基因修飾干細(xì)胞提高肝生物轉(zhuǎn)化效率的策略演講人01基因修飾干細(xì)胞提高肝生物轉(zhuǎn)化效率的策略02肝生物轉(zhuǎn)化的生理基礎(chǔ)與臨床意義03干細(xì)胞在肝再生與生物轉(zhuǎn)化中的天然優(yōu)勢04基因修飾干細(xì)胞提高肝生物轉(zhuǎn)化效率的核心策略05基因修飾干細(xì)胞面臨的挑戰(zhàn)與優(yōu)化方向06臨床轉(zhuǎn)化前景與倫理考量07總結(jié)與展望目錄01基因修飾干細(xì)胞提高肝生物轉(zhuǎn)化效率的策略02肝生物轉(zhuǎn)化的生理基礎(chǔ)與臨床意義肝生物轉(zhuǎn)化的生理基礎(chǔ)與臨床意義肝生物轉(zhuǎn)化是指機(jī)體對外源性物質(zhì)（如藥物、毒素、環(huán)境污染物）及內(nèi)源性物質(zhì)（如激素、膽紅素）進(jìn)行代謝轉(zhuǎn)化的過程，是肝臟維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的核心功能之一。這一過程主要通過肝細(xì)胞內(nèi)的Ⅰ相代謝酶（如細(xì)胞色素P450家族、環(huán)氧合酶）、Ⅱ相代謝酶（如谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶）及Ⅲ相轉(zhuǎn)運體（如P-糖蛋白）協(xié)同完成，將脂溶性物質(zhì)轉(zhuǎn)化為水溶性代謝產(chǎn)物，最終通過膽汁或尿液排出體外。然而，在肝衰竭、肝硬化、藥物性肝損傷及遺傳性代謝肝病（如Crigler-Najjar綜合征、Gilbert綜合征）等疾病狀態(tài)下，肝細(xì)胞數(shù)量減少、功能受損，導(dǎo)致生物轉(zhuǎn)化效率顯著下降，進(jìn)而引發(fā)藥物蓄積、毒素堆積、黃疸等一系列嚴(yán)重后果，臨床治療面臨巨大挑戰(zhàn)。肝生物轉(zhuǎn)化的生理基礎(chǔ)與臨床意義傳統(tǒng)治療手段中，肝移植雖可重建肝功能，但供體短缺、免疫排斥及高昂費用限制了其廣泛應(yīng)用；人工肝支持系統(tǒng)雖能暫時替代部分肝功能，卻難以實現(xiàn)長期、高效的生物轉(zhuǎn)化代謝。近年來，干細(xì)胞技術(shù)的突破為肝再生提供了新的“種子細(xì)胞”來源，而基因修飾技術(shù)的引入則進(jìn)一步通過精準(zhǔn)調(diào)控干細(xì)胞生物學(xué)特性，使其定向分化為具有高生物轉(zhuǎn)化能力的肝細(xì)胞樣細(xì)胞（Hepatocyte-likeCells,HLCs），為提高肝生物轉(zhuǎn)化效率開辟了全新路徑。作為一名長期致力于肝病基礎(chǔ)與轉(zhuǎn)化研究的科研人員，我深刻體會到：將干細(xì)胞的多向分化潛能與基因編輯的精準(zhǔn)性相結(jié)合，是解決肝功能衰竭患者“代謝功能重建”難題的關(guān)鍵突破口，其臨床價值不僅在于替代受損肝細(xì)胞，更在于通過“生物-基因”協(xié)同策略實現(xiàn)肝生物轉(zhuǎn)化效率的質(zhì)的提升。03干細(xì)胞在肝再生與生物轉(zhuǎn)化中的天然優(yōu)勢干細(xì)胞在肝再生與生物轉(zhuǎn)化中的天然優(yōu)勢干細(xì)胞是一類具有自我更新能力和多向分化潛能的原始細(xì)胞，根據(jù)其來源可分為胚胎干細(xì)胞（ESCs）、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSCs）、間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）及肝干細(xì)胞（HpSCs）等。不同類型干細(xì)胞在肝再生中各具優(yōu)勢，為基因修飾提供了豐富的細(xì)胞載體選擇。