實驗室生物標本處理規(guī)程#實驗室生物標本處理規(guī)程

##一、概述

生物標本是實驗室研究的重要基礎材料，其處理質量直接影響實驗結果的準確性和可靠性。本規(guī)程旨在規(guī)范實驗室生物標本的采集、保存、處理和存儲等環(huán)節(jié)，確保標本質量，保障實驗工作的順利進行。規(guī)程涵蓋了標本采集、固定、脫水、透明、硬化、包埋、切片等關鍵步驟，并規(guī)定了相應的質量控制措施。

##二、標本采集

###（一）基本原則

1.標本采集應遵循無菌操作原則，防止污染。

2.采集過程應盡量減少對標本組織的損傷。

3.標本采集量應根據實驗需求合理確定，避免浪費。

###（二）操作步驟

1.**準備階段**

(1)檢查采集工具的清潔度和消毒情況。

(2)準備好標本固定液、標記標簽等輔助材料。

(3)了解標本來源信息，做好記錄。

2.**采集過程**

(1)根據實驗要求選擇合適的采集部位。

(2)使用無菌器械進行采集，避免交叉污染。

(3)采集完成后立即進行標記和固定。

###（三）質量控制

1.標本采集過程中應避免過度擠壓或損傷。

2.標本固定液應新鮮配制，濃度符合標準。

3.標本標記應清晰、持久，包含必要信息。

##三、標本固定

###（一）固定原則

1.固定液應能快速滲透組織，固定細胞結構。

2.固定過程應避免標本變形或染色。

3.固定時間應根據標本類型和大小確定。

###（二）操作步驟

1.**固定液配制**

(1)按照標準配方配制固定液。

(2)檢查固定液pH值，確保在適宜范圍內。

2.**標本固定**

(1)將標本完全浸入固定液中。

(2)確保標本各部位均被固定液覆蓋。

(3)根據需要調整固定時間。

###（三）質量控制

1.固定液應定期更換，避免污染。

2.固定過程中應避免標本碰撞或移動。

3.固定后的標本應進行編號和記錄。

##四、標本處理

###（一）脫水

1.脫水目的是去除標本中的水分，為后續(xù)處理做準備。

2.脫水過程應逐步進行，避免組織收縮或變形。

###（二）透明

1.透明目的是使標本變得透明，便于觀察。

2.透明劑應選擇與組織親和性好的試劑。

###（三）硬化

1.硬化目的是增強標本硬度，便于切片。

2.硬化劑應選擇對組織損傷小的試劑。

###（四）包埋

1.包埋目的是將標本固定在支撐材料中。

2.包埋材料應具有良好的透光性和穩(wěn)定性。

##五、標本存儲

###（一）存儲條件

1.標本存儲環(huán)境應干燥、避光、低溫。

2.存儲容器應密封，避免污染。

###（二）定期檢查

1.定期檢查標本保存狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)異常及時處理。

2.更新標本存儲記錄，確保信息完整。

##六、安全注意事項

1.操作過程中應佩戴防護用品，避免接觸有害試劑。

2.廢棄物應按照規(guī)定進行處理，防止環(huán)境污染。

3.實驗結束后應徹底清潔工作區(qū)域，做好消毒工作。

#實驗室生物標本處理規(guī)程

##一、概述

生物標本是實驗室研究的重要基礎材料，其處理質量直接影響實驗結果的準確性和可靠性。本規(guī)程旨在規(guī)范實驗室生物標本的采集、保存、處理和存儲等環(huán)節(jié)，確保標本質量，保障實驗工作的順利進行。規(guī)程涵蓋了標本采集、固定、脫水、透明、硬化、包埋、切片等關鍵步驟，并規(guī)定了相應的質量控制措施。規(guī)范的標本處理流程有助于保持標本的原有結構、化學成分和生物學活性，為后續(xù)的觀察、分析和研究提供可靠依據。本規(guī)程適用于各類組織、細胞及其他生物材料在實驗室環(huán)境下的處理工作。

