微生物檢驗(yàn)日常操作規(guī)劃一、概述

微生物檢驗(yàn)是保障產(chǎn)品質(zhì)量、食品安全和環(huán)境安全的重要手段。科學(xué)的日常操作規(guī)劃能夠確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和一致性。本規(guī)劃旨在明確微生物檢驗(yàn)的日常操作流程、關(guān)鍵控制點(diǎn)和注意事項(xiàng)，以提升檢驗(yàn)效率和質(zhì)量。

二、微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備

（一）環(huán)境要求

1.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持清潔、干燥，溫度控制在18℃–24℃，相對濕度維持在45%–60%。

2.操作區(qū)域應(yīng)分為清潔區(qū)、半清潔區(qū)和污染區(qū)，并設(shè)置物理隔離。

3.空氣凈化系統(tǒng)應(yīng)定期檢測，確保潔凈度符合標(biāo)準(zhǔn)。

（二）設(shè)備與耗材準(zhǔn)備

1.高壓滅菌鍋：定期校驗(yàn)，確保滅菌效果（如使用121℃、15psi壓力滅菌15分鐘）。

2.超凈工作臺：每日使用前進(jìn)行紫外線消毒和電子風(fēng)槍吹掃。

3.需氧培養(yǎng)箱和厭氧培養(yǎng)箱：溫度控制在36℃±1℃，濕度維持在85%以上。

4.顯微鏡：校正目鏡和物鏡，確保放大倍數(shù)準(zhǔn)確。

5.耗材：無菌培養(yǎng)皿、試管、移液管、接種環(huán)等，使用前需確認(rèn)包裝完好。

三、樣品采集與處理

（一）樣品采集

1.選擇具有代表性的樣品，避免污染。

2.樣品量應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目確定，一般不少于10g或10mL。

3.樣品采集后應(yīng)立即密封，標(biāo)注信息（如采集時(shí)間、來源、批次）。

（二）樣品處理

1.無菌操作臺內(nèi)拆封樣品，避免二次污染。

2.按項(xiàng)目要求進(jìn)行稀釋（如1:10、1:100稀釋）。

3.稀釋液使用無菌水或緩沖液，需確認(rèn)無菌性。

四、微生物培養(yǎng)與計(jì)數(shù)

（一）需氧菌培養(yǎng)

1.將處理后的樣品接種于營養(yǎng)瓊脂平板，涂布均勻。

2.放入36℃±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24–48小時(shí)。

3.計(jì)數(shù)菌落時(shí)，選擇30–300CFU的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

（二）厭氧菌培養(yǎng)

1.使用厭氧袋或厭氧罐，排除氧氣后培養(yǎng)。

2.培養(yǎng)溫度36℃±1℃，時(shí)間24–72小時(shí)。

3.觀察典型厭氧菌特征（如黑色colonies）。

（三）霉菌與酵母菌培養(yǎng)

1.接種于沙氏葡萄糖瓊脂平板，28℃±1℃培養(yǎng)3–5天。

2.計(jì)數(shù)時(shí)區(qū)分霉菌（絲狀）和酵母菌（球狀）。

五、結(jié)果判讀與記錄

（一）結(jié)果判讀

1.菌落形態(tài)：記錄顏色、大小、邊緣形狀等特征。

2.計(jì)數(shù)方法：采用平板計(jì)數(shù)法或MPN法（如3管系列）。

3.陽性對照：每批檢驗(yàn)需設(shè)置陽性對照，確保培養(yǎng)基活性。

（二）數(shù)據(jù)記錄

1.建立檢驗(yàn)記錄表，包含樣品信息、操作人、檢驗(yàn)時(shí)間等。

2.計(jì)數(shù)結(jié)果需復(fù)核，避免人為誤差。

3.數(shù)據(jù)保存至少2年，以備追溯。

六、日常質(zhì)量控制

（一）內(nèi)部質(zhì)控

1.每日使用無菌水驗(yàn)證移液管準(zhǔn)確性（如100μL移液誤差±5%）。

2.每周進(jìn)行培養(yǎng)基復(fù)溶測試，確保pH值（6.4–7.2）。

3.每月使用標(biāo)準(zhǔn)菌株（如大腸桿菌ATCC25922）驗(yàn)證培養(yǎng)基和操作。

（二）外部質(zhì)控

1.參加第三方能力驗(yàn)證計(jì)劃，對比行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

2.定期送檢盲樣，評估實(shí)驗(yàn)室檢出率。

七、注意事項(xiàng)