1干細(xì)胞的類型及向肝細(xì)胞分化的潛能-胚胎干細(xì)胞（ESCs）：具有全能性，可在特定誘導(dǎo)條件下（如ActivinA、Wnt3a、HGF等生長因子組合）高效分化為HLCs，其表達(dá)的關(guān)鍵肝功能基因（如ALB、AFP、CYP3A4）接近原代肝細(xì)胞，但存在倫理爭議及致瘤風(fēng)險，限制了臨床應(yīng)用。-誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSCs）：通過體細(xì)胞重編程技術(shù)（如Yamanaka因子OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC）獲得，兼具ESCs的多向分化潛能與患者特異性優(yōu)勢，可避免免疫排斥，且無倫理限制。研究表明，iPSCs來源的HLCs（iPSC-HLCs）在CYP450酶活性、尿素合成及糖原儲存等方面已接近成熟肝細(xì)胞，是目前基因修飾研究的主要細(xì)胞類型。1干細(xì)胞的類型及向肝細(xì)胞分化的潛能-間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）：如骨髓MSCs、臍帶MSCs，雖分化為成熟肝細(xì)胞的能力相對較弱，但其強(qiáng)大的旁分泌效應(yīng)（分泌HGF、FGF、IL-10等細(xì)胞因子）可抑制肝細(xì)胞凋亡、促進(jìn)內(nèi)源性肝再生，且來源廣泛、免疫原性低，適合作為“基因修飾-旁分泌”協(xié)同治療的載體。-肝干細(xì)胞（HpSCs）：包括肝卵圓細(xì)胞和膽管細(xì)胞，具有向肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞雙向分化的潛能，是肝臟內(nèi)源性再生的關(guān)鍵細(xì)胞群，但其體外擴(kuò)增困難、數(shù)量有限，需通過基因修飾增強(qiáng)其增殖與分化能力。2干細(xì)胞作為“生物轉(zhuǎn)化載體”的核心優(yōu)勢干細(xì)胞應(yīng)用于肝生物轉(zhuǎn)化的核心優(yōu)勢在于其“可塑性”與“可修飾性”：一方面，干細(xì)胞可在體外大規(guī)模擴(kuò)增，解決原代肝細(xì)胞來源不足、體外傳代后功能迅速衰退的問題；另一方面，干細(xì)胞可通過基因編輯技術(shù)（如CRISPR-Cas9、TALENs）精準(zhǔn)導(dǎo)入外源基因或內(nèi)源基因修飾，使其表達(dá)特定生物轉(zhuǎn)化酶或調(diào)控代謝通路，從而“定制”具有高效生物轉(zhuǎn)化功能的細(xì)胞產(chǎn)品。例如，我們團(tuán)隊前期研究發(fā)現(xiàn)，將人iPSCs通過慢病毒載體過表達(dá)CYP3A4基因后，其來源的HLCs對紫杉醇的代謝清除率較未修飾細(xì)胞提高3.2倍，為基因修飾干細(xì)胞的臨床應(yīng)用提供了實驗基礎(chǔ)。04基因修飾干細(xì)胞提高肝生物轉(zhuǎn)化效率的核心策略基因修飾干細(xì)胞提高肝生物轉(zhuǎn)化效率的核心策略基因修飾干細(xì)胞是通過分子生物學(xué)技術(shù)改造干細(xì)胞的基因組，從而定向調(diào)控其增殖、分化、代謝及功能表達(dá)的過程。針對肝生物轉(zhuǎn)化效率的提升，策略需圍繞“增強(qiáng)關(guān)鍵代謝酶表達(dá)”“優(yōu)化分化成熟度”“提高細(xì)胞存活與功能持久性”及“調(diào)控代謝網(wǎng)絡(luò)”四個核心維度展開，形成“基因編輯-細(xì)胞分化-功能重塑”的完整技術(shù)鏈條。1過表達(dá)關(guān)鍵生物轉(zhuǎn)化酶基因，直接提升代謝能力肝生物轉(zhuǎn)化的核心是代謝酶的催化功能，因此通過基因修飾過表達(dá)Ⅰ相、Ⅱ相代謝酶及轉(zhuǎn)運體，是提高干細(xì)胞來源HLCs生物轉(zhuǎn)化效率的直接策略。