乳腺癌HER2檢測(cè)指南（2025版）乳腺癌作為全球女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，其分子分型指導(dǎo)下的精準(zhǔn)治療已成為臨床共識(shí)。人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）狀態(tài)是乳腺癌重要的分子標(biāo)志物之一，直接影響治療方案選擇與預(yù)后評(píng)估。隨著檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步與臨床研究的深入，2025年版乳腺癌HER2檢測(cè)指南在整合最新循證醫(yī)學(xué)證據(jù)的基礎(chǔ)上，對(duì)檢測(cè)流程、技術(shù)規(guī)范、質(zhì)量控制及結(jié)果判讀進(jìn)行了系統(tǒng)性更新，旨在為臨床提供更精準(zhǔn)、更規(guī)范的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。一、檢測(cè)前樣本管理規(guī)范樣本質(zhì)量是保證HER2檢測(cè)準(zhǔn)確性的首要環(huán)節(jié)，需從采集、固定、處理全流程嚴(yán)格把控。1.樣本類型與采集檢測(cè)樣本應(yīng)優(yōu)先選擇浸潤(rùn)性癌組織，原位癌成分不單獨(dú)用于HER2狀態(tài)判定。手術(shù)切除標(biāo)本需選取腫瘤核心區(qū)域（非壞死、非退變區(qū)），取材大小建議不小于5mm×5mm×2mm；空心針穿刺活檢標(biāo)本需至少包含2條完整腫瘤組織條，每條長(zhǎng)度≥10mm；細(xì)胞學(xué)標(biāo)本（如細(xì)針穿刺）需確保涂片或細(xì)胞塊中腫瘤細(xì)胞比例≥50%，且細(xì)胞形態(tài)完整。2.固定與處理所有組織樣本應(yīng)在離體30分鐘內(nèi)完成固定，采用10%中性緩沖福爾馬林（pH6.8-7.2），固定液體積與組織體積比≥10:1。固定時(shí)間需嚴(yán)格控制：小標(biāo)本（如穿刺組織）固定6-24小時(shí)，大標(biāo)本（如手術(shù)切除標(biāo)本）固定6-72小時(shí)，避免固定不足（<6小時(shí)）或過(guò)度固定（>72小時(shí)）導(dǎo)致抗原丟失或結(jié)構(gòu)破壞。固定后標(biāo)本需在48小時(shí)內(nèi)完成脫水、透明、浸蠟及包埋，包埋時(shí)應(yīng)保持組織切面與蠟塊表面平行，避免傾斜導(dǎo)致切片厚度不均。3.樣本預(yù)處理評(píng)估檢測(cè)前需通過(guò)HE染色切片進(jìn)行預(yù)評(píng)估：①腫瘤細(xì)胞占比需≥10%（若腫瘤細(xì)胞占比5%-10%，需備注說(shuō)明并謹(jǐn)慎判讀）；②排除壞死、出血及嚴(yán)重纖維化區(qū)域；③確認(rèn)組織為浸潤(rùn)性癌（導(dǎo)管原位癌需與浸潤(rùn)性成分區(qū)分）。若樣本不符合上述要求，應(yīng)及時(shí)聯(lián)系臨床重新取材。二、檢測(cè)技術(shù)選擇與操作規(guī)范HER2檢測(cè)需采用經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）批準(zhǔn)的檢測(cè)試劑，推薦采用免疫組織化學(xué)法（IHC）聯(lián)合原位雜交法（ISH）的分層檢測(cè)模式，其中IHC為初篩，ISH為IHC2+結(jié)果的確認(rèn)方法。（一）免疫組織化學(xué)法（IHC）1.試劑與設(shè)備使用抗HER2鼠單克隆抗體（如4B5克?。┗蛲脝慰寺】贵w（如SP3），檢測(cè)系統(tǒng)需為EnVision法或類似增強(qiáng)系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)需設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照（已知HER23+乳腺癌組織）和陰性對(duì)照（省略一抗或使用無(wú)關(guān)抗體）。2.操作流程切片厚度4-5μm，經(jīng)脫蠟、水化后進(jìn)行抗原修復(fù)（推薦高壓熱修復(fù)，pH8.0-9.0EDTA緩沖液），孵育一抗（37℃30分鐘或4℃過(guò)夜），二抗孵育（37℃30分鐘），DAB顯色（控制顯色時(shí)間5-10分鐘，避免過(guò)染），蘇木精復(fù)染后封片。3.判讀標(biāo)準(zhǔn)僅評(píng)估浸潤(rùn)性癌細(xì)胞的細(xì)胞膜染色強(qiáng)度，按以下標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)：-0：無(wú)染色或≤10%腫瘤細(xì)胞弱且不完整的膜染色；-1+：>10%腫瘤細(xì)胞弱且不完整的膜染色（僅基底側(cè)或側(cè)緣染色）；-2+：>10%腫瘤細(xì)胞中等完整膜染色（細(xì)胞膜連續(xù)但著色淺），或≤10%腫瘤細(xì)胞強(qiáng)完整膜染色；-3+：>10%腫瘤細(xì)胞強(qiáng)且完整的膜染色（細(xì)胞膜全周連續(xù)深染）。其中，IHC3+直接判定為HER2陽(yáng)性，IHC0/1+判定為陰性，IHC2+需進(jìn)一步行ISH檢測(cè)。