##二、標本采集

###（一）基本原則

1.**無菌操作原則**：標本采集過程中必須嚴格遵循無菌技術，使用無菌器械，操作環(huán)境需保持潔凈，以防止微生物污染標本，影響后續(xù)實驗結果。這包括操作前對雙手和工具的徹底消毒，以及在無菌條件下進行標本獲取。

2.**最小損傷原則**：采集工具應選擇鋒利、合適的型號，以減少對標本組織的機械損傷和擠壓，避免細胞破裂、組織結構變形或出血，確保獲取的標本能真實反映其原始狀態(tài)。

3.**按需采集原則**：根據具體的實驗目的和研究需求，精確計算并采集適量的標本。避免過度采集，不僅可減少樣本浪費，也能降低對供體（如動物）的潛在影響，并節(jié)約后續(xù)處理所需的試劑和設備資源。

###（二）操作步驟

1.**準備階段**

(1)**器械準備與消毒**：仔細檢查所有即將使用的采集器械（如手術刀、活檢鉗、注射器、培養(yǎng)皿等）是否完好無損，是否為一次性無菌器械或已按照規(guī)定進行高溫高壓滅菌（如121°C，15分鐘）。對于可重復使用的金屬器械，需徹底清潔并用合適的消毒劑處理。

(2)**固定液與輔助材料準備**：根據標本類型和后續(xù)處理流程，提前配制并檢查所需固定液（如10%中性甲醛緩沖液、4%多聚甲醛等）的濃度和體積是否準確，pH值是否在規(guī)定范圍內。準備好標簽、記號筆（防水）、標本袋、記錄本等輔助材料。

(3)**信息記錄與標識**：獲取標本前，必須準確記錄標本來源（如供體編號、組織部位、采集時間等）相關信息。立即在標本或其容器上粘貼帶有清晰、持久標識的標簽，確保在整個處理過程中標識不脫落、不模糊。

2.**采集過程**

(1)**定位與麻醉（如適用）**：準確找到目標采集部位。如果采集對象是活體生物（如動物），需根據實驗要求選擇合適的麻醉方式和方法，確保麻醉效果穩(wěn)定，減少采集過程中的應激反應對標本的影響。

(2)**消毒與鋪巾**：對采集部位進行徹底的消毒（如使用碘伏、酒精等），范圍要足夠大。鋪開無菌手術巾，建立無菌操作區(qū)域。

(3)**執(zhí)行采集**：按照預定方案使用無菌器械進行標本采集。例如，進行組織活檢時，應垂直進針，避免來回攪動；獲取細胞懸液時，需使用無菌吸管或采血管。采集過程中注意控制力度和深度，避免損傷周圍組織。

(4)**即時固定**：標本采集完成后，應立即將其完全浸入預冷的、足量的固定液中。對于較大或較深的標本，可能需要多次更換固定液以確保所有部分都能充分滲透。立即開始計時，記錄固定開始時間。

###（三）質量控制

1.**操作規(guī)范性檢查**：采集前后及過程中，操作人員需自查是否嚴格遵守無菌操作、最小損傷等原則。有條件時，應有經驗豐富的同事進行監(jiān)督或復核。

2.**標本完整性評估**：采集后初步觀察標本，檢查其大小、形狀、顏色是否與預期一致，有無明顯出血、破碎或污染。

3.**固定及時性確認**：確保標本在采集后規(guī)定時間內（通常為幾分鐘內）開始有效固定，并記錄固定時間，避免因固定延遲導致組織自溶或結構改變。

##三、標本固定

###（一）固定原則

1.**快速滲透原則**：固定液應具有高滲透壓和良好的流動性，能夠迅速且均勻地滲透到標本內部，尤其是在細胞和組織的深處，以有效固定細胞結構，防止其降解。

2.**結構保持原則**：選擇的固定液應盡可能減少對原生組織化學成分和結構的破壞，避免引起過度收縮、硬化、染色或溶解，力求保留標本最接近天然的形態(tài)。

3.**固定時間原則**：固定所需的時間取決于標本的類型（組織、細胞）、大小、形狀以及固定液的種類和濃度。必須根據文獻資料或預實驗結果，為不同類型的標本確定并嚴格遵守推薦的固定時間，以保證固定效果。

