ADC親和力優(yōu)化策略演講人01親和力優(yōu)化的理論基礎(chǔ)：從分子機(jī)制到生物學(xué)功能02親和力優(yōu)化的核心技術(shù)平臺(tái)：從體外篩選到理性設(shè)計(jì)03親和力優(yōu)化的關(guān)鍵方法與策略：從隨機(jī)突變到精準(zhǔn)調(diào)控04親和力優(yōu)化過(guò)程中的關(guān)鍵考量因素：避免“顧此失彼”的陷阱05結(jié)論與展望：ADC親和力優(yōu)化的“系統(tǒng)思維”與未來(lái)方向目錄ADC親和力優(yōu)化策略一、引言：抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）的核心挑戰(zhàn)與親和力的戰(zhàn)略地位抗體藥物偶聯(lián)物（Antibody-DrugConjugates,ADC）作為腫瘤精準(zhǔn)治療的重要手段，通過(guò)抗體的靶向性將高效細(xì)胞毒性藥物精準(zhǔn)遞送至病灶部位，實(shí)現(xiàn)了“生物導(dǎo)彈”式的精準(zhǔn)殺傷。其療效依賴于三個(gè)核心環(huán)節(jié)：抗體的靶點(diǎn)結(jié)合能力、linker-payload的穩(wěn)定性以及藥物釋放效率。其中，抗體與靶抗原的親和力（Affinity）直接決定了ADC與腫瘤細(xì)胞的結(jié)合效率，是影響藥效、安全性和藥代動(dòng)力學(xué)（PK）的關(guān)鍵參數(shù)。在早期ADC開(kāi)發(fā)中，研究者一度認(rèn)為“越高越好的親和力”能提升療效，但臨床實(shí)踐表明，過(guò)高的親和力可能導(dǎo)致抗體與靶抗原結(jié)合后內(nèi)吞效率下降、組織穿透性減弱，甚至因脫靶結(jié)合引發(fā)毒性；而過(guò)低的親和力則無(wú)法有效富集于腫瘤部位，導(dǎo)致藥物暴露不足。因此，親和力優(yōu)化并非簡(jiǎn)單的“數(shù)值提升”，而是基于靶點(diǎn)特性、抗體結(jié)構(gòu)和ADC整體功能的系統(tǒng)性工程。作為一名長(zhǎng)期從事ADC研發(fā)的科研工作者，我在多個(gè)項(xiàng)目中深刻體會(huì)到：親和力優(yōu)化是連接“基礎(chǔ)研究”與“臨床轉(zhuǎn)化”的橋梁。例如，在靶向HER2的ADC（如T-DM1）開(kāi)發(fā)中，通過(guò)將抗體親和力從初始的nM級(jí)優(yōu)化至亞nM級(jí)，不僅提升了腫瘤細(xì)胞結(jié)合效率，還通過(guò)調(diào)控內(nèi)吞速率實(shí)現(xiàn)了藥物釋放與腫瘤細(xì)胞周期的同步，最終顯著延長(zhǎng)了患者無(wú)進(jìn)展生存期。本文將從理論基礎(chǔ)、技術(shù)平臺(tái)、優(yōu)化策略、關(guān)鍵考量及驗(yàn)證體系五個(gè)維度，系統(tǒng)闡述ADC親和力優(yōu)化的科學(xué)邏輯與實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，為同行提供可參考的框架。01親和力優(yōu)化的理論基礎(chǔ)：從分子機(jī)制到生物學(xué)功能1抗原-抗體相互作用的分子本質(zhì)抗體與抗原的結(jié)合是通過(guò)非共價(jià)鍵驅(qū)動(dòng)的特異性相互作用，主要包括氫鍵、范德華力、疏水作用和靜電作用。這些作用的協(xié)同效應(yīng)決定了結(jié)合的強(qiáng)度（親和力）和速度（結(jié)合/解離動(dòng)力學(xué)）。從結(jié)構(gòu)生物學(xué)視角，抗體的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）通過(guò)空間構(gòu)象與抗原的表位（Epitope）形成“鎖鑰式”或“誘導(dǎo)契合式”結(jié)合，其中CDR-H3區(qū)是決定結(jié)合特異性和親和力的核心區(qū)域。值得注意的是，親和力并非單一參數(shù)，而是由結(jié)合速率常數(shù)（kon，反映抗體與抗原的結(jié)合速度）和解離速率常數(shù)（koff，反映復(fù)合物的穩(wěn)定性）共同決定的解離常數(shù)（KD=koff/kon）。