（二）原位雜交法（ISH）ISH包括熒光原位雜交（FISH）、顯色原位雜交（CISH）、銀染原位雜交（SISH）及雙重原位雜交（DISH），可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件選擇，但需保證結(jié)果的可比性。1.FISH檢測(cè)使用HER2（17q12）和CEP17（17p11.1-q11.2）雙探針試劑盒。切片厚度4-5μm，經(jīng)脫蠟、水化、胃蛋白酶消化（37℃10-20分鐘，以組織呈毛玻璃樣為度）、變性（80℃5-10分鐘）、雜交（37℃過(guò)夜）、洗片（2×SSC/0.3%NP-40，73℃2分鐘）后，用DAPI復(fù)染。判讀時(shí)需計(jì)數(shù)至少20個(gè)非重疊、核完整的浸潤(rùn)性癌細(xì)胞，計(jì)算HER2/CEP17比值（R值）及平均HER2拷貝數(shù)（H值）：-R≥2.0且H≥4.0：陽(yáng)性；-R<2.0且H<4.0：陰性；-R<2.0但H≥4.0且<6.0：灰區(qū)（需結(jié)合臨床情況或重新計(jì)數(shù)50個(gè)細(xì)胞）；-R≥2.0但H<4.0：需確認(rèn)是否為17號(hào)染色體多體（CEP17信號(hào)≥3個(gè)細(xì)胞占比>50%時(shí)，判定為陰性）。2.CISH/SISH檢測(cè)基于生物素-親和素系統(tǒng)或銀染顯色，結(jié)果判讀需在光學(xué)顯微鏡下觀察：HER2信號(hào)為棕褐色（CISH）或黑色（SISH）圓點(diǎn)，CEP17信號(hào)（可選）為紅色（CISH）或其他對(duì)比色。計(jì)數(shù)20個(gè)腫瘤細(xì)胞，HER2信號(hào)≥6個(gè)/細(xì)胞或HER2/CEP17≥2.0為陽(yáng)性；HER2信號(hào)<4個(gè)/細(xì)胞或HER2/CEP17<2.0為陰性；4-5個(gè)/細(xì)胞或HER2/CEP17<2.0但HER2信號(hào)≥4個(gè)/細(xì)胞為灰區(qū)，需結(jié)合臨床。3.DISH檢測(cè)同時(shí)檢測(cè)HER2和Ki-67等指標(biāo)，可在同一張切片上完成多標(biāo)志物分析，適用于小標(biāo)本或需聯(lián)合檢測(cè)的場(chǎng)景，判讀標(biāo)準(zhǔn)與FISH一致。三、質(zhì)量控制與實(shí)驗(yàn)室管理1.人員資質(zhì)檢測(cè)人員需經(jīng)病理學(xué)或分子檢測(cè)專業(yè)培訓(xùn)，IHC判讀需由中級(jí)及以上職稱病理醫(yī)師完成，ISH判讀需由經(jīng)過(guò)認(rèn)證的技術(shù)人員或病理醫(yī)師操作，結(jié)果需經(jīng)雙人復(fù)核。2.室內(nèi)質(zhì)控每批次檢測(cè)需包含陽(yáng)性、陰性對(duì)照，對(duì)照結(jié)果不符合預(yù)期時(shí)需停止檢測(cè)并排查原因。IHC需定期進(jìn)行抗體效價(jià)驗(yàn)證（每6個(gè)月1次），ISH需校準(zhǔn)熒光顯微鏡（每3個(gè)月1次）及顯色系統(tǒng)（每批次）。3.室間質(zhì)評(píng)實(shí)驗(yàn)室需每年參加國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心（NCCL）或國(guó)際權(quán)威機(jī)構(gòu)（如CAP）的室間質(zhì)評(píng)，未通過(guò)者需整改并重新檢測(cè)歷史樣本。4.設(shè)備管理切片機(jī)需定期校準(zhǔn)（每6個(gè)月1次），保證切片厚度均勻（4-5μm）；熒光顯微鏡需配置合適濾光片（HER2用FITC，CEP17用TexasRed），激發(fā)光強(qiáng)度需符合要求（避免信號(hào)衰減）；恒溫設(shè)備（雜交儀、烤箱）溫度誤差需≤±1℃。四、結(jié)果報(bào)告與臨床應(yīng)用1.報(bào)告內(nèi)容檢測(cè)報(bào)告需包含：①患者基本信息（姓名、ID、樣本類型）；②樣本質(zhì)量評(píng)估（腫瘤細(xì)胞占比、是否符合檢測(cè)要求）；③檢測(cè)方法（IHC/ISH具體類型）；④IHC評(píng)分（0/1+/2+/3+）；⑤ISH結(jié)果（R值、H值、細(xì)胞計(jì)數(shù)數(shù)量）；⑥最終判讀結(jié)論（陽(yáng)性/陰性/灰區(qū)）；⑦檢測(cè)者與審核者簽名及日期?；覅^(qū)結(jié)果需備注“建議結(jié)合臨床或重復(fù)檢測(cè)”。2.臨床意義HER2陽(yáng)性（IHC3+或ISH陽(yáng)性）提示患者適合抗HER2靶向治療（如曲妥珠單抗、帕妥珠單抗、DS-8201等），且需關(guān)注腫瘤異質(zhì)性（若陽(yáng)性細(xì)胞占比<50%，需標(biāo)注并與臨床溝通）；HER2陰性（IHC0/1+或ISH陰性）患者不推薦抗HER2治療，需結(jié)合其他分子標(biāo)志物（如ER、PR、Ki-67）制定內(nèi)分泌治療或化療方案。3.特殊情況處理新輔助治療前需重新檢測(cè)原發(fā)灶HER2狀態(tài)（治療可能導(dǎo)致表達(dá)變化）；轉(zhuǎn)移性病灶需檢測(cè)轉(zhuǎn)移灶HER2狀態(tài)（約15%原發(fā)灶陰性患者轉(zhuǎn)移灶陽(yáng)性）；導(dǎo)管原位癌（DCIS）的HE