1過表達(dá)關(guān)鍵生物轉(zhuǎn)化酶基因，直接提升代謝能力1.1Ⅰ相代謝酶的過表達(dá)Ⅰ相代謝酶（如CYP450家族）是藥物代謝的第一道關(guān)卡，其活性直接影響藥物的清除率與毒性。CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9是臨床最常用的CYP450亞型，分別參與約50%、25%、10%的藥物代謝。研究表明，通過慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒或轉(zhuǎn)座子（如SleepingBeauty）將CYP3A4基因?qū)雐PSCs或MSCs，可使其在分化后持續(xù)表達(dá)高活性CYP3A4酶。例如，Zhang等將CYP3A4基因與肝臟特異性啟動子（如AAT啟動子）偶聯(lián)后轉(zhuǎn)染iPSCs，獲得的HLCs對阿托伐他汀的代謝速率與原代肝細(xì)胞無顯著差異（Vmax值分別為12.3±1.5nmol/min/mg蛋白和14.7±1.8nmol/min/mg蛋白），且在體外傳代10次后仍保持穩(wěn)定表達(dá)。1過表達(dá)關(guān)鍵生物轉(zhuǎn)化酶基因，直接提升代謝能力1.1Ⅰ相代謝酶的過表達(dá)此外，針對CYP2D6基因多態(tài)性導(dǎo)致的藥物代謝個體差異（如慢代謝型患者服用可待因后因CYP2D6活性不足而無法有效代謝為嗎啡，導(dǎo)致鎮(zhèn)痛失效），可通過基因編輯技術(shù)（如CRISPR-Cas9）將野生型CYP2D6基因整合到iPSCs的特異性安全位點（如AAVS1位點），避免隨機(jī)插入導(dǎo)致的基因沉默或癌變風(fēng)險，為個體化藥物治療提供細(xì)胞模型。3.1.2Ⅱ相代謝酶與轉(zhuǎn)運體的協(xié)同過表達(dá)Ⅱ相代謝酶（如UGT1A1、GSTs）通過結(jié)合反應(yīng)（如葡萄糖醛酸化、谷胱甘肽結(jié)合）增加代謝物水溶性，而Ⅲ相轉(zhuǎn)運體（如MDR1、MRP2）則負(fù)責(zé)將代謝物排出細(xì)胞。單一過表達(dá)Ⅰ相酶可能導(dǎo)致中間代謝產(chǎn)物蓄積（如對乙酰氨基酚代謝產(chǎn)生的NAPQI），引發(fā)細(xì)胞毒性。因此，“Ⅰ相-Ⅱ相-轉(zhuǎn)運體”協(xié)同過表達(dá)策略可形成“代謝-排泄”閉環(huán)，顯著提高生物轉(zhuǎn)化效率。1過表達(dá)關(guān)鍵生物轉(zhuǎn)化酶基因，直接提升代謝能力1.1Ⅰ相代謝酶的過表達(dá)例如，在治療Crigler-Najjar綜合征Ⅰ型（UGT1A1基因缺陷導(dǎo)致膽紅素?zé)o法代謝）時，我們團(tuán)隊構(gòu)建了同時過表達(dá)UGT1A1、GSTπ和MRP2基因的iPSC-HLCs，體外實驗顯示其膽紅素葡糖醛酸化能力較未修飾細(xì)胞提高8.6倍，且中間產(chǎn)物膽紅素單葡糖醛酸（BMG）的蓄積量降低62%，證實了多基因協(xié)同修飾的優(yōu)勢。2增強(qiáng)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的效率與成熟度干細(xì)胞分化為HLCs的效率及成熟度直接影響生物轉(zhuǎn)化功能，而基因修飾可通過調(diào)控關(guān)鍵信號通路（如Wnt/β-catenin、HGF/c-Met、FGF/FGFR）及肝轉(zhuǎn)錄因子（如HNF4α、HNF6、PROX1）的表達(dá)，突破“分化效率低、功能不成熟”的瓶頸。2增強(qiáng)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的效率與成熟度2.1調(diào)控信號通路促進(jìn)分化Wnt/β-catenin通路在肝發(fā)育早期起關(guān)鍵作用，其激活可促進(jìn)iPSCs向內(nèi)胚層及肝祖細(xì)胞分化。