共識(2025版)地中海貧血(地貧)是一種高發(fā)的遺傳性血紅蛋白病，全球約有3.5億人為地貧基因致病變異攜帶者，我國南方地區(qū)攜帶率高達10%~25%。通過血液學篩查、熱點變異檢測以及基于其他技術的罕見型地貧基因檢測的"多層級序貫篩診"模式在地貧防控中取得了顯著的成效，但其流程冗繁、受檢者及醫(yī)療成本高、咨詢壓力大，存在明顯的局限性。單分子實時測序技術以其長讀長和準確識別堿基序列的優(yōu)點，不僅能夠拓寬地貧基因變異檢測的范圍，還能夠直接確定α-和β-珠蛋白基因的單體型和結構重排，顯著提高檢出率，降低誤檢和漏檢率，對于改進地貧基因檢測具有革命性意義。隨著技術的成熟和成本的下降，單分子實時測序在地貧防控中的應用越來越廣泛，目前已積累超過50項臨床研究和30萬例臨床應用數(shù)據(jù)。本共識基于這些循證證據(jù)，通過探討單分子實時測序在臨床地貧基因檢測中的應用范圍、操作流程及局限性，為臨床醫(yī)師、實驗室人員和政策制定者提供參考和指導，助力全生命周期的地貧精準防控。地中海貧血(thalassemia,以下簡稱地貧)是指由于珠蛋白基因變異引起的一種或多種珠蛋白肽鏈合成障礙導致的遺傳性溶血性貧血，呈常染色體隱性遺傳，是全球患病人數(shù)最多的單基因病之一。根據(jù)珠蛋白鏈的受損情況，地貧主要分為由α-珠蛋白基因簇中的HBA2常在妊娠23~38周在宮內(nèi)或分娩后半小時內(nèi)死亡。β-地貧的臨床型和重型。中間型β-地貧患兒通常在2歲之后發(fā)病，表現(xiàn)為中至重度的溶血性貧血，而重型β-地貧患兒通常在出生后3～6個月內(nèi)發(fā)病，其生存依賴于輸血治療。當α基因重復(可通過輸血治療或骨髓移植治療，其年均醫(yī)療費用分別為10萬元和40萬元左右，不僅給罹患疾病家庭造成巨大的經(jīng)濟壓力，也對社會的前提下，可將單分子實時測序作為地貧基因檢測方法的選項。對于地貧高發(fā)地區(qū)的孕前或孕早期夫婦，在充分知情的前提下，可將單分子實時測序作為一線的攜帶者篩查方法供其選擇。(2)產(chǎn)前診斷：對具有重型地貧生育高風險、有介入性產(chǎn)前診斷需求的家庭，在充分知情的前提下，可將單分子實時測序作為產(chǎn)前診(3)新生兒篩查：對于地貧高發(fā)地區(qū)的新生兒，在其父母充分知情的前提下，可將單分子實時測序作為地貧基因的檢測方法供其選擇。(4)患者診斷：對于血常規(guī)或血紅蛋白電泳篩查結果為陽性的新生兒、兒童、成人或家庭成員，可將單分子實時測序作為一線的地貧基因檢測方法供其選擇。對于近期曾接受全血、白細胞成分輸血或者造血干細胞移植的就診者，直接檢測外周血樣可能會影響地貧基因檢測結果的準確性。對于全血或白細胞成分輸血者，建議采集其他組織細胞、如口腔黏膜脫落細胞等進行檢測，或在4~6個月后采集外周血樣送檢。對接受過骨髓造血干細胞移植者，建議采集其他組織細胞、如口腔黏膜脫落細胞等進行檢測，不建議通過外周血進行地貧基因檢測。1.3檢測變異范圍【推薦意見2】單分子實時測序技術應明確檢測中國人群α-和β-地貧致病性明確的熱點變異(在對應類型總陽性位點中占比≥1%)和常見變異(在對應類型總陽性位點中占比<1%且≥0.1%)(表1)。