2025年核酸檢測筆試題及答案一、單項選擇題（每題2分，共30分）1.新型冠狀病毒核酸檢測中，咽拭子采樣的正確操作應避免接觸以下哪個部位？A.雙側(cè)扁桃體B.咽后壁C.舌頭D.懸雍垂答案：C2.采用10:1混采模式時，若某管混采樣本檢測結果為陽性，后續(xù)處理流程中第一步應為？A.立即上報疾控部門B.對該管10名樣本單獨檢測C.重新提取該管核酸并復檢D.核查樣本采集時間及保存條件答案：D3.核酸提取過程中，若使用磁珠法，關鍵步驟“結合-洗滌-洗脫”的核心原理是？A.磁珠與核酸的電荷吸附B.磁珠表面硅羥基與核酸的氫鍵結合C.磁珠對蛋白質(zhì)的特異性結合D.磁珠對鹽離子的中和作用答案：B4.實時熒光PCR檢測中，擴增曲線“平臺期”未出現(xiàn)的常見原因是？A.模板濃度過高B.引物設計錯誤C.熒光染料失效D.擴增循環(huán)數(shù)不足答案：A5.核酸檢測實驗室生物安全二級（BSL-2）區(qū)域中，必須配備的基礎防護設備是？A.正壓防護服B.生物安全柜C.高壓蒸汽滅菌器D.紫外線消毒車答案：B6.新冠病毒ORF1ab基因與N基因同時陽性時，結果判讀應為？A.陽性B.弱陽性C.灰區(qū)D.無效答案：A7.樣本保存液（病毒保存液）的主要成分不包括？A.胍鹽（如異硫氰酸胍）B.牛血清白蛋白（BSA）C.EDTAD.Tris-HCl緩沖液答案：B8.核酸檢測實驗室分區(qū)管理中，“擴增產(chǎn)物分析區(qū)”與“試劑準備區(qū)”之間的壓差要求是？A.正壓（前者高于后者）B.負壓（前者低于后者）C.無壓差要求D.動態(tài)平衡答案：B9.某樣本檢測結果顯示Ct值為38，且擴增曲線呈“拖尾”現(xiàn)象，最可能的原因是？A.樣本中存在PCR抑制物B.引物二聚體干擾C.模板濃度極低D.熒光通道設置錯誤答案：C10.混采樣本采集時，若某受檢者已接種新冠疫苗（滅活疫苗），采樣時間應至少間隔？A.2小時B.4小時C.6小時D.無特殊要求答案：D（注：滅活疫苗不含活病毒，不影響核酸檢測）11.核酸提取儀日常維護中，需重點檢查的項目是？A.加樣針的液面感應功能B.離心轉(zhuǎn)子的平衡度C.冰箱溫度穩(wěn)定性D.計算機操作系統(tǒng)版本答案：A12.實驗室質(zhì)量控制中，“室內(nèi)質(zhì)控”的核心目的是？A.驗證檢測系統(tǒng)的準確性B.確保不同實驗室結果可比性C.監(jiān)控檢測過程的穩(wěn)定性D.評估操作人員的技術水平答案：C13.核酸檢測報告中，“未檢出”的規(guī)范表述應為？A.陰性B.新冠病毒核酸檢測結果陰性C.未檢測到新冠病毒核酸D.檢測結果正常答案：B14.運輸4℃保存的核酸樣本時，若運輸時間超過48小時，應采取的措施是？A.加入冰袋維持2-8℃B.冷凍至-20℃運輸C.立即離心后分離血清D.無需特殊處理答案：B15.某實驗室連續(xù)3次檢測同一陽性對照品，Ct值均比預期高3-5個循環(huán)，最可能的原因是？A.對照品保存不當（反復凍融）B.擴增程序中退火溫度過高C.移液器校準偏差（吸液量不足）D.熒光激發(fā)光強度衰減答案：C二、多項選擇題（每題3分，共30分。每題至少2個正確選項，錯選、漏選均不得分）1.咽拭子采樣時，可能導致假陰性的操作包括？A.采樣前30分鐘受檢者飲水B.拭子僅接觸舌面未到達咽后壁C.拭子在咽部停留時間不足5秒D.采樣后立即將拭子浸入保存液答案：BC2.核酸檢測實驗室“三區(qū)兩通道”中的“三區(qū)”指？A.試劑準備區(qū)B.樣本處理區(qū)C.擴增分析區(qū)D.消毒清洗區(qū)答案：ABC3.實時熒光PCR檢測中，“內(nèi)標”的作用包括？A.