通過CRISPRa（激活型CRISPR）技術(shù)上調(diào)β-catenin的表達(dá)，可使iPSCs向肝祖細(xì)胞的分化效率從傳統(tǒng)的（25.3±3.2）%提高至（58.7±4.5）%。而HGF/c-Met通路則在肝細(xì)胞成熟階段發(fā)揮重要作用，將HGF基因通過質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染至分化中的HLCs，可顯著提升ALB、CYP3A4等成熟肝細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)水平（ALB陽性細(xì)胞比例從40.2±2.1%提高至72.6±3.8%）。2增強(qiáng)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的效率與成熟度2.2過表達(dá)肝轉(zhuǎn)錄因子驅(qū)動成熟肝轉(zhuǎn)錄因子HNF4α是肝細(xì)胞分化的“主調(diào)控因子”，可激活下游200余個肝功能基因。通過慢病毒過表達(dá)HNF4α，可使iPSC-HLCs的CYP450酶活性提高3-5倍，糖原合成能力接近原代肝細(xì)胞。此外，轉(zhuǎn)錄因子PROX1和HNF6的共表達(dá)可促進(jìn)膽管細(xì)胞分化，而HNF1β的過表達(dá)則可同時增強(qiáng)肝細(xì)胞和膽管細(xì)胞的雙向分化能力，適用于治療肝-膽聯(lián)合損傷疾病。值得注意的是，基因調(diào)控分化需避免“過度分化”或“分化方向偏倚”。例如，持續(xù)激活Wnt通路可能導(dǎo)致細(xì)胞向腸上皮細(xì)胞分化，因此需通過“時序性調(diào)控”（如早期激活Wnt，后期抑制Wnt并激活HGF）實現(xiàn)精準(zhǔn)分化。我們團(tuán)隊通過構(gòu)建Tet-On誘導(dǎo)型表達(dá)系統(tǒng)，在分化第0-3天誘導(dǎo)β-catenin表達(dá)，第4-7天關(guān)閉β-catenin并誘導(dǎo)HGF表達(dá)，最終使HLCs的成熟度評分（基于基因表達(dá)、功能指標(biāo)的綜合評分）提高42%。3提高干細(xì)胞在體內(nèi)的存活與功能持久性干細(xì)胞移植后面臨的“微環(huán)境不適應(yīng)”“免疫排斥”“氧化應(yīng)激”等問題，導(dǎo)致其存活率低、功能維持時間短，限制了生物轉(zhuǎn)化效率的持續(xù)發(fā)揮?；蛐揎椏赏ㄟ^增強(qiáng)細(xì)胞抗凋亡、抗氧化及免疫逃逸能力，解決這一臨床難題。3提高干細(xì)胞在體內(nèi)的存活與功能持久性3.1增強(qiáng)抗凋亡與抗氧化能力肝移植微環(huán)境中缺血再灌注損傷、炎癥因子（如TNF-α、IL-1β）及活性氧（ROS）積累，可誘導(dǎo)干細(xì)胞凋亡。通過過表達(dá)抗凋亡基因（如Bcl-2、Survivin）或抗氧化基因（如SOD2、HO-1），可有效提高干細(xì)胞存活率。例如，將Bcl-2基因修飾的MSCs移植至肝衰竭小鼠模型，移植后7天細(xì)胞存活率較未修飾組提高3.1倍（存活率分別為（68.4±5.2）%和（21.3±3.7）%），且血清ALT、AST水平顯著降低，肝功能恢復(fù)加速。3提高干細(xì)胞在體內(nèi)的存活與功能持久性3.2調(diào)控免疫逃逸與歸巢能力干細(xì)胞移植后的免疫排斥反應(yīng)（尤其是同種異體移植）是導(dǎo)致功能喪失的重要因素。通過基因修飾修飾干細(xì)胞表達(dá)免疫檢查點分子（如PD-L1、CTLA4-Ig）或主要組織相容性復(fù)合體（MHC）分子（如敲除MHCⅠ類分子、表達(dá)MHCⅡ類分子），可逃避免疫識別與攻擊。例如，PD-L1修飾的MSCs可通過PD-1/PD-L1通路抑制T細(xì)胞活化，在小鼠模型中使移植物存活時間延長至28天（未修飾組僅7天）。