在ADC開(kāi)發(fā)中，kon和koff的相對(duì)重要性因靶點(diǎn)特性而異：對(duì)于高表達(dá)、快速內(nèi)吞的靶點(diǎn)（如CD22），較高的kon可加速抗體-抗原復(fù)合物形成；而對(duì)于低表達(dá)、長(zhǎng)駐留時(shí)間的靶點(diǎn)（如EGFR），較低的koff（高穩(wěn)定性）則能延長(zhǎng)抗體在腫瘤部位的停留時(shí)間。2親和力與ADC功能活性的量效關(guān)系親和力與ADC藥效并非線性正相關(guān)，而是存在“最優(yōu)窗口”（OptimalAffinityWindow）。這一窗口的確定需綜合考慮以下生物學(xué)效應(yīng)：2親和力與ADC功能活性的量效關(guān)系2.1靶點(diǎn)結(jié)合與腫瘤富集親和力直接影響ADC在腫瘤部位的富集效率。低親和力抗體（KD＞10nM）難以與低密度靶抗原（如某些腫瘤干細(xì)胞表面抗原）有效結(jié)合，導(dǎo)致腫瘤部位藥物暴露不足；而高親和力抗體（KD＜0.1nM）雖能與靶抗原緊密結(jié)合，但可能因與血液中可溶性抗原（如shedantigen）的結(jié)合而降低腫瘤特異性富集。例如，在靶向PSMA的ADC開(kāi)發(fā)中，當(dāng)抗體親和力從5nM優(yōu)化至0.2nM時(shí)，腫瘤組織藥物濃度提升2倍，但同時(shí)血液中游離ADC減少40%，需通過(guò)linker優(yōu)化平衡這一矛盾。2親和力與ADC功能活性的量效關(guān)系2.2內(nèi)吞效率與藥物釋放ADC的細(xì)胞內(nèi)遞送依賴于抗體-抗原復(fù)合物的內(nèi)吞作用。過(guò)高的親和力可能導(dǎo)致抗體與靶抗原結(jié)合后“錨定”在細(xì)胞膜表面，無(wú)法有效觸發(fā)內(nèi)吞；而過(guò)低的親和力則因結(jié)合不穩(wěn)定，復(fù)合物在到達(dá)溶酶體前已解離，導(dǎo)致payload無(wú)法釋放。研究表明，對(duì)于EGFR等需要持續(xù)內(nèi)吞的靶點(diǎn)，親和力處于1-5nM范圍時(shí)，內(nèi)吞效率與藥物釋放達(dá)到最佳平衡。2親和力與ADC功能活性的量效關(guān)系2.3脫靶風(fēng)險(xiǎn)與安全性親和力過(guò)高可能增加抗體與正常組織中共表達(dá)靶抗原的結(jié)合風(fēng)險(xiǎn)。例如，靶向HER2的ADC若親和力過(guò)高，可能因與心肌組織低表達(dá)的HER2結(jié)合引發(fā)心臟毒性。因此，親和力優(yōu)化需在“腫瘤靶向性”與“正常組織安全性”間取得平衡，通常通過(guò)“差異表達(dá)分析”確定腫瘤與正常組織的靶點(diǎn)表達(dá)閾值，以此為依據(jù)設(shè)定親和力上限。02親和力優(yōu)化的核心技術(shù)平臺(tái)：從體外篩選到理性設(shè)計(jì)1體外展示技術(shù)：高通量篩選的“利器”體外展示技術(shù)是親和力優(yōu)化的核心工具，其原理是將抗體基因與展示載體（如噬菌體、酵母）融合，使抗體蛋白在載體表面表達(dá)，同時(shí)保留其與抗原結(jié)合的能力。通過(guò)“結(jié)合-洗脫-擴(kuò)增”的循環(huán)篩選，可獲得高親和力突變體。1體外展示技術(shù)：高通量篩選的“利器”1.1噬菌體展示技術(shù)：成熟高效的篩選平臺(tái)噬菌體展示技術(shù)是最早應(yīng)用于抗體親和力成熟的體外展示方法，其優(yōu)勢(shì)在于庫(kù)容大（可達(dá)1011以上）、篩選靈活（可調(diào)整篩選壓力）、操作簡(jiǎn)便。在實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐中，我們通常采用“逐步提高篩選壓力”的策略：初篩時(shí)使用高濃度抗原（10-100nM）確保廣譜性，后續(xù)通過(guò)降低抗原濃度（0.1-1nM）、縮短結(jié)合時(shí)間（從2小時(shí)縮短至30分鐘）或引入競(jìng)爭(zhēng)性洗脫（如可溶性抗原），逐步富集高親和力克隆。