###（二）操作步驟

1.**固定液配制與檢查**

(1)**精確配制**：嚴格按照標準操作規(guī)程（SOP）或試劑說明書，使用分析天平稱量固定液固體成分，使用精確容量的移液器或容量瓶配制固定液。常見的固定液如10%中性緩沖甲醛（pH7.4）、4%多聚甲醛（用于免疫組化或原位雜交）、Bouin's液（用于一般組織學染色）等。確保溶劑（通常是水或特定緩沖液）的純度和溫度符合要求。

(2)**質量檢測**：在使用前，檢查固定液的澄清度、顏色（應無雜質沉淀或異常顏色）、以及pH值（使用pH計測量，必要時用緩沖液校準）。對于需要精確pH值的固定液（如甲醛緩沖液），必須使用合適的緩沖體系調節(jié)并維持pH穩(wěn)定。

2.**標本固定操作**

(1)**浸沒固定**：將采集好的標本放入盛有足量固定液的容器中，確保標本完全被固定液覆蓋，沒有氣泡附著在標本表面，以利于均勻固定。對于較大或形狀不規(guī)則的標本，可能需要適當支撐或晃動容器，幫助固定液流動和滲透。

(2)**控制環(huán)境**：將固定液容器置于適宜的環(huán)境中保存，通常是室溫或4°C冷藏（根據固定液種類和標本特性決定）。冷藏可以減緩固定反應速度，有時能更好地保存某些抗原性。避免高溫或陽光直射，這些條件可能加速固定液變質或影響標本。

(3)**記錄固定信息**：在標本標簽或記錄本上清晰記錄所用固定液名稱、濃度、pH值、配制日期、開始固定時間、固定溫度等信息。

###（三）質量控制

1.**固定液狀態(tài)監(jiān)控**：定期檢查固定液的狀態(tài)，有無沉淀、變色或渾濁。發(fā)現(xiàn)異常應及時處理或更換固定液。

2.**固定時間監(jiān)控**：嚴格遵守預定的固定時間。可通過設置定時提醒或記錄表來確保不遺漏或提前結束固定。

3.**固定效果初步評估**：在固定期間或固定結束后，可取出少量代表性標本進行初步檢查（如染色觀察），評估固定效果。理想的固定效果表現(xiàn)為組織收縮適度、細胞輪廓清晰、無明顯自溶跡象。

##四、標本處理

###（一）脫水

1.**脫水目的**：脫水的核心目的是逐步、完全地去除標本中所有的自由水，為后續(xù)的透明步驟做準備。自由水的存在會使標本密度降低，難以被透明劑替代，并可能導致組織變形或切片困難。

2.**脫水原則**：脫水過程應采用一系列濃度遞增的脫水劑（通常是酒精），使水分能夠緩慢、均勻地離開組織，同時盡量減少對組織結構的損傷。脫水劑的選擇和梯度設置需根據標本類型（如硬組織、軟組織、細胞）和后續(xù)處理要求（如石蠟包埋、樹脂包埋）來確定。

###（二）透明

1.**透明目的**：透明是指使用高折射率的透明劑（如二甲苯、苯甲苯或特定合成透明劑）替代組織中的水分，使標本變得與透明劑具有相近的折射率。這一步驟對于制作光學顯微鏡切片至關重要，可以消除組織與周圍介質（如水）的折射率差異，減少光線散射，提高圖像的清晰度和分辨率。

2.**透明劑選擇**：透明劑的選擇需考慮其對組織的滲透能力、與后續(xù)包埋劑的兼容性、以及對環(huán)境的影響。傳統(tǒng)上常用二甲苯，但因其毒性較高，現(xiàn)在也常用毒性較低的替代品。