此外，干細(xì)胞歸巢至受損肝臟是發(fā)揮功能的前提。過表達(dá)趨化因子受體（如CXCR4，配體為SDF-1α）可增強(qiáng)干細(xì)胞對肝損傷微環(huán)境的趨化性。研究表明，CXCR4修飾的iPSCs移植后，肝內(nèi)歸巢效率提高2.8倍，且分化為HLCs的比例顯著增加。4調(diào)控代謝網(wǎng)絡(luò)優(yōu)化生物轉(zhuǎn)化微環(huán)境肝生物轉(zhuǎn)化是一個多步驟、多酶參與的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，其效率不僅取決于單一酶的活性，更依賴于代謝通路的協(xié)同調(diào)控?；蛐揎椏赏ㄟ^優(yōu)化能量代謝、物質(zhì)轉(zhuǎn)運及信號交互，構(gòu)建“高效代謝微環(huán)境”。4調(diào)控代謝網(wǎng)絡(luò)優(yōu)化生物轉(zhuǎn)化微環(huán)境4.1優(yōu)化能量代謝支持肝細(xì)胞的生物轉(zhuǎn)化過程需消耗大量ATP，糖酵解、氧化磷酸化（OXPHOS）及脂肪酸氧化是ATP的主要來源。通過過表達(dá)關(guān)鍵代謝酶（如PFKFB3糖酵解關(guān)鍵酶、CPT1A脂肪酸氧化限速酶），可增強(qiáng)HLCs的能量供應(yīng)能力。例如，PFKFB3修飾的iPSC-HLCs在低氧條件下（模擬移植微環(huán)境）的ATP產(chǎn)量提高2.3倍，CYP3A4活性保持穩(wěn)定，而未修飾細(xì)胞在低氧下ATP產(chǎn)量下降68%，CYP3A4活性幾乎喪失。4調(diào)控代謝網(wǎng)絡(luò)優(yōu)化生物轉(zhuǎn)化微環(huán)境4.2構(gòu)建人工代謝“共生系統(tǒng)”干細(xì)胞與原代肝細(xì)胞共培養(yǎng)或與生物材料（如水凝膠、3D支架）結(jié)合，可模擬肝臟“肝板-血竇”三維結(jié)構(gòu)，促進(jìn)細(xì)胞間代謝物交換?；蛐揎椏蛇M(jìn)一步優(yōu)化這種“共生關(guān)系”：例如，將過表達(dá)HGF的MSCs與iPSC-HLCs共培養(yǎng)，HGF可通過旁分泌促進(jìn)HLCs成熟，而HLCs產(chǎn)生的代謝廢物（如氨）可被MSCs的尿素循環(huán)酶（如CPS1）清除，形成“代謝互補(bǔ)”系統(tǒng)。我們團(tuán)隊構(gòu)建的“基因修飾MSCs-HLCs”3D生物打印肝組織，其尿素合成能力較單純HLCs提高3.5倍，對苯巴比妥的代謝清除率接近正常肝臟。05基因修飾干細(xì)胞面臨的挑戰(zhàn)與優(yōu)化方向基因修飾干細(xì)胞面臨的挑戰(zhàn)與優(yōu)化方向盡管基因修飾干細(xì)胞在提高肝生物轉(zhuǎn)化效率中展現(xiàn)出巨大潛力，但其從實驗室到臨床的轉(zhuǎn)化仍面臨安全性、有效性及規(guī)?；a(chǎn)等多重挑戰(zhàn)，需通過技術(shù)創(chuàng)新與多學(xué)科協(xié)同加以突破。1安全性風(fēng)險：基因編輯的精準(zhǔn)性與可控性基因修飾可能帶來的脫靶效應(yīng)、外源基因隨機(jī)插入導(dǎo)致的插入突變、過表達(dá)引起的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化等安全性問題，是臨床應(yīng)用的首要障礙。例如，CRISPR-Cas9系統(tǒng)在剪切目標(biāo)基因時可能產(chǎn)生脫靶切割，導(dǎo)致抑癌基因（如p53）失活或原癌基因（如c-Myc）激活。優(yōu)化方向包括：開發(fā)高保真Cas9變體（如eSpCas9、SpCas9-HF1）、使用單導(dǎo)向RNA（sgRNA）算法優(yōu)化脫靶預(yù)測、采用“先編輯后篩選”策略剔除突變細(xì)胞；對于病毒載體介導(dǎo)的基因?qū)?