ICS65.020.20

CCSB39

4103

洛陽市地方標準

DB4103/T192—2025

羊肚菌菌種生產(chǎn)技術規(guī)程

2025-04-25發(fā)布2025-05-25實施

洛陽市市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB4103/T192—2025

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別這些專利的責任。

本文件由洛陽市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本文件起草單位：洛陽師范學院、洛陽市農(nóng)林科學院、嵩縣農(nóng)業(yè)技術推廣服務中心、澗西區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)

村局、洛陽五丈山農(nóng)業(yè)科技公司、洛陽飛振農(nóng)業(yè)科技有限公司。

本文件主要起草人：韓建明、史明艷、吳孔陽、張延召、郭立、付鵬程、周曉君、王育娜、李金博、

易力、范一霖、張向月、王帥兵、張健、謝劉振、劉大齊。

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DB4103/T192—2025

羊肚菌菌種生產(chǎn)技術規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了洛陽市羊肚菌菌種生產(chǎn)的設施設備、母種制作、原種和栽培種制作、檢測、菌種標識

及儲藏、對照留樣檢測。

本文件適用于羊肚菌母種、原種、栽培種生產(chǎn)技術。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB4806.7食品安全國家標準食品接觸用塑料材料及制品

NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術規(guī)程

NY/T1284食用菌菌種中雜菌及害蟲的檢驗

3術語與定義

本文件沒有可界定的術語和定義。

4設施設備

4.1菌種生產(chǎn)應選擇地勢高，通風良好，空氣清新，水源近，排水通暢，交通便利的場所。菌種生產(chǎn)

廠房應有各自隔離的攤曬場、原材料庫、配料分裝庫。配套有配料室、攪拌室、裝袋（瓶）室、滅菌室、

冷卻室、接種室、培養(yǎng)室（通風好，有紗窗）、菌種檢測室及菌種冷藏庫等各環(huán)節(jié)的設施，應符合NY/T

528規(guī)定。

4.2菌種生產(chǎn)需要粉碎機、電子秤、攪拌機、裝袋（瓶）機、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、超凈工作臺

或接種箱、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架、搖床、顯微鏡等設備，應符合NY/T528規(guī)定。

5母種制作

5.1培養(yǎng)基

推薦使用以下配方：

配方1：馬玲薯提取液200g，葡萄糖20g，瓊脂15g，KH?PO?2g，MgSO?·7H?O0.5g，酵母粉2

g，水1000mL。

配方2：馬鈴薯200g，葡萄糖或蔗糖20g，瓊脂15g～20g，水1000mL。

5.2容器

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試管選用18mm×180mm或者20mm×200mm。

5.3分裝

培養(yǎng)基至分裝試管1/4～1/5處，用棉塞或硅膠塞封閉試管口，每5支試管為1把，用牛皮紙包扎，橡

皮筋扎緊，棉塞向上放置。棉塞應采用梳棉。

5.4滅菌

4h內(nèi)完成培養(yǎng)基分裝后立即進鍋滅菌。在121℃～122℃（0.11MPa～0.12MPa）恒溫滅菌25min。

滅菌完成后自然降壓，待降溫至（65±5）℃時取出試管，在空氣清潔的室內(nèi)擺斜面，要求斜面長度不

超過試管長度的2/3。

5.5滅菌效果檢查

冷卻后抽取3%～5%的試管，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)48h后無微生物長出的為滅菌合格。

5.6接種

選擇經(jīng)過出菇試驗的優(yōu)良菌株進行接種。接種環(huán)境溫度要求18℃以下。在超凈工作臺或接種箱內(nèi)接

種。接種前用紫外燈照射30min，之后用75%酒精進行表面消毒。接種過程嚴格執(zhí)行無菌操作，接種

后及時貼好標簽并做好記錄。

5.7培養(yǎng)