(投票專家54人，贊成53票、反對1票、棄權0票)俗名HGVS命名a-珠蛋白基因熱點NC_000016.10:g.173384_177187del熱點NC_000016.10:g.169818_174075del熱點NC_000016.10:g.165401_184701del_THAINC_000016.10:g.149863_183312dela熱點熱點熱點熱點NC_000016.10:g.173384-177187熱點NC_000016.10:g.169818_174075dup熱點NC_000011.10:g.5169918_5248821dβ缺失NC_000011.10;g.5201647_5229059d熱點熱點β熱點熱點3珠蛋白基因熱點熱點β3HBB:c.130G>T【推薦意見3】單分子實時測序技術建議檢測中國人群α-和β-0.1%)。(投票專家54人，贊成54票、反對0票、棄權0票)導致血液學表型異常的變異。(投票專家54人，贊成53票、反對0票、棄權1票)HBG2、HBS1L-MYB、BCL11A、KLF1等，用于表型-基因型不符，需揭示調(diào)控區(qū)變異及修飾基因的協(xié)同致病機制的疑難地貧病例。(投票專家54人，贊成52票、反對0票、棄權2票)(1)α-和β-珠蛋白基因的熱點變異和常見變異中國人群α-和β-珠蛋白基因的熱點變異和常見變異如表1所示。α-珠蛋白基因的10個熱點變異和常見變異的檢出數(shù)約占α-珠蛋白基因總陽性位點檢出數(shù)的95%,β-珠蛋白基因的14個熱點變異和常見變異檢出數(shù)約占β-珠蛋白基因總陽性位點檢出數(shù)的98%。(2)α-和β-珠蛋白基因的罕見變異中國人群α-和β-珠蛋白基因的罕見變異分別占其總陽性位點檢出數(shù)的5%和2%。由于地貧高發(fā)地區(qū)基因變異的整體攜帶率高，檢測罕見變異類型也具有重要的價值。臨床發(fā)現(xiàn)的部分罕見變異如表2所示。值得注意的是，單分子實時測序和傳統(tǒng)的基于PCR方法的隊列研究及臨床實踐表明，傳統(tǒng)的β-地貧檢測方法覆蓋的部分點突變?nèi)绾虲D37(TGG>TGA)(HBB:c.114G>A)非常罕見(在β-地貧所有陽性位點中占比<0.01%)。表2中國人群a-和β-珠蛋白基因的部分罕見變異類別俗名HGVS命名α珠蛋白基因罕見a27.6NC_000016.10:g.1a罕見-a2-4NC_000016.10:g.175996_178389del罕見aMAL3.3NC_000016.10:g.171882_175438dela罕見_4.6NC_000016.10:g.144215_188841del罕見_FL.NC_000016.10:g.151641_182316del罕見_27.3NC_000016.10;g.158664_185974delNC_000016.10:g.153510_175436delinsGGGAAGGGTGGG罕見CD40(AAG>AA-)罕見CD59(GGC>CGC)HBA2:c.178G>Cc罕見CD90-92(-AGCTTCGG)HBA2:c.272_279delAGCTTC罕見CD104(TGC>TAC)HBAl:c.314G>Aa罕見CD119(CCT>TCT)HBA1:c.358C罕見aaaam.7NC_000016.10:g.173384-177187dup[3]罕見aaaomm1.2NC_000016.10:g.169818_174075dup[3]罕見aHKaaNC_00001β缺失罕見3.5kb_delNC_000011.10:g.5224302_5227791dβ缺失β融合罕見Filipino_delNC_000011.10:g.5112882_5231358delβ缺失β缺失罕見4.9kb_delNC_000011.10:g.5226187_5231089dβ缺失罕見-90(C>T)HBB:c.