CCSB46團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)Determinationofchlorateandperchlorateinruminantfeedsandfo—Liquidchromatography-Tandemmassspectro陜西省飼料協(xié)會發(fā)布T/SXSL18-2025本文件按照GB/T1.1–2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由陜西省飼料協(xié)會提出并歸口。本文件起草單位：陜西秦云農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測股份有限公司、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所、內(nèi)蒙古英馳科技服務(wù)有限公司、陜西省農(nóng)業(yè)檢驗(yàn)檢測中心、黑龍江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站、青島金久生物技術(shù)有限公司、陜西鑫誠大唐生物制藥有限公司、渭南市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測中心、內(nèi)蒙古牧泉元興飼料有限責(zé)任公司。本文件主要起草人：賀習(xí)文、谷旭、顧洪濤、李慧、劉嫵妍、李智文、孫曉智、于福利、高云峰、臧明磊、汪軍明、趙彩會、洪偉、張穎、許軍紅、朱弘、孫凱佳、吳曉紅、白青、白雪。本文件為首次發(fā)布。本文件由陜西秦云農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測股份有限公司負(fù)責(zé)解釋。單位：陜西秦云農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測股份有限公司。單位地址：陜西省渭南市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)，永興大道與建業(yè)路丁字口西南角。電話編：714000T/SXSL18-2025反芻動物用飼料飼草中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本文件規(guī)定了反芻動物用飼料飼草中氯酸鹽和高氯酸鹽的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本文件適用于反芻動物用飼料飼草（青貯飼料、青綠飼料、精料補(bǔ)充料、濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料）中氯酸鹽和高氯酸鹽含量的測定。本文件氯酸鹽的檢出限為2.0μg/kg，定量限為5.0μg/kg；高氯酸鹽的檢出限為1.0μg/kg，定量限為2.5μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T20195動物飼料試樣的制備3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理試樣中的氯酸鹽和高氯酸鹽用甲酸甲醇溶液提取，經(jīng)固相萃取柱凈化后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線校準(zhǔn)，內(nèi)標(biāo)法定量。5試劑或材料除非另有規(guī)定，本文件所有試劑均為色譜級。5.1水：GB/T6682，一級。5.5甲酸銨：≥99.9%。5.6微孔濾膜：0.22μm，有機(jī)系。5.7微孔濾膜：0.22μm，水系。5.80.1%甲酸甲醇溶液：移取1mL甲酸于1000mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，充分混勻。5.920mmol/L甲酸銨溶液：準(zhǔn)確稱取1.26g甲酸銨（5.5）于1000mL容量瓶中，加入適量水溶解2T/SXSL18-2025后定容至刻度，充分混勻，經(jīng)0.22μm濾膜（5.7）過濾后備用。5.10氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1mg/mL以氯酸根（ClO3-）計(jì)，CAS:7775-09-9，購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。5.11高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1mg/mL以高氯酸根（ClO4-）計(jì)，CAS:7601-89-0，購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶5.12氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)貯備液（1mg/mL以氯酸根-18O3（ClO3-18O3）計(jì)，CAS:14866-68-3，購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。5.13高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)貯備液（1mg/mL以高氯酸根-18O4（ClO4-18O4）計(jì)，CAS:871943-52-1，購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。5.14混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液：分別準(zhǔn)確移取氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液（5.8）2mL、高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)貯備液（5.9）1mL于同一10mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，制成氯酸鹽、高氯酸鹽濃度分別為200.0μg/mL、100.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，2℃~8℃保存，有效期為3個(gè)月。5.15混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（5.12）1.0mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，制成氯酸鹽、高氯酸鹽濃度分別為2.0μg/mL、1.0μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，2℃~8℃保存，有效期為1個(gè)月。5.16混合同位素內(nèi)標(biāo)中間溶液：分別準(zhǔn)確移取氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)貯備液（5.10）2mL、高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)貯備液（5.11）1mL于同一10mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，制成氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)、高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)濃度分別為200.0μg/mL、100.0μg/mL的混合同位素內(nèi)標(biāo)中間溶液，2℃~8℃保存，有效期為3個(gè)月。5.17混合同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液：準(zhǔn)確移取混合同位素內(nèi)標(biāo)中間溶液（5.14）1.0mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，制成氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)、高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)濃度分別為2.0μg/mL、1.0μg/mL的混合同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液，2℃~8℃保存，有效期為1個(gè)月。5.18混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（5.13）5μL、10μL、50μL、100μL、200μL及混合同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液（5.15）50μL于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋定容，配制成氯酸鹽濃度為1.0ng/mL、2.