（一）無菌操作

1.手部消毒后使用酒精棉球擦手。

2.移液管和接種環(huán)需火焰滅菌。

3.避免說話、咳嗽等產(chǎn)生氣溶膠。

（二）生物安全

1.培養(yǎng)物需高壓滅菌后丟棄。

2.污染區(qū)域使用75%酒精消毒。

3.工作人員需穿戴一次性手套和口罩。

八、異常情況處理

（一）培養(yǎng)基失效

1.若培養(yǎng)皿出現(xiàn)霉斑，立即廢棄并報(bào)告。

2.復(fù)溶pH值超出范圍需重新配制。

（二）污染事件

1.發(fā)現(xiàn)污染時(shí)隔離相關(guān)樣品和設(shè)備。

2.分析污染原因（如操作不規(guī)范），并修訂操作流程。

九、總結(jié)

微生物檢驗(yàn)的日常操作規(guī)劃需涵蓋環(huán)境、設(shè)備、樣品處理、培養(yǎng)、質(zhì)控等環(huán)節(jié)，通過標(biāo)準(zhǔn)化流程減少誤差，確保檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。定期審核和優(yōu)化流程，以適應(yīng)新的檢驗(yàn)需求。

一、概述

微生物檢驗(yàn)是保障產(chǎn)品質(zhì)量、食品安全和環(huán)境安全的重要手段?？茖W(xué)的日常操作規(guī)劃能夠確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和一致性。本規(guī)劃旨在明確微生物檢驗(yàn)的日常操作流程、關(guān)鍵控制點(diǎn)和注意事項(xiàng)，以提升檢驗(yàn)效率和質(zhì)量。

二、微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備

（一）環(huán)境要求

1.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持清潔、干燥，溫度控制在18℃–24℃，相對濕度維持在45%–60%。過高或過低的溫濕度會影響微生物生長和培養(yǎng)基性能。

2.操作區(qū)域應(yīng)分為清潔區(qū)、半清潔區(qū)和污染區(qū)，并設(shè)置物理隔離。清潔區(qū)用于無菌操作，半清潔區(qū)進(jìn)行初步樣品處理，污染區(qū)處理污染樣品。

3.空氣凈化系統(tǒng)應(yīng)定期檢測（如使用HEPA濾網(wǎng)），確保潔凈度符合ISO5級標(biāo)準(zhǔn)（空氣中≥3.5×10^2CFU/m3）。

（二）設(shè)備與耗材準(zhǔn)備

1.高壓滅菌鍋：定期校驗(yàn)（如使用生物指示劑驗(yàn)證滅菌效果），確保121℃、15psi壓力滅菌15分鐘可殺滅所有微生物。

2.超凈工作臺：每日使用前進(jìn)行紫外線消毒（30分鐘）和電子風(fēng)槍吹掃，確保工作臺面潔凈度。

3.需氧培養(yǎng)箱和厭氧培養(yǎng)箱：需氧培養(yǎng)箱溫度控制在36℃±1℃，濕度維持在85%以上；厭氧培養(yǎng)箱使用厭氧指示劑（如甲基紅）確認(rèn)無氧環(huán)境。

4.顯微鏡：校正目鏡和物鏡，確保放大倍數(shù)準(zhǔn)確（如油鏡100×）。

5.耗材：無菌培養(yǎng)皿（直徑90mm）、試管（直徑16mm×150mm）、移液管（1mL、5mL）、接種環(huán)（一次性或金屬），使用前需確認(rèn)包裝完好（如無破損、無漏氣）。

三、樣品采集與處理

（一）樣品采集

1.選擇具有代表性的樣品，避免污染。例如，食品檢驗(yàn)時(shí)隨機(jī)抽取5–10個(gè)包裝，每個(gè)包裝取不少于10g樣品。

2.樣品量應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目確定，一般不少于10g或10mL。液體樣品需使用無菌容器，固體樣品需使用無菌袋。

3.樣品采集后應(yīng)立即密封，標(biāo)注信息（如采集時(shí)間、來源、批次、操作人）。

（二）樣品處理

1.無菌操作臺內(nèi)拆封樣品，避免二次污染。使用酒精棉球擦拭樣品表面。

2.按項(xiàng)目要求進(jìn)行稀釋（如1:10、1:100稀釋）。使用無菌水或緩沖液，需確認(rèn)無菌性（如使用無菌水制備后高壓滅菌15分鐘）。

3.稀釋液使用無菌水或緩沖液，需確認(rèn)無菌性。

四、微生物培養(yǎng)與計(jì)數(shù)