###（三）硬化

1.**硬化目的**：硬化的主要目的是增強標本的整體硬度和脆性，使其能夠承受后續(xù)切片過程中產生的機械應力，不易破碎，從而獲得連續(xù)、完整的組織切片。這對于需要制作較厚切片或硬組織的標本尤為重要。

2.**硬化劑選擇**：常用的硬化劑是酒精（乙醇），通常以不同濃度梯度進行。有時也會結合使用其他硬化劑，如福爾馬林，以達到更好的硬化效果。

###（四）包埋

1.**包埋目的**：包埋是將處理后的標本固定在一個堅硬且具有良好透光性的基質（包埋塊）中。這樣做有多個目的：一是提供機械支撐，使標本在切片過程中保持穩(wěn)定和完整；二是將分散的標本組織整合成塊，便于定位和連續(xù)切片；三是作為載體制備切片，方便后續(xù)染色和觀察。

2.**包埋材料選擇**：根據后續(xù)的應用，選擇合適的包埋材料。最常用的是石蠟（ParaffinWax），適用于大多數常規(guī)組織學染色。對于需要更高分辨率或進行特殊顯微鏡技術（如電鏡）觀察的標本，則選擇樹脂包埋劑（如環(huán)氧樹脂、丙烯酸樹脂）。不同包埋材料的熔點、硬度、對組織的滲透性等特性各不相同，需根據實驗需求選擇。

3.**包埋操作**：將處理好的標本（通常是經過脫水和透明步驟的）放入預熱至合適熔點的包埋材料中，使用包埋模具將其塑形，待包埋材料完全冷卻凝固后，即制成包埋塊。

##五、標本存儲

###（一）存儲條件

1.**溫度控制**：標本存儲環(huán)境應保持相對恒定的低溫，通常為4°C冷藏或-20°C冷凍。冷藏可以減緩后續(xù)處理步驟中的化學反應速率，延長某些試劑（如固定液）的有效期，并有利于脫水等過程的進行。冷凍則能更徹底地保存生物活性（如果適用），或長期保存未處理的原始標本。不同階段的標本或試劑可能需要不同的存儲溫度。

2.**濕度控制**：存儲環(huán)境應相對干燥，避免濕度過高導致標本霉變或試劑水解。對于需要干燥存儲的試劑（如乙醇系列），應使用密封容器。

3.**避光保護**：光線（尤其是紫外線）可能加速某些化學反應或導致試劑分解。因此，存儲容器應選用不透明材料，或對光線敏感的試劑/標本進行避光保存（如存放在棕色瓶中或暗處）。

4.**環(huán)境清潔**：存儲區(qū)域應保持清潔，防止灰塵、微生物等污染標本或試劑。

5.**分區(qū)管理**：不同狀態(tài)、不同處理階段的標本或試劑應分開存放，并有明確的標識，防止混淆和誤用。例如，固定液、不同濃度的酒精、包埋塊等應有各自獨立的存儲區(qū)域。

###（二）定期檢查

1.**目視檢查**：定期（如每周或每月）對存儲的標本和試劑進行目視檢查，觀察有無物理變化，如容器破損、泄漏、試劑變色、沉淀、結晶、霉變、標本變形等。

2.**狀態(tài)評估**：對于需要檢查標本狀態(tài)的（如未包埋的組織塊），可定期取出部分標本進行初步評估，判斷其保存質量是否依然符合要求。

3.**記錄更新**：對檢查結果進行記錄，并及時更新標本存儲記錄本或電子數據庫。如果發(fā)現(xiàn)異常，應立即采取相應措施（如更換容器、調整存儲條件、隔離問題標本等），并記錄處理過程。

4.**庫存盤點**：定期進行存儲物品的清點，核對數量，確保賬物相符，及時補充消耗的試劑或處理待處理的標本。

##六、安全注意事項

1.**個人防護**：在標本處理的整個過程中，操作人員必須穿戴適當的個人防護裝備（PPE），包括但不限于：潔凈工作服、實驗帽、防滲透手套（根據接觸的試劑選擇合適的材質，如處理有機溶劑需用丁腈橡膠手套）、護目鏡或面屏（防止化學濺射或組織碎屑飛濺）。必要時還需佩戴呼吸防護裝置。

