ICS65.020.30CCSB433715IDB3715/T39—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件由聊城市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出、歸口并組織實(shí)施。本文件起草單位：聊城市東昌府區(qū)畜牧獸醫(yī)事業(yè)發(fā)展中心、聊城市東昌府區(qū)興堂牧業(yè)有限公司、聊城職業(yè)技術(shù)學(xué)院、莘縣畜牧獸醫(yī)事業(yè)發(fā)展中心、高唐縣畜牧水產(chǎn)事業(yè)中心、冠縣農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心、聊城市東昌府區(qū)道口鋪街道農(nóng)林水綜合服務(wù)中心、聊城市東昌府區(qū)閆寺街道農(nóng)林水綜合服務(wù)中心。本文件主要起草人：侯國生、張婭娣、曹學(xué)香、李孟燕、齊來勇、李長磊、石延國、郭廣玲、許文婷、王蘭天、賈國富、衣慧靜、蘇子明、張東福、楊雪青、張廣瑞、李樂軍、張瑞華、張國良、趙景龍、付崇波。DB3715/T39—20231魯西黑頭羊人工授精技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了魯西黑頭羊的術(shù)語和定義、種公羊選擇與調(diào)教、采精前準(zhǔn)備、精液品質(zhì)檢查、精液稀釋、精液保存運(yùn)輸、發(fā)情母羊鑒定、輸精及檔案記錄。本文件適用于規(guī)?；B(yǎng)羊場(chǎng)、養(yǎng)殖專業(yè)戶、配種站點(diǎn)魯西黑頭羊的人工授精技術(shù)操作。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。DB37/T3367魯西黑頭羊3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1魯西黑頭羊luxiblack-headsheep頭頸背毛黑色，體軀背毛白色，頭清秀，鼻梁隆起，耳大稍下垂，頸背部結(jié)合良好，公、母羊均無角，瘦尾。胸寬深、背腰平直、后軀豐滿、結(jié)構(gòu)勻稱，四肢較高且粗壯，蹄質(zhì)堅(jiān)實(shí)，全身呈桶裝結(jié)構(gòu)，肉用體型明顯。4種公羊選擇與調(diào)教4.1種公羊選擇4.1.1種公羊應(yīng)符合DB37/T3367要求，體型外貌、體重體尺、繁殖性能，綜合評(píng)定達(dá)到一級(jí)以上。4.1.2選擇符合魯西黑頭羊種用標(biāo)準(zhǔn)，體質(zhì)結(jié)實(shí)，結(jié)構(gòu)勻稱，生產(chǎn)性能高，生殖器官發(fā)育正常，有明顯魯西黑頭羊品種特征，精液品質(zhì)良好、健康無病的公羊作為種公羊。4.2種公羊調(diào)教4.3公羊牽引公羊牽到采精現(xiàn)場(chǎng)后，停留3min～5min，再讓其爬跨。5采精前準(zhǔn)備5.1器械洗滌和消毒DB3715/T39—202325.1.1采精前人工授精所用器械（見附錄A假陰道內(nèi)胎、玻璃棒、溫度計(jì)、金屬鑷子用75%酒精棉球擦試消毒；集精杯、輸精器、稀釋液、生理鹽水、棉球、毛巾、紗布、保存運(yùn)輸精液用的玻璃容器高壓蒸汽消毒，消毒溫度115℃,時(shí)間30min。5.1.2輸精時(shí)當(dāng)連續(xù)數(shù)只母羊輸精時(shí)，輸精器及開膣器在為每只母羊使用后，應(yīng)經(jīng)75%酒精棉球由前向后擦拭消毒再為另一只母羊輸精。5.1.3輸精后人工授精所用器械每次使用后，用洗滌劑洗刷干凈。假陰道內(nèi)胎、集精杯、輸精器、保存運(yùn)輸精液用的容器等接觸精液的器械，徹底消毒后，再用經(jīng)滅菌的稀釋液沖洗2次。