（一）需氧菌培養(yǎng)

1.將處理后的樣品接種于營養(yǎng)瓊脂平板，涂布均勻（使用L型接種環(huán)，避免接觸皿邊）。

2.放入36℃±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24–48小時(shí)。需氧菌典型菌落特征為圓形、隆起、邊緣整齊。

3.計(jì)數(shù)菌落時(shí)，選擇30–300CFU的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。使用計(jì)數(shù)器或肉眼估算，記錄菌落數(shù)（CFU/g或CFU/mL）。

（二）厭氧菌培養(yǎng)

1.使用厭氧袋或厭氧罐，排除氧氣后培養(yǎng)。厭氧袋需使用導(dǎo)線法或壓力指示劑確認(rèn)無氧。

2.培養(yǎng)溫度36℃±1℃，時(shí)間24–72小時(shí)。典型厭氧菌特征為黑色colonies（如脆弱擬桿菌）或無色透明菌落（如產(chǎn)氣莢膜梭菌）。

（三）霉菌與酵母菌培養(yǎng)

1.接種于沙氏葡萄糖瓊脂平板，28℃±1℃培養(yǎng)3–5天。霉菌菌落絲狀，酵母菌菌落球狀。

2.計(jì)數(shù)時(shí)區(qū)分霉菌（絲狀）和酵母菌（球狀），記錄菌落形態(tài)。

五、結(jié)果判讀與記錄

（一）結(jié)果判讀

1.菌落形態(tài)：記錄顏色、大小、邊緣形狀等特征。例如，大腸桿菌典型菌落為麥粒色、圓形、光滑。

2.計(jì)數(shù)方法：采用平板計(jì)數(shù)法或MPN法（如3管系列）。平板計(jì)數(shù)法需使用三角計(jì)數(shù)法避免邊緣效應(yīng)。

3.陽性對照：每批檢驗(yàn)需設(shè)置陽性對照，確保培養(yǎng)基活性（如使用已知濃度的大腸桿菌陽性對照）。

（二）數(shù)據(jù)記錄

1.建立檢驗(yàn)記錄表，包含樣品信息、操作人、檢驗(yàn)時(shí)間、培養(yǎng)基批號等。

2.計(jì)數(shù)結(jié)果需復(fù)核，避免人為誤差。例如，兩人獨(dú)立計(jì)數(shù)同一平板，結(jié)果差異不超過5%時(shí)才記錄。

3.數(shù)據(jù)保存至少2年，以備追溯。使用電子或紙質(zhì)記錄，需防水、防火。

六、日常質(zhì)量控制

（一）內(nèi)部質(zhì)控

1.每日使用無菌水驗(yàn)證移液管準(zhǔn)確性（如100μL移液誤差±5%）。使用移液管校正儀進(jìn)行校驗(yàn)。

2.每周進(jìn)行培養(yǎng)基復(fù)溶測試，確保pH值（6.4–7.2）。使用pH計(jì)測量培養(yǎng)基復(fù)溶后的pH值。

3.每月使用標(biāo)準(zhǔn)菌株（如大腸桿菌ATCC25922）驗(yàn)證培養(yǎng)基和操作。使用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行接種和培養(yǎng)，結(jié)果需符合標(biāo)準(zhǔn)范圍。

（二）外部質(zhì)控

1.參加第三方能力驗(yàn)證計(jì)劃，對比行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。例如，每年參加ISO16140能力驗(yàn)證，評估實(shí)驗(yàn)室檢出率。

2.定期送檢盲樣，評估實(shí)驗(yàn)室檢出率。盲樣由外部機(jī)構(gòu)提供，實(shí)驗(yàn)室不知曉具體菌種和濃度。

七、注意事項(xiàng)

