腹腔積液診斷卵巢漿液性癌的細(xì)胞病理學(xué)特征分析2026性癌(serousovariancarcinoma,SOC)占上皮性卵巢癌的75%,好發(fā)腹脹等癥狀，或無明顯不適僅自覺腹圍異常增且伴隨廣泛轉(zhuǎn)移，手術(shù)不能完全切除。有研究顯示，17.7%的低級別漿液性癌(low-gradeserousovariancarcinoma,LGSOC)和91.8%的高級別漿液性癌(high-grade會出現(xiàn)惡性腹腔積液。因此，在難以獲得組織學(xué)本研究中，我們分別對5例LGSOC和27例HGSOC的腹腔積液的細(xì)胞變進(jìn)行比較，旨在提高細(xì)胞病理醫(yī)師對該病的1.漿膜腔積液標(biāo)本的采集：收集2015年1月至2021年7月南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫人民醫(yī)院經(jīng)腹腔積液細(xì)胞病理學(xué)診斷為SOC的細(xì)胞學(xué)標(biāo)本32例，其他類型浸潤性腺癌腹腔積液標(biāo)本21例(胃腸道腺癌10例，胰腺導(dǎo)管腺癌5例，肺腺癌6例),良性間皮增生腹腔積液標(biāo)本4例，惡性間皮瘤標(biāo)本4例(胸腔積液2例，腹腔積液1例，心包積液1例)。漿膜腔積液標(biāo)本由臨床醫(yī)師采集。2.漿膜腔積液標(biāo)本的細(xì)胞病理學(xué)檢測方法：將漿膜腔積液離心后取沉淀物涂片，經(jīng)95%乙醇固定后行HE染色，光鏡下觀察其形態(tài)學(xué)特點。剩余標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定后制成細(xì)胞沉渣包埋蠟塊，4μm厚切片，行常規(guī)HE染色和免疫細(xì)胞化學(xué)染色，光鏡下觀察其形態(tài)學(xué)特點和各種蛋白的表達(dá)情況。免疫細(xì)胞化學(xué)染色采用EnVision二步法，所用一抗包括廣譜細(xì)胞角蛋白單克隆抗體AE1/AE3、糖類抗原125(carbohydrateantigen125,CA125)、細(xì)胞角蛋白7(keratin7,CK7)、細(xì)胞角蛋白20(keratin20,CK20)、villin、配對盒基因8(pairedboxgene8,PAX-8)、抑癌基因p53、腎母細(xì)胞瘤基因1(Wilm's(thyroidtranscriptionactor1,TTF1)、糖類抗原19-9(carbohydrateantigen19-9,CA19-9)、上皮細(xì)胞膜抗原(epithelialmembraneantigen,EMA)。試劑均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，根據(jù)抗體說明書和實驗規(guī)范進(jìn)行操作。漿膜腔積液標(biāo)本均經(jīng)2位及以上高年資細(xì)胞學(xué)病理醫(yī)師重新閱片，并與相應(yīng)臨床科室高年資醫(yī)師共同商討確診。3.血液樣本的采集和血清腫瘤標(biāo)志物的檢測：抽取患者空腹肘靜脈血5ml,置于未加抗凝劑的試管中，室溫下靜置30min,3000r/min離心10min分離血清。使用羅氏E170全自動電化學(xué)發(fā)光儀和配套試劑盒檢測血清腫瘤標(biāo)志物CA125、癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)和CA19-9的水平。各血清腫瘤標(biāo)志物的臨界參考值：CA1ng/ml,CA19-937U/ml。如患者的檢腹腔積液的常規(guī)和生化檢查結(jié)果、診療經(jīng)過和影像學(xué)檢查圖像等。5.統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料采用Fisher1.SOC的臨床特征：32例SOC患者中，5例為LGSOC,年齡42~63歲，中位年齡54歲；27例為HGSOC,年齡40~76歲，中位年齡66歲。LGSOC患者中，2例就診時主訴體檢發(fā)現(xiàn)腹水及附件區(qū)腫塊11例下腹不適兩月余，1例腹脹伴惡性嘔吐1d,1例腹脹伴進(jìn)行性加重1月余。