開膣器洗滌干凈消毒后，再用滅菌生理鹽水棉球沖洗2次。假陰道內(nèi)胎的油漬及輸精器內(nèi)殘留的精液，均應(yīng)徹底洗滌干凈，最后再經(jīng)清水和蒸餾水各沖洗1次并保持清潔、干燥，存放于清潔柜內(nèi)。5.2假陰道準(zhǔn)備5.2.1安裝檢查所用內(nèi)胎有無損壞和沙眼，完整無損者放入沸水浸泡3min～5min，將內(nèi)胎裝入外殼，光面朝內(nèi)，兩頭等長，一端翻套在外殼上，依同法套好另一端。注意勿使內(nèi)胎有扭轉(zhuǎn)情況，并使松緊適度，然后兩端分別套上橡皮圈固定。5.2.2調(diào)試用漏斗將50℃~55℃溫水注入到假陰道夾層內(nèi)，水量為外殼與內(nèi)胎間容量的1/2～1/3，用消毒玻璃棒蘸取潤滑劑，將假陰道內(nèi)胎前1/2段由外向內(nèi)均勻涂抹一薄層，用經(jīng)消毒的溫度計(jì)檢測(cè)假陰道內(nèi)腔溫度，以達(dá)39℃~42℃為宜，若過低、過高可用熱水、冷水調(diào)節(jié)，向夾層內(nèi)注入適量空氣，使假陰道內(nèi)腔形成一定的壓力，采精口端形成三角形，用長柄鑷子夾上75%酒精消毒內(nèi)胎，從內(nèi)向外旋轉(zhuǎn)，勿留空白，停留3s～5s，酒精揮發(fā)后，用生理鹽水棉球擦拭，沖洗。5.3臺(tái)羊準(zhǔn)備選擇體格大小與公羊大小相近的發(fā)情健康母羊作為臺(tái)羊。假母羊?yàn)榕_(tái)羊時(shí)，應(yīng)先經(jīng)過訓(xùn)練，即先用真母羊?yàn)榕_(tái)羊，適應(yīng)采精后，再改用假母羊作臺(tái)羊。6采精6.1采精方法6.1.1種公羊在采精之前，以濕毛巾將陰莖包皮周圍擦拭干凈。6.1.2采精人員蹲于臺(tái)羊右側(cè)，右手持假陰道與地面成35。～40。角，緊靠于臺(tái)羊尻部，當(dāng)種公羊爬跨于臺(tái)羊背上并伸出陰莖時(shí)，立即敏捷地用左手指輕托陰莖包皮，將陰莖導(dǎo)入假陰道內(nèi)。公羊射精后，立即將假陰道豎起，排出空氣，取下集精杯，蓋上集精杯蓋，掛上公羊牌號(hào)送往精液處理室。6.2采精次數(shù)DB3715/T39—20233種公羊宜采精1次～2次/d，每周宜采5d，休息2d。7精液品質(zhì)檢查7.1感官檢查種公羊射精量1mL～1.5mL，精液乳白色，無味或略帶腥味；帶有腐敗臭味，出現(xiàn)紅色、褐色的精液不應(yīng)用于輸精。7.2顯微鏡檢查7.2.1檢測(cè)周期7.2.2檢查方法用消毒過的干凈玻璃棒取原精液或用生理鹽水稀釋過的精液1滴，滴在干凈的干燥載玻片上，蓋上干凈的蓋玻片，使蓋玻片與載玻片之間充滿精液，避免產(chǎn)生氣泡，然后在顯微鏡下放大300倍～600倍進(jìn)行觀察，觀察時(shí)蓋玻片、載玻片、顯微鏡載物臺(tái)的溫度≥30℃,室溫≥18℃。7.2.3精子活率100%的精子呈直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)者評(píng)為1.0；90%的精子呈直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)者評(píng)為0.9，依此類推。7.2.4精子密度顯微鏡視野內(nèi)精子密集，精子間空隙小于1個(gè)精子長度的精液定為“密”級(jí)；精子間空隙相當(dāng)于1個(gè)精子的長度，能看到每個(gè)精子活動(dòng)的定為“中”級(jí)；精子稀少，精子間空隙超過1個(gè)精子長度的定為“稀”級(jí)。8精液稀釋8.1精液稀釋液配制8.1.1奶類稀釋液取健康母牛、母羊的新鮮奶，92℃~95℃水浴消毒15min，溫度降至40℃以下，加入青霉素100000U/100mL～200000U/100mL。8.1.2葡-檸-卵稀釋液葡萄糖3g，檸檬酸鈉1.4g，蒸餾水加至100mL后取上液80mL，加卵黃20mL，青霉素100000U。