（一）無菌操作

1.手部消毒后使用酒精棉球擦手。操作前洗手，使用75%酒精消毒手部。

2.移液管和接種環(huán)需火焰滅菌（金屬接種環(huán)需燒至紅熱）。

3.避免說話、咳嗽等產(chǎn)生氣溶膠。操作時(shí)頭部偏向一側(cè)，避免噴濺。

（二）生物安全

1.培養(yǎng)物需高壓滅菌后丟棄（如121℃、15psi壓力滅菌15分鐘）。

2.污染區(qū)域使用75%酒精消毒。消毒后使用電子風(fēng)槍吹干。

3.工作人員需穿戴一次性手套和口罩。操作完畢后脫掉手套，使用酒精棉球擦拭雙手。

八、異常情況處理

（一）培養(yǎng)基失效

1.若培養(yǎng)皿出現(xiàn)霉斑，立即廢棄并報(bào)告。使用酒精燈燒毀污染培養(yǎng)皿。

2.復(fù)溶pH值超出范圍需重新配制。使用新鮮培養(yǎng)基，重新復(fù)溶并檢測pH值。

（二）污染事件

1.發(fā)現(xiàn)污染時(shí)隔離相關(guān)樣品和設(shè)備。使用紅色標(biāo)簽標(biāo)注污染樣品。

2.分析污染原因（如操作不規(guī)范），并修訂操作流程。例如，若因超凈工作臺使用不當(dāng)導(dǎo)致污染，需增加培訓(xùn)。

九、總結(jié)

微生物檢驗(yàn)的日常操作規(guī)劃需涵蓋環(huán)境、設(shè)備、樣品處理、培養(yǎng)、質(zhì)控等環(huán)節(jié)，通過標(biāo)準(zhǔn)化流程減少誤差，確保檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。定期審核和優(yōu)化流程，以適應(yīng)新的檢驗(yàn)需求。例如，每年評估一次操作流程，根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)更新檢驗(yàn)方法。

一、概述

微生物檢驗(yàn)是保障產(chǎn)品質(zhì)量、食品安全和環(huán)境安全的重要手段。科學(xué)的日常操作規(guī)劃能夠確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和一致性。本規(guī)劃旨在明確微生物檢驗(yàn)的日常操作流程、關(guān)鍵控制點(diǎn)和注意事項(xiàng)，以提升檢驗(yàn)效率和質(zhì)量。

二、微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備

（一）環(huán)境要求

1.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持清潔、干燥，溫度控制在18℃–24℃，相對濕度維持在45%–60%。

2.操作區(qū)域應(yīng)分為清潔區(qū)、半清潔區(qū)和污染區(qū)，并設(shè)置物理隔離。

3.空氣凈化系統(tǒng)應(yīng)定期檢測，確保潔凈度符合標(biāo)準(zhǔn)。

（二）設(shè)備與耗材準(zhǔn)備

1.高壓滅菌鍋：定期校驗(yàn)，確保滅菌效果（如使用121℃、15psi壓力滅菌15分鐘）。

2.超凈工作臺：每日使用前進(jìn)行紫外線消毒和電子風(fēng)槍吹掃。

3.需氧培養(yǎng)箱和厭氧培養(yǎng)箱：溫度控制在36℃±1℃，濕度維持在85%以上。

4.顯微鏡：校正目鏡和物鏡，確保放大倍數(shù)準(zhǔn)確。

5.耗材：無菌培養(yǎng)皿、試管、移液管、接種環(huán)等，使用前需確認(rèn)包裝完好。

三、樣品采集與處理

（一）樣品采集

1.選擇具有代表性的樣品，避免污染。

2.樣品量應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目確定，一般不少于10g或10mL。

3.樣品采集后應(yīng)立即密封，標(biāo)注信息（如采集時(shí)間、來源、批次）。

（二）樣品處理

1.無菌操作臺內(nèi)拆封樣品，避免二次污染。

2.按項(xiàng)目要求進(jìn)行稀釋（如1:10、1:100稀釋）。

3.稀釋液使用無菌水或緩沖液，需確認(rèn)無菌性。

四、微生物培養(yǎng)與計(jì)數(shù)

（一）需氧菌培養(yǎng)

1.將處理后的樣品接種于營養(yǎng)瓊脂平板，涂布均勻。

2.放入36℃±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24–48小時(shí)。

3.計(jì)數(shù)菌落時(shí)，選擇30–300CFU的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

（二）厭氧菌培養(yǎng)

1.使用厭氧袋或厭氧罐，排除氧氣后培養(yǎng)。

2.培養(yǎng)溫度36℃±1℃，時(shí)間24–72小時(shí)。

3.觀察典型厭氧菌特征（如黑色colonies）。

（三）霉菌與酵母菌培養(yǎng)

