一、菌種的衰退與復(fù)壯的概念1.衰退（degeneration）：菌種在培養(yǎng)或保藏過程中，由于自發(fā)突變的存在，出現(xiàn)某些原有優(yōu)良生產(chǎn)性狀的劣化、遺傳標(biāo)記的丟失等現(xiàn)象，稱為菌種的衰退。衰退的原因：①基因突變，②分離現(xiàn)象。常見的衰退現(xiàn)象：菌落和細(xì)胞形態(tài)的改變；生長速度緩慢，產(chǎn)孢子越來越少；抵抗力、抗不良環(huán)境能力減弱等。代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力或其對宿主寄生能力下降；第四節(jié)菌種的衰退、復(fù)壯及保藏2、菌種的復(fù)壯（rejuvenation）：使衰退的菌種恢復(fù)原來優(yōu)良性狀。狹義的復(fù)壯是指在菌種已發(fā)生衰退的情況下，通過純種分離和生產(chǎn)性能測定等方法，從衰退的群體中找出未衰退的個(gè)體，以達(dá)到恢復(fù)該菌原有典型性狀的措施；廣義的復(fù)壯是指在菌種的生產(chǎn)性能未衰退前就有意識(shí)的經(jīng)常、進(jìn)行純種的分離和生產(chǎn)性能測定工作，以期菌種的生產(chǎn)性能逐步提高。實(shí)際上是利用自發(fā)突變（正變）不斷地從生產(chǎn)中選種

菌種的復(fù)壯措施：

①純種分離：（平板劃線法、涂布法、傾注法、單細(xì)胞挑取法等）。

②通過寄主體內(nèi)生長進(jìn)行復(fù)壯（如Bacillusthuringiensis的復(fù)壯）；

③淘汰已衰退的個(gè)體（采用比較激烈的理化條件進(jìn)行處理，以殺死生命力較差的已衰退個(gè)體）。

④采用有效的菌種保藏方法。3、防止菌種衰退的方法：

①控制傳代次數(shù)（一般在DNA的復(fù)制過程中，堿基的錯(cuò)配率是5x10-4，自發(fā)突變的頻率為10-8~10-9，采用良好的菌種保藏方法，可以減少移種和傳代的數(shù)）；

②選擇合適的培養(yǎng)條件；

③采用不同類型的細(xì)胞進(jìn)行傳代（對絲狀微生物而言，通常采用穩(wěn)定的單核孢子進(jìn)行接種）；

④采用有效的菌種保藏方法。二、菌種保藏：

1.目的：

①存活，不丟失，不污染

②防止優(yōu)良性狀喪失

③隨時(shí)為生產(chǎn)、科研提供優(yōu)良菌種

2.原理：選用優(yōu)良的純種，（最好是休眠體，如分生孢子、芽胞等），創(chuàng)造降低微生物代謝活動(dòng)強(qiáng)度，生長繁殖受抑制，難以發(fā)生突變的環(huán)境條件。（其環(huán)境要素是干燥、低溫、缺氧、缺營養(yǎng)以及添加保護(hù)劑等）

3.菌種保藏的方法3、方法：

①低溫保藏法

方法：菌種管置4℃冰箱保藏，定時(shí)傳代

原理：低溫下，微生物代謝強(qiáng)度明顯下降。

②石蠟油低溫保藏法：

橡皮塞取代棉塞、加石蠟油。

③干燥保藏法將菌種置于土壤、細(xì)紗、濾紙、硅膠等干燥材料上保藏。如砂土管法，適用于放線菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏時(shí)間幾至幾十年。④真空冷凍干燥法加有保護(hù)劑的菌懸液在凍結(jié)狀態(tài)下予以真空干燥。適用于各種微生物，便于大量保藏，菌種存活時(shí)間長，是目前最好的保藏方法。⑤液氮超低溫保藏法將菌種置于保護(hù)劑中，預(yù)凍后保存在液氮超低溫冰箱中（-196℃）。適用于各種微生物的較理想的保藏方法。菌種保藏機(jī)構(gòu)的任務(wù)：廣泛收集科研和生產(chǎn)菌種、菌株，并加以妥善保管，使之達(dá)到不死、不衰、不亂以及便于研究、交換和使用的目的。菌種保藏機(jī)構(gòu)：

中國微生物菌種保藏委員會(huì)(CCCCM)

美國的典型菌種保藏中心(ATCC)

英國國家典型菌種保藏所（NCTC）法國里昂巴斯德研究所（IPL）國內(nèi)外菌種保藏機(jī)構(gòu)：干法保藏菌種的方法幾種常用菌種保藏方法的比較方法名稱主要措施適宜菌種保藏期評價(jià)冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固體）石蠟油封藏法*沙土保藏法冷凍干燥法低溫低溫低溫、缺氧干燥、無營養(yǎng)干燥、無氧、低溫、有保護(hù)劑各大類細(xì)菌、酵母菌各大類**產(chǎn)孢