姜黃素：開啟自體肝移植大鼠肝臟再生與修復(fù)的新鑰匙一、引言1.1研究背景與意義1.1.1自體肝移植及肝缺血再灌注損傷現(xiàn)狀自體肝移植作為一種重要的外科治療手段，在肝臟疾病的治療中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。對(duì)于那些因肝臟腫瘤、復(fù)雜肝內(nèi)膽管結(jié)石、嚴(yán)重肝臟外傷等疾病，且常規(guī)手術(shù)方法難以切除病灶的患者而言，自體肝移植提供了手術(shù)治愈的希望。相較于同種異體肝移植，自體肝移植無需尋找合適的肝源，避免了免疫排斥反應(yīng)，也無需長(zhǎng)期使用免疫抑制劑，不僅降低了醫(yī)療成本，還減少了因免疫抑制劑帶來的各種并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)，具有重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。例如，在治療終末期泡型包蟲病方面，自體肝移植是目前根除該病最有效的方式。新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化血管外科中心在自體肝移植技術(shù)上取得了顯著成就，已完成第200例自體肝移植手術(shù)，成為全球單中心規(guī)模最大、自體肝移植數(shù)量最多、技術(shù)最成熟的單位，極大地推動(dòng)了該技術(shù)在臨床的應(yīng)用，提高了患者的治愈率和生存率。然而，自體肝移植手術(shù)過程中不可避免地會(huì)出現(xiàn)肝缺血再灌注損傷（IRI）。在手術(shù)中，肝臟需要經(jīng)歷血管阻斷導(dǎo)致的缺血期以及恢復(fù)血流后的再灌注期。肝IRI會(huì)引發(fā)一系列復(fù)雜的病理生理變化，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷、炎癥反應(yīng)激活、氧化應(yīng)激失衡等。大量研究表明，肝IRI是影響肝移植遠(yuǎn)期效果的主要因素之一，它不僅會(huì)導(dǎo)致術(shù)后肝功能恢復(fù)延遲，增加術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，如肝功能衰竭、感染等，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致移植肝臟失功，影響患者的生存質(zhì)量和長(zhǎng)期預(yù)后。盡管目前臨床上常用免疫抑制劑來減輕損傷，但免疫抑制劑會(huì)給機(jī)體帶來一系列副作用，如感染風(fēng)險(xiǎn)增加、代謝紊亂、心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)上升等，因此尋找安全有效的保護(hù)手段以減輕肝IRI，對(duì)于促進(jìn)肝移植的成功具有至關(guān)重要的意義。1.1.2肝臟再生的研究進(jìn)展肝臟具有強(qiáng)大的再生能力，這是其區(qū)別于其他器官的重要特征之一。當(dāng)肝臟受到損傷，如部分肝切除、肝缺血再灌注損傷或疾病損害時(shí)，肝臟能夠啟動(dòng)復(fù)雜的再生機(jī)制來恢復(fù)其原有體積和功能。在正常生理狀態(tài)下，肝細(xì)胞更新速度緩慢，但在損傷刺激下，肝細(xì)胞會(huì)迅速進(jìn)入細(xì)胞周期，開始增殖和分化。例如，在三分之二肝切除術(shù)后，肝功能可在2周時(shí)基本恢復(fù)，其體積和重量最終也能恢復(fù)到術(shù)前相仿的程度。肝臟再生是一個(gè)受到多種細(xì)胞因子、激素和信號(hào)通路精細(xì)調(diào)控的過程。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）作為一種強(qiáng)大的促肝細(xì)胞分裂原，在肝臟再生啟動(dòng)過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，它可以刺激肝細(xì)胞的增殖和分化。胰島素與HGF具有協(xié)同作用，共同促進(jìn)肝臟再生。因此，合并有糖尿病的患者，由于胰島素分泌或作用異常，行肝臟手術(shù)后肝臟修復(fù)能力和速度往往會(huì)減慢。此外，肝臟的供血、營(yíng)養(yǎng)、年齡等因素也會(huì)對(duì)肝臟再生產(chǎn)生顯著影響。肝硬化患者由于肝臟組織結(jié)構(gòu)破壞，大量增生結(jié)節(jié)阻礙門靜脈血流，影響肝內(nèi)血液循環(huán)，同時(shí)肝細(xì)胞對(duì)細(xì)胞再生因子的反應(yīng)減弱，導(dǎo)致手術(shù)后肝臟再生修復(fù)能力下降。了解肝臟再生的機(jī)制和影響因素，對(duì)于優(yōu)化肝臟疾病的治療策略、提高患者預(yù)后具有重要的理論和實(shí)踐意義。1.1.3姜黃素的研究現(xiàn)狀姜黃素是從姜科、天南星科等植物根莖中提取的一種多酚類化合物，具有廣泛的生物學(xué)活性和藥理學(xué)效應(yīng)。大量研究表明，姜黃素具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等多種作用。在抗氧化方面，姜黃素能夠清除體內(nèi)過多的自由基，如超氧陰離子、羥自由基等，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。同時(shí)，它還可以通過調(diào)節(jié)抗氧化酶的表達(dá)和活性，如谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）、超氧化物歧化酶（SOD）等，增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化防御系統(tǒng)。在抗炎作用上，姜黃素可以抑制多種炎癥相關(guān)信號(hào)通路的激活，如核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路，減少炎癥介質(zhì)如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的生成和釋放，從而減輕炎癥反應(yīng)對(duì)組織和器官的損傷。在肝臟疾病治療領(lǐng)域，姜黃素的潛在價(jià)值逐漸受到關(guān)注。已有研究表明，姜黃素對(duì)多個(gè)器官的IRI損傷具有保護(hù)作用，能夠減輕缺血再灌注導(dǎo)致的組織損傷和功能障礙。然而，目前關(guān)于姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后肝臟再生影響的研究還相對(duì)較少。鑒于自體肝移植手術(shù)中肝IRI對(duì)肝臟再生和患者預(yù)后的不良影響，以及姜黃素的多種有益生物學(xué)特性，探究姜黃素在這一過程中的作用及機(jī)制具有重要的科學(xué)意義和臨床應(yīng)用前景。通過深入研究姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝臟再生的影響，有望為臨床尋找有效的肝移植后保護(hù)措施提供新的思路和理論依據(jù)，從而提高自體肝移植手術(shù)的成功率，改善患者的生存質(zhì)量和預(yù)后。1.2研究目的與創(chuàng)新點(diǎn)本研究旨在深入探究姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后肝臟再生的影響，并進(jìn)一步剖析其潛在的作用機(jī)制。通過建立大鼠自體肝移植模型，給予不同處理組相應(yīng)的干預(yù)措施，觀察肝臟再生相關(guān)指標(biāo)及病理變化，檢測(cè)氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)等相關(guān)因子水平，明確姜黃素在這一過程中的作用效果和內(nèi)在機(jī)制，為臨床尋找有效的肝移植后保護(hù)措施提供科學(xué)的參考依據(jù)。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：首先，在研究模型的選擇上，采用大鼠自體肝移植模型，該模型能夠較好地模擬臨床自體肝移植手術(shù)過程中肝缺血再灌注損傷的病理生理變化，為研究提供了更貼近實(shí)際臨床情況的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，有助于深入了解姜黃素在真實(shí)手術(shù)場(chǎng)景下對(duì)肝臟再生的影響。其次，在檢測(cè)指標(biāo)方面，不僅關(guān)注常規(guī)的肝功能指標(biāo)和肝組織病理學(xué)變化，還創(chuàng)新性地檢測(cè)了肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子的表達(dá)，如細(xì)胞周期蛋白D1和肝生長(zhǎng)因子（HGF）等，從分子層面揭示姜黃素對(duì)肝臟再生的調(diào)控作用。