8.1.3生理鹽水0.9%氯化鈉溶液。8.2精液稀釋8.2.1稀釋倍數(shù)根據(jù)精液密度、活率和選用的稀釋液而定，每個(gè)輸精劑0.1mL～0.2mL，保持有效精子數(shù)在20000000個(gè)以上。DB3715/T39—202348.2.2調(diào)整稀釋液的溫度與原精液溫度相同。先以1:5作第一次稀釋，放置10min后再稀釋至原精液的1倍～3倍，精液稀釋后，進(jìn)行精子活率評(píng)定，以檢驗(yàn)稀釋效果。8.2.3精液瓶作好標(biāo)記，注明種公羊號(hào)、采精時(shí)間、精液量及其活率評(píng)定等級(jí)。9精液保存運(yùn)輸9.1采出的精液，經(jīng)精液品質(zhì)檢查，精子活率≥0.8的精液，應(yīng)迅速稀釋、包裝、降溫。9.2運(yùn)送精液的保溫瓶放入冰塊，精液溫度保持在2℃~5℃。精液瓶的溫度應(yīng)緩慢下降，并穩(wěn)妥安置于保溫瓶?jī)?nèi)。9.3精液在運(yùn)輸過程中，嚴(yán)防劇烈振蕩，盡可能縮短途中運(yùn)輸時(shí)間。9.4經(jīng)運(yùn)輸和保存的精液，經(jīng)精液品質(zhì)檢查，精子活率≥0.6的，方可用于輸精。輸精時(shí)從保溫瓶中取出，在室溫下，溫水中使精液溫度升高至18℃~25℃。10母羊發(fā)情鑒定10.1初配年齡魯西黑頭羊適宜的初配年齡為7月齡～8月齡。10.2母羊發(fā)情表現(xiàn)10.2.1魯西黑頭羊母羊每次發(fā)情持續(xù)時(shí)間一般為26h～30h。發(fā)情周期平均為18d。10.2.2母羊發(fā)情時(shí)，興奮不安，行為異常，尾巴頻頻擺動(dòng)，對(duì)外界刺激反應(yīng)敏感，食欲減退，外陰部松馳、充血、腫脹、陰蒂勃起；陰道充血、松馳，分泌粘液，有交配欲，主動(dòng)接近公羊，在公羊追逐或爬跨時(shí)站立不動(dòng)。發(fā)情終止時(shí)，拒絕公羊接近和爬跨。10.3.1選擇體格健壯無疫病，年齡2歲～5歲的公羊做試情公羊，在腰部綁系試情布，將陰莖罩住，或做輸精管結(jié)扎或陰莖移除術(shù)。10.3.2試情公羊單圈喂養(yǎng)，除作試情外嚴(yán)禁和母羊在一起，試情公羊給予良好的飼養(yǎng)條件，未作手術(shù)的種公羊每隔5d～6d排精或本交一次。10.3.3試情公羊與母羊的比例為1:40～1:50。試情公羊進(jìn)入母羊群后，發(fā)現(xiàn)有站立不動(dòng)并主動(dòng)接近公羊或接受公羊爬跨的母羊，即為發(fā)情母羊。11.1輸精時(shí)間母羊經(jīng)發(fā)情鑒定后，方可給予輸精，輸精時(shí)間一般在母羊發(fā)情后12h～24h。11.2輸精部位輸精前，外陰部清洗干凈，以1/10000高錳酸鉀溶液擦拭消毒，擦干后，再以生理鹽水棉球擦拭，將經(jīng)消毒的開膣器輕緩地插入陰道，打開陰道，尋找子宮頸外口，再將輸精器插入子宮頸外口內(nèi)，深度DB3715/T39—2023511.3輸精量原精液0.05mL～0.1mL，稀釋后精液0.05mL～0.1mL。11.4輸精次數(shù)早晨發(fā)現(xiàn)發(fā)情，當(dāng)天下午輸精1次，第2天早上復(fù)配1次；傍晚發(fā)現(xiàn)發(fā)情，第2天上、下午各輸精12檔案記錄應(yīng)分別建立種公羊精液品質(zhì)檢查及利用記錄表（見附錄B）和母羊繁殖配種記錄表（見附錄C），各項(xiàng)記錄應(yīng)按時(shí)、準(zhǔn)確，每月進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。DB3715/T39—20236人工授精所需主要器材與藥品人工授精所需主要器材與藥品見表A.1。表A.1人工授精所需的主要器材與藥品假陰道外殼、假陰道內(nèi)胎、假陰道塞子(帶氣嘴)、集精杯、開膣器、