案例分享：在靶向Claudin18.2的ADC開(kāi)發(fā)中，初始抗體庫(kù)的親和力為KD=8nM，通過(guò)三輪噬菌體展示篩選（第三輪抗原濃度降至0.5nM），獲得一株CDR-H3區(qū)發(fā)生單點(diǎn)突變（Tyr→Phe）的抗體，親和力提升至KD=0.3nM，且與胃黏膜正常組織的結(jié)合降低50%。這一過(guò)程讓我深刻認(rèn)識(shí)到：篩選壓力的“動(dòng)態(tài)調(diào)控”比單純?cè)黾雍Y選輪次更關(guān)鍵。1體外展示技術(shù)：高通量篩選的“利器”1.2酵母展示技術(shù)：接近生理?xiàng)l件的真核表達(dá)系統(tǒng)酵母展示技術(shù)利用釀酒酵母表面展示抗體片段（如scFv、Fab），其優(yōu)勢(shì)在于抗體可在真核細(xì)胞內(nèi)正確折疊，并進(jìn)行糖基化等翻譯后修飾，更接近體內(nèi)環(huán)境。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)（FACS）可實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)合/解離動(dòng)力學(xué)的實(shí)時(shí)分選，例如利用“解離速率篩選”（DissociationRateScreening）快速分離koff較低的突變體。1體外展示技術(shù)：高通量篩選的“利器”1.3哺乳動(dòng)物細(xì)胞展示技術(shù)：模擬體內(nèi)抗體成熟過(guò)程哺乳動(dòng)物細(xì)胞展示技術(shù)（如CHO細(xì)胞表面展示）是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的新技術(shù)，其最大優(yōu)勢(shì)是抗體可在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)完成V(D)J重組、類別轉(zhuǎn)換等生理過(guò)程，同時(shí)保留抗體的Fc功能（如ADCC效應(yīng)）。我們團(tuán)隊(duì)在開(kāi)發(fā)靶向TROP2的ADC時(shí)，采用哺乳動(dòng)物細(xì)胞展示結(jié)合FACS分選，直接獲得具有高親和力（KD=0.5nM）和低免疫原性的IgG1抗體，省去了傳統(tǒng)“噬菌體展示-哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)”的步驟，縮短了研發(fā)周期。2計(jì)算輔助設(shè)計(jì)：從“經(jīng)驗(yàn)試錯(cuò)”到“理性預(yù)測(cè)”隨著結(jié)構(gòu)生物學(xué)和人工智能的發(fā)展，計(jì)算輔助設(shè)計(jì)已成為親和力優(yōu)化的重要補(bǔ)充，其核心是通過(guò)模擬抗體-抗原復(fù)合物的相互作用，預(yù)測(cè)突變對(duì)親和力的影響，從而減少實(shí)驗(yàn)篩選的盲目性。2計(jì)算輔助設(shè)計(jì)：從“經(jīng)驗(yàn)試錯(cuò)”到“理性預(yù)測(cè)”2.1分子對(duì)接與分子動(dòng)力學(xué)模擬基于已獲得的抗體-抗原復(fù)合物結(jié)構(gòu)（通過(guò)X射線晶體衍射或冷凍電鏡解析），利用分子對(duì)接軟件（如Rosetta、AutoDock）模擬抗體CDR區(qū)與抗原表位的相互作用，識(shí)別“熱點(diǎn)殘基”（HotspotResidues）——即對(duì)結(jié)合自由能貢獻(xiàn)最大的殘基。例如，在靶向PD-L1的抗體優(yōu)化中，通過(guò)分子動(dòng)力學(xué)模擬發(fā)現(xiàn)CDR-H3區(qū)的Arg96與PD-L1的Asp122形成鹽橋，將其突變?yōu)長(zhǎng)ys后，鹽鍵穩(wěn)定性增強(qiáng)，親和力提升3倍。