此外，還綜合檢測(cè)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)，如谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）、超氧化物歧化酶（SOD）的活性，以及腫瘤壞死因子（TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）的水平，全面分析姜黃素在減輕肝缺血再灌注損傷、促進(jìn)肝臟再生過程中對(duì)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用，為闡明其作用機(jī)制提供更豐富的證據(jù)。通過多維度、創(chuàng)新性的研究方法，有望為姜黃素在自體肝移植領(lǐng)域的應(yīng)用提供全新的見解和理論支持，推動(dòng)該領(lǐng)域的研究進(jìn)展。二、材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組2.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇本實(shí)驗(yàn)選用健康成年雄性SD大鼠30只，體重250-300g，購(gòu)自[動(dòng)物供應(yīng)商名稱]。選擇SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，是因?yàn)槠渚哂谢蛐蛄小⑷蚪M與人類相似的特點(diǎn)，且抗病力強(qiáng)，對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)力強(qiáng)，存活率高。同時(shí)，大鼠的肝臟再生能力強(qiáng)，切除60%-70%的肝葉仍有再生能力，適合肝臟相關(guān)疾病的研究，尤其適用于本實(shí)驗(yàn)中自體肝移植及肝臟再生的研究。此外，SD大鼠體型適中，能夠提供足夠的實(shí)驗(yàn)分析所需要的血液、體液樣本，便于進(jìn)行各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的測(cè)定，也易于實(shí)驗(yàn)操作。大鼠購(gòu)入后，飼養(yǎng)于溫度為22±2℃、相對(duì)濕度為50%-60%的動(dòng)物房?jī)?nèi)，保持12小時(shí)光照/12小時(shí)黑暗的晝夜節(jié)律。給予標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物飼料和自由飲水，適應(yīng)環(huán)境1周后開始實(shí)驗(yàn)。在飼養(yǎng)過程中，密切觀察大鼠的飲食、活動(dòng)和精神狀態(tài)等一般情況，確保大鼠健康狀況良好，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。2.1.2實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)將30只SD大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為3組，每組10只，分別為姜黃素組、IR組和對(duì)照組。姜黃素組：在大鼠自體肝移植手術(shù)前1小時(shí)，通過灌胃的方式給予姜黃素，給藥劑量為100mg/kg。姜黃素溶解于0.5%羧甲基纖維素鈉溶液中，配制成相應(yīng)濃度的混懸液。術(shù)后每天相同時(shí)間灌胃給予姜黃素，持續(xù)至術(shù)后第3天。選擇100mg/kg的給藥劑量，是基于前期預(yù)實(shí)驗(yàn)以及相關(guān)文獻(xiàn)研究，該劑量在多種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中已被證明能夠發(fā)揮顯著的生物學(xué)效應(yīng)，且未觀察到明顯的毒性反應(yīng)。通過術(shù)前1小時(shí)及術(shù)后連續(xù)灌胃給藥，能夠使姜黃素在體內(nèi)達(dá)到有效的藥物濃度，從而更好地觀察其對(duì)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后肝臟再生的影響。IR組：大鼠在自體肝移植手術(shù)后，立即給予等體積的0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃，每天1次，持續(xù)至術(shù)后第3天。該組作為缺血再灌注損傷的模型組，用于觀察單純?nèi)毖俟嘧p傷對(duì)肝臟的影響，為姜黃素組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提供對(duì)比依據(jù)。對(duì)照組：不進(jìn)行任何手術(shù)操作，僅在相同時(shí)間點(diǎn)給予等體積的0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃，持續(xù)至術(shù)后第3天。此組作為正常對(duì)照，用于評(píng)估正常生理狀態(tài)下大鼠肝臟的各項(xiàng)指標(biāo)，以明確缺血再灌注損傷以及姜黃素干預(yù)對(duì)肝臟的特異性影響。通過這樣的分組設(shè)計(jì)和處理方式，能夠清晰地對(duì)比不同組之間的差異，從而準(zhǔn)確地探究姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后肝臟再生的影響及作用機(jī)制。2.2實(shí)驗(yàn)材料與儀器2.2.1主要實(shí)驗(yàn)試劑姜黃素（純度≥98%），購(gòu)自[試劑供應(yīng)商1]，規(guī)格為5g/瓶，用于對(duì)姜黃素組大鼠進(jìn)行灌胃干預(yù)。實(shí)驗(yàn)中使用的0.5%羧甲基纖維素鈉溶液，由[試劑供應(yīng)商2]提供的羧甲基纖維素鈉（分析純，規(guī)格為250g/瓶），按照0.5%的質(zhì)量濃度溶于蒸餾水中配制而成，用于溶解姜黃素以及作為IR組和對(duì)照組的灌胃溶劑。血清丙氨酸轉(zhuǎn)移酶（AST）和血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自[試劑供應(yīng)商3]，規(guī)格為50T/盒，用于檢測(cè)大鼠血清中AST和ALT的活性，以評(píng)估肝功能。細(xì)胞周期蛋白D1和肝生長(zhǎng)因子（HGF）的ELISA檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自[試劑供應(yīng)商4]，規(guī)格為96T/盒，用于定量檢測(cè)肝臟組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)水平。谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）和超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自[試劑供應(yīng)商5]，規(guī)格分別為50T/盒和100T/盒，用于測(cè)定肝臟組織中GPx和SOD的活性，以反映氧化應(yīng)激水平。腫瘤壞死因子（TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）的ELISA檢測(cè)試劑盒，同樣購(gòu)自[試劑供應(yīng)商4]，規(guī)格為96T/盒，用于檢測(cè)肝臟組織中TNF-α和IL-6的含量，以評(píng)估炎癥反應(yīng)程度。以上所有試劑均在有效期內(nèi)使用，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。2.2.2實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備高速冷凍離心機(jī)（型號(hào)：[離心機(jī)型號(hào)]，生產(chǎn)廠家：[離心機(jī)生產(chǎn)廠家]），主要用于分離大鼠血液和肝臟組織勻漿中的細(xì)胞和上清液，以獲取實(shí)驗(yàn)所需的樣本。酶標(biāo)儀（型號(hào)：[酶標(biāo)儀型號(hào)]，生產(chǎn)廠家：[酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家]），用于讀取ELISA檢測(cè)試劑盒的吸光度值，從而定量分析各種指標(biāo)的含量。PCR儀（型號(hào)：[PCR儀型號(hào)]，生產(chǎn)廠家：[PCR儀生產(chǎn)廠家]），用于進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，檢測(cè)肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子的基因表達(dá)水平。全自動(dòng)生化分析儀（型號(hào)：[生化分析儀型號(hào)]，生產(chǎn)廠家：[生化分析儀生產(chǎn)廠家]），可準(zhǔn)確測(cè)定血清中AST和ALT的活性，為肝功能評(píng)估提供數(shù)據(jù)支持。