病理科細胞學檢查規(guī)范細則演講人：日期:目錄CONTENTS樣本采集與接收1樣本處理流程2染色技術規(guī)范3顯微鏡檢查步驟4診斷報告規(guī)范5質量控制要求6樣本采集與接收Part.01標本類型與采集方法脫落細胞標本通過自然脫落或機械刮取獲取，如痰液、尿液、陰道分泌物等，需使用無菌容器收集，避免污染和細胞降解。適用于體表或深部腫物，采用細針穿刺抽吸技術，確保穿刺部位消毒，避免出血和感染，樣本需立即涂片固定。如胸腹水、心包積液等，需無菌穿刺抽取，加入抗凝劑防止凝固，并盡快送檢以保證細胞活性。如支氣管刷檢、宮頸刮片等，操作時需輕柔避免損傷組織，樣本應均勻涂布于載玻片并立即固定。細針穿刺標本漿膜腔積液標本刷檢或刮片標本固定液選擇根據(jù)不同標本類型選用95%乙醇、甲醛或專用細胞保存液，確保細胞形態(tài)完整性和抗原穩(wěn)定性。運輸時效溫度控制包裝規(guī)范學生社團活動總結內頁標題液體樣本需冷藏（2-8℃）運輸，避免冷凍；涂片標本需干燥后固定，防止潮濕導致細胞溶解。樣本采集后應在規(guī)定時間內送檢，延遲超過時限需注明原因，并評估樣本是否仍符合檢測要求。使用防漏、防震的專用容器，標注“生物危害”標識，并附完整的申請單及樣本信息標簽。信息完整性核查核對患者姓名、性別、唯一標識號、標本類型及采集部位，確保與申請單一致，缺失信息需及時聯(lián)系補全。雙人核對制度接收人員與送檢人員共同確認樣本信息，簽署交接記錄，避免人為差錯導致后續(xù)檢測錯誤。樣本質量評估檢查標本量是否充足、有無凝固或腐敗，記錄異常情況（如溶血、滲漏），不合格樣本需拒收并說明原因。電子系統(tǒng)錄入將樣本信息實時錄入實驗室信息系統(tǒng)（LIS），生成唯一條碼，便于追蹤檢測流程和結果反饋。接收登記與信息核對樣本處理流程Part.02離心參數(shù)設定采用低速離心（800-1000rpm）維持5分鐘，避免細胞機械損傷，確保細胞完整性。特殊樣本需根據(jù)粘稠度調整轉速和時間參數(shù)。離心管選擇標準使用無菌錐底離心管，容量需與樣本體積匹配（預留1/3空間），管壁需標注患者信息條形碼防止混淆。細胞沉淀評估離心后觀察沉淀層厚度，合格標準為形成均勻致密細胞層。若出現(xiàn)分層不清需追加梯度離心或酶消化處理。質量控制記錄每批次離心需記錄轉速、時間、溫度及操作者信息，納入實驗室LIS系統(tǒng)追溯管理。離心與濃縮技術規(guī)范涂片厚度控制使用楔形推片法制備，單層細胞區(qū)域占比應＞70%，邊緣保留2mm空白帶防止細胞溢出載玻片。玻片標識規(guī)范防干燥處理樣本涂布后3秒內浸入固定液，延遲超過15秒將導致細胞退變。高粘液樣本需預先進行乙酰半胱氨酸處理。異常樣本處理涂片制備標準步驟采用耐有機溶劑標簽機打印患者ID及樣本編號，標注位置統(tǒng)一在玻片磨砂端，避免遮蓋觀察區(qū)域。血性樣本需先進行紅細胞裂解，粘液樣本采用細胞離心涂片機（CytoSpin）制備特殊涂片。固定方法與時效控制使用95%乙醇與冰醋酸（19:1）混合液，每100ml添加0.5g碳酸鈣中和酸性環(huán)境，pH值維持在7.0-7.4范圍。酒精固定液配方固定環(huán)境溫度控制在20-25℃，濕度＜60%。冷藏固定需使用預冷至4℃的專用固定液并記錄溫度變化曲線。溫度監(jiān)控要求常規(guī)樣本固定15-30分鐘，富含蛋白質樣本延長至45分鐘。液基細胞學樣本需專用甲醇基固定液固定不少于12小時。固定時間梯度010302出現(xiàn)固定液渾濁、沉淀或pH值偏移＞0.5時立即更換新液，已固定樣本需重新處理并備注質量事件報告。