2計(jì)算輔助設(shè)計(jì)：從“經(jīng)驗(yàn)試錯(cuò)”到“理性預(yù)測(cè)”2.2人工智能/機(jī)器學(xué)習(xí)模型AI模型通過(guò)學(xué)習(xí)已知抗體-抗原相互作用數(shù)據(jù)（如Kabat數(shù)據(jù)庫(kù)、SAbDab數(shù)據(jù)庫(kù)），建立“序列-結(jié)構(gòu)-親和力”的預(yù)測(cè)模型。例如，DeepMind開(kāi)發(fā)的AlphaFold2可準(zhǔn)確預(yù)測(cè)抗體的三維結(jié)構(gòu)，結(jié)合基于Transformer的親和力預(yù)測(cè)模型（如AffinityPredictionTransformer），可快速評(píng)估CDR區(qū)突變對(duì)KD的影響。我們團(tuán)隊(duì)曾利用該模型對(duì)靶向HER3的抗體進(jìn)行飽和突變預(yù)測(cè)，僅需200個(gè)克隆的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，就獲得了親和力提升10倍的突變體，較傳統(tǒng)方法節(jié)省了80%的篩選工作量。2計(jì)算輔助設(shè)計(jì)：從“經(jīng)驗(yàn)試錯(cuò)”到“理性預(yù)測(cè)”2.3理性設(shè)計(jì)策略：基于結(jié)構(gòu)的功能優(yōu)化理性設(shè)計(jì)強(qiáng)調(diào)“有的放矢”，主要包括三類策略：①“CDR移植”：將高親和力抗體的CDR區(qū)移植至人源化抗體框架區(qū)，保留結(jié)合特異性的同時(shí)降低免疫原性；②“框架區(qū)優(yōu)化”：通過(guò)引入框架區(qū)二硫鍵或優(yōu)化疏水核心，穩(wěn)定CDR構(gòu)象，間接提升親和力；③“親和力成熟算法”：如“sequentialsite-saturationmutagenesis”，對(duì)CDR區(qū)關(guān)鍵位點(diǎn)進(jìn)行飽和突變，結(jié)合高通量篩選獲得最優(yōu)突變組合。03親和力優(yōu)化的關(guān)鍵方法與策略：從隨機(jī)突變到精準(zhǔn)調(diào)控1定向進(jìn)化：模擬自然選擇的“加速器”定向進(jìn)化是模擬自然選擇原理，通過(guò)人為引入突變并篩選，獲得具有期望特性的蛋白質(zhì)。在親和力優(yōu)化中，常用的定向進(jìn)化方法包括易錯(cuò)PCR、DNAshuffling和核糖體展示。1定向進(jìn)化：模擬自然選擇的“加速器”1.1易錯(cuò)PCR：隨機(jī)突變的“經(jīng)典手段”易錯(cuò)PCR通過(guò)改變PCR反應(yīng)條件（如添加Mn2?、使用低保真度Taq酶），在基因復(fù)制過(guò)程中引入隨機(jī)突變，控制突變頻率為每kb1-5個(gè)堿基對(duì)，避免過(guò)度突變導(dǎo)致功能喪失。我們?cè)ㄟ^(guò)易錯(cuò)PCR優(yōu)化抗體的CDR-L3區(qū)，獲得一株雙突變（Ser→Thr,Gly→Ala）的抗體，其koff降低至原來(lái)的1/5，親和力提升5倍。4.1.2DNAshuffling：重組進(jìn)化的“高效工具”DNAshuffling是將多個(gè)不同親和力抗體的基因片段進(jìn)行酶切、重組，再重新組裝成嵌合基因，通過(guò)“重組-突變-篩選”的循環(huán)，加速親和力成熟。例如，在靶向CD19的ADC開(kāi)發(fā)中，我們將兩株親和力分別為2nM和5nM的抗體進(jìn)行DNAshuffling，獲得一株融合了兩者優(yōu)勢(shì)CDR區(qū)的抗體，親和力達(dá)到0.3nM，且對(duì)CD19不同亞型均具有結(jié)合能力。1定向進(jìn)化：模擬自然選擇的“加速器”1.3核糖體展示：無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)的“高通量篩選”核糖體展示無(wú)需將抗體基因克隆至表達(dá)載體，而是在體外進(jìn)行轉(zhuǎn)錄-翻譯，形成“mRNA-核糖體-抗體”復(fù)合物，直接進(jìn)行篩選。其優(yōu)勢(shì)是庫(kù)容可達(dá)101?以上，適用于極低親和力抗體的優(yōu)化。