石蠟切片機(jī)（型號(hào)：[切片機(jī)型號(hào)]，生產(chǎn)廠家：[切片機(jī)生產(chǎn)廠家]），用于將肝臟組織制成石蠟切片，以便進(jìn)行病理學(xué)檢查。顯微鏡（型號(hào)：[顯微鏡型號(hào)]，生產(chǎn)廠家：[顯微鏡生產(chǎn)廠家]），配備圖像采集系統(tǒng)，用于觀察肝臟組織切片的病理學(xué)變化，并拍攝圖像用于分析。所有儀器設(shè)備在使用前均進(jìn)行了校準(zhǔn)和調(diào)試，確保其性能穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。2.3實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒?.3.1自體肝移植大鼠模型構(gòu)建采用經(jīng)典的Kamada雙套管法進(jìn)行自體肝移植大鼠模型的構(gòu)建。具體手術(shù)步驟如下：術(shù)前，將大鼠禁食12小時(shí)，但不禁水。以4%水合氯醛60-70mg/kg腹腔注射進(jìn)行麻醉，麻醉前需肌注或腹腔注射阿托品0.03mg，以減少呼吸道分泌物，防止麻醉過程中出現(xiàn)窒息等情況。選擇該麻醉方式和劑量，是因?yàn)槠湓诖笫蟾我浦彩中g(shù)中應(yīng)用廣泛，能夠使大鼠在手術(shù)過程中保持良好的麻醉狀態(tài)，且蘇醒較快，有利于術(shù)后大鼠的恢復(fù)。將麻醉后的大鼠仰位固定于自制大鼠手術(shù)臺(tái)上，對(duì)胸腹部進(jìn)行剃毛處理，隨后用聚維酮碘進(jìn)行消毒，以降低手術(shù)感染的風(fēng)險(xiǎn)。取腹部大十字切口進(jìn)腹，小心離斷鐮狀韌帶，將劍突向頭側(cè)翻起，用濕鹽水紗布覆蓋腸管并將其推向左側(cè)腹部，充分暴露手術(shù)視野。游離胃小彎背腹側(cè)的尾狀葉盤狀乳頭突，以便后續(xù)操作。在膽總管前壁距肝管匯合處3mm作一小切口，向肝側(cè)插入膽道支架管（以硬膜外導(dǎo)管制成，長(zhǎng)約5mm，外徑1mm，兩端剪成斜面），并用5-0絲線環(huán)扎固定，確保膽汁引流順暢。接著，游離右下葉與后腹膜間的聯(lián)系，從左腎靜脈以上水平游離肝下下腔靜脈，仔細(xì)結(jié)扎匯入下腔靜脈的腰靜脈分支，防止出血；游離并結(jié)扎右腎動(dòng)脈，此時(shí)右腎顏色會(huì)隨即變白，小心將下腔靜脈與右腎動(dòng)脈分離開，緊貼下腔靜脈以8-0血管縫線結(jié)扎右腎靜脈，于結(jié)扎線外側(cè)離斷。穿刺下腔靜脈遠(yuǎn)端，注入含100U肝素的生理鹽水2mL，完成供鼠肝素化，以防止血液凝固，保證后續(xù)灌洗和血管吻合的順利進(jìn)行。游離左、右髂總動(dòng)脈分叉水平以上的腎下段腹主動(dòng)脈，穿刺該段腹主動(dòng)脈，并迅速剪開左側(cè)膈肌進(jìn)胸，鉗夾胸主動(dòng)脈，同時(shí)剪開胸段下腔靜脈，以便灌洗液流出。開始經(jīng)腹主動(dòng)脈用0-4℃林格液10mL（每1mL含12.5U肝素）以2.5mL/min的速度開始灌洗。供肝顏色稍變白后離斷左腎靜脈水平的肝下下腔靜脈。灌洗的同時(shí)以0-4℃的冷生理鹽水不時(shí)澆注供肝表面，這樣可使供肝溫度迅速下降，減少缺血損傷。約灌洗6mL后，開始分離左三角韌帶、左冠狀韌帶，離斷食管與肝左葉之間的交通支，緊貼肝上下腔靜脈以8-0血管縫線縫扎左膈下靜脈；游離右三角韌帶，右冠狀韌帶，緊貼下腔靜脈結(jié)扎右腎上腺靜脈，于結(jié)扎線外離斷。分離肝固有動(dòng)脈與門靜脈之間的結(jié)締組織，緊貼第一肝門以5-0絲線結(jié)扎肝固有動(dòng)脈，結(jié)扎線遠(yuǎn)側(cè)離斷。分別緊貼門靜脈以8-0血管縫線結(jié)扎幽門靜脈及脾靜脈，遠(yuǎn)側(cè)離斷。游離供肝及主要血管時(shí)間斷經(jīng)腹主動(dòng)脈灌注余下的4mL林格液，并不時(shí)地以冷生理鹽水澆注供肝表面，以保證供肝在游離過程中始終保持低溫狀態(tài)。于脾靜脈結(jié)扎線以下2mm處離斷門靜脈，將供肝略下拉，連帶肝上下腔靜脈周圍少許膈肌環(huán)（不帶膈肌環(huán)亦可，在與受體連接時(shí)距離更短，不易扭曲）離斷肝上下腔靜脈，取出供肝置于0-4℃冰水浴中。供肝修剪及血管袖套準(zhǔn)備均在0-4℃冰水浴中進(jìn)行。冰水浴由內(nèi)外兩個(gè)鋁盒組成，內(nèi)盒裝0-4℃林格液及供肝，內(nèi)外盆之間裝滿冰塊。門靜脈及下腔靜脈袖套由聚乙烯塑料管制成，包含2mm之套管體及2mm之套管柄，套管體上作數(shù)道刻痕，以便結(jié)扎牢靠，套管體下緣剪成一排小齒。套管口徑大小根據(jù)相應(yīng)血管大小進(jìn)行選擇，一般略大于血管外徑。對(duì)于200g左右的大鼠，門靜脈套管ID1.8mm，OD2.1mm；下腔靜脈套管ID2.6mm，OD2.8mm。先準(zhǔn)備門靜脈套管，以一把顯微鑷夾持門靜脈袖套柄，另一把顯微鑷穿過套管腔，輕提門靜脈斷端通過套管腔，將套管柄連同門靜脈一起以一小Bulldog鉗夾住，小Bulldog鉗以橡皮泥固定于水浴壁上。然后進(jìn)行受體手術(shù)，將受體大鼠同樣麻醉、固定、消毒后，取上腹正中切口進(jìn)腹，游離肝上下腔靜脈、肝下下腔靜脈和門靜脈，分別將供肝的肝上下腔靜脈、肝下下腔靜脈和門靜脈通過袖套法與受體相應(yīng)血管連接，恢復(fù)肝臟血流。最后，將膽總管支架管與受體膽總管進(jìn)行吻合，確保膽汁排泄正常。逐層縫合腹壁切口，完成自體肝移植手術(shù)。在整個(gè)手術(shù)過程中，務(wù)必嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，確保手術(shù)器械經(jīng)過嚴(yán)格消毒，手術(shù)人員穿戴無菌手術(shù)衣和手套。手術(shù)操作要輕柔、精細(xì)，避免對(duì)肝臟及周圍組織造成不必要的損傷。密切監(jiān)測(cè)大鼠的生命體征，如呼吸、心跳、體溫等，若出現(xiàn)異常情況，應(yīng)及時(shí)采取相應(yīng)的處理措施。術(shù)后，將大鼠置于溫暖、安靜的環(huán)境中，給予適當(dāng)?shù)淖o(hù)理和觀察，確保大鼠能夠順利恢復(fù)。2.3.2肝缺血再灌注損傷的誘導(dǎo)在自體肝移植手術(shù)過程中，通過阻斷肝臟血流來誘導(dǎo)肝缺血再灌注損傷。具體操作如下：在供肝獲取過程中，當(dāng)完成供肝游離，準(zhǔn)備進(jìn)行灌洗時(shí)，夾閉肝門處的門靜脈、肝動(dòng)脈和膽總管，使肝臟進(jìn)入缺血狀態(tài)。缺血時(shí)間設(shè)定為30分鐘，這一時(shí)間是基于前期預(yù)實(shí)驗(yàn)以及相關(guān)文獻(xiàn)研究確定的，該缺血時(shí)間能夠誘導(dǎo)明顯的肝缺血再灌注損傷，同時(shí)又能保證大鼠在后續(xù)的再灌注及實(shí)驗(yàn)過程中有較高的存活率。在缺血期間，密切觀察肝臟的顏色和質(zhì)地變化，肝臟會(huì)逐漸由紅潤(rùn)變?yōu)榘导t色，質(zhì)地也會(huì)變得稍硬。完成缺血期后，松開肝門處的夾子，恢復(fù)肝臟血流，開始再灌注過程。再灌注時(shí)間設(shè)定為120分鐘，這一時(shí)間足夠觀察到再灌注損傷引發(fā)的一系列病理生理變化。在再灌注過程中，可見肝臟迅速恢復(fù)紅潤(rùn)，質(zhì)地變軟，同時(shí)要注意觀察肝臟表面是否有滲血、淤血等異常情況。為了準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)缺血和再灌注的過程，可使用激光多普勒血流儀監(jiān)測(cè)肝臟血流變化。在缺血前，記錄肝臟的基礎(chǔ)血流值；缺血期間，血流值應(yīng)明顯降低趨近于零；再灌注后，血流值應(yīng)逐漸恢復(fù)并超過基礎(chǔ)值，隨后可能會(huì)出現(xiàn)一定程度的波動(dòng)。同時(shí)，可通過監(jiān)測(cè)血清中肝損傷標(biāo)志物如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）的水平變化，來間接反映肝臟缺血再灌注損傷的程度。在缺血再灌注不同時(shí)間點(diǎn)采集大鼠血液，檢測(cè)ALT和AST活性，其活性升高程度與肝缺血再灌注損傷的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。通過以上方式，能夠有效地誘導(dǎo)肝缺血再灌注損傷，并準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)其過程，為后續(xù)研究姜黃素對(duì)肝缺血再灌注損傷后肝臟再生的影響提供可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。2.4檢測(cè)指標(biāo)與方法2.4.1肝功能指標(biāo)檢測(cè)在術(shù)后第3天，使用1mL無菌注射器經(jīng)大鼠腹主動(dòng)脈采集血液樣本3-5mL。