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、40.0ng/mL，高氯酸鹽濃度為0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL，氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)濃度為10.0ng/mL，高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)濃度為5.0ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，臨用現(xiàn)配。5.19HLB固相萃取小柱（填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物規(guī)格為200mg/6mL，或性能相當(dāng)者，臨用前用5mL甲醇活化。5.20GCB固相萃取小柱（填料為石墨炭黑）：規(guī)格為200mg/6mL，或性能相當(dāng)者，臨用前用5mL甲醇活化。6儀器設(shè)備6.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（配有電噴霧電離源）。6.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。6.3渦旋混合器。6.4振蕩器。6.5離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥6000r/min。6.6固相萃取裝置。6.7容量瓶：容量為10mL、100mL和1000mL。7樣品T/SXSL18-20253按照GB/T20195的規(guī)定制備試樣。選取與待測樣品類型相同，均勻一致，且在待測物保留時(shí)間處儀器響應(yīng)面積小于方法定量限30%的飼料樣品，作為空白樣品。8試驗(yàn)步驟8.1提取取空白樣品同步試驗(yàn)。稱取試樣2g（精確至0.0001g）于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入50μL混合同位素內(nèi)標(biāo)工作溶液（5.15混勻；再準(zhǔn)確加入0.1%甲酸甲醇溶液10mL（5.6渦旋1min，振蕩提取20min，于6000r/min離心3min，上清液轉(zhuǎn)入另一支潔凈的離心管中，為待凈化液。8.2凈化8.2.1青貯飼料將5mL待凈化液注入GCB固相萃取小柱（5.20）中，使用注射器活塞加壓，流速不超過1mL/min，棄去約1mL初濾液，續(xù)濾液流入HLB固相萃取小柱（5.19）中，使用注射器活塞加壓，流速不超過1mL/min，棄去約1mL初濾液，收集續(xù)濾液，過膜（5.6）后待測。當(dāng)試樣濃度超出線性范圍后需重新測定。8.2.2精料補(bǔ)充料、濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料將5mL待凈化液注入HLB固相萃取小柱（5.19）中，使用注射器活塞加壓，流速不超過1mL/min，棄去約1mL初濾液，收集續(xù)濾液，過膜（5.6）后待測。當(dāng)試樣濃度超出線性范圍后需重新測定。8.3測定8.3.1液相色譜參考條件a）色譜柱：AcclaimTMTrinityTMP1復(fù)合離子交換柱（100×2.1mm，3μm或性能相當(dāng)者。b）流動相：A相：20mmol/L甲酸銨溶液（5.9B相：乙腈，洗脫條件見表1。c）流速：0.5mL/min。d）柱溫：35℃。e）進(jìn)樣量：10μL。表1梯度洗脫條件時(shí)間（min）0.03.0907.0907.1T/SXSL18-202548.3.2質(zhì)譜參考條件a）電離方式：電噴霧離子源（ESI）；b）監(jiān)測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRMc）掃描方式：負(fù)離子掃描；d）毛細(xì)管電壓：2.5kV；e）離子源溫度：150℃;f）脫溶劑氣溫度：350℃;g）多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）離子對、錐孔電壓及碰撞能量見表2。表2氯酸鹽、高氯酸鹽及其內(nèi)標(biāo)物的定性離子對、定量離子對及質(zhì)譜條件被測物名稱定性離子對m/z定量離子對m/z錐孔電壓V碰撞能量氯酸鹽83.0＞67.083.0＞67.022.09485.0＞69.022.195高氯酸鹽99.0＞83.099.0＞83.027.298101.0＞85.027.093氯酸鹽-18O389.0＞71.0/23.491高氯酸鹽-18O4107.0＞89.0/28.18.3.3混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液和試樣溶液的測定在儀器最佳工作條件下，分別取混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液（5.18）和試樣溶液（8.2）上機(jī)測定?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)系列工作溶液中各待測物的多反應(yīng)監(jiān)測離子色譜圖見附錄A。8.3.4定性通過試樣色譜圖的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、各色譜峰的特征離子與相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各色譜峰的特征離子相對照定性。試樣與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間的相對偏差不大于2.5%；試樣特征離子的相對豐度與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表3的規(guī)定，則可判定樣品中存在對應(yīng)的化合物。表3定性測定時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度>50>20～50（含）>10～20（含）允許的最大偏差8.3.5定量在儀器最佳工作條件下，取試樣溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測組分峰面積與對應(yīng)內(nèi)標(biāo)峰面積比值為縱坐標(biāo)，待測組分濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行單點(diǎn)或多點(diǎn)校正，采用內(nèi)標(biāo)法定量。試樣溶液中待測物的響應(yīng)值與對應(yīng)內(nèi)標(biāo)物響應(yīng)值的比值均應(yīng)在儀器測定的線性范圍內(nèi)。以氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)T/SXSL18-2025為內(nèi)標(biāo)物計(jì)算氯酸鹽含量，以高氯酸鹽同位素內(nèi)標(biāo)為內(nèi)標(biāo)物計(jì)算高氯酸鹽含量，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.99。試樣溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。當(dāng)試樣的上機(jī)濃度超過線性范圍時(shí)，在樣品提?。?.1）時(shí)內(nèi)標(biāo)物加入量應(yīng)增加適當(dāng)倍數(shù)（n），凈化（8.2）后的試樣溶液用甲醇稀釋n倍后重新測定。單點(diǎn)校正定量時(shí)，試樣溶液中待測物的濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度相差不超過30%。9試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理試樣中氯酸鹽（以氯酸根計(jì)）、高氯酸鹽（以高氯酸根計(jì)）的含量w以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，單位為微克每千克(μg/kg），多點(diǎn)校準(zhǔn)按式（1）計(jì)算，單點(diǎn)校準(zhǔn)按式（2）計(jì)算。式中：C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的試樣溶液待測物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mLV——試樣提取溶液的體積，單位為毫升（mLm——試樣的質(zhì)量，單位為克（gn——稀釋倍數(shù)。式中：Cis——試樣溶液中各內(nèi)標(biāo)物濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；Cs——標(biāo)準(zhǔn)溶液中各待測物濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；C’is——標(biāo)準(zhǔn)溶液中各內(nèi)標(biāo)物濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；Ai——試樣溶液中各待測物峰面積；Ais——試樣溶液中各內(nèi)標(biāo)物峰面積；As——標(biāo)準(zhǔn)溶液中各待測物峰面積；A’is——標(biāo)準(zhǔn)溶