共識(shí)(2025版)地中海貧血(地貧)是一種高發(fā)的遺傳性血紅蛋白病，全球約有3.5億人為地貧基因致病變異攜帶者，我國(guó)南方地區(qū)攜帶率高達(dá)10%~25%。通過(guò)血液學(xué)篩查、熱點(diǎn)變異檢測(cè)以及基于其他技術(shù)的罕見型地貧基因檢測(cè)的"多層級(jí)序貫篩診"模式在地貧防控中取得了顯著的成效，但其流程冗繁、受檢者及醫(yī)療成本高、咨詢壓力大，存在明顯的局限性。單分子實(shí)時(shí)測(cè)序技術(shù)以其長(zhǎng)讀長(zhǎng)和準(zhǔn)確識(shí)別堿基序列的優(yōu)點(diǎn)，不僅能夠拓寬地貧基因變異檢測(cè)的范圍，還能夠直接確定α-和β-珠蛋白基因的單體型和結(jié)構(gòu)重排，顯著提高檢出率，降低誤檢和漏檢率，對(duì)于改進(jìn)地貧基因檢測(cè)具有革命性意義。隨著技術(shù)的成熟和成本的下降，單分子實(shí)時(shí)測(cè)序在地貧防控中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，目前已積累超過(guò)50項(xiàng)臨床研究和30萬(wàn)例臨床應(yīng)用數(shù)據(jù)。本共識(shí)基于這些循證證據(jù)，通過(guò)探討單分子實(shí)時(shí)測(cè)序在臨床地貧基因檢測(cè)中的應(yīng)用范圍、操作流程及局限性，為臨床醫(yī)師、實(shí)驗(yàn)室人員和政策制定者提供參考和指導(dǎo)，助力全生命周期的地貧精準(zhǔn)防控。地中海貧血(thalassemia,以下簡(jiǎn)稱地貧)是指由于珠蛋白基因變異引起的一種或多種珠蛋白肽鏈合成障礙導(dǎo)致的遺傳性溶血性貧血，呈常染色體隱性遺傳，是全球患病人數(shù)最多的單基因病之一。根據(jù)珠蛋白鏈的受損情況，地貧主要分為由α-珠蛋白基因簇中的HBA2基因(OMIM*141850)和/或HBA1基因(OMIM*1有關(guān)。α-地貧的臨床表現(xiàn)隨α-珠蛋白基因HbH)病和HbBart's水腫胎綜合征。HbH病又稱為中間型α-地貧，常在妊娠23~38周在宮內(nèi)或分娩后半小時(shí)內(nèi)死亡。β-地貧的臨床型和重型。中間型β-地貧患兒通常在2歲之后發(fā)病，表現(xiàn)為中至重度的溶血性貧血，而重型β-地貧患兒通常在出生后3~6個(gè)月內(nèi)發(fā)病，其生存依賴于輸血治療。當(dāng)α基因重復(fù)(如α-三聯(lián)體、α-四聯(lián)更嚴(yán)重的貧血癥狀。根據(jù)《中國(guó)地中海貧血藍(lán)皮書》,重型地貧患者可通過(guò)輸血治療或骨髓移植治療，其年均醫(yī)療費(fèi)用分別為10萬(wàn)元和40萬(wàn)元左右，不僅給罹患疾病家庭造成巨大的經(jīng)濟(jì)壓力，也對(duì)社會(huì)我國(guó)長(zhǎng)江以南為地貧高發(fā)區(qū)域，其中以廣西、海南和廣東最為嚴(yán)重，其地貧基因變異攜帶率分別高達(dá)25%、21%和19%。目前我國(guó)已在南方10個(gè)高發(fā)省份開展了政府指導(dǎo)下的地貧防控服務(wù)項(xiàng)目。然而，由于人口流動(dòng)，我國(guó)北方及絲綢之路沿線的新疆、北京、河南等地也有地貧病例的報(bào)道。近期的一項(xiàng)研究表明，北京的貧血孕婦地貧變異攜帶率高達(dá)16%,且攜帶者中籍貫為北方地區(qū)的孕婦占比高達(dá)63%。由于北方地區(qū)臨床尚未常規(guī)開展地貧基因篩查，部分地貧攜帶者可因?yàn)E用鐵劑而導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷、妊娠期糖尿病等并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)?；诒狈降貐^(qū)特定的血液病譜特征，針對(duì)貧血的孕婦及兒童，可考慮在啟動(dòng)補(bǔ)鐵治療前實(shí)施地貧基因篩查，以避免醫(yī)源性鐵過(guò)載的發(fā)生。當(dāng)前地貧防控的策略是基于”多層級(jí)序貫篩診"模式，即首先采取基于血液學(xué)表型的篩查技術(shù)，以全血細(xì)胞分析和血紅蛋白電泳分析作為主要的篩查指標(biāo)，之后采用跨越斷裂點(diǎn)PCR(Gap-PCR)、PCR-反向點(diǎn)雜交法(PCR-reversedotblotting,PCR-RDB)、多重連接探針擴(kuò)增(multipleligation-dependentprobeamplification,MLPA)、對(duì)血液學(xué)指標(biāo)篩查陽(yáng)性的樣本進(jìn)行檢測(cè)以確定其基因型。