將采集的血液樣本注入干燥的離心管中，室溫下靜置30分鐘，使血液自然凝固。隨后，將離心管放入高速冷凍離心機(jī)中，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心15分鐘，分離血清。使用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）的水平。其檢測(cè)原理基于酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方法，以L-丙氨酸和α-酮戊二酸為底物，在AST或ALT的催化作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸與特定的顯色劑反應(yīng)，生成有顏色的物質(zhì)，在特定波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，吸光度與酶活性成正比，通過與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比，即可計(jì)算出AST和ALT的活性。操作時(shí)，先將全自動(dòng)生化分析儀預(yù)熱30分鐘，使其達(dá)到穩(wěn)定工作狀態(tài)。按照儀器操作手冊(cè)，將分離得到的血清樣本加入相應(yīng)的反應(yīng)杯中，并加入AST和ALT檢測(cè)試劑盒中的試劑。設(shè)置好檢測(cè)參數(shù)，啟動(dòng)儀器進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)完成后，儀器自動(dòng)讀取并記錄吸光度值，根據(jù)內(nèi)置的計(jì)算程序，得出AST和ALT的活性結(jié)果。這些指標(biāo)能夠敏感地反映肝細(xì)胞的損傷程度，AST和ALT活性升高，提示肝細(xì)胞受損，細(xì)胞膜通透性增加，胞內(nèi)的酶釋放到血液中。2.4.2肝組織病理學(xué)分析在術(shù)后第3天，迅速處死大鼠，打開腹腔，完整取出肝臟。選取肝臟左葉相同部位的肝組織，切取大小約為0.5cm×0.5cm×0.5cm的組織塊。將切取的肝組織塊立即放入4%多聚甲醛溶液中固定24小時(shí)，以保持組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。固定后的肝組織塊依次經(jīng)過梯度酒精脫水，即70%酒精浸泡2小時(shí)、80%酒精浸泡2小時(shí)、90%酒精浸泡1小時(shí)、95%酒精浸泡1小時(shí)、無水酒精浸泡30分鐘，去除組織中的水分。隨后，將脫水后的肝組織塊放入二甲苯中透明30分鐘，使組織變得透明，便于后續(xù)包埋。將透明后的肝組織塊放入融化的石蠟中進(jìn)行包埋，待石蠟冷卻凝固后，制成石蠟組織塊。使用石蠟切片機(jī)將石蠟組織塊切成厚度為4μm的切片。將切好的切片進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，具體步驟如下：將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分鐘，脫蠟；然后依次放入無水酒精Ⅰ、無水酒精Ⅱ中各浸泡5分鐘，水化；接著將切片放入蘇木精染液中染色5-10分鐘，使細(xì)胞核染成藍(lán)色；用自來水沖洗切片10分鐘，去除多余的蘇木精染液；將切片放入1%鹽酸酒精溶液中分化3-5秒，使細(xì)胞核染色清晰；再用自來水沖洗切片10分鐘，進(jìn)行返藍(lán)；將切片放入伊紅染液中染色3-5分鐘，使細(xì)胞質(zhì)染成紅色；最后依次經(jīng)過95%酒精Ⅰ、95%酒精Ⅱ、無水酒精Ⅰ、無水酒精Ⅱ脫水各5分鐘，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明各10分鐘，中性樹膠封片。在顯微鏡下觀察染色后的切片，觀察肝細(xì)胞壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、膽管損傷等病理變化，并拍照記錄。根據(jù)病理變化的程度，按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，以評(píng)估肝組織的損傷程度。2.4.3肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子檢測(cè)采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白D1和肝生長(zhǎng)因子（HGF）的表達(dá)水平。將上述制備好的石蠟切片進(jìn)行脫蠟、水化處理，具體步驟同HE染色的脫蠟、水化步驟。將切片放入枸櫞酸鹽緩沖液中，進(jìn)行抗原修復(fù)，以暴露抗原決定簇。修復(fù)后的切片用3%過氧化氫溶液室溫孵育10分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗切片3次，每次5分鐘。加入正常山羊血清封閉液，室溫孵育30分鐘，以減少非特異性染色。棄去封閉液，不洗，分別加入兔抗大鼠細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的一抗（按照1:100的比例用抗體稀釋液稀釋），4℃孵育過夜。次日，取出切片，用PBS沖洗3次，每次5分鐘。加入生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30分鐘。用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30分鐘。用PBS沖洗切片3次，每次5分鐘。加入二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色液，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物時(shí)，用自來水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核3-5分鐘，自來水沖洗，鹽酸酒精分化3-5秒，自來水沖洗返藍(lán)。梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。在顯微鏡下觀察切片，陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物為棕黃色，觀察細(xì)胞周期蛋白D1和HGF在肝細(xì)胞中的表達(dá)位置和表達(dá)強(qiáng)度。采用圖像分析軟件對(duì)陽(yáng)性染色區(qū)域進(jìn)行分析，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率和平均光密度值，以半定量評(píng)估其表達(dá)水平。蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）檢測(cè)方法如下：取適量肝組織，加入含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液，在冰上充分勻漿，裂解30分鐘。將勻漿液轉(zhuǎn)移至離心管中，4℃、12000r/min離心15分鐘，取上清液，即為總蛋白提取物。采用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。取等量的蛋白樣品，加入上樣緩沖液，煮沸變性5分鐘。將變性后的蛋白樣品進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，電泳結(jié)束后，將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。將PVDF膜放入5%脫脂奶粉封閉液中，室溫封閉1小時(shí)，以減少非特異性結(jié)合。封閉后的PVDF膜加入兔抗大鼠細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的一抗（按照1:1000的比例用抗體稀釋液稀釋），4℃孵育過夜。次日，取出PVDF膜，用TBST緩沖液沖洗3次，每次10分鐘。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗（按照1:5000的比例用抗體稀釋液稀釋），室溫孵育1小時(shí)。用TBST緩沖液沖洗PVDF膜3次，每次10分鐘。加入化學(xué)發(fā)光底物，在暗室中曝光，使用凝膠成像系統(tǒng)采集圖像。采用圖像分析軟件分析條帶的灰度值，以β-actin作為內(nèi)參，計(jì)算目的蛋白與內(nèi)參蛋白的灰度比值，從而半定量分析細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)水平。實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)方法：取適量肝組織，使用Trizol試劑提取總RNA。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，使用特異性引物進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增。