葡萄酒中5種揮發(fā)性酯類物質(zhì)的測定Microextraction-GasChromatography-寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會發(fā)布I本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》規(guī)定編寫。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會提出并歸口。本文件起草單位：寧夏回族自治區(qū)食品檢測研究院（國家市場監(jiān)督管理總局重點實驗室（枸杞及葡萄酒質(zhì)量安全））、寧夏化學(xué)分析測試協(xié)會。本文件主要起草人：湯麗華、王琛、岳苑、劉繼輝、朱燕燕、呂毅、郭陽、王澤嵐、吳明、馬桂娟、張小飛。葡萄酒中5種揮發(fā)性酯類物質(zhì)的測定固相微萃取-氣相色譜/質(zhì)譜法本文件規(guī)定了葡萄酒中5種揮發(fā)性酯類物質(zhì)(乙酸異戊酯、己酸乙酯、乙酸己酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯)的固相微萃取-氣相色譜質(zhì)譜檢測方法。本文件適用于葡萄酒中5種揮發(fā)性酯類物質(zhì)(乙酸異戊酯、己酸乙酯、乙酸己酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯)的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。試樣經(jīng)乙醇溶液渦旋提取，經(jīng)40℃萃取后頂空固相微萃取進行富集，色譜柱分離，供氣相色譜-質(zhì)譜儀測定，內(nèi)標(biāo)法定量。5試劑和材料本方法所用的水為GB/T6682規(guī)定的一級水。5.1試劑5.1.1無水乙醇：色譜純。5.1.2氯化鈉：分析純。5.1.315%乙醇水溶液：準(zhǔn)確量取75mL無水乙醇（5.1.1），加入425mL水，混勻。5.2標(biāo)準(zhǔn)品5.2.1標(biāo)準(zhǔn)品：乙酸異戊酯（isoamylacetate，CAS號123-92-2，分子式C7H14O2）、己酸乙酯（ethylhexanoate，CAS號123-66-0，分子式C8H16O2）、乙酸己酯（hexylacetate，CA式C8H16O2）、辛酸乙酯(ethylcaprylate，CAS號106-32-1，分子式C10H20O2)、癸酸乙酯(ethylcaprate，CAS號100-38-3，分子式C12H24O2），內(nèi)標(biāo)為3-辛醇（3-octanol，CAS號589-98-0式C8H18O）。以上標(biāo)準(zhǔn)品純度均大于98%。5.2.2標(biāo)準(zhǔn)儲備液(10.0mg/mL)：準(zhǔn)確稱取適量乙酸異戊酯、己酸乙酯、乙酸己酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品，用無水乙醇（5.1.1）配制成濃度為10.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，-18℃保存。2T/NAIA0370—20255.2.3標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)需要，用15%乙醇水溶液（5.1.3）配制適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，范圍為1.0μg/mL至100.0μg/mL，臨用現(xiàn)配。5.2.4內(nèi)標(biāo)儲備液(10.0mg/mL)：準(zhǔn)確稱取適量的內(nèi)標(biāo)3-辛醇標(biāo)準(zhǔn)品，用無水乙醇（5.1.1）配制成濃度為10.0mg/mL的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，-18℃保存。5.2.5內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液(500μg/mL)：根據(jù)需要，用15%乙醇水溶液（5.1.3）配制濃度為500μg/mL的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液，臨用現(xiàn)配。6儀器和設(shè)備6.1固相微萃取-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀(SPME-GC-MS/MS）。6.2分析天平：感量0.01mg。6.3固相微萃取頭：100μm聚二甲基硅氧烷。6.4固相微萃取瓶：15mL。6.5數(shù)顯恒溫磁力攪拌器：可溫控。6.6超聲波清洗器。6.7磁力攪拌子：1.5cm。6.8渦旋混合器。7.1試樣制備取代表性樣品2瓶搖勻分裝，冷藏保存。7.2試樣的提取取10.0mL葡萄酒樣品置于萃取瓶中，加入500μg/mL的內(nèi)標(biāo)使用液（5.2.5）100μL和2g氯化鈉（5.1.2），放入磁力攪拌子后擰緊瓶蓋在渦旋混合器上混勻（內(nèi)標(biāo)上機濃度為5μg/mL），置于40℃的數(shù)顯恒溫磁力攪拌器中，保持5min后用固相微萃取手柄的保護針管刺穿瓶蓋橡膠墊，插入萃取瓶內(nèi)頂空中，推出萃取頭置于溶液上方?？刂戚腿囟葹?0℃,萃取50min后收回萃取頭拔出保護針管，插入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進樣口解吸5min，按儀器工作條件進行測定，采用內(nèi)標(biāo)法定量。7.3儀器參考條件7.3.1氣相色譜參考條件a）色譜柱：DB-WAX色譜柱，柱長：30m；內(nèi)徑：0.25mm；膜厚：0.25μm或性能相當(dāng)者。b）進樣口溫度：230℃。10℃/min升溫至200℃,保持11min。d）進樣方式：不分流進樣。e）進樣量：1μL。7.3.2質(zhì)譜參考條件a）電離方式：電子轟擊電離源(EI)。b）傳輸線溫度：250℃。3T/NAIA0370—2025c）離子源溫度：230℃。d）電子能量：70eV。e）監(jiān)測方式：選擇離子掃描(SIM)；監(jiān)測離子參見附錄A。7.4定性測定經(jīng)確證分析被測物質(zhì)量色譜峰保留時間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相一致，并且在扣除背景后的樣品譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)。同時所選擇離子的豐度比與標(biāo)準(zhǔn)樣物質(zhì)相關(guān)離子的相對豐度一致，相似度在允許偏差之內(nèi)（見表1），則可判定樣品中存在對應(yīng)的被測物。表1定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差>50%>20％至50%>10％至20%7.5定量測定根據(jù)樣液中被測物含量情況，選定濃度相近的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和待測樣液中被測物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣液均按7.2和7.3規(guī)定條件進行測定，如果樣液中與標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的保留時間有峰出現(xiàn)，則對其進行定性、定量，葡萄酒中5種揮發(fā)性物質(zhì)的參考保留時間見表2。葡萄酒中5種揮發(fā)性物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的總離子流圖參見附錄B，內(nèi)標(biāo)法定量。表2參考保留時間7.6空白試驗除不加試樣外，均按上述步驟進行。8結(jié)果計算試樣中被測物含量按式（1）進行計算：X——樣本中被測物含量，單位為微克每毫升(μg/mL）；C——測定溶液濃度，單位為微克每毫升(μg/mL）；C0——空白基質(zhì)溶液濃度，單位為微克每毫升(μg/mL）；注：測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。T/NAIA0370—202549精密度在重復(fù)性測定條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。乙酸異戊酯、己酸乙酯、乙酸己酯的定量限均為2.0μg/mL，辛酸乙酯、癸酸乙酯的定量限為5T/NAIA0370—2025乙酸異戊酯、己酸乙酯、乙酸己酯、辛酸乙酯、癸