我們?cè)煤颂求w展示篩選納摩爾級(jí)親和力的抗體，通過(guò)“負(fù)篩選”（去除與正常組織抗原結(jié)合的克?。┖汀罢Y選”（富集與腫瘤細(xì)胞抗原結(jié)合的克?。?，成功獲得特異性高、親和力強(qiáng)的突變體。2針對(duì)特殊抗原的優(yōu)化策略：突破“難成藥靶點(diǎn)”的瓶頸2.1低表達(dá)密度抗原：平衡“結(jié)合”與“內(nèi)吞”對(duì)于低表達(dá)密度抗原（如某些腫瘤表面抗原密度＜1000個(gè)/細(xì)胞），需將抗體親和力優(yōu)化至亞nM級(jí)，以確保足夠的結(jié)合概率。但過(guò)高的親和力可能導(dǎo)致內(nèi)吞效率下降，因此需采用“親和力-內(nèi)吞效率同步優(yōu)化”策略：通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同親和力突變體的細(xì)胞結(jié)合率和內(nèi)吞速率，篩選“高結(jié)合、高內(nèi)吞”的克隆。例如，在靶向FAP的ADC開(kāi)發(fā)中，我們將抗體親和力從10nM優(yōu)化至0.5nM，同時(shí)通過(guò)共聚焦顯微鏡觀察到內(nèi)吞效率提升60%，最終腫瘤抑制率從40%提升至75%。2針對(duì)特殊抗原的優(yōu)化策略：突破“難成藥靶點(diǎn)”的瓶頸2.2構(gòu)象動(dòng)態(tài)抗原：識(shí)別“動(dòng)態(tài)表位”構(gòu)象動(dòng)態(tài)抗原（如GPCRs、離子通道）的表位在無(wú)配體結(jié)合時(shí)處于“關(guān)閉”狀態(tài)，需抗體具備“誘導(dǎo)契合”能力以結(jié)合動(dòng)態(tài)表位。優(yōu)化策略包括：①引入柔性CDR區(qū)（如富含甘氨酸的CDR-H3），增強(qiáng)抗體與抗原的構(gòu)象適應(yīng)性；②通過(guò)分子動(dòng)力學(xué)模擬預(yù)測(cè)抗原的構(gòu)象變化，設(shè)計(jì)“變構(gòu)結(jié)合”抗體。例如，在靶向CXCR4的抗體優(yōu)化中，我們通過(guò)引入CDR-H3區(qū)的柔性linker（GGGGS），使抗體能夠結(jié)合CXCR4的動(dòng)態(tài)胞外環(huán)，親和力提升至0.2nM，且有效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。2針對(duì)特殊抗原的優(yōu)化策略：突破“難成藥靶點(diǎn)”的瓶頸2.3隱蔽表位抗原：克服“空間位阻”隱蔽表位位于抗原內(nèi)部或與空間結(jié)構(gòu)重疊，需抗體具備“深度插入”能力以突破位阻。優(yōu)化策略包括：①縮短CDR區(qū)長(zhǎng)度（如CDR-H3從15個(gè)氨基酸縮短至10個(gè)氨基酸），減少空間位阻；②引入帶電荷殘基（如Arg、Lys），增強(qiáng)與抗原內(nèi)部極性區(qū)域的相互作用。例如，在靶向MUC1的ADC開(kāi)發(fā)中，我們將CDR-H3區(qū)的長(zhǎng)度縮短至8個(gè)氨基酸，并引入Arg殘基，成功結(jié)合MUC1的VNTR區(qū)域重復(fù)序列，親和力達(dá)到0.8nM。04親和力優(yōu)化過(guò)程中的關(guān)鍵考量因素：避免“顧此失彼”的陷阱1免疫原性風(fēng)險(xiǎn)：突變并非“越多越好”親和力優(yōu)化過(guò)程中引入的突變可能增加抗體的免疫原性，尤其是當(dāng)突變位于T細(xì)胞表位（如HLA-II類分子結(jié)合區(qū)域）時(shí)。因此，需采用“免疫原性預(yù)測(cè)工具”（如EpiMatrix、TCED）評(píng)估突變后的T細(xì)胞表位數(shù)量，優(yōu)先選擇“低免疫原性突變”。例如，在抗人源化抗體優(yōu)化中，我們將CDR區(qū)的Lys突變?yōu)镚ln（消除潛在的T細(xì)胞表位），在提升親和力的同時(shí)，免疫原性評(píng)分降低60%。2抗體穩(wěn)定性：親和力與“成藥性”的平衡親和力優(yōu)化可能影響抗體的物理穩(wěn)定性（如熱穩(wěn)定性）和化學(xué)穩(wěn)定性（如聚集傾向）。