2.**化學品安全**：

*處理所有化學品（固定液、酒精、透明劑、包埋劑等）前，必須查閱其安全數據表（SDS/MSDS），了解其危險性、操作注意事項和應急處理措施。

*在通風良好的區(qū)域（如通風櫥）操作揮發(fā)性強的有機溶劑（如二甲苯、酒精），防止吸入有毒蒸氣。

*小心操作熱介質（如融化的石蠟），防止燙傷。使用合適的工具（如加熱板、溫度計）進行操作。

*廢棄化學品和受污染的標本、耗材應按照實驗室規(guī)定進行分類收集和處理，嚴禁隨意丟棄。特別是有機溶劑廢液，通常需要經過專門的處理系統(tǒng)。

3.**生物安全**：雖然本規(guī)程主題不涉及特定病原體，但處理生物標本仍需遵循生物安全原則。對于來源不明的組織，應按潛在高風險樣本處理。操作過程中避免產生氣溶膠，處理結束后徹底洗手。

4.**設備安全**：正確使用所有設備，如離心機、烘箱、冰箱、冰柜、切片機等。定期檢查設備運行狀態(tài)，確保安全。操作精密設備（如切片機）前需接受專門培訓。

5.**工作區(qū)域管理**：保持工作臺面整潔，物品擺放有序。實驗結束后，及時清理工作區(qū)域，清潔和消毒使用的器械和工具。妥善處理廢棄物，防止交叉污染和環(huán)境污染。

6.**應急準備**：熟悉實驗室的應急設備（如洗眼器、緊急噴淋裝置）的位置和使用方法。了解實驗室的應急預案，包括化學品泄漏、火災、人員受傷等情況的處理流程。

#實驗室生物標本處理規(guī)程

##一、概述

生物標本是實驗室研究的重要基礎材料，其處理質量直接影響實驗結果的準確性和可靠性。本規(guī)程旨在規(guī)范實驗室生物標本的采集、保存、處理和存儲等環(huán)節(jié)，確保標本質量，保障實驗工作的順利進行。規(guī)程涵蓋了標本采集、固定、脫水、透明、硬化、包埋、切片等關鍵步驟，并規(guī)定了相應的質量控制措施。

