醫(yī)院核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作流程核酸檢測(cè)作為感染性疾病診斷、疫情防控的核心技術(shù)手段，醫(yī)院檢測(cè)流程的規(guī)范性直接影響結(jié)果準(zhǔn)確性與生物安全。本文結(jié)合臨床實(shí)踐與行業(yè)規(guī)范，從檢測(cè)前準(zhǔn)備、樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)接收、核酸提取擴(kuò)增、結(jié)果報(bào)告及廢棄物處理等環(huán)節(jié)，詳細(xì)闡述全流程操作要點(diǎn)，為醫(yī)療機(jī)構(gòu)提供實(shí)操指引。一、檢測(cè)前準(zhǔn)備工作（一）人員資質(zhì)與培訓(xùn)參與核酸檢測(cè)的工作人員需具備臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)資質(zhì)，并定期接受生物安全、操作規(guī)范等專(zhuān)項(xiàng)培訓(xùn)。培訓(xùn)內(nèi)容涵蓋樣本采集手法、核酸提取流程、擴(kuò)增儀操作、應(yīng)急處置（如樣本污染、設(shè)備故障）等，確保人員熟練掌握全流程操作邏輯。（二）物資與設(shè)備準(zhǔn)備試劑耗材：根據(jù)檢測(cè)量提前籌備核酸提取試劑、熒光定量PCR擴(kuò)增試劑、采樣拭子、含保存液的采樣管、無(wú)酶吸頭等。需核查試劑有效期、批號(hào)，確保與設(shè)備適配；耗材需經(jīng)滅菌處理，外包裝無(wú)破損。設(shè)備調(diào)試：檢測(cè)前校準(zhǔn)核酸提取儀、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，檢查離心機(jī)、生物安全柜、移液器性能。設(shè)備運(yùn)行參數(shù)（如溫度、轉(zhuǎn)速、擴(kuò)增程序）需與試劑說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格匹配。（三）實(shí)驗(yàn)室環(huán)境準(zhǔn)備檢測(cè)區(qū)域（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)）需嚴(yán)格分區(qū)，各區(qū)壓力梯度、氣流方向符合生物安全要求（如試劑區(qū)正壓、樣本/擴(kuò)增區(qū)相對(duì)負(fù)壓）。檢測(cè)前需：用含氯消毒劑或75%乙醇擦拭臺(tái)面、設(shè)備；紫外燈照射30分鐘（避開(kāi)不耐紫外線(xiàn)設(shè)備）；記錄環(huán)境溫濕度、清潔消毒情況。二、樣本采集流程（一）采樣前準(zhǔn)備人員防護(hù)：采樣人員穿戴醫(yī)用防護(hù)口罩、防護(hù)服、面屏、手套、鞋套；受檢者佩戴口罩，保持1米間距，提前告知“采樣前30分鐘避免進(jìn)食、飲水、吸煙”。信息核對(duì)：通過(guò)系統(tǒng)或表單核對(duì)受檢者信息（脫敏處理）、采樣類(lèi)型（咽拭子/鼻拭子等），生成唯一采樣編號(hào)并關(guān)聯(lián)采樣管。（二）采樣操作規(guī)范咽拭子：受檢者頭微仰、發(fā)“啊”音，采樣拭子輕柔擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁（避免觸舌），動(dòng)作≤5秒；拭子頭浸入保存液，折斷桿部（或旋緊管蓋）。鼻拭子：受檢者頭部中立，拭子沿下鼻道插入（成人2-3cm、兒童適度縮短），貼壁旋轉(zhuǎn)≥3圈（停留≥15秒），后續(xù)操作同咽拭子。特殊樣本：血液（EDTA抗凝管）、痰液（深咳留?。┑刃枳裱瓕?duì)應(yīng)規(guī)范，確保樣本質(zhì)量。（三）樣本標(biāo)識(shí)與暫存采樣后立即貼標(biāo)簽（含受檢者信息、采樣時(shí)間、類(lèi)型），樣本置于帶冰袋的轉(zhuǎn)運(yùn)箱（2-8℃）暫存；若2小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，可室溫暫存（避免陽(yáng)光直射），并記錄環(huán)境溫度。三、樣本轉(zhuǎn)運(yùn)與實(shí)驗(yàn)室接收（一）樣本轉(zhuǎn)運(yùn)要求轉(zhuǎn)運(yùn)人員核對(duì)樣本數(shù)量、標(biāo)識(shí)、保存液狀態(tài)，密封轉(zhuǎn)運(yùn)箱并填寫(xiě)記錄（含樣本信息、時(shí)間、溫度）。