盡管上述篩診策略的實(shí)施已使地貧防控工作取得了顯著成效，但由于珠蛋白基因具有重復(fù)性序列且變異類型復(fù)雜多樣，運(yùn)用該策略防控地貧流程冗繁，可因反復(fù)就診造成受檢者和醫(yī)療人工成本高、咨詢壓力大，血液學(xué)表型陰性的個(gè)體容易因表型陰性而漏掉后續(xù)的基因檢測(cè)，包括"靜止型aaaαanti3.7等)的攜帶者以及罕見的結(jié)構(gòu)變異。因此，該策略具有了來(lái)自全國(guó)14個(gè)省市自治區(qū)51個(gè)單位、具有醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)、臨床遺傳學(xué)、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、兒科學(xué)等背景的專家，按照專業(yè)背景進(jìn)行分組討論和撰寫工作。首先確定了需要解決的關(guān)鍵臨床問(wèn)題，包括地貧基因篩查、診斷以及遺傳咨詢中的常見問(wèn)題等。為確保共識(shí)的科學(xué)性和實(shí)用性，專家推薦意見參考了國(guó)際實(shí)踐指南報(bào)告規(guī)范(reportingitemsforpracticeguidelinesinhealthcare,RIGHT),同時(shí)進(jìn)行了系統(tǒng)的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)檢索，檢索的數(shù)據(jù)庫(kù)包括PubMed、WebofScience、EMbase、中國(guó)知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、維普數(shù)據(jù)庫(kù)等，檢索詞包括"地中海貧血""頻率""攜帶率""突變譜""基因型""中國(guó)"等，檢索年限為2000年至今。并通過(guò)德爾菲(Delphi)法進(jìn)行了匿名投票和反饋，以確保各項(xiàng)推薦意見至少獲得50%的贊同比例，且持反對(duì)意見者的比例低于20%。最終形成的推薦意見經(jīng)過(guò)全體協(xié)作組成員的共同審議和確認(rèn)。本共識(shí)旨在為臨床醫(yī)師、實(shí)驗(yàn)室人員和政策制定者提供規(guī)范化指導(dǎo)，助力地貧全生命周期的精準(zhǔn)防控。【推薦意見1】單分子實(shí)時(shí)測(cè)序技術(shù)可用于地貧攜帶者篩查、產(chǎn)前診斷、新生兒篩查以及患者診斷，以滿足臨床對(duì)地貧基因進(jìn)行快速、準(zhǔn)確檢測(cè)的需求。(投票專家54人，贊成54票、反對(duì)0票、棄權(quán)0票)(1)攜帶者篩查：對(duì)于血液學(xué)指標(biāo)高風(fēng)險(xiǎn)(血常規(guī)檢查顯示小細(xì)胞低色素或血紅蛋白電泳結(jié)果異常)的孕前或孕早期夫婦，在充分知情的前提下，可將單分子實(shí)時(shí)測(cè)序作為地貧基因檢測(cè)方法的選項(xiàng)。對(duì)于地貧高發(fā)地區(qū)的孕前或孕早期夫婦，在充分知情的前提下，可將單分子實(shí)時(shí)測(cè)序作為一線的攜帶者篩查方法供其選擇。(2)產(chǎn)前診斷：對(duì)具有重型地貧生育高風(fēng)險(xiǎn)、有介入性產(chǎn)前診斷需求的家庭，在充分知情的前提下，可將單分子實(shí)時(shí)測(cè)序作為產(chǎn)前診(3)新生兒篩查：對(duì)于地貧高發(fā)地區(qū)的新生兒，在其父母充分知情的前提下，可將單分子實(shí)時(shí)測(cè)序作為地貧基因的檢測(cè)方法供其選擇。(4)患者診斷：對(duì)于血常規(guī)或血紅蛋白電泳篩查結(jié)果為陽(yáng)性的新生兒、兒童、成人或家庭成員，可將單分子實(shí)時(shí)測(cè)序作為一線的地貧基因檢測(cè)方法供其選擇。對(duì)于近期曾接受全血、白細(xì)胞成分輸血或者造血干細(xì)胞移植的就診者，直接檢測(cè)外周血樣可能會(huì)影響地貧基因檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。對(duì)于全血或白細(xì)胞成分輸血者，建議采集其他組織細(xì)胞、如口腔黏膜脫落細(xì)胞等進(jìn)行檢測(cè)，或在4~6個(gè)月后采集外周血樣送檢。