##二、標本采集

###（一）基本原則

1.標本采集應遵循無菌操作原則，防止污染。

2.采集過程應盡量減少對標本組織的損傷。

3.標本采集量應根據實驗需求合理確定，避免浪費。

###（二）操作步驟

1.**準備階段**

(1)檢查采集工具的清潔度和消毒情況。

(2)準備好標本固定液、標記標簽等輔助材料。

(3)了解標本來源信息，做好記錄。

2.**采集過程**

(1)根據實驗要求選擇合適的采集部位。

(2)使用無菌器械進行采集，避免交叉污染。

(3)采集完成后立即進行標記和固定。

###（三）質量控制

1.標本采集過程中應避免過度擠壓或損傷。

2.標本固定液應新鮮配制，濃度符合標準。

3.標本標記應清晰、持久，包含必要信息。

##三、標本固定

###（一）固定原則

1.固定液應能快速滲透組織，固定細胞結構。

2.固定過程應避免標本變形或染色。

3.固定時間應根據標本類型和大小確定。

###（二）操作步驟

1.**固定液配制**

(1)按照標準配方配制固定液。

(2)檢查固定液pH值，確保在適宜范圍內。

2.**標本固定**

(1)將標本完全浸入固定液中。

(2)確保標本各部位均被固定液覆蓋。

(3)根據需要調整固定時間。

###（三）質量控制

1.固定液應定期更換，避免污染。

2.固定過程中應避免標本碰撞或移動。

3.固定后的標本應進行編號和記錄。

##四、標本處理

###（一）脫水

1.脫水目的是去除標本中的水分，為后續(xù)處理做準備。

2.脫水過程應逐步進行，避免組織收縮或變形。

###（二）透明

1.透明目的是使標本變得透明，便于觀察。

2.透明劑應選擇與組織親和性好的試劑。

###（三）硬化

1.硬化目的是增強標本硬度，便于切片。

2.硬化劑應選擇對組織損傷小的試劑。

###（四）包埋

1.包埋目的是將標本固定在支撐材料中。

2.包埋材料應具有良好的透光性和穩(wěn)定性。

##五、標本存儲

###（一）存儲條件

1.標本存儲環(huán)境應干燥、避光、低溫。

2.存儲容器應密封，避免污染。

###（二）定期檢查

1.定期檢查標本保存狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)異常及時處理。

2.更新標本存儲記錄，確保信息完整。

##六、安全注意事項

1.操作過程中應佩戴防護用品，避免接觸有害試劑。

2.廢棄物應按照規(guī)定進行處理，防止環(huán)境污染。

3.實驗結束后應徹底清潔工作區(qū)域，做好消毒工作。

#實驗室生物標本處理規(guī)程

##一、概述

生物標本是實驗室研究的重要基礎材料，其處理質量直接影響實驗結果的準確性和可靠性。本規(guī)程旨在規(guī)范實驗室生物標本的采集、保存、處理和存儲等環(huán)節(jié)，確保標本質量，保障實驗工作的順利進行。規(guī)程涵蓋了標本采集、固定、脫水、透明、硬化、包埋、切片等關鍵步驟，并規(guī)定了相應的質量控制措施。規(guī)范的標本處理流程有助于保持標本的原有結構、化學成分和生物學活性，為后續(xù)的觀察、分析和研究提供可靠依據。本規(guī)程適用于各類組織、細胞及其他生物材料在實驗室環(huán)境下的處理工作。

##二、標本采集

###（一）基本原則

1.**無菌操作原則**：標本采集過程中必須嚴格遵循無菌技術，使用無菌器械，操作環(huán)境需保持潔凈，以防止微生物污染標本，影響后續(xù)實驗結果。這包括操作前對雙手和工具的徹底消毒，以及在無菌條件下進行標本獲取。

2.**最小損傷原則**：采集工具應選擇鋒利、合適的型號，以減少對標本組織的機械損傷和擠壓，避免細胞破裂、組織結構變形或出血，確保獲取的標本能真實反映其原始狀態(tài)。

3.**按需采集原則**：根據具體的實驗目的和研究需求，精確計算并采集適量的標本。避免過度采集，不僅可減少樣本浪費，也能降低對供體（如動物）的潛在影響，并節(jié)約后續(xù)處理所需的試劑和設備資源。

###（二）操作步驟

1.**準備階段**

(1)**器械準備與消毒**：仔細檢查所有即將使用的采集器械（如手術刀、活檢鉗、注射器、培養(yǎng)皿等）是否完好無損，是否為一次性無菌器械或已按照規(guī)定進行高溫高壓滅菌（如121°C，15分鐘）。對于可重復使用的金屬器械，需徹底清潔并用合適的消毒劑處理。

(2)**固定液與輔助材料準備**：根據標本類型和后續(xù)處理流程，提前配制并檢查所需固定液（如10%中性甲醛緩沖液、4%多聚甲醛等）的濃度和體積是否準確，pH值是否在規(guī)定范圍內。準備好標簽、記號筆（防水）、標本袋、記錄本等輔助材料。

(3)**信息記錄與標識**：獲取標本前，必須準確記錄標本來源（如供體編號、組織部位、采集時間等）相關信息。立即在標本或其容器上粘貼帶有清晰、持久標識的標簽，確保在整個處理過程中標識不脫落、不模糊。

2.**采集過程**

(1)**定位與麻醉（如適用）**：準確找到目標采集部位。如果采集對象是活體生物（如動物），需根據實驗要求選擇合適的麻醉方式和方法，確保麻醉效果穩(wěn)定，減少采集過程中的應激反應對標本的影響。