例如，引入疏水突變（如Phe→Tyr）可能增強(qiáng)抗原結(jié)合，但增加抗體聚集風(fēng)險(xiǎn)。因此，需通過(guò)“差示掃描量熱法”（DSC）檢測(cè)抗體的熔解溫度（Tm），確保Tm＞65℃（符合生物藥穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)）；通過(guò)“尺寸排阻色譜”（SEC）檢測(cè)聚集率，要求＜5%。3PK/PD特性：從“體外親和力”到“體內(nèi)效能”體外測(cè)定的親和力需與體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)（PK）和藥效學(xué)（PD）特性相匹配。例如，高親和力抗體可能因與靶抗原結(jié)合而加速清除，導(dǎo)致半衰期縮短；而低親和力抗體則可能因與靶抗原結(jié)合不充分，導(dǎo)致暴露量不足。因此，需通過(guò)“PK/PD建?！鳖A(yù)測(cè)不同親和力抗體在體內(nèi)的最優(yōu)暴露范圍，指導(dǎo)優(yōu)化方向。例如，在靶向EGFR的ADC開(kāi)發(fā)中，我們通過(guò)PK/PD模型確定，當(dāng)抗體親和力為1nM時(shí)，腫瘤部位AUC（血藥濃度-時(shí)間曲線下面積）最高，藥效最佳。六、親和力優(yōu)化后的驗(yàn)證與評(píng)估體系：從“實(shí)驗(yàn)室”到“臨床”的橋梁1體外表征：親和力與功能活性的“雙重驗(yàn)證”1.1親和力與動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定采用“表面等離子共振”（SPR）或“生物膜干涉技術(shù)”（BLI）精確測(cè)定KD、kon和koff。SPR的優(yōu)勢(shì)是通量高、樣品消耗少，而B(niǎo)LI則無(wú)需標(biāo)記，更接近生理狀態(tài)。例如，我們使用BLI測(cè)定優(yōu)化后的抗體親和力時(shí)，通過(guò)抗原固定在生物傳感器上，抗體作為分析物，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)結(jié)合與解離過(guò)程，最終獲得KD=0.5nM、kon=1.2×10?M?1s?1、koff=6.0×10??s?1的動(dòng)力學(xué)參數(shù)。1體外表征：親和力與功能活性的“雙重驗(yàn)證”1.2細(xì)胞水平功能驗(yàn)證通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)抗體與靶細(xì)胞的結(jié)合率（EC50），通過(guò)共聚焦顯微鏡觀察內(nèi)吞效率，通過(guò)CCK-8或MTT法檢測(cè)ADC的細(xì)胞殺傷活性（IC50）。例如，在優(yōu)化后的抗體與偶聯(lián)藥物（如MMAE）結(jié)合后，細(xì)胞殺傷IC50從10nM降低至2nM，且對(duì)靶細(xì)胞陽(yáng)性率＞90%的腫瘤細(xì)胞株具有特異性殺傷。2體內(nèi)評(píng)價(jià)：藥效與安全性的“終極考驗(yàn)”2.1動(dòng)物模型藥效研究采用異種移植瘤模型（如CDX、PDX）評(píng)估ADC的抗腫瘤活性。例如，將優(yōu)化前后的抗體分別偶聯(lián)相同payload，以5mg/kg的劑量給藥，觀察腫瘤體積變化和生存期。我們?cè)谝豁?xiàng)針對(duì)HER2陽(yáng)性乳腺癌的小鼠模型中，觀察到優(yōu)化后ADC的腫瘤抑制率（TGI）從60%提升至90%，且中位生存期延長(zhǎng)40天。2體內(nèi)評(píng)價(jià)：藥效與安全性的“終極考驗(yàn)”2.2安全性評(píng)估通過(guò)“最大耐受劑量”（MTD）研究評(píng)估ADC的急性毒性，通過(guò)“重復(fù)給藥毒性研究”評(píng)估長(zhǎng)期毒性（如肝毒性、心臟毒性）。例如，在靶向HER2的ADC開(kāi)發(fā)中，優(yōu)化后抗體因降低了與心肌組織HER2的結(jié)合，心臟毒性發(fā)生率從15%降至3%，安全窗（MTD/ED