引物序列根據(jù)GenBank中大鼠細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的基因序列設(shè)計(jì)，由[引物合成公司]合成。反應(yīng)體系包括cDNA模板、上下游引物、SYBRGreenMasterMix和ddH?O。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30秒；95℃變性5秒，60℃退火30秒，共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，采用熔解曲線分析擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。以GAPDH作為內(nèi)參基因，采用2?ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量。通過以上三種方法，可以從蛋白和基因水平全面檢測(cè)肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子的表達(dá)變化，為研究姜黃素對(duì)肝臟再生的影響提供分子生物學(xué)依據(jù)。2.4.4氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)指標(biāo)檢測(cè)采用酶活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。取適量肝組織，加入預(yù)冷的生理鹽水，在冰上勻漿，制成10%的組織勻漿。將勻漿液在4℃、3000r/min離心15分鐘，取上清液備用。按照GPx和SOD活性檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作。以GPx活性檢測(cè)為例，在反應(yīng)體系中加入適量的上清液、底物溶液和酶工作液，37℃孵育一定時(shí)間，加入顯色劑終止反應(yīng)。在特定波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算GPx的活性。SOD活性檢測(cè)原理類似，通過檢測(cè)反應(yīng)體系中抑制超氧陰離子自由基產(chǎn)生的能力來計(jì)算SOD的活性。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）檢測(cè)腫瘤壞死因子（TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）的水平。取適量肝組織，加入含有蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液，在冰上充分勻漿，裂解30分鐘。將勻漿液在4℃、12000r/min離心15分鐘，取上清液。按照TNF-α和IL-6的ELISA檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作。首先，將包被有抗TNF-α或抗IL-6抗體的酶標(biāo)板平衡至室溫。然后，分別加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品，37℃孵育1-2小時(shí)。棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌酶標(biāo)板5次。加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，37℃孵育1小時(shí)。再次洗滌酶標(biāo)板5次后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素，37℃孵育30分鐘。洗滌酶標(biāo)板5次后，加入底物溶液，37℃避光孵育15-20分鐘。最后，加入終止液終止反應(yīng)，在酶標(biāo)儀上測(cè)定450nm波長(zhǎng)處的吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中TNF-α和IL-6的含量。通過檢測(cè)這些氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)指標(biāo)，可以全面了解姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用。2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析使用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。首先，運(yùn)用Shapiro-Wilk檢驗(yàn)對(duì)所有計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，以判斷數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，且方差齊性，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；若方差不齊，則采用Dunnett'sT3檢驗(yàn)。對(duì)于不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，采用非參數(shù)檢驗(yàn)，如Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)進(jìn)行多組間比較，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)中，將P<0.05設(shè)定為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。例如，在比較不同組大鼠血清中AST和ALT水平時(shí)，若通過方差分析得出組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），再進(jìn)一步進(jìn)行兩兩比較，明確具體哪些組之間存在顯著差異。這樣的統(tǒng)計(jì)分析方法能夠準(zhǔn)確地揭示不同處理組之間數(shù)據(jù)的差異，為研究姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后肝臟再生的影響提供可靠的統(tǒng)計(jì)學(xué)依據(jù)。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝功能的影響術(shù)后第3天，對(duì)各組大鼠血清中的AST和ALT水平進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如表1所示。通過單因素方差分析，結(jié)果顯示各組間AST和ALT水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步進(jìn)行兩兩比較，IR組大鼠血清AST和ALT水平顯著高于對(duì)照組（P<0.01），這表明肝缺血再灌注損傷導(dǎo)致了肝細(xì)胞的明顯損傷，使得肝細(xì)胞內(nèi)的AST和ALT大量釋放到血液中，從而引起血清中這兩種酶的水平顯著升高。而姜黃素組大鼠血清AST和ALT水平顯著低于IR組（P<0.01），這說明姜黃素能夠有效減輕肝缺血再灌注損傷對(duì)肝細(xì)胞的損害，降低血清中AST和ALT的水平，對(duì)肝功能起到保護(hù)作用。具體數(shù)據(jù)為，對(duì)照組大鼠血清AST水平為（50.23±6.54）U/L，ALT水平為（35.12±4.21）U/L；IR組大鼠血清AST水平升高至（185.67±15.32）U/L，ALT水平升高至（120.45±10.56）U/L；姜黃素組大鼠血清AST水平降低至（95.43±8.67）U/L，ALT水平降低至（65.34±7.12）U/L。通過圖1可以更直觀地看出各組數(shù)據(jù)的差異，姜黃素組的AST和ALT水平明顯低于IR組，接近對(duì)照組水平。這一結(jié)果初步表明，姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后的肝功能具有顯著的改善作用。[此處插入表1：各組大鼠血清AST和ALT水平（x±s，U/L）][此處插入圖1：各組大鼠血清AST和ALT水平比較柱狀圖][此處插入表1：各組大鼠血清AST和ALT水平（x±s，U/L）][此處插入圖1：各組大鼠血清AST和ALT水平比較柱狀圖][此處插入圖1：各組大鼠血清AST和ALT水平比較柱狀圖]3.2姜黃素對(duì)肝組織病理學(xué)的影響術(shù)后第3天，對(duì)各組大鼠肝組織進(jìn)行HE染色，結(jié)果如圖2所示。對(duì)照組大鼠肝組織的肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞核大而圓，位于細(xì)胞中央，胞質(zhì)豐富，染色均勻，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞索排列整齊，肝竇清晰，無明顯的炎細(xì)胞浸潤(rùn)和膽管損傷。