1.接種于沙氏葡萄糖瓊脂平板，28℃±1℃培養(yǎng)3–5天。

2.計(jì)數(shù)時(shí)區(qū)分霉菌（絲狀）和酵母菌（球狀）。

五、結(jié)果判讀與記錄

（一）結(jié)果判讀

1.菌落形態(tài)：記錄顏色、大小、邊緣形狀等特征。

2.計(jì)數(shù)方法：采用平板計(jì)數(shù)法或MPN法（如3管系列）。

3.陽性對照：每批檢驗(yàn)需設(shè)置陽性對照，確保培養(yǎng)基活性。

（二）數(shù)據(jù)記錄

1.建立檢驗(yàn)記錄表，包含樣品信息、操作人、檢驗(yàn)時(shí)間等。

2.計(jì)數(shù)結(jié)果需復(fù)核，避免人為誤差。

3.數(shù)據(jù)保存至少2年，以備追溯。

六、日常質(zhì)量控制

（一）內(nèi)部質(zhì)控

1.每日使用無菌水驗(yàn)證移液管準(zhǔn)確性（如100μL移液誤差±5%）。

2.每周進(jìn)行培養(yǎng)基復(fù)溶測試，確保pH值（6.4–7.2）。

3.每月使用標(biāo)準(zhǔn)菌株（如大腸桿菌ATCC25922）驗(yàn)證培養(yǎng)基和操作。

（二）外部質(zhì)控

1.參加第三方能力驗(yàn)證計(jì)劃，對比行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

2.定期送檢盲樣，評估實(shí)驗(yàn)室檢出率。

七、注意事項(xiàng)

（一）無菌操作

1.手部消毒后使用酒精棉球擦手。

2.移液管和接種環(huán)需火焰滅菌。

3.避免說話、咳嗽等產(chǎn)生氣溶膠。

（二）生物安全

1.培養(yǎng)物需高壓滅菌后丟棄。

2.污染區(qū)域使用75%酒精消毒。

3.工作人員需穿戴一次性手套和口罩。

八、異常情況處理

（一）培養(yǎng)基失效

1.若培養(yǎng)皿出現(xiàn)霉斑，立即廢棄并報(bào)告。

2.復(fù)溶pH值超出范圍需重新配制。

（二）污染事件

1.發(fā)現(xiàn)污染時(shí)隔離相關(guān)樣品和設(shè)備。

2.分析污染原因（如操作不規(guī)范），并修訂操作流程。

九、總結(jié)

微生物檢驗(yàn)的日常操作規(guī)劃需涵蓋環(huán)境、設(shè)備、樣品處理、培養(yǎng)、質(zhì)控等環(huán)節(jié)，通過標(biāo)準(zhǔn)化流程減少誤差，確保檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。定期審核和優(yōu)化流程，以適應(yīng)新的檢驗(yàn)需求。

一、概述

微生物檢驗(yàn)是保障產(chǎn)品質(zhì)量、食品安全和環(huán)境安全的重要手段?？茖W(xué)的日常操作規(guī)劃能夠確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和一致性。本規(guī)劃旨在明確微生物檢驗(yàn)的日常操作流程、關(guān)鍵控制點(diǎn)和注意事項(xiàng)，以提升檢驗(yàn)效率和質(zhì)量。

二、微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備

（一）環(huán)境要求

1.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持清潔、干燥，溫度控制在18℃–24℃，相對濕度維持在45%–60%。過高或過低的溫濕度會影響微生物生長和培養(yǎng)基性能。

2.操作區(qū)域應(yīng)分為清潔區(qū)、半清潔區(qū)和污染區(qū)，并設(shè)置物理隔離。清潔區(qū)用于無菌操作，半清潔區(qū)進(jìn)行初步樣品處理，污染區(qū)處理污染樣品。

3.空氣凈化系統(tǒng)應(yīng)定期檢測（如使用HEPA濾網(wǎng)），確保潔凈度符合ISO5級標(biāo)準(zhǔn)（空氣中≥3.5×10^2CFU/m3）。

（二）設(shè)備與耗材準(zhǔn)備

1.高壓滅菌鍋：定期校驗(yàn)（如使用生物指示劑驗(yàn)證滅菌效果），確保121℃、15psi壓力滅菌15分鐘可殺滅所有微生物。

2.超凈工作臺：每日使用前進(jìn)行紫外線消毒（30分鐘）和電子風(fēng)槍吹掃，確保工作臺面潔凈度。

3.需氧培養(yǎng)箱和厭氧培養(yǎng)箱：需氧培養(yǎng)箱溫度控制在36℃±1℃，濕度維持在85%以上；厭氧培養(yǎng)箱使用厭氧指示劑（如甲基紅）確認(rèn)無氧環(huán)境。