固定失效判定04染色技術規(guī)范Part.032014巴氏染色操作要點04010203固定步驟標準化樣本需在95%乙醇中固定15分鐘以上，確保細胞結構完整，避免染色過程中細胞脫落或變形。固定后需充分沖洗，避免殘留乙醇影響染色效果。染色液配比與時間控制蘇木精染色時間嚴格控制在5-8分鐘，分化液（0.5%鹽酸乙醇）作用時間不超過10秒，藍化液（弱堿性溶液）處理30秒至1分鐘，確保核質對比清晰。梯度脫水與透明化依次通過70%、80%、95%和100%乙醇脫水，每級停留1-2分鐘；二甲苯透明處理需兩次，每次3分鐘，確保封片時光學透明度達標。質量控制與復檢每批次染色需設置陽性對照樣本，染色后需在顯微鏡下復檢細胞核著色深淺、胞漿透明度及背景清潔度，不合格者需重新制片。胸腹水、尿液等體液標本需在30分鐘內完成染色（如瑞氏-吉姆薩法），便于快速鑒別炎癥、腫瘤細胞或微生物感染。體液細胞學篩查資源有限環(huán)境下可采用改良巴氏染色（縮短至10分鐘），滿足宮頸刮片等基礎篩查需求，但需注明染色方法局限性?；鶎俞t(yī)療機構初篩01020304適用于冰凍切片或穿刺標本的即時染色，5分鐘內完成染色流程（如Diff-Quik法），幫助術中醫(yī)師快速判斷病變性質。術中快速病理診斷快速染色可用于教學示教或科研預實驗，縮短樣本處理周期，但正式研究仍需標準染色流程以保證數(shù)據(jù)可靠性。教學與科研演示快速染色適用場景特殊染色選擇標準病原體鑒別需求抗酸染色（如Ziehl-Neelsen法）用于結核分枝桿菌檢測，六胺銀染色用于真菌（如肺孢子菌）形態(tài)學確認，需根據(jù)臨床疑似病原體類型選擇。質量控制要求特殊染色試劑需定期驗證有效性（如陽性對照片測試），操作人員需接受專項培訓，報告需注明染色方法及結果解讀限制。腫瘤標志物定位黏液卡紅染色鑒別腺癌黏液分泌，PAS染色顯示糖原沉積（如腎透明細胞癌），需結合HE染色結果針對性補充。纖維成分分析Masson三色染色區(qū)分膠原纖維（藍色）與肌纖維（紅色），VG染色顯示彈力纖維，適用于肝硬化、血管病變等診斷。顯微鏡檢查步驟Part.04初篩與低倍鏡觀察樣本整體評估使用低倍鏡（4×或10×物鏡）快速掃描樣本全貌，觀察細胞分布密度、背景清潔度及是否存在明顯異常細胞團塊，初步判斷樣本質量是否符合診斷要求。030201結構特征識別重點觀察細胞排列模式和組織結構特征，如腺泡狀、片狀或單個散在分布，識別是否存在組織結構破壞或極性紊亂等病理學改變。背景成分分析評估涂片背景中是否存在炎性細胞、紅細胞、壞死碎片或黏液等成分，這些信息對判斷病變性質具有重要參考價值。

核質比精確測量切換至高倍鏡（40×物鏡）詳細評估單個細胞的核質比例，惡性腫瘤細胞通常表現(xiàn)為核質比顯著增高，核占據(jù)胞漿大部分空間。

核異型性評估系統(tǒng)觀察細胞核的形態(tài)學特征，包括核大小不均、核膜不規(guī)則、核染色質增粗或分布異常，以及核仁數(shù)目和大小變化等惡性指征。

胞漿特征分析記錄胞漿的染色特性（嗜堿性/嗜酸性）、分泌空泡、顆粒分布等特征，某些特殊胞漿改變對特定腫瘤類型具有診斷提示意義。高倍鏡細胞形態(tài)分析數(shù)字化定位標記根據(jù)細胞異型程度采用標準化分級系統(tǒng)（如Bethesda系統(tǒng)）進行注釋，詳細記錄輕度、中度或重度非典型增生的具體形態(tài)學依據(jù)。分級注釋系統(tǒng)多參數(shù)記錄表填寫完整填寫包括細胞數(shù)量、分布模式、核特征、背景改變等在內的多維參數(shù)記錄表，為后續(xù)診斷提供全面客觀的形態(tài)學數(shù)據(jù)支持。