溫度控制在16℃～18℃，避光培養(yǎng)。接種后第3d、第5d和長滿培養(yǎng)基后分別進行檢驗，挑出未

活、污染和生長不良的不合格試管。

5.8檢測

培養(yǎng)好的母種應經(jīng)過交配型基因檢測和出菇試驗，檢測不合格的不得使用。交配型基因檢測方法見

附錄A，出菇試驗檢測見附錄B。

5.9感官要求

母種感官要求見附錄C。

6原種和栽培種制作

經(jīng)過檢測的母種進行生產(chǎn)性原種制作。

6.1制作流程

培養(yǎng)料配制→裝瓶/袋→滅菌→冷卻→接種→培養(yǎng)→成品。

6.2培養(yǎng)料配方

推薦使用以下配方：

配方1：小麥粒85%、麥麩10%、石灰2%、過磷酸鈣2%、石膏1%。

配方2：小麥粒80%、棉籽殼13%、麥麩5%、石灰1%、石膏1%。

配方3：小麥粒72%、玉米芯20%、麥麩5%、石灰2%、石膏1%。

配方4：小麥粒70%、棉籽殼23%、麥麩5%、石灰1%、石膏1%。

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6.3培養(yǎng)料配制

6.3.1泡發(fā)小麥

水里加2%的生石灰，沒過小麥10cm,水溫在20℃左右泡發(fā)時間30h左右，保證小麥完全泡發(fā)飽滿，

無白芯。泡后把石灰沖洗干凈。

6.3.2玉米芯或棉籽殼發(fā)酵

使用生石灰及麩皮發(fā)酵腐熟，發(fā)酵后若發(fā)臭或者有干芯的禁止使用。

6.3.3培養(yǎng)料混合

將泡發(fā)好的小麥+發(fā)酵后的玉米芯（棉籽殼），與配方中石灰粉、石膏等其他原料攪拌均勻，控制

含水量65%左右。

6.4裝袋（瓶）

6.4.1原種裝瓶

采用850mL以下、瓶口直徑小于等于4cm、耐126℃高溫的近透明塑料瓶子或玻璃瓶。

6.4.2栽培種裝袋（瓶）

采用同原種要求相同的瓶子，也可采用折徑為（15～17）cm×（33～35）cm耐126℃高溫的聚丙烯

塑料袋。

6.4.3裝袋（瓶）要求

裝袋（瓶）后要求培養(yǎng)料上表面距瓶（袋）口距離（50±5mm），便于后續(xù)套套環(huán)、封口等操作，

然后放入專用滅菌筐內(nèi)。每袋（瓶）裝培養(yǎng)基質(zhì)500g～600g。各類容器都應使用棉塞或窩口海綿塞封

口，也可用能滿足濾菌和透氣要求的無棉蓋體套環(huán)封口。以上聚丙烯塑料袋均符合GB4806.7要求。

6.5滅菌

采用高壓滅菌或常壓滅菌。

原種和栽培種按每次滅菌數(shù)量隨機抽取1%作為樣品，挑取培養(yǎng)料顆粒經(jīng)無菌操作接種于置于PDA

培養(yǎng)基中，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)48h后無微生物長出的為滅菌合格。

6.6接種

接種環(huán)境溫度要求18℃以下?？刹捎贸瑑艄ぷ髋_、層流罩、接種箱接種。提前采用臭氧和紫外線雙

重殺菌完成接種室的滅菌消殺工作，消殺時間不低于10h。接種時須關閉紫外燈，接種人員更換工作服、

戴口罩，將預冷后的菌種送入接種室，用75%的酒精把原種及接種鉤等進行消毒。每支母種接種6瓶

（袋）～8瓶（袋），接種塊大小12mm×15mm。

6.7培養(yǎng)

接種完成后送至菌種培育室，培育室溫度設定16℃～18℃左右，培養(yǎng)20d～25d左右至菌絲長滿。培

育室注意遮光，在外界溫度低于18℃時進行通風。

7檢測

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原種和栽培的檢測方法同5.8，感官要求見附錄C。雜菌檢測按NY/T1284規(guī)定的方法檢驗菌種的雜