5例患者一般情況均良好，可耐受手術(shù)治療，腹腔積液中查見腫瘤細(xì)胞后行卵巢癌腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，術(shù)后病理診斷為LGSOC。27例HGSOC中，6例就診時主訴體檢發(fā)現(xiàn)腹腔積液及附件區(qū)占位1~2周，其余21例腹脹、腹痛1月至半年。18例患者一般情況良好，腹腔積液中查見腫瘤細(xì)胞后行卵巢癌腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，9例患者接受術(shù)前化療后行卵巢癌腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，術(shù)后病理診斷均為HGSOC。32例SOCCT檢查均顯示附件區(qū)占位及腹腔積液(圖1)。2.SOC患者血清腫瘤標(biāo)情況見表1。29例(90.6%)SOC患者血清CA125增高，但與納入研究的非卵巢原發(fā)病變患者間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05);9例胃腸道腺癌和5例肺腺癌患者血清CEA陽性，陽性率高于SOC患者(均P<0.001);5例胃腸道腺癌和5例胰腺導(dǎo)管腺癌患者血清CA19-9陽性，陽性率高和CA19-9均在正常范圍內(nèi)。3.SOC腹腔積液的細(xì)胞涂片特點：SOC患者腹腔穿刺液常規(guī)及生化檢查均提示為滲出液，其中26例為血性積液。(1)LGSOC:腫瘤細(xì)胞聚集成小簇或微乳頭狀，細(xì)胞輕一中度異型。細(xì)胞核大小較一致，橢圓形或圓形，核染色質(zhì)較細(xì)膩，1例核分裂象計數(shù)約為1個/10高倍視野(high-powerfield,HPF),余4例均未見明確核分裂象。2例可見砂礫體，背景細(xì)胞較少，為淋巴細(xì)胞和組織細(xì)胞，且以淋巴細(xì)胞為主(圖2)。(2)HGSOC:腫瘤細(xì)胞多聚集，呈不規(guī)則巢團(tuán)狀、乳頭狀及梅花狀結(jié)構(gòu)，同時也可見散在的腫瘤細(xì)胞核增大明顯，且大小不等，可相差3倍以上，核形不規(guī)則，核染色質(zhì)粗，可見雙核、多核，部分可見核仁，27例HGSOC患者均可見核分裂象(核分裂象計數(shù)3~9個/10HPF,中位數(shù)為5個/10HPF),細(xì)胞質(zhì)多少不一，常見分泌空泡。有6例可見砂礫體。背景細(xì)胞較多，為組織細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，且以組織細(xì)胞為主(圖3)。LGSOC和HGSOC腹腔積液腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)形態(tài)特征見表2。4.SOC腹腔積液的細(xì)胞蠟塊特點：經(jīng)離心沉學(xué)形態(tài)。LGSOC乳頭狀結(jié)構(gòu)明顯，細(xì)胞團(tuán)周圍多有空白裂隙(圖4)。HGSOC的腫瘤細(xì)胞多排列成梅花狀或乳頭狀，并見較多散在腫瘤細(xì)胞，部分患者可見核仁及砂礫體(圖5)。免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，所有WT1,不表達(dá)CK20、villin和calretinin;p53在所有LGSOC中呈局灶陽性；27例HGSOC中，23例(85.2%)患者腫瘤細(xì)胞p53呈彌漫陽性表達(dá)，4例表達(dá)陰性(圖6,表2)。5.與SOC細(xì)胞學(xué)形態(tài)相似的非卵腫瘤細(xì)胞體積較大，胞質(zhì)較豐富，核異型性明顯，因胞質(zhì)內(nèi)有黏液分泌，所以胞核常偏位，核分裂象易見。其中6例患者的腹腔積液中腫瘤細(xì)胞呈團(tuán)片狀聚集，立體感明顯，4例腹腔積液中腫瘤細(xì)胞間黏附性差，多數(shù)腫瘤細(xì)胞單個散在分布，細(xì)胞間大小差異大，可達(dá)3倍以上，見印戒樣細(xì)胞(圖7)。