對(duì)接受過(guò)骨髓造血干細(xì)胞移植者，建議采集其他組織細(xì)胞、如口腔黏膜脫落細(xì)胞等進(jìn)行檢測(cè)，不建議通過(guò)外周血進(jìn)行地貧基因檢測(cè)。1.3檢測(cè)變異范圍【推薦意見2】單分子實(shí)時(shí)測(cè)序技術(shù)應(yīng)明確檢測(cè)中國(guó)人群α-和β-地貧致病性明確的熱點(diǎn)變異(在對(duì)應(yīng)類型總陽(yáng)性位點(diǎn)中占比≥1%)和常見變異(在對(duì)應(yīng)類型總陽(yáng)性位點(diǎn)中占比<1%且≥0.1%)(表1)。(投票專家54人，贊成53票、反對(duì)1票、棄權(quán)0票)表1中國(guó)人群a-和β-珠蛋白基因的熱點(diǎn)及常見變異俗名HGVS命名a-珠蛋白基因熱點(diǎn)NC_000016.10:g.173384_177187del熱點(diǎn)NC_000016.10:g.169818_174075del熱點(diǎn)NC_000016.10:g.165401_184701delNC_000016.10:g.149863_183312del熱點(diǎn)熱點(diǎn)熱點(diǎn)a熱點(diǎn)NC_000016.10:g.173384-177187熱點(diǎn)NC_000016.10:g.169818_174075dup熱點(diǎn)NC_000011.10:g.5169918_5248821dβ缺失NC_000011.10:g.5201647_5229059dβ缺失熱點(diǎn)熱點(diǎn)熱點(diǎn)熱點(diǎn)β珠蛋白基因熱點(diǎn)熱點(diǎn)HBB:c.130G>T【推薦意見3】單分子實(shí)時(shí)測(cè)序技術(shù)建議檢測(cè)中國(guó)人群α-和β-珠蛋白基因致病性明確的罕見變異(在對(duì)應(yīng)類型總陽(yáng)性位點(diǎn)中占比<0.1%)。(投票專家54人，贊成54票、反對(duì)0票、棄權(quán)0票)導(dǎo)致血液學(xué)表型異常的變異。(投票專家54人，贊成53票、反對(duì)0票、棄權(quán)1票)家54人，贊成52票、反對(duì)0票、棄權(quán)2票)中國(guó)人群α-和β-珠蛋白基因的熱點(diǎn)變異和常見變異如表1所示。α-珠蛋白基因的10個(gè)熱點(diǎn)變異和常見變異的檢出數(shù)約占α-珠蛋白基因總陽(yáng)性位點(diǎn)檢出數(shù)的95%,β-珠蛋白基因的14個(gè)熱點(diǎn)變異和常見變異檢出數(shù)約占β-珠蛋白基因總陽(yáng)性位點(diǎn)檢出數(shù)的98%。檢出數(shù)的5%和2%。由于地貧高發(fā)地區(qū)基因變異的整體攜帶率高，檢測(cè)罕見變異類型也具有重要的價(jià)值。臨床發(fā)現(xiàn)的部分罕見變異如表2點(diǎn)中占比<0.01%)。表2中國(guó)人群a-和β珠蛋白基因的部分罕見變異俗名NC_000016.10:g.148216_175855delNC_000016.10:g.175996_178389delNC_000016.10:g.171882_175438del_14.6NC_000016.10:g.144215_188841del_FIL.NC_000016.10:g.151641_182316del_27.3NC_000016.10;g.158664_185974delNC_000016.10:g.153510_175436delinsGGGAAGGGTGGG0HBA2:c.1A>GaHBA2:c.178G>CHBA2:c.184A>THBA2:c.272_279delAGCTaNC_000016.10:g.173384-177187dupNC_000016.10:g.169818_174075dup[3]NC_000011.10:g.5226263_5227619dβ缺失NC_000011.10:g.5224302_5227791dβ缺失NC_000011.10:g.5112882_5231358dβ缺失NC_000011.10:g.5182845_5249973dβ缺失NC_000011.10:g.5226187_5231089dβ缺失ββββ珠蛋白基因HBB:c.113G>AβββHBB:c.114G>Aβ(3)δ-珠蛋白基因的相關(guān)變異δ一珠蛋白基因的變異通常不會(huì)導(dǎo)致小細(xì)胞低色素的表型，但會(huì)降低HbA2的表達(dá)。當(dāng)合并β-地貧時(shí)，δ-地貧可能會(huì)掩蓋β-地貧引起的HbA2升高，從而導(dǎo)致漏檢，因此檢測(cè)δ-珠蛋白基因的變異也具有重要的臨床意義。