(2)**消毒與鋪巾**：對采集部位進行徹底的消毒（如使用碘伏、酒精等），范圍要足夠大。鋪開無菌手術巾，建立無菌操作區(qū)域。

(3)**執(zhí)行采集**：按照預定方案使用無菌器械進行標本采集。例如，進行組織活檢時，應垂直進針，避免來回攪動；獲取細胞懸液時，需使用無菌吸管或采血管。采集過程中注意控制力度和深度，避免損傷周圍組織。

(4)**即時固定**：標本采集完成后，應立即將其完全浸入預冷的、足量的固定液中。對于較大或較深的標本，可能需要多次更換固定液以確保所有部分都能充分滲透。立即開始計時，記錄固定開始時間。

###（三）質量控制

1.**操作規(guī)范性檢查**：采集前后及過程中，操作人員需自查是否嚴格遵守無菌操作、最小損傷等原則。有條件時，應有經驗豐富的同事進行監(jiān)督或復核。

2.**標本完整性評估**：采集后初步觀察標本，檢查其大小、形狀、顏色是否與預期一致，有無明顯出血、破碎或污染。

3.**固定及時性確認**：確保標本在采集后規(guī)定時間內（通常為幾分鐘內）開始有效固定，并記錄固定時間，避免因固定延遲導致組織自溶或結構改變。

##三、標本固定

###（一）固定原則

1.**快速滲透原則**：固定液應具有高滲透壓和良好的流動性，能夠迅速且均勻地滲透到標本內部，尤其是在細胞和組織的深處，以有效固定細胞結構，防止其降解。

2.**結構保持原則**：選擇的固定液應盡可能減少對原生組織化學成分和結構的破壞，避免引起過度收縮、硬化、染色或溶解，力求保留標本最接近天然的形態(tài)。

3.**固定時間原則**：固定所需的時間取決于標本的類型（組織、細胞）、大小、形狀以及固定液的種類和濃度。必須根據文獻資料或預實驗結果，為不同類型的標本確定并嚴格遵守推薦的固定時間，以保證固定效果。

###（二）操作步驟

1.**固定液配制與檢查**

(1)**精確配制**：嚴格按照標準操作規(guī)程（SOP）或試劑說明書，使用分析天平稱量固定液固體成分，使用精確容量的移液器或容量瓶配制固定液。常見的固定液如10%中性緩沖甲醛（pH7.4）、4%多聚甲醛（用于免疫組化或原位雜交）、Bouin's液（用于一般組織學染色）等。確保溶劑（通常是水或特定緩沖液）的純度和溫度符合要求。

(2)**質量檢測**：在使用前，檢查固定液的澄清度、顏色（應無雜質沉淀或異常顏色）、以及pH值（使用pH計測量，必要時用緩沖液校準）。對于需要精確pH值的固定液（如甲醛緩沖液），必須使用合適的緩沖體系調節(jié)并維持pH穩(wěn)定。

2.**標本固定操作**

(1)**浸沒固定**：將采集好的標本放入盛有足量固定液的容器中，確保標本完全被固定液覆蓋，沒有氣泡附著在標本表面，以利于均勻固定。對于較大或形狀不規(guī)則的標本，可能需要適當支撐或晃動容器，幫助固定液流動和滲透。

(2)**控制環(huán)境**：將固定液容器置于適宜的環(huán)境中保存，通常是室溫或4°C冷藏（根據固定液種類和標本特性決定）。冷藏可以減緩固定反應速度，有時能更好地保存某些抗原性。避免高溫或陽光直射，這些條件可能加速固定液變質或影響標本。

(3)**記錄固定信息**：在標本標簽或記錄本上清晰記錄所用固定液名稱、濃度、pH值、配制日期、開始固定時間、固定溫度等信息。

###（三）質量控制

1.**固定液狀態(tài)監(jiān)控**：定期檢查固定液的狀態(tài)，有無沉淀、變色或渾濁。發(fā)現(xiàn)異常應及時處理或更換固定液。

2.**固定時間監(jiān)控**：嚴格遵守預定的固定時間?？赏ㄟ^設置定時提醒或記錄表來確保不遺漏或提前結束固定。

3.**固定效果初步評估**：在固定期間或固定結束后，可取出少量代表性標本進行初步檢查（如染色觀察），評估固定效果。理想的固定效果表現(xiàn)為組織收縮適度、細胞輪廓清晰、無明顯自溶跡象。