-14ββ罕見CD30(AGG>GGG)HBB:c.91A>Gββ珠蛋白基因罕見CD37(TGG>TAG)HBB:c.113G>Aβ罕見IVS-1-5(G>C)罕見CD126(GTG>GGG)HBB:c.380T>G非常罕見CAP+1(A>C)β非常罕見-32(C>A)非常罕見-30(T>C)非常罕見IVS-1-1(G>Aβ非常罕見IVS-1-5(G>C非常罕見CD31(CTG>-TG)HBB:c.94delC非常罕見CD37(TGG>TGA)HBB:c.114G>Aβ融合δ-珠蛋白基因的變異通常不會導致小細胞低色素的表型，但會降低HbA2的表達。當合并β-地貧時，δ-地貧可能會掩蓋β-地貧引起的HbA2升高，從而導致漏檢，因此檢測δ一珠蛋白基因的變異也具有重要的臨床意義。中國人群δ-珠蛋白基因的熱點變異包括CD116(CGC>TGC)(HBD:c.349C>T);常見變異包括-68(C>T)(HBD:IVS-II-897(A>C)(HBD:c.316-2A>C);罕見變異包括c.425T>C)、CD142(GCT>GT二、檢測前咨詢與知情同意在采用單分子實時測序技術進行地貧基因檢測之前，應為就診者或其家屬提供詳細的遺傳咨詢，了解其家族史、患病史及檢測的目的，告知檢測的必要性、流程、可能的結果及意義，包括檢測的適用范圍、目標疾病、檢測方法、費用、檢測周期、局限性及相關風險等。應告知檢測后可能需要的進一步檢查和隨訪，以及可能影響檢測結果的因素，如樣本采集和處理過程中的注意事項等，其要點包括：(1)應充分了解就診者或夫婦雙方的籍貫、既往史、孕產(chǎn)史、家族史、可疑的地貧臨床指征和實驗室檢查結果等信息，以準確判斷其是否屬于適用人群；(2)應向就診者及其親屬詳細說明檢測的意義、適用人群、檢測范圍、檢測方法與流程、費用、準確性、局限性、檢測周期、相關風險等信息，并告知檢測后遺傳咨詢與后續(xù)可提供的干預方案，如胚胎植入前遺傳學檢測、產(chǎn)前診斷等。在產(chǎn)前診斷時，應強調(diào)排除母源污染以及陽性結果需通過兩種檢測方法確認的重要性，并提醒即使檢測結果無明顯異常，仍無法完全排除胎兒患地貧之外的其他疾病的可能性，孕婦需定期接受常規(guī)的產(chǎn)前檢查，完成對于其他疾病的系統(tǒng)性篩查，確保實現(xiàn)對胎兒健康狀況的全面評估；(3)應向患者強調(diào)可能檢出無癥狀攜帶者。這類個體雖無罹患地貧的風險，但其后代可能攜帶地貧基因變異，應告知其接受遺傳咨詢(4)應向孕婦及其親屬說明可能影響檢測結果的因素；(5)應告知孕婦醫(yī)療機構或檢測機構將對其妊娠結局進行隨訪；(6)應向就診者承諾檢測數(shù)據(jù)將僅用于醫(yī)學目的，并嚴格保護個人隱私，避免基因歧視；【推薦意見6】單分子實時測序技術在臨床地貧檢測中應遵循標反對0票、棄權0票)【推薦意見7】單分子實時測序檢測到的地貧變異解讀建議參考LOVD-China、HbVar、Ithanet、LOVD、《α-地中海貧血的臨床專家54人，贊成54票、反對0票、棄權0票)【推薦意見8】當出現(xiàn)不同數(shù)據(jù)庫對地貧基因變異致病性評級不變異的致病性。(投票專家54人，贊成54票、反對0票、棄權0票)本類型的溫控條件進行包裝和運輸(表3),以確保樣本的質量。EDTA抗凝管，1～2mL,充分顛倒混勻不超過72h放置于4℃~8℃暫存，長期保存需-20℃凍存直徑超過8mm×3mm的不超過72h0℃以下保存不超過72h不超過72hEDTA抗凝管，1～2mL,充分顛倒混勻不超過72h新采集的臍帶血樣本可直接寄出或放置