再生醫(yī)學蛋白質(zhì)純化工程師崗位考試試卷及答案一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.蛋白質(zhì)純化常用的層析方法不包括（）A.離子交換層析B.凝膠過濾層析C.紙層析D.親和層析2.SDS主要用于（）A.蛋白質(zhì)定量B.蛋白質(zhì)純度鑒定C.蛋白質(zhì)活性測定D.蛋白質(zhì)等電點測定3.超濾的主要作用是（）A.去除小分子雜質(zhì)B.分離不同分子量蛋白質(zhì)C.去除色素D.濃縮蛋白質(zhì)溶液4.蛋白質(zhì)在等電點時，其（）A.溶解度最大B.溶解度最小C.電荷最多D.穩(wěn)定性最好5.以下哪種試劑可用于蛋白質(zhì)定量（）A.考馬斯亮藍B.二苯胺C.茚三酮D.斐林試劑6.親和層析中，與目標蛋白特異性結(jié)合的是（）A.固定相B.流動相C.配體D.載體7.凝膠過濾層析中，先被洗脫下來的是（）A.分子量小的蛋白質(zhì)B.分子量大的蛋白質(zhì)C.電荷多的蛋白質(zhì)D.電荷少的蛋白質(zhì)8.蛋白質(zhì)純化過程中，常用的緩沖液pH范圍是（）A.2-4B.5-7C.7-9D.9-119.離子交換層析的原理是基于蛋白質(zhì)的（）A.分子量差異B.等電點差異C.溶解度差異D.親和力差異10.透析的主要目的是（）A.去除蛋白質(zhì)溶液中的小分子雜質(zhì)B.濃縮蛋白質(zhì)溶液C.改變蛋白質(zhì)的構(gòu)象D.測定蛋白質(zhì)的分子量答案：1.C2.B3.D4.B5.A6.C7.B8.C9.B10.A二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.蛋白質(zhì)純化的方法有（）A.鹽析B.透析C.電泳D.離子交換層析E.親和層析2.影響蛋白質(zhì)溶解度的因素有（）A.溫度B.pH值C.離子強度D.蛋白質(zhì)濃度E.溶劑種類3.以下屬于蛋白質(zhì)定量方法的有（）A.凱氏定氮法B.雙縮脲法C.福林-酚試劑法D.紫外吸收法E.Bradford法4.親和層析常用的配體有（）A.抗體B.抗原C.酶的底物D.輔酶E.金屬離子5.凝膠過濾層析的應用包括（）A.分離不同分子量蛋白質(zhì)B.測定蛋白質(zhì)分子量C.蛋白質(zhì)脫鹽D.蛋白質(zhì)濃縮E.蛋白質(zhì)復性6.離子交換劑的種類有（）A.陽離子交換劑B.陰離子交換劑C.兩性離子交換劑D.非離子交換劑E.弱離子交換劑7.蛋白質(zhì)純化過程中，可能用到的儀器有（）A.離心機B.層析柱C.超濾設備D.透析袋E.移液器8.蛋白質(zhì)在純化過程中可能出現(xiàn)的問題有（）A.蛋白質(zhì)變性B.蛋白質(zhì)降解C.回收率低D.純度不高E.活性喪失9.蛋白質(zhì)復性的方法有（）A.稀釋復性B.透析復性C.超濾復性D.柱上復性E.添加劑輔助復性10.蛋白質(zhì)純度鑒定的方法有（）A.SDSB.等電聚焦電泳C.HPLCD.質(zhì)譜分析E.紫外光譜分析答案：1.ABDE2.ABCDE3.ABCDE4.ABCDE5.ABC6.AB7.ABCDE8.ABCDE9.ABCDE10.ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.鹽析法是通過改變蛋白質(zhì)的溶解度來分離蛋白質(zhì)的。（）2.蛋白質(zhì)在電場中移動的方向只取決于其分子量大小。（）3.親和層析的特異性很高，只適用于分離單一蛋白質(zhì)。（）4.凝膠過濾層析中，蛋白質(zhì)的洗脫體積與其分子量呈線性關(guān)系。（）5.離子交換層析中，緩沖液的離子強度對蛋白質(zhì)的洗脫有影響。（）6.透析可以完全去除蛋白質(zhì)溶液中的所有小分子雜質(zhì)。（）7.蛋白質(zhì)的等電點是固定不變的，不受外界因素影響。（）8.Bradford法測定蛋白質(zhì)含量時，蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍結(jié)合后顏色會發(fā)生變化。（）9.超濾過程中，壓力越大，蛋白質(zhì)的濃縮效果越好。（）10.蛋白質(zhì)純化過程中，為了提高回收率，可以不考慮純度。（）答案：1.√2.×3.×4.√5.√6.×7.×8.√9.×10.×四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述蛋白質(zhì)純化的一般步驟。答案：一般步驟為樣品預處理，去除雜質(zhì)；采用鹽析等初步分離方法進行粗分離；再通過層析技術(shù)如離子交換、親和、凝膠過濾等進行精細分離；最后進行純度鑒定和活性檢測。2.離子交換層析的原理是什么？答案：基于蛋白質(zhì)所帶電荷與離子交換劑上的相反電荷基團間的靜電吸附作用。不同蛋白質(zhì)等電點不同，在特定pH緩沖液中所帶電荷不同，與離子交換劑結(jié)合能力有差異，從而實現(xiàn)分離。3.簡述SDS的原理。答案：SDS能使蛋白質(zhì)變性并與蛋白質(zhì)結(jié)合，賦予蛋白質(zhì)均勻的負電荷，消除蛋白質(zhì)原有電荷差異。在電場中，蛋白質(zhì)按分子量大小在聚丙烯酰胺凝膠中遷移，分子量小的遷移快，從而分離鑒定蛋白質(zhì)。4.蛋白質(zhì)純化過程中如何防止蛋白質(zhì)變性？答案：控制溫度在合適范圍，避免高溫；維持緩沖液合適的pH值，接近蛋白質(zhì)穩(wěn)定的pH區(qū)間；減少機械攪拌、超聲等劇烈操作；添加保護劑如甘油、DTT等，防止蛋白質(zhì)氧化和聚集。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論親和層析在再生醫(yī)學蛋白質(zhì)純化中的優(yōu)勢與局限性。答案：優(yōu)勢在于特異性強，能高效分離目標蛋白，純度高，可用于微量蛋白純化。局限性是配體選擇和制備困難，成本高；柱子易污染，使用壽命有限；對樣品前處理要求高，雜質(zhì)可能影響分離效果。2.如何優(yōu)化蛋白質(zhì)純化工藝以提高產(chǎn)量和純度？答案：優(yōu)化可從多方面入手。選擇合適的起始材料和預處理方法，減少雜質(zhì)。合理組合純化方法，如先粗分再細分。優(yōu)化層析參數(shù)，如流速、緩沖液條件等。加強過程監(jiān)控，及時調(diào)整。同時，注意防止蛋白質(zhì)損失和變性，提高回收率和純度。3.談談蛋白質(zhì)復性在再生醫(yī)學蛋白質(zhì)純化中的重要性及面臨的挑戰(zhàn)。答案：重要性在于許多重組蛋白表達后為包涵體，需復性恢復活性才能用于再生醫(yī)學。面臨挑戰(zhàn)有復性效率低，易形成錯誤折疊和聚集；不同蛋白復性條件差異大，需摸索優(yōu)化；復性過程影響因素多，如溫度、pH、添加劑等，控制難度大。4.舉例說明蛋白質(zhì)純化技術(shù)在再生醫(yī)學領(lǐng)域的具體