監(jiān)測樣本采集是否合格（如是否含人類細胞）B.排除PCR抑制物干擾C.提高檢測靈敏度D.驗證擴增效率答案：ABD4.生物安全柜使用時需遵循的規(guī)范包括？A.操作前開機運行10分鐘B.物品擺放遵循“清潔區(qū)→污染區(qū)”單向原則C.手臂進出時避免快速移動D.操作結束后立即關閉電源答案：ABC5.核酸檢測結果復核的適用場景包括？A.單基因陽性（如僅ORF1ab陽性）B.Ct值≥35的弱陽性樣本C.同一受檢者前后兩次檢測結果矛盾D.混采管初篩陽性答案：ABCD6.樣本運輸過程中需記錄的關鍵信息有？A.運輸起始時間與到達時間B.運輸溫度（實時監(jiān)測數(shù)據(jù)）C.運輸人員姓名及聯(lián)系方式D.樣本數(shù)量及編號答案：ABD7.實驗室發(fā)生離心管破裂（樣本泄漏）時，應急處理步驟包括？A.立即停止離心，待轉(zhuǎn)子完全靜止后開蓋B.佩戴雙層手套、護目鏡清理泄漏物C.用0.55%含氯消毒液覆蓋污染區(qū)域30分鐘D.更換離心轉(zhuǎn)子后繼續(xù)使用答案：ABC8.影響PCR擴增效率的因素包括？A.引物/探針的特異性B.dNTP濃度C.Taq酶的熱穩(wěn)定性D.模板的純度答案：ABCD9.核酸檢測質(zhì)量控制品應具備的特性是？A.基質(zhì)與檢測樣本相似（如咽拭子保存液）B.靶標濃度覆蓋檢測線性范圍C.穩(wěn)定性（-20℃保存6個月無降解）D.含高濃度人類基因組DNA答案：ABC10.混采檢測中，“20:1”模式相比“10:1”模式的優(yōu)勢與風險分別是？A.提高檢測效率B.降低單個樣本檢測成本C.假陽性風險增加D.對檢測靈敏度要求更高答案：ABD三、判斷題（每題1分，共10分。正確填“√”，錯誤填“×”）1.核酸檢測樣本采集時，若受檢者出現(xiàn)咳嗽，應立即停止采樣并更換拭子。（×）（解析：咳嗽不影響采樣，需避免拭子觸碰其他部位。）2.病毒保存液（含胍鹽）可滅活病毒，因此樣本處理區(qū)無需在生物安全柜中操作。（×）（解析：胍鹽雖滅活病毒，但樣本可能含其他病原體，仍需在生物安全柜中處理。）3.實時熒光PCR儀的“ROX”通道用于校正孔間熒光信號差異。（√）4.核酸提取完成后，若暫不檢測，可將DNA/RNA置于4℃保存24小時。（√）5.實驗室分區(qū)標識僅需在入口處張貼，區(qū)域內(nèi)無需重復標注。（×）（解析：分區(qū)標識需在每個區(qū)域入口及關鍵位置明確標注。）6.混采管陽性時，只需對該管10名受檢者重新采樣檢測，無需復核原管。（×）（解析：需先復核原管，排除檢測誤差后再重新采樣。）7.擴增產(chǎn)物分析區(qū)的空氣流向應為“非污染區(qū)→污染區(qū)”。（√）8.移液器校準周期為6個月，若使用頻率低可延長至12個月。（×）（解析：校準周期需嚴格遵循設備說明書，一般不超過12個月，高頻使用需縮短。）9.檢測結果為“陰性”時，報告中無需注明“僅對本次檢測樣本負責”。（×）（解析：所有檢測報告均需注明責任范圍。）10.實驗室廢棄的一次性防護服應作為“感染性廢物”，使用雙層黃色醫(yī)療垃圾袋封裝。（√）四、簡答題（每題6分，共30分）1.簡述核酸檢測中“假陽性”的常見原因及預防措施。答案：常見原因：①擴增產(chǎn)物污染（氣溶膠擴散）；②樣本交叉污染（加樣時吸頭帶液）；③試劑污染（陽性對照或標準品混入其他區(qū)域）；④儀器污染（擴增儀孔間殘留）。預防措施：①嚴格分區(qū)操作（試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)物理隔離）；②使用帶濾芯吸頭；③定期清潔實驗室（紫外線照射+含氯消毒液擦拭）；④設置陰性對照（水對照、空白對照）；⑤使用UNG酶（尿嘧啶-N-糖基化酶）降解含dUTP的擴增產(chǎn)物。