮醇類、二氫黃酮醇類、二氫黃酮類化合物、氫氧化鈉溶液反應(yīng)呈黃色可能含有黃酮類、異黃酮類、黃酮醇類化合物等硼氫化鈉實驗現(xiàn)象不明顯不含二氫黃酮類化合物采用試管預(yù)試法定性分析結(jié)果表如下：表3.2定性鑒定結(jié)果鑒定成分試管預(yù)實驗現(xiàn)象結(jié)果有機酸PH試紙弱酸性+溴酚藍試劑黃色斑點+皂苷類泡沫實驗大量泡沫，放置5min不消失+蒽醌類硼酸溶液現(xiàn)象不明顯-氫氧化鉀溶液呈黃橙色+堿性試驗呈紅色，加過氧化氫不褪色，酸化，紅色褪去+酚類三氯化鐵溶液呈墨綠色+香草醛-鹽酸試劑呈紅色斑點+甾體香草醛-硫酸試劑呈紅色+生物堿碘-碘化鉀試劑有棕紅色沉淀產(chǎn)生，最多+苦味酸試劑有淡黃色沉淀產(chǎn)生，較少+鞣酸試劑有淡褐色沉淀產(chǎn)生，較多+強心苷亞硝基鐵氰化鈉試劑不呈紅色，不褪色-堿性苦味酸試劑不呈紅色，溶液不分層-香豆素三氯化鐵不呈藍綠色-氨基酸、蛋白質(zhì)雙縮脲反應(yīng)呈紫紅色+茚三酮反應(yīng)呈紫藍色+糖類斐林試劑產(chǎn)生磚紅色沉淀+三氯化鐵-冰醋酸試劑溶液分層，上層呈藍色，下層呈紅色，兩液交界面呈紅色環(huán)+鞣質(zhì)氯化鈉-明膠試劑產(chǎn)生沉淀++表示陽性反應(yīng)，-表示陰性反應(yīng)3.2三種植物黃酮含量圖3.1不同樣品總黃酮含量其中，序號1-3分別代表廣東、福建、廣西醇提液；序號4-6分別代表廣東、福建、廣西水提液。根據(jù)表3.2可得到三個不同地區(qū)百香果葉中的總黃酮含量，根據(jù)圖3.2可直觀表達出不同地區(qū)百香果葉總黃酮含量的高低。其中廣東地區(qū)百香果葉醇提液和水提液的總黃酮含量分別是7.901mg/g和5.681mg/g，福建地區(qū)百香果葉醇提液和水提液的總黃酮含量分別是8.281mg/g和6.114mg/g，廣東地區(qū)百香果葉醇提液和水提液的總黃酮含量分別是15.189mg/g和11.803mg/g，故不同地區(qū)的百香果葉的總黃酮含量不同，且不同提取溶劑的總黃酮含量也不同。由此可見，無論是以水或以乙醇作為提取溶劑，廣西地區(qū)的百香果葉總黃酮含量都比其他的兩個地區(qū)的總黃酮含量多。3.3不同方法對提取液中總黃酮含量的影響3.3.1DPPH法測定黃酮對自由基清除能力配制質(zhì)量濃度為2.0mg/mL、4.0mg/mL、6.0mg/mL、8.0mg/mL、10.0mg/mL不同地區(qū)的百香果葉提取溶液，加入DPPH溶液，以維生素C曲線作對照，測定各組吸光度值，計算清除率，結(jié)果如圖3.1。從圖3.2可看出，產(chǎn)自廣東、福建、廣西的百香果葉中提取的黃酮類化合物都對自由基有清除作用。隨著濃度的提高，各個地區(qū)的百香果葉提取液中的黃酮化合物對自由基的清除能力逐漸提高，提取物濃度與清除率成正比。其中，產(chǎn)自廣西的百香果葉醇提液中的黃酮類化合物對自由基的清除作用最好，均在60%以上，最高達到96.19%。圖3.2DPPH對自由基的清除率從左至右依次是產(chǎn)自廣東、福建、廣西百香果葉水提液、醇提液3.3.2水楊酸法測定黃酮對羥基自由基清除能力測定黃酮對羥自由基的清除能力的實驗結(jié)果如下：表3.2對羥基自由基清除能力的實驗數(shù)據(jù)Tab.3.2ExperimentaldataofThe