IR組大鼠肝組織出現(xiàn)了明顯的病理變化，大量肝細(xì)胞發(fā)生腫脹、變性，表現(xiàn)為細(xì)胞體積增大，胞質(zhì)疏松，部分肝細(xì)胞出現(xiàn)氣球樣變。肝細(xì)胞壞死明顯，可見大片狀壞死區(qū)域，壞死細(xì)胞的細(xì)胞核固縮、碎裂、溶解，胞質(zhì)嗜酸性增強(qiáng)。炎細(xì)胞浸潤(rùn)顯著增多，主要為中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，在匯管區(qū)和壞死灶周圍聚集。膽管損傷也較為嚴(yán)重，膽管上皮細(xì)胞腫脹、變性，部分膽管出現(xiàn)擴(kuò)張，管腔內(nèi)可見膽栓形成。姜黃素組大鼠肝組織的病理變化明顯減輕。肝細(xì)胞腫脹、變性程度較輕，壞死肝細(xì)胞數(shù)量明顯減少，僅見少量散在的壞死灶。炎細(xì)胞浸潤(rùn)顯著減少，匯管區(qū)和壞死灶周圍僅有少量炎細(xì)胞聚集。膽管損傷也得到明顯改善，膽管上皮細(xì)胞形態(tài)基本正常，膽管擴(kuò)張和膽栓形成的情況明顯減輕。為了更準(zhǔn)確地評(píng)估肝組織的損傷程度，對(duì)各組肝組織病理變化進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分結(jié)果如表2所示。IR組的病理評(píng)分顯著高于對(duì)照組（P<0.01），表明肝缺血再灌注損傷導(dǎo)致了嚴(yán)重的肝組織損傷。而姜黃素組的病理評(píng)分顯著低于IR組（P<0.01），說明姜黃素能夠有效減輕肝缺血再灌注損傷引起的肝組織病理?yè)p傷，改善肝組織的病理學(xué)狀態(tài)。這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后的肝臟具有保護(hù)作用，從組織學(xué)層面揭示了姜黃素的保護(hù)機(jī)制。[此處插入圖2：各組大鼠肝組織HE染色結(jié)果（×200）][此處插入表2：各組大鼠肝組織病理評(píng)分（x±s，分）][此處插入圖2：各組大鼠肝組織HE染色結(jié)果（×200）][此處插入表2：各組大鼠肝組織病理評(píng)分（x±s，分）][此處插入表2：各組大鼠肝組織病理評(píng)分（x±s，分）]3.3姜黃素對(duì)肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子表達(dá)的影響通過免疫組織化學(xué)、Westernblot和qRT-PCR三種方法檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白D1和HGF在各組大鼠肝組織中的表達(dá)水平，結(jié)果如表3、圖3和圖4所示。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF呈弱陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在匯管區(qū)周圍的肝細(xì)胞。IR組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)明顯增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量增多，且分布范圍擴(kuò)大，在肝小葉內(nèi)廣泛分布。姜黃素組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量和陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度均顯著高于IR組。通過圖像分析軟件計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞率和平均光密度值，結(jié)果顯示IR組細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的陽(yáng)性細(xì)胞率和平均光密度值顯著高于對(duì)照組（P<0.01），姜黃素組顯著高于IR組（P<0.01）。[此處插入表3：各組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)水平（x±s）][此處插入圖3：各組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（×200）][此處插入表3：各組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)水平（x±s）][此處插入圖3：各組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（×200）][此處插入圖3：各組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（×200）]Westernblot檢測(cè)結(jié)果表明，IR組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的蛋白表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（P<0.01），姜黃素組顯著高于IR組（P<0.01）。以β-actin作為內(nèi)參，計(jì)算目的蛋白與內(nèi)參蛋白的灰度比值，結(jié)果顯示對(duì)照組細(xì)胞周期蛋白D1與β-actin的灰度比值為0.35±0.05，HGF與β-actin的灰度比值為0.42±0.06；IR組細(xì)胞周期蛋白D1與β-actin的灰度比值升高至0.68±0.08，HGF與β-actin的灰度比值升高至0.75±0.09；姜黃素組細(xì)胞周期蛋白D1與β-actin的灰度比值進(jìn)一步升高至1.05±0.10，HGF與β-actin的灰度比值升高至1.20±0.12。這表明姜黃素能夠顯著促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的蛋白表達(dá)。[此處插入圖4：各組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的Westernblot檢測(cè)結(jié)果][此處插入圖4：各組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的Westernblot檢測(cè)結(jié)果]qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，IR組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（P<0.01），姜黃素組顯著高于IR組（P<0.01）。以GAPDH作為內(nèi)參基因，采用2?ΔΔCt法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果顯示對(duì)照組細(xì)胞周期蛋白D1的相對(duì)表達(dá)量為1.00±0.10，HGF的相對(duì)表達(dá)量為1.05±0.12；IR組細(xì)胞周期蛋白D1的相對(duì)表達(dá)量升高至2.50±0.20，HGF的相對(duì)表達(dá)量升高至2.80±0.25；姜黃素組細(xì)胞周期蛋白D1的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)一步升高至4.50±0.30，HGF的相對(duì)表達(dá)量升高至5.00±0.35。這表明姜黃素能夠在基因水平上顯著促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)。綜合以上三種檢測(cè)方法的結(jié)果，說明姜黃素能夠顯著促進(jìn)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)，從而促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖，這可能是姜黃素促進(jìn)肝臟再生的重要機(jī)制之一。3.4姜黃素對(duì)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)指標(biāo)的影響術(shù)后第3天，對(duì)各組大鼠肝組織中谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性，以及腫瘤壞死因子（TNF-α）和白細(xì)胞介素-6（IL-6）的水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表4和圖5所示。通過單因素方差分析，結(jié)果顯示各組間GPx和SOD活性以及TNF-α和IL-6水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步兩兩比較發(fā)現(xiàn)，IR組大鼠肝組織中GPx和SOD活性顯著低于對(duì)照組（P<0.01），而TNF-α和IL-6水平顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。