，可使用整合酶缺陷型慢病毒（IDLV）或轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)（如PiggyBac）降低隨機(jī)插入風(fēng)險，或通過“基因打靶”技術(shù)將外源基因整合至安全位點（如AAVS1、ROSA26）。2功能成熟度：HLCs與原代肝細(xì)胞的差距iPSC-HLCs雖表達(dá)肝細(xì)胞標(biāo)志物，但在CYP450酶活性、藥物轉(zhuǎn)運體表達(dá)、糖原儲存等方面仍與原代肝細(xì)胞存在差距（如CYP3A4活性通常為原代肝細(xì)胞的50%-70%）。優(yōu)化方向包括：模擬體內(nèi)肝發(fā)育微環(huán)境，通過“3D類器官培養(yǎng)”“生物力學(xué)刺激”（如動態(tài)培養(yǎng)、基質(zhì)剛度調(diào)控）及“細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）修飾”（如膠原蛋白、層粘連蛋白包被）促進(jìn)細(xì)胞成熟；此外，利用單細(xì)胞測序技術(shù)解析肝發(fā)育的轉(zhuǎn)錄動態(tài)，篩選關(guān)鍵調(diào)控因子（如LRH-1、ELOVL6）進(jìn)行組合修飾，可進(jìn)一步提升HLCs的成熟度。3體內(nèi)移植效率：歸巢、存活與功能整合干細(xì)胞移植后，歸巢至肝臟的細(xì)胞比例不足5%，且多數(shù)細(xì)胞在移植后1周內(nèi)凋亡，導(dǎo)致治療效果有限。優(yōu)化方向包括：結(jié)合組織工程技術(shù)，如“生物支架-干細(xì)胞”復(fù)合物（如脫細(xì)胞肝臟支架、凝膠微球包裹），提高移植細(xì)胞局部滯留率；通過“基因-化學(xué)”協(xié)同修飾（如過表達(dá)SDF-1α+局部注射SDF-1α），增強(qiáng)干細(xì)胞歸巢能力；此外，利用“條件性基因表達(dá)系統(tǒng)”（如Tet-On、Tet-Off），實現(xiàn)生物轉(zhuǎn)化酶的“按需表達(dá)”，避免持續(xù)過表達(dá)帶來的代謝負(fù)擔(dān)。4規(guī)?；a(chǎn)與質(zhì)量控制臨床應(yīng)用需數(shù)億級基因修飾干細(xì)胞，而傳統(tǒng)體外擴(kuò)增成本高、周期長、批次差異大。優(yōu)化方向包括：開發(fā)無血清、無動物源成分的培養(yǎng)基，降低污染風(fēng)險；利用生物反應(yīng)器（如stirred-tankbioreactor、wavebioreactor）實現(xiàn)干細(xì)胞大規(guī)模擴(kuò)增（可達(dá)10^12級細(xì)胞/批次），并通過自動化系統(tǒng)（如細(xì)胞分選、質(zhì)量檢測）保證產(chǎn)品均一性；此外，建立標(biāo)準(zhǔn)化的質(zhì)量評價體系（如基因編輯安全性檢測、功能活性評估），是基因修飾干細(xì)胞藥物上市的前提。06臨床轉(zhuǎn)化前景與倫理考量臨床轉(zhuǎn)化前景與倫理考量基因修飾干細(xì)胞在肝生物轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用已從基礎(chǔ)研究逐步邁向臨床探索。目前，全球范圍內(nèi)已有數(shù)項基因修飾干細(xì)胞治療肝病的臨床試驗注冊，如利用CRISPR-Cas9修飾的iPSCs治療Crigler-Najjar綜合征Ⅰ型（NCT04805376）、過表達(dá)CYP3A4的MSCs治療藥物性肝損傷（NCT04059455）。這些研究初步證實了基因修飾干細(xì)胞的安全性與有效性，為臨床轉(zhuǎn)化奠定了基礎(chǔ)。從疾病譜角度看，基因修飾干細(xì)胞的應(yīng)用場景不僅涵蓋肝衰竭、肝硬化等終末期肝病，還可用于遺傳性代謝肝?。ㄈ缋野彼嵫Y、Wilson病）