2.請列出咽拭子采樣的標準操作步驟（需包含關鍵細節(jié)）。答案：①準備：核對受檢者信息，佩戴N95口罩、手套、護目鏡，打開采樣管并固定；②采樣：受檢者頭后仰，張口發(fā)“啊”音（必要時用壓舌板），將拭子越過舌根，快速擦拭雙側(cè)扁桃體及咽后壁（各2-3次）；③處理：拭子避免觸碰口腔其他部位，立即將拭子頭浸入病毒保存液，折斷拭桿（保留1cm在管內(nèi)），旋緊管蓋；④記錄：標注樣本編號、采集時間，放入密封袋。3.實時熒光PCR檢測中，如何通過擴增曲線判斷結果有效性？答案：①有效曲線：指數(shù)期明顯（斜率≥1.5），平臺期平穩(wěn)（熒光值≥閾值線2倍），Ct值在15-38之間（根據(jù)試劑說明書調(diào)整）；②無效曲線：無指數(shù)期（Ct值無）、平臺期未形成（Ct值＞40）、曲線呈“鋸齒狀”（儀器信號干擾）、引物二聚體（Ct值＜15且熒光值低）；③需復檢的情況：單基因陽性、Ct值接近灰區(qū)（如35-40）、曲線形態(tài)異常但Ct值在有效范圍內(nèi)。4.簡述核酸檢測實驗室“室內(nèi)質(zhì)控”的具體內(nèi)容及頻率。答案：內(nèi)容：①陽性對照（覆蓋檢測線性范圍的低、中、高濃度）；②陰性對照（無核酸模板的水對照）；③內(nèi)標對照（監(jiān)測樣本質(zhì)量及抑制物）；④重復性測試（同一份樣本重復檢測3次，Ct值偏差≤1.5）。頻率：每批次檢測需包含陰、陽性對照；內(nèi)標對照隨樣本同步檢測；重復性測試每工作日至少1次；異常結果時增加質(zhì)控頻率。5.混采樣本檢測中，若某20:1混采管初篩陽性，后續(xù)處理流程是什么？答案：①復核原管：使用原管核酸重復檢測，確認是否為檢測誤差；②若復核陽性，收集該管20名受檢者信息（姓名、聯(lián)系方式、采樣時間）；③單采復檢：對20名受檢者單獨采集咽拭子（1:1檢測），同時采集原混采管對應的受檢者咽拭子（用于溯源）；④結果上報：單采陽性者立即上報疾控部門，啟動流調(diào)；⑤記錄歸檔：保存原管核酸、單采樣本、檢測記錄至少3個月。五、案例分析題（每題10分，共20分）案例1：某實驗室在常規(guī)檢測中發(fā)現(xiàn)，連續(xù)3天檢測的“弱陽性樣本”（Ct值35-38）數(shù)量較平時增加3倍，且這些樣本均來自同一社區(qū)采樣點。問題：（1）可能的原因有哪些？（2）應采取哪些排查措施？答案：（1）可能原因：①采樣操作不規(guī)范（如拭子未接觸咽后壁，樣本量不足）；②樣本保存不當（運輸時間過長，保存溫度高于8℃）；③采樣拭子質(zhì)量問題（吸附能力差）；④檢測試劑靈敏度下降（批次間差異）；⑤社區(qū)實際感染率上升（需結合流行病學判斷）。（2）排查措施：①調(diào)取該社區(qū)采樣點視頻，核查采樣人員操作（是否接觸正確部位、停留時間）；②檢查樣本運輸記錄（起始時間、溫度監(jiān)測數(shù)據(jù)）；③更換該批次采樣拭子，用已知陽性樣本驗證吸附能力；④使用同一批弱陽性樣本，用不同品牌試劑復檢；⑤聯(lián)系疾控部門，統(tǒng)計該社區(qū)近期新增病例及密接情況；⑥對實驗室環(huán)境進行污染排查（擴增區(qū)空氣采樣、設備表面拭子檢測）。案例2：某實驗室夜間檢測時，一臺實時熒光PCR儀突然斷電，重啟后顯示“溫度模塊故障”，此時已有100份樣本完成核酸提取，等待上機。問題：（1）可能造成的影響是什么？（2）應如何處理以減少損失？答案：（1）影響：①已提取的核酸（RNA）易降解（室溫放置超過2小時降解率＞50%）；②若儀器短