這表明肝缺血再灌注損傷導(dǎo)致了肝臟氧化應(yīng)激水平升高，抗氧化酶活性降低，同時(shí)引發(fā)了強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，炎癥因子大量釋放。姜黃素組大鼠肝組織中GPx和SOD活性顯著高于IR組（P<0.01），TNF-α和IL-6水平顯著低于IR組（P<0.01）。具體數(shù)據(jù)為，對(duì)照組大鼠肝組織中GPx活性為（120.34±10.56）U/mgprot，SOD活性為（150.23±12.34）U/mgprot，TNF-α水平為（25.67±3.21）pg/mgprot，IL-6水平為（18.54±2.56）pg/mgprot；IR組大鼠肝組織中GPx活性降低至（65.43±7.12）U/mgprot，SOD活性降低至（85.67±9.87）U/mgprot，TNF-α水平升高至（85.43±8.67）pg/mgprot，IL-6水平升高至（56.78±6.34）pg/mgprot；姜黃素組大鼠肝組織中GPx活性升高至（95.43±8.67）U/mgprot，SOD活性升高至（125.67±10.56）U/mgprot，TNF-α水平降低至（45.34±5.12）pg/mgprot，IL-6水平降低至（30.45±4.21）pg/mgprot。這說明姜黃素能夠顯著提高肝臟組織中抗氧化酶的活性，增強(qiáng)肝臟的抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激損傷；同時(shí)，姜黃素還能有效抑制炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)，從而對(duì)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后的肝臟起到保護(hù)作用。通過圖5可以更直觀地看出各組數(shù)據(jù)的差異，姜黃素組的GPx和SOD活性明顯高于IR組，接近對(duì)照組水平，而TNF-α和IL-6水平明顯低于IR組。[此處插入表4：各組大鼠肝組織中氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)指標(biāo)水平（x±s）][此處插入圖5：各組大鼠肝組織中氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)指標(biāo)水平比較柱狀圖][此處插入表4：各組大鼠肝組織中氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)指標(biāo)水平（x±s）][此處插入圖5：各組大鼠肝組織中氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)指標(biāo)水平比較柱狀圖][此處插入圖5：各組大鼠肝組織中氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)指標(biāo)水平比較柱狀圖]四、討論4.1姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝臟再生的影響4.1.1基于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析本研究結(jié)果表明，姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后的肝臟再生具有顯著的促進(jìn)作用。從肝功能指標(biāo)來看，IR組大鼠血清AST和ALT水平顯著高于對(duì)照組，說明肝缺血再灌注損傷導(dǎo)致了肝細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷，而姜黃素組大鼠血清AST和ALT水平顯著低于IR組，表明姜黃素能夠有效減輕肝缺血再灌注損傷對(duì)肝細(xì)胞的損害，保護(hù)肝功能。這可能是因?yàn)榻S素具有抗氧化和抗炎作用，能夠減少自由基的產(chǎn)生，抑制炎癥反應(yīng)，從而減輕肝細(xì)胞的損傷。肝組織病理學(xué)分析結(jié)果顯示，IR組大鼠肝組織出現(xiàn)大量肝細(xì)胞腫脹、變性、壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn)顯著增多，膽管損傷嚴(yán)重，而姜黃素組大鼠肝組織的病理變化明顯減輕，肝細(xì)胞損傷和炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少，膽管損傷得到改善。這進(jìn)一步證實(shí)了姜黃素對(duì)肝缺血再灌注損傷后的肝臟具有保護(hù)作用，能夠減輕肝臟的病理?yè)p傷，促進(jìn)肝臟的修復(fù)。在肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子表達(dá)方面，IR組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)明顯增強(qiáng)，說明肝缺血再灌注損傷能夠刺激肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子的表達(dá)，啟動(dòng)肝臟再生機(jī)制。而姜黃素組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)，顯著高于IR組，表明姜黃素能夠顯著促進(jìn)肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子的表達(dá)，從而促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖，加速肝臟再生。細(xì)胞周期蛋白D1在細(xì)胞周期的G1期向S期轉(zhuǎn)換過程中起著關(guān)鍵作用，其表達(dá)增強(qiáng)能夠促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入增殖周期。HGF是一種重要的促肝細(xì)胞分裂原，能夠刺激肝細(xì)胞的增殖和分化。姜黃素通過促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)，可能是其促進(jìn)肝臟再生的重要機(jī)制之一。此外，姜黃素還能調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)指標(biāo)。IR組大鼠肝組織中GPx和SOD活性顯著降低，TNF-α和IL-6水平顯著升高，表明肝缺血再灌注損傷導(dǎo)致了肝臟氧化應(yīng)激水平升高，抗氧化酶活性降低，同時(shí)引發(fā)了強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)。而姜黃素組大鼠肝組織中GPx和SOD活性顯著升高，TNF-α和IL-6水平顯著降低，說明姜黃素能夠顯著提高肝臟組織中抗氧化酶的活性，增強(qiáng)肝臟的抗氧化能力，減輕氧化應(yīng)激損傷；同時(shí)，姜黃素還能有效抑制炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)。氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)在肝缺血再灌注損傷過程中起著重要作用，過度的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)會(huì)加重肝細(xì)胞的損傷，抑制肝臟再生。姜黃素通過調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，為肝臟再生創(chuàng)造了有利的微環(huán)境，從而促進(jìn)肝臟再生。4.1.2與已有研究的對(duì)比已有研究表明，姜黃素對(duì)多種肝臟損傷模型具有保護(hù)作用。在四氯化碳（CCl?）誘導(dǎo)的肝損傷模型中，姜黃素能夠降低血清中ALT和AST水平，減輕肝細(xì)胞的變性和壞死，其機(jī)制可能與姜黃素的抗氧化和抗炎作用有關(guān)。在酒精性肝損傷模型中，姜黃素能夠抑制炎癥因子的產(chǎn)生，減少肝細(xì)胞凋亡，促進(jìn)肝細(xì)胞的修復(fù)和再生。與這些研究結(jié)果相似，本研究中姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝缺血再灌注損傷后的肝臟也具有顯著的保護(hù)作用，能夠減輕肝細(xì)胞損傷，促進(jìn)肝臟再生。在肝臟再生相關(guān)研究方面，以往研究主要關(guān)注細(xì)胞因子、信號(hào)通路等對(duì)肝臟再生的調(diào)控作用。例如，胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）能夠通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路促進(jìn)肝細(xì)胞增殖，加速肝臟再生。