菌。

8菌種標識及儲藏

經(jīng)檢查合格的菌種應做好標識（廠名廠址、生產(chǎn)日期、品種等），及時包裝入菌種庫。菌種庫溫度1℃～

4℃，避光，適當通風，定期對空間進行殺菌處理。同時做好生產(chǎn)各環(huán)節(jié)詳細記錄。

9對照留樣檢測

各級菌種都應留樣備查，按批隨機抽取樣品留存，抽樣量分別為該批培養(yǎng)量的1%，每批抽樣數(shù)量

母種不少于1支、原種不少于5瓶、栽培種不少于10袋，保存于潔凈的1℃～4℃冷庫中。同批次栽培種

還必須同時留樣出菇驗證。

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附錄A

（資料性）

交配型基因檢測（參考）

交配型基因檢測步驟如下：

a)用CTAB法提取待測菌種的菌株總DNA作為PCR擴增模板；

b)以引物對MAT1-1L/MAT1-1R（MAT1-1L:5′-TTACCTTACTGGACTGGTTC-3′,MAT1-1R:5′

-AATGCAAGTAGGTGTCATTC-3′）進行PCR擴增，獲得預期0.7kb的唯一條帶的菌株，說明含有MAT1-1

交配型基因；以引物對MAT1-2L/MAT1-2R（MAT1-2L:5′-TCCTATGAATGCGTAAGTTC-3′,MAT1-2R:5

′-GTATTATCACCAACCGTAGC-3′）進行PCR擴增，獲得預期0.4kb的唯一條帶的菌株，說明含有MAT1-2

交配型基因；

c)PCR擴增體系：2×PCRmix12.5μL，5μM的正反向引物各1μL，DNA模板20ng，ddH2O補足

至25μL；

d)擴增程序為：94℃預變性3min；94℃變性1min，50℃退火30sec，72℃延伸1min，35個循環(huán)；

72℃延伸10min；

e)若只檢測到MAT1-1交配型和MAT1-2交配型中的任一種交配型的菌株，說明出菇能力較差或不

能出菇；若檢測到MAT1-1交配型和MAT1-2兩種交配型的菌株，說明具有出菇能力。

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附錄B

（資料性）

菌種出菇試驗

將被檢母種先后制作成原種和栽培種，每個菌種栽培面積≥3m2，至少設置3個隨機小區(qū)重復，進

行常規(guī)種植管理。記錄母種、原種和栽培長滿所需時間，出第一潮菇所需時間和產(chǎn)量，總產(chǎn)和平均產(chǎn)量，

第一潮菇菇形、色澤、質(zhì)地，菌蓋和菌柄的長短等指標，統(tǒng)計檢驗結果。同時將該母種的出發(fā)菌株設為

對照，做同樣處理。對比二者的檢驗結果，以時間計的檢驗項目中，被檢母種的任何一項時間校對照菌

株推遲5天以上（含5天）者，為不合格；產(chǎn)量顯著低于對照菌株者，為不合格；菇體外觀形態(tài)與對照明

顯不同或畸形者，為不合格。

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附錄C

（資料性）

母種、原種、栽培種感官要求

母種感官要求見表C.1。

表C.1母種感官要求

項目要求

容器完整、無損、潔凈

棉塞或無棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、能滿足透氣和過濾要求

培養(yǎng)基灌入量為試管總容積的1/4，培養(yǎng)皿高的的1/3～1/2

斜面背面外觀培養(yǎng)基不干縮，無積水、顏色均勻、無暗斑、無色素

菌絲生長量長滿斜面或平板

菌絲體特征菌絲潔白、絨毛狀、生長致密、均勻、健壯

菌絲體表面均勻、舒展、平整

菌絲體分泌物無

菌落邊緣整齊

雜菌菌落無

斜面背面外觀培養(yǎng)基不干縮，無積水、顏色均勻、無暗斑、無色

原種感官要求見表C.2。

表C.2原種感官要求

項目要求

容器完整、無破損、潔凈

棉塞或無棉蓋體干燥、整潔、松緊適度、能滿足透氣和濾菌要求

培養(yǎng)基上表面距瓶（袋）口的距離（50±5）mm

菌絲生長量長滿容器

菌絲體特征菌絲體生長旺健、整齊

培養(yǎng)物表面菌絲體生長均勻、無高溫抑制線

培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶壁、無干縮

菌絲分泌物無、允許少量無色至棕黃色水珠

雜菌菌落無

子實體原基無

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