ICS67.020.10

CCSX40

CFNA

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/CFNA6502—2024

胡椒及其制品中胡椒堿的含量測(cè)定

Determinationofpiperinecontentinpepper（PipernigrumL.）anditspreparation

（征求意見稿）

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

中國(guó)食品土畜進(jìn)出口商會(huì)發(fā)布

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胡椒及其制品中胡椒堿的含量測(cè)定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于胡椒及其制品中胡椒堿的含量測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T12729.3香辛料和調(diào)味品分析用粉末試樣的制備

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4方法原理

用紫外分光光度法測(cè)定胡椒及其制品中胡椒堿的含量。使用乙醇甲醇混合溶液提取樣品中的胡椒堿，

在342nm-345nm之間的最大吸波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度值。

5試劑

95%乙醇，分析純。

甲醇，分析純。

乙醇-甲醇混合液：5mL甲醇（5.2）加入100mL乙醇（5.1）中，混勻。

胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：直接購(gòu)買市售有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

5.4.1胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取100.00mg胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)品，置于100mL容量瓶中，加入適量乙醇-

甲醇混合液（5.3）溶解后，用乙醇-甲醇混合液（5.3）定容至刻度，搖勻，備用。

5.4.2胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確移取胡椒堿儲(chǔ)備液（5.4.1）1mL，置于100mL容量瓶中，用乙醇-甲

醇混合液（5.3）稀釋至刻度，搖勻，該溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。

6儀器

分析天平：精確度為0.0001g。

紫外分光光度計(jì)：波長(zhǎng)200nm-400nm,配備1cm石英比色皿。

實(shí)驗(yàn)室常用玻璃器皿。

7分析步驟

黑胡椒和白胡椒前處理

7.1.1制樣

按GB/T12729.3規(guī)定執(zhí)行。

7.1.2提取

準(zhǔn)確稱取混勻的樣品粉末(過(guò)孔徑250μm篩)0.5g，置于125mL錐形瓶中，加入70mL乙醇-甲醇混合

液（5.3），水浴回流1h，冷卻至室溫，過(guò)濾至200mL容量瓶中，濾渣用乙醇-甲醇混合液（5.3）洗滌，

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合并洗滌液于容量瓶中，用乙醇-甲醇混合液（5.3）定容至刻度，搖勻。準(zhǔn)確移取上述溶液5mL置于100

mL容量瓶中，用乙醇-甲醇混合液（5.3）定容至刻度，搖勻，15min.內(nèi)上機(jī)測(cè)定吸光度值。

胡椒油樹脂的前處理

準(zhǔn)確稱取1g充分混勻的樣品置于100mL棕色容量瓶中，用乙醇-甲醇混合液（5.3）定容至刻度，搖

勻，備用。準(zhǔn)確移取10mL上述樣品，置于100mL容量瓶中，用乙醇-甲醇混合液（5.3）定容至刻度，搖

勻，再準(zhǔn)確移取1mL，置于100mL容量瓶中，用乙醇-甲醇混合液（5.3）定容至刻度，搖勻，15min.內(nèi)

上機(jī)測(cè)定吸光度值。

測(cè)定

7.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

準(zhǔn)確移取胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)品中間液（5.4.2）0.00ml、1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml、

6.00mL，分別置于10mL容量瓶中，用乙醇-甲醇混合液（5.3）稀釋至刻度，搖勻，標(biāo)準(zhǔn)中間液濃度分

別為0.00μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、3.00μg/mL、4.00μg/mL、5.00μg/mL、6.00μg/mL。使用

1cm石英比色皿，以乙醇-甲醇混合液（5.3）調(diào)零，以乙醇-甲醇混合液（5.3）作參比，在343nm的最

大吸收波長(zhǎng)下，測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)品工作液的吸光度值，記為A1、A2、A3、A4、A5、A6，根據(jù)公式（1）換

算成1μg/mL時(shí)胡椒堿的平均吸光度值A(chǔ)a。

7.3.2試樣測(cè)定

使用1cm石英比色皿，以乙醇-甲醇混合液（5.3）調(diào)零，用乙醇-甲醇混合液（5.3）作參比，在343

nm的最大吸收波長(zhǎng)下，測(cè)定試樣（7.1.2）、試樣（7.2）的吸光度值。

8結(jié)果計(jì)算與表示

結(jié)果計(jì)算

1μg/mL時(shí)胡椒堿的平均吸光度值A(chǔ)a按照公式（1）計(jì)算：

A1A2A2A4A5A6

Aa=(＋＋＋＋＋)÷6··················································(1)

123456

胡椒堿含量%按照公式（2）計(jì)算：

???

胡椒堿%=×6×100·························································(2)

????×10

式中：As—樣品溶液吸光度值；

Aa—1μg/ml時(shí)胡椒堿溶液的平均吸光度值；

f—稀釋因子；

Ws—樣品質(zhì)量，g。

結(jié)果表示

計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

9精密度

同一樣品在相同條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于8%。

10特別提示

本方法測(cè)定的包括胡椒堿異構(gòu)體和相關(guān)化合物（如有）的吸光度值，包括胡椒堿和次胡椒酰胺，

它們?cè)谒鶞y(cè)波長(zhǎng)下具有吸光度，但不像胡椒堿那樣辛辣。分析過(guò)程中使用鋁箔或黑紙將燒瓶包裹起來(lái)，

并盡快做測(cè)定，能減少這類化合物的形成，并防止樣品刺激性物質(zhì)的增加給測(cè)定結(jié)果造成影響。

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該方法并不要求在每次分析時(shí)都使用胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)品。因此，相應(yīng)的穩(wěn)定性至關(guān)重要。如果采取任

何可能改變儀器響應(yīng)的措施，必須用新標(biāo)準(zhǔn)重新校準(zhǔn)。包括：預(yù)防性維護(hù)