外送樣本需符合UN2814生物安全運(yùn)輸要求（加貼危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)），轉(zhuǎn)運(yùn)全程維持2-8℃（特殊樣本按說(shuō)明書(shū)）。（二）實(shí)驗(yàn)室接收流程接收人員核對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)記錄與樣本信息，檢查采樣管是否破損、保存液是否足量、樣本是否渾濁/溶血。合格樣本登記后轉(zhuǎn)入樣本制備區(qū)；若暫存，置于2-8℃冰箱（保存≤24小時(shí)，特殊試劑可延至48小時(shí)，需驗(yàn)證）。四、核酸提取與擴(kuò)增檢測(cè)（一）試劑配制與準(zhǔn)備在試劑準(zhǔn)備區(qū)，按樣本量計(jì)算試劑體積，用校準(zhǔn)移液器吸取提取/擴(kuò)增試劑（專(zhuān)用吸頭避免交叉污染）。配制好的擴(kuò)增液需避光、4℃暫存（≤2小時(shí)）。（二）核酸提取操作磁珠法：樣本（或上清液）轉(zhuǎn)入提取板，加磁珠、裂解液等，按提取儀程序（裂解-結(jié)合-洗滌-洗脫）操作，確保磁珠充分結(jié)合核酸，洗滌徹底去除雜質(zhì)，洗脫體積符合要求（20-50μL）。柱提法：樣本裂解液轉(zhuǎn)入離心柱，離心吸附核酸，洗滌液去除雜質(zhì)，洗脫液洗脫核酸（注意離心速度、時(shí)間，避免柱膜干燥）。（三）擴(kuò)增反應(yīng)與結(jié)果判讀體系配制：核酸加入擴(kuò)增液，輕柔混勻（避氣泡），瞬時(shí)離心后轉(zhuǎn)入擴(kuò)增管，密封后上機(jī)。擴(kuò)增程序：按試劑說(shuō)明書(shū)設(shè)置參數(shù)（逆轉(zhuǎn)錄溫度、預(yù)變性、循環(huán)數(shù)等），過(guò)程中避免中斷。結(jié)果判讀：陽(yáng)性：Ct值＜35（或試劑標(biāo)準(zhǔn)）且曲線(xiàn)指數(shù)增長(zhǎng)；陰性：Ct值≥35或無(wú)增長(zhǎng)；灰區(qū)（35-40）：重復(fù)檢測(cè)或換試劑驗(yàn)證，結(jié)合臨床綜合判斷。五、結(jié)果報(bào)告與質(zhì)量控制（一）結(jié)果審核與發(fā)布檢測(cè)人員核對(duì)擴(kuò)增曲線(xiàn)、Ct值、樣本信息，陽(yáng)性結(jié)果需雙人復(fù)核（必要時(shí)重提重?cái)U(kuò)）。確認(rèn)無(wú)誤后錄入系統(tǒng)，生成報(bào)告（含受檢者信息、方法、結(jié)果、時(shí)間、實(shí)驗(yàn)室信息），授權(quán)人員審核后發(fā)布。（二）質(zhì)量控制措施室內(nèi)質(zhì)控：每批次設(shè)陰性（無(wú)模板水）、陽(yáng)性（已知核酸）、弱陽(yáng)性（Ct30-35）對(duì)照，監(jiān)控?cái)U(kuò)增效率；對(duì)照異常時(shí)排查試劑、設(shè)備、操作，重新檢測(cè)。室間質(zhì)評(píng)：定期參加國(guó)家級(jí)/省級(jí)質(zhì)評(píng)，確保結(jié)果準(zhǔn)確性；質(zhì)評(píng)不合格時(shí)分析原因（試劑批次、操作誤差），針對(duì)性改進(jìn)。六、廢棄物處理與生物安全防護(hù)（一）醫(yī)療廢物處置樣本相關(guān)廢物：采樣管、拭子、離心管等入雙層醫(yī)療廢物袋，噴灑2000mg/L含氯消毒劑或浸泡后，按條例轉(zhuǎn)運(yùn)處置。實(shí)驗(yàn)室廢物：擴(kuò)增后反應(yīng)管、吸頭高壓滅菌（121℃，30分鐘）；試劑包裝、防護(hù)用品按感染性廢物分類(lèi)，日產(chǎn)日清。（二）生物安全防護(hù)要點(diǎn)全程在生物安全柜內(nèi)操作（樣本處理、試劑配制），避免氣溶膠污染。樣本泄漏時(shí)，立即吸水紙覆蓋+含氯消毒劑噴灑（作用30分鐘后清理）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，臺(tái)面、設(shè)備二次消毒，新風(fēng)換氣；人員規(guī)范脫卸防護(hù)用品、洗手。結(jié)語(yǔ)醫(yī)院核酸檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化操作是結(jié)果準(zhǔn)確、生物安全的核心保障。醫(yī)療機(jī)構(gòu)需結(jié)合實(shí)