(2)胰腺導(dǎo)管腺癌：腹腔積液中腫瘤細(xì)胞呈柱狀細(xì)胞形態(tài)，多聚CA19-9呈強(qiáng)陽性表達(dá)(圖8)。(3)肺腺癌：6例患者均有惡性胸腔和腹腔積液，且均有肺腺癌手術(shù)切除史。腹腔積液性表達(dá)(圖9)。與SOC細(xì)胞學(xué)形態(tài)相似的非卵巢起源腺癌與SOC細(xì)胞學(xué)特征比較見表3。6.與SOC細(xì)胞學(xué)形態(tài)相似的間皮源性病變的細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)大小規(guī)則，邊界模糊，核圓形或卵開窗現(xiàn)象(圖10)。(2)惡性間皮瘤：腫瘤細(xì)胞排列成球狀、乳頭狀、腺腔樣及梅花狀，腫瘤細(xì)胞團(tuán)外緣呈裙邊樣，細(xì)胞核增質(zhì)比增高，可出現(xiàn)雙核、多核細(xì)胞，常見核仁及核分裂象，calretinin、WT1和EMA陽性表達(dá)(圖11)。與SOC細(xì)胞學(xué)形態(tài)相似的間皮源性病變與SOC細(xì)胞學(xué)特征比較見表3。SOC發(fā)病隱匿，多數(shù)患者在就診時已是晚期，且超過1/3的患者在就診的操作，且放腹水可減輕患者腹痛、腹脹癥狀，多為治療所需，不增加患就成為患者進(jìn)行病理診斷的唯一標(biāo)本來源。CA125是目前臨床應(yīng)用最廣增高，但與納入研究的非卵巢來源的惡性腫外，SOC患者的血清CEA和CA19-9均處于正常范圍，而胃腸道腺癌-9升高。因此，腫瘤標(biāo)志物對SOC的診斷有一定提示作用，但并不能價值和可行性。2014年世界衛(wèi)生組織提出了SOC的兩級分級系統(tǒng)，將SOC分為LGSOC和HGSOC,該分級系統(tǒng)對SOC的臨床治療及預(yù)后評體的分級標(biāo)準(zhǔn)，需要在臨床實踐中進(jìn)一步分析總結(jié)。本研究結(jié)果顯示，則巢團(tuán)狀、乳頭狀或梅花狀結(jié)構(gòu)，同時也可見較多散在分布的腫瘤細(xì)胞。此外，LGSOC中背景細(xì)胞較少，且以淋巴細(xì)胞為主，而HGSOC中背景核仁及核分裂象。SOC的兩級分級系統(tǒng)是在組織病理的基礎(chǔ)上建立的，在SOC組織中，LGSOC細(xì)胞核輕一中度異型，核分裂象通常為3~5個/10HPF;HGSOC細(xì)胞核重度異型，核分裂象通常>12個/10HPF。在本研究中，5例LGSOC腹腔積液的細(xì)胞學(xué)涂片中僅有1例找到了核分裂象，27例HGSOC腹腔積液的細(xì)胞學(xué)涂片核分裂象計數(shù)均<12個/10HPF。產(chǎn)生該現(xiàn)象的原因尚不明確，我們推測可能與脫落至腹腔腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境發(fā)生改變，從而增殖受到抑制學(xué)診斷中，核分裂象計數(shù)對于鑒別LGSOC與HGSOC而細(xì)胞核的異型性是SOC分級的關(guān)鍵，這與Seidman等和Vang等的因此，與組織病理學(xué)相似，p53在LGSOC中呈局灶陽性表達(dá)，而在為血性，涂片背景細(xì)胞多為組織細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。但LGSOC患者腹胞較多，且以組織細(xì)胞為主。腫瘤性腹腔積癌細(xì)胞相似。此外，反應(yīng)性的間皮細(xì)胞也會出現(xiàn)前癌相鑒別。腺癌是惡性腹腔積液中最常見的病理積液中腫瘤標(biāo)志物CEA常升高。腫瘤細(xì)胞異型性大，因細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有黏液，所以胞核常偏位，可資鑒別。鑒別困難時可輔以免疫細(xì)胞化學(xué)檢測，胃腸道腺癌常表達(dá)CK7、CK20、villin和CDX-2等，而SOC多表達(dá)排列緊密，呈腺樣或乳頭狀結(jié)構(gòu)。血清及腹腔積液性，而villin為陰性，CK20在胰腺導(dǎo)管腺癌中的陽性表達(dá)率為23%,而其呈小乳頭狀排列為主時，從細(xì)胞形態(tài)學(xué)上與肺