Capability

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cleartheHydroxy

radical圖3.2不同樣品對羥基自由基清除能力其中，序號1-3分別代表廣東、福建、廣西醇提液；序號4-6分別代表廣東、福建、廣西水提液；序號7表示蘆丁溶液。實驗結(jié)果表明，三個不同地區(qū)不同提取液中黃酮類化合物對羥基自由基都有一定的清除能力，但它們的對羥自由基的清除能力都較蘆丁的對羥自由基的清除能力弱些，且不同地區(qū)不同提取液提取的黃酮類化合物對羥自由基的清除能力有所不同。通過比較清除率大小，可以得出，廣西水提液中的黃酮類化合物對羥自由基的清除率最高，可達93.11%，而福建醇提液中的黃酮類化合物對羥自由基的清除率最低，為22%。3.3.3總抗氧化性測定配制質(zhì)量濃度為2.0mg/mL、4.0mg/mL、6.0mg/mL、8.0mg/mL、10.0mg/mL不同地區(qū)的百香果葉提取溶液，加入鉬酸銨工作液，以維生素C曲線作對照，比較各組吸光度值，根據(jù)圖3.3可得出，產(chǎn)自廣西的百香果葉醇提液的總抗氧化效果最好。圖3.3總抗氧化吸光值4結(jié)論（1）本實驗采用水提取法、醇提取法和酸性醇液提取法對不同地區(qū)百香果葉的有效成分進行提取，并用顯色反應(yīng)對其進行全面的定性鑒定，確定百香果葉有效成分的具體種類為氨基酸、蒽醌、有機酸、酚類、糖類、皂苷、鞣質(zhì)、生物堿、黃酮類化合物。通過黃酮類化合物進行專項鑒定，確定黃酮類化合物的具體種類可能為黃酮、黃酮醇、異黃酮類化合物。說明百香果葉的有效成分豐富，作為天然抗氧化產(chǎn)物具有很高的研究和開發(fā)價值。（2）采用超聲波輔助提取法，提取廣東、福建、廣西三個地區(qū)中百香果葉的黃酮類化合物。制作蘆丁對照曲線，采用紫外分光光度法測定提取物中的總黃酮含量。其中廣東地區(qū)百香果葉醇提液和水提液的總黃酮含量分別是7.901mg/g和5.681mg/g，福建地區(qū)百香果葉醇提液和水提液的總黃酮含量分別是8.281mg/g和6.114mg/g，廣東地區(qū)百香果葉醇提液和水提液的總黃酮含量分別是15.189mg/g和11.803mg/g，故不同地區(qū)的百香果葉的總黃酮含量不同，且不同提取溶劑的總黃酮含量也不同。（3）采用DPPH法、水楊酸法以及總抗氧化法三種方法測定不同地區(qū)百香果葉的抗氧化性，可得出三個不同地區(qū)不同提取液中黃酮類化合物對自由基都有一定的清除能力，但它們的對自由基的清除能力都較蘆丁和抗壞血酸對羥自由基的清除能力弱些，且不同地區(qū)不同提取液提取的黃酮類化合物對羥自由基的清除能力有所不同。但從三個抗氧化方法中可以看出，不同地區(qū)百香果葉中所提取的黃酮類化合物都有一定的抗氧化作用，從而判斷其能有效的清除氧自由基，阻止細胞老化以及有效的延緩衰老；百香果葉中提取的黃酮類化合物是一種天然的有機化合物，以其純天然、無毒副作用的優(yōu)點，能夠用來代替有副作用的人工合成的功能因子，所以百香果葉中提取的黃酮類化合物具有廣泛的研究前景，作為提取黃酮類化合物的新來源存在一定的可能性。參考文獻［1］丁利君，蘇桂良．微波輔助提取蜈蚣草黃酮及其抗氧化研究［J］.食品與生物技術(shù)學(xué)報，2009，5:623．［2]徐潔昕.黃山貢菊有效成分的定性分析［J］.資源開發(fā)與市場，2009，25(7):594．?。?］梁坤．刺玫薔薇莖中黃酮苷元提取純化及抗氧化活性的研究［D］．哈爾濱:東北林業(yè)大學(xué)碩士論文，2009:．［4]中國科學(xué)院上海藥物研究所植物化學(xué)研究室編譯，黃酮體化合物鑒定手冊［M］．北京:科學(xué)出版社，1981:389．［5］周作渝.對食用合成色素標準品的探討[J].食品科學(xué),1992,13(3):57-58.［6]岳靜,方宏筠,黃紅光.紫甘薯紅色素的研究進展[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué),2003(5):22-25.[7］肖軍霞,黃國清,仇宏偉,等.紅樹莓花色苷的提取及抗氧化活性研究[J]食品科學(xué),2011,32(8):15-18.[8］王蕾,符玲,敬林林,等.月季花抗氧化活性成分研究[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報,2012,33(11):2457-2461[9］賈長虹,常麗新,趙京,等.月季果中黃酮的提取及其對自由基的清除作用的研究[J].食品工業(yè)科技,2010,31(1):168-170［10］梁坤．刺玫薔薇莖中黃酮苷元提取純化及抗氧化活