4.顯微鏡：校正目鏡和物鏡，確保放大倍數(shù)準(zhǔn)確（如油鏡100×）。

5.耗材：無菌培養(yǎng)皿（直徑90mm）、試管（直徑16mm×150mm）、移液管（1mL、5mL）、接種環(huán)（一次性或金屬），使用前需確認(rèn)包裝完好（如無破損、無漏氣）。

三、樣品采集與處理

（一）樣品采集

1.選擇具有代表性的樣品，避免污染。例如，食品檢驗(yàn)時(shí)隨機(jī)抽取5–10個(gè)包裝，每個(gè)包裝取不少于10g樣品。

2.樣品量應(yīng)根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目確定，一般不少于10g或10mL。液體樣品需使用無菌容器，固體樣品需使用無菌袋。

3.樣品采集后應(yīng)立即密封，標(biāo)注信息（如采集時(shí)間、來源、批次、操作人）。

（二）樣品處理

1.無菌操作臺內(nèi)拆封樣品，避免二次污染。使用酒精棉球擦拭樣品表面。

2.按項(xiàng)目要求進(jìn)行稀釋（如1:10、1:100稀釋）。使用無菌水或緩沖液，需確認(rèn)無菌性（如使用無菌水制備后高壓滅菌15分鐘）。

3.稀釋液使用無菌水或緩沖液，需確認(rèn)無菌性。

四、微生物培養(yǎng)與計(jì)數(shù)

（一）需氧菌培養(yǎng)

1.將處理后的樣品接種于營養(yǎng)瓊脂平板，涂布均勻（使用L型接種環(huán)，避免接觸皿邊）。

2.放入36℃±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24–48小時(shí)。需氧菌典型菌落特征為圓形、隆起、邊緣整齊。

3.計(jì)數(shù)菌落時(shí)，選擇30–300CFU的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。使用計(jì)數(shù)器或肉眼估算，記錄菌落數(shù)（CFU/g或CFU/mL）。

（二）厭氧菌培養(yǎng)

1.使用厭氧袋或厭氧罐，排除氧氣后培養(yǎng)。厭氧袋需使用導(dǎo)線法或壓力指示劑確認(rèn)無氧。

2.培養(yǎng)溫度36℃±1℃，時(shí)間24–72小時(shí)。典型厭氧菌特征為黑色colonies（如脆弱擬桿菌）或無色透明菌落（如產(chǎn)氣莢膜梭菌）。

（三）霉菌與酵母菌培養(yǎng)

1.接種于沙氏葡萄糖瓊脂平板，28℃±1℃培養(yǎng)3–5天。霉菌菌落絲狀，酵母菌菌落球狀。

2.計(jì)數(shù)時(shí)區(qū)分霉菌（絲狀）和酵母菌（球狀），記錄菌落形態(tài)。

五、結(jié)果判讀與記錄

（一）結(jié)果判讀

1.菌落形態(tài)：記錄顏色、大小、邊緣形狀等特征。例如，大腸桿菌典型菌落為麥粒色、圓形、光滑。

2.計(jì)數(shù)方法：采用平板計(jì)數(shù)法或MPN法（如3管系列）。平板計(jì)數(shù)法需使用三角計(jì)數(shù)法避免邊緣效應(yīng)。

3.陽性對照：每批檢驗(yàn)需設(shè)置陽性對照，確保培養(yǎng)基活性（如使用已知濃度的大腸桿菌陽性對照）。

（二）數(shù)據(jù)記錄

1.建立檢驗(yàn)記錄表，包含樣品信息、操作人、檢驗(yàn)時(shí)間、培養(yǎng)基批號等。

2.計(jì)數(shù)結(jié)果需復(fù)核，避免人為誤差。例如，兩人獨(dú)立計(jì)數(shù)同一平板，結(jié)果差異不超過5%時(shí)才記錄。

3.數(shù)據(jù)保存至少2年，以備追溯。使用電子或紙質(zhì)記錄，需防水、防火。

六、日常質(zhì)量控制

（一）內(nèi)部質(zhì)控

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