##四、標本處理

###（一）脫水

1.**脫水目的**：脫水的核心目的是逐步、完全地去除標本中所有的自由水，為后續(xù)的透明步驟做準備。自由水的存在會使標本密度降低，難以被透明劑替代，并可能導致組織變形或切片困難。

2.**脫水原則**：脫水過程應采用一系列濃度遞增的脫水劑（通常是酒精），使水分能夠緩慢、均勻地離開組織，同時盡量減少對組織結構的損傷。脫水劑的選擇和梯度設置需根據標本類型（如硬組織、軟組織、細胞）和后續(xù)處理要求（如石蠟包埋、樹脂包埋）來確定。

###（二）透明

1.**透明目的**：透明是指使用高折射率的透明劑（如二甲苯、苯甲苯或特定合成透明劑）替代組織中的水分，使標本變得與透明劑具有相近的折射率。這一步驟對于制作光學顯微鏡切片至關重要，可以消除組織與周圍介質（如水）的折射率差異，減少光線散射，提高圖像的清晰度和分辨率。

2.**透明劑選擇**：透明劑的選擇需考慮其對組織的滲透能力、與后續(xù)包埋劑的兼容性、以及對環(huán)境的影響。傳統(tǒng)上常用二甲苯，但因其毒性較高，現(xiàn)在也常用毒性較低的替代品。

###（三）硬化

1.**硬化目的**：硬化的主要目的是增強標本的整體硬度和脆性，使其能夠承受后續(xù)切片過程中產生的機械應力，不易破碎，從而獲得連續(xù)、完整的組織切片。這對于需要制作較厚切片或硬組織的標本尤為重要。

2.**硬化劑選擇**：常用的硬化劑是酒精（乙醇），通常以不同濃度梯度進行。有時也會結合使用其他硬化劑，如福爾馬林，以達到更好的硬化效果。

###（四）包埋

1.**包埋目的**：包埋是將處理后的標本固定在一個堅硬且具有良好透光性的基質（包埋塊）中。這樣做有多個目的：一是提供機械支撐，使標本在切片過程中保持穩(wěn)定和完整；二是將分散的標本組織整合成塊，便于定位和連續(xù)切片；三是作為載體制備切片，方便后續(xù)染色和觀察。

2.**包埋材料選擇**：根據后續(xù)的應用，選擇合適的包埋材料。最常用的是石蠟（ParaffinWax），適用于大多數常規(guī)組織學染色。對于需要更高分辨率或進行特殊顯微鏡技術（如電鏡）觀察的標本，則選擇樹脂包埋劑（如環(huán)氧樹脂、丙烯酸樹脂）。不同包埋材料的熔點、硬度、對組織的滲透性等特性各不相同，需根據實驗需求選擇。

3.**包埋操作**：將處理好的標本（通常是經過脫水和透明步驟的）放入預熱至合適熔點的包埋材料中，使用包埋模具將其塑形，待包埋材料完全冷卻凝固后，即制成包埋塊。

##五、標本存儲

###（一）存儲條件

1.**溫度控制**：標本存儲環(huán)境應保持相對恒定的低溫，通常為4°C冷藏或-20°C冷凍。冷藏可以減緩后續(xù)處理步驟中的化學反應速率，延長某些試劑（如固定液）的有效期，并有利于脫水等過程的進行。冷凍則能更徹底地保存生物活性（如果適用），或長期保存未處理的原始標本。不同階段的標本或試劑可能需要不同的存儲溫度。

2.**濕度控制**：存儲環(huán)境應相對干燥，避免濕度過高導致標本霉變或試劑水解。對于需要干燥存儲的試劑