中國(guó)人群δ-珠蛋白基因的熱點(diǎn)變異包括CD116(CGC>TGC)(HBD:c.349C>T);常見變異包括-68(C>T)(HBD:IVS-II-897(A>C)(HBD:c.316-2A>C);罕見變異包括二、檢測(cè)前咨詢與知情同意在采用單分子實(shí)時(shí)測(cè)序技術(shù)進(jìn)行地貧基因檢測(cè)之前，應(yīng)為就診者或其家屬提供詳細(xì)的遺傳咨詢，了解其家族史、患病史及檢測(cè)的目的，告知檢測(cè)的必要性、流程、可能的結(jié)果及意義，包括檢測(cè)的適用范圍、目標(biāo)疾病、檢測(cè)方法、費(fèi)用、檢測(cè)周期、局限性及相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)等。應(yīng)告知檢測(cè)后可能需要的進(jìn)一步檢查和隨訪，以及可能影響檢測(cè)結(jié)果的因素，如樣本采集和處理過(guò)程中的注意事項(xiàng)等，其要點(diǎn)包括：(1)應(yīng)充分了解就診者或夫婦雙方的籍貫、既往史、孕產(chǎn)史、家族史、可疑的地貧臨床指征和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果等信息，以準(zhǔn)確判斷其是否屬于適用人群；(2)應(yīng)向就診者及其親屬詳細(xì)說(shuō)明檢測(cè)的意義、適用人群、檢測(cè)范圍、檢測(cè)方法與流程、費(fèi)用、準(zhǔn)確性、局限性、檢測(cè)周期、相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)等信息，并告知檢測(cè)后遺傳咨詢與后續(xù)可提供的干預(yù)方案，如胚胎植入前遺傳學(xué)檢測(cè)、產(chǎn)前診斷等。在產(chǎn)前診斷時(shí)，應(yīng)強(qiáng)調(diào)排除母源污染以及陽(yáng)性結(jié)果需通過(guò)兩種檢測(cè)方法確認(rèn)的重要性，并提醒即使檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯異常，仍無(wú)法完全排除胎兒患地貧之外的其他疾病的可能性，孕婦需定期接受常規(guī)的產(chǎn)前檢查，完成對(duì)于其他疾病的系統(tǒng)性篩查，確保實(shí)現(xiàn)對(duì)胎兒健康狀況的全面評(píng)估；(3)應(yīng)向患者強(qiáng)調(diào)可能檢出無(wú)癥狀攜帶者。這類個(gè)體雖無(wú)罹患地貧的風(fēng)險(xiǎn)，但其后代可能攜帶地貧基因變異，應(yīng)告知其接受遺傳咨詢(4)應(yīng)向孕婦及其親屬說(shuō)明可能影響檢測(cè)結(jié)果的因素；(5)應(yīng)告知孕婦醫(yī)療機(jī)構(gòu)或檢測(cè)機(jī)構(gòu)將對(duì)其妊娠結(jié)局進(jìn)行隨訪；(6)應(yīng)向就診者承諾檢測(cè)數(shù)據(jù)將僅用于醫(yī)學(xué)目的，并嚴(yán)格保護(hù)個(gè)人隱私，避免基因歧視；【推薦意見6】單分子實(shí)時(shí)測(cè)序技術(shù)在臨床地貧檢測(cè)中應(yīng)遵循標(biāo)反對(duì)0票、棄權(quán)0票)【推薦意見7】單分子實(shí)時(shí)測(cè)序檢測(cè)到的地貧變異解讀建議參考指南》、《β-地中海貧血的臨床實(shí)踐指南》等國(guó)際權(quán)威公共數(shù)據(jù)庫(kù)專家54人，贊成54票、反對(duì)0票、棄權(quán)0票)【推薦意見8】當(dāng)出現(xiàn)不同數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)地貧基因變異致病性評(píng)級(jí)不變異的致病性。(投票專家54人，贊成54票、反對(duì)0票、棄權(quán)0票)本類型的溫控條件進(jìn)行包裝和運(yùn)輸(表3),以確保樣本的質(zhì)量。EDTA抗凝管，1～2mL,充分顛倒混勻不超過(guò)72h放置于4℃~8℃暫存，長(zhǎng)期保存需-20℃凍存直徑超過(guò)8mm×3mm的0℃以下保存不超過(guò)72h不超過(guò)72hEDTA抗凝管，1～2mL,充分顛倒混勻不超過(guò)72h新采集的臍帶血樣本可直接寄出或放置于4℃~8℃暫存，長(zhǎng)期保存需-20℃凍存DNA在24h內(nèi)檢