使用顯微鏡數(shù)碼系統(tǒng)對可疑區(qū)域進行坐標標記和圖像采集，確保異常細胞能被準確定位和復查，建立完整的影像學檔案。異常細胞標記與記錄診斷報告規(guī)范Part.05報告分級標準（TBS系統(tǒng)）描述細胞核增大、輕度深染及核周空暈等特征，提示HPV感染相關改變，需注明是否合并其他病理變化。明確區(qū)分意義未明的不典型鱗狀細胞與高度鱗狀上皮內病變的不典型細胞，需結合臨床病史及HPV檢測結果綜合判斷。強調細胞核漿比失調、染色質增粗等高級別病變特征，需與浸潤癌鑒別并建議進一步活檢確診。明確惡性細胞學特征，包括核異型性、病理性核分裂象及腫瘤性壞死等，需標注細胞來源與分化程度。非典型鱗狀細胞（ASC-US/ASC-H）低度鱗狀上皮內病變（LSIL）高度鱗狀上皮內病變（HSIL）鱗狀細胞癌（SCC）與腺癌關鍵描述術語統(tǒng)一細胞數(shù)量評估采用"不足/滿意/豐富"三級描述，明確最低細胞量標準（如宮頸涂片需含≥5000個鱗狀細胞）。炎癥反應分級定義"輕度/中度/重度"炎癥標準，關聯(lián)微生物感染或非特異性反應，需描述炎癥細胞類型及分布特點。修復性改變特征規(guī)范核仁明顯、細胞極性保持等良性修復術語，避免與腫瘤性改變混淆。微生物學報告統(tǒng)一真菌、細菌、病毒感染的細胞學特征描述，如念珠菌假菌絲、線索細胞或巨細胞病毒包涵體等。復核與簽發(fā)流程完成初步診斷并標記疑難病例，需記錄細胞形態(tài)學特征與鑒別診斷要點，提交高年資醫(yī)師復核。初檢醫(yī)師責任針對HSIL及以上病變必須由兩名副主任以上醫(yī)師獨立閱片，分歧病例需提交科室會診討論。建立惡性病變及特殊感染的快速報告通道，要求檢出后立即通知臨床并書面記錄通知詳情。雙盲復核制度最終報告需包含檢測方法、診斷結論、臨床建議三部分，電子簽名與紙質報告同步存檔。報告簽發(fā)規(guī)范01020403危急值處理流程質量控制要求Part.06室內質控執(zhí)行要點樣本處理標準化嚴格遵循樣本采集、固定、運輸及保存的標準化流程，確保細胞形態(tài)完整性，避免因操作不當導致的假陰性或假陽性結果。染色質量監(jiān)控定期檢查染色試劑的效期與濃度，采用陽性對照樣本評估染色均勻性，確保巴氏染色、HE染色等關鍵步驟的顯色清晰度和細胞結構辨識度。設備校準與維護每日記錄離心機、顯微鏡等關鍵設備的運行參數(shù)，定期進行校準與性能驗證，避免因設備偏差影響檢測結果準確性。結果復核制度建立分級審核機制，初篩結果需由高年資病理醫(yī)師復核，疑難病例提交多學科會診，降低誤診率。選擇通過權威認證的室間質評機構（如CAP、ISO認證項目），確保比對樣本的多樣性和臨床相關性，涵蓋常見及罕見病例類型。制定年度室間比對參與計劃，每季度至少完成一次全流程盲測，涵蓋樣本處理、診斷及報告環(huán)節(jié)，及時分析偏差原因并整改。建立與其他實驗室的數(shù)據(jù)共享平臺，對比異常結果進行技術溯源，優(yōu)化操作流程或更新診斷標準，提升整體檢測一致性。將室間質評結果納入科室績效考核，針對薄弱環(huán)節(jié)開展專項培訓或技術升級，形成持續(xù)改進的閉環(huán)管理。室間比對參與機制機構資質篩選周期性評估計劃數(shù)據(jù)共享與改進結果反饋閉環(huán)管理人員持續(xù)培訓標準分層培訓體系根據(jù)職稱與經驗劃分初級、中級、高級培訓模塊，初級人員側重基礎操作規(guī)范，中高級人員強化疑難病例分析與新技術應