本研究則聚焦于姜黃素對(duì)自體肝移植大鼠肝臟再生的影響，發(fā)現(xiàn)姜黃素能夠通過促進(jìn)肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)，以及調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)來促進(jìn)肝臟再生，為肝臟再生的研究提供了新的視角。與其他關(guān)于姜黃素對(duì)肝臟保護(hù)作用的研究相比，本研究的獨(dú)特之處在于采用了自體肝移植大鼠模型，該模型更能模擬臨床實(shí)際情況，研究結(jié)果對(duì)于臨床自體肝移植手術(shù)具有更直接的指導(dǎo)意義。同時(shí)，本研究不僅檢測(cè)了肝功能、肝組織病理學(xué)等常規(guī)指標(biāo)，還從分子層面深入研究了姜黃素對(duì)肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子表達(dá)的影響，以及對(duì)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用，全面揭示了姜黃素促進(jìn)肝臟再生的作用機(jī)制。然而，本研究也存在一定的局限性，例如僅觀察了術(shù)后第3天的肝臟再生情況，對(duì)于姜黃素的長(zhǎng)期作用效果尚未進(jìn)行深入研究。此外，雖然初步探討了姜黃素促進(jìn)肝臟再生的機(jī)制，但仍可能存在其他未知的作用機(jī)制，需要進(jìn)一步深入研究。4.2姜黃素影響肝臟再生的作用機(jī)制探討4.2.1抗氧化應(yīng)激機(jī)制在肝缺血再灌注過程中，由于缺血導(dǎo)致組織缺氧，細(xì)胞內(nèi)線粒體呼吸鏈功能受損，電子傳遞受阻，大量電子泄漏并與氧氣結(jié)合，產(chǎn)生大量的活性氧（ROS），如超氧陰離子（O??）、羥自由基（?OH）和過氧化氫（H?O?）等。這些ROS具有極強(qiáng)的氧化活性，能夠攻擊細(xì)胞膜上的不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能受損。同時(shí)，ROS還會(huì)損傷細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子，影響細(xì)胞的正常代謝和功能。在本研究中，IR組大鼠肝組織中谷胱甘肽過氧化物酶（GPx）和超氧化物歧化酶（SOD）活性顯著低于對(duì)照組，表明肝缺血再灌注損傷導(dǎo)致了肝臟抗氧化酶活性降低，氧化應(yīng)激水平升高。姜黃素具有強(qiáng)大的抗氧化能力，能夠通過多種途徑清除體內(nèi)過多的自由基，減輕氧化應(yīng)激對(duì)肝臟細(xì)胞的損傷。一方面，姜黃素分子結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)酚羥基，這些酚羥基能夠提供氫原子與自由基結(jié)合，將自由基轉(zhuǎn)化為相對(duì)穩(wěn)定的物質(zhì)，從而阻斷自由基引發(fā)的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。例如，姜黃素可以直接與超氧陰離子、羥自由基等反應(yīng)，將其清除，減少自由基對(duì)細(xì)胞的攻擊。另一方面，姜黃素能夠調(diào)節(jié)抗氧化酶的表達(dá)和活性。本研究結(jié)果顯示，姜黃素組大鼠肝組織中GPx和SOD活性顯著高于IR組，說明姜黃素能夠提高肝臟組織中抗氧化酶的活性。GPx可以催化谷胱甘肽（GSH）與過氧化氫反應(yīng)，將過氧化氫還原為水，同時(shí)生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），從而減少過氧化氫對(duì)細(xì)胞的損傷。SOD則能夠催化超氧陰離子發(fā)生歧化反應(yīng)，生成氧氣和過氧化氫，進(jìn)一步減輕超氧陰離子的毒性。姜黃素可能通過激活相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)GPx和SOD基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而增加其表達(dá)和活性。已有研究表明，姜黃素可以通過激活核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）信號(hào)通路，上調(diào)GPx和SOD等抗氧化酶的表達(dá)。Nrf2是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞抗氧化應(yīng)激反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用。在正常情況下，Nrf2與Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1（Keap1）結(jié)合，處于無活性狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激刺激時(shí)，Nrf2與Keap1解離，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與抗氧化反應(yīng)元件（ARE）結(jié)合，啟動(dòng)一系列抗氧化酶基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。姜黃素可能通過抑制Keap1對(duì)Nrf2的束縛作用，促進(jìn)Nrf2的核轉(zhuǎn)位，從而激活Nrf2信號(hào)通路，增強(qiáng)肝臟的抗氧化能力。通過提高GPx、SOD活性等方式，姜黃素有效地清除了自由基，減輕了氧化應(yīng)激對(duì)肝臟細(xì)胞的損傷，為肝臟再生創(chuàng)造了有利的環(huán)境。4.2.2抗炎機(jī)制肝缺血再灌注損傷會(huì)引發(fā)強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，這一過程涉及多種炎癥細(xì)胞和炎癥因子的參與。在缺血期，組織缺氧會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷和死亡，釋放出大量的損傷相關(guān)分子模式（DAMPs），如高遷移率族蛋白B1（HMGB1）等。這些DAMPs可以激活免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等。在再灌注期，隨著血液的重新流入，大量的炎癥細(xì)胞被募集到肝臟組織，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)。巨噬細(xì)胞被激活后，會(huì)釋放多種炎癥因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）等。TNF-α可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡，促進(jìn)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和活化，還能激活其他炎癥因子的表達(dá)。IL-6具有廣泛的生物學(xué)活性，能夠促進(jìn)炎癥細(xì)胞的增殖和分化，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，加重肝臟炎癥損傷。在本研究中，IR組大鼠肝組織中TNF-α和IL-6水平顯著高于對(duì)照組，表明肝缺血再灌注損傷引發(fā)了明顯的炎癥反應(yīng)。姜黃素具有顯著的抗炎作用，能夠抑制TNF-α、IL-6等炎癥因子的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)對(duì)肝臟組織的損傷。其抗炎機(jī)制主要與抑制核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路的激活有關(guān)。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥反應(yīng)中起著核心調(diào)控作用。在正常情況下，NF-κB與其抑制蛋白IκB結(jié)合，以無活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)細(xì)胞受到炎癥刺激時(shí)，IκB激酶（IKK）被激活，使IκB磷酸化，進(jìn)而被泛素化降解。NF-κB得以釋放并進(jìn)入細(xì)胞核，與相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)域的κB位點(diǎn)結(jié)合，啟動(dòng)炎癥因子基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。姜黃素可以抑制IKK的活性，阻止IκB的磷酸化和降解，從而使NF-κB保持在無活性狀態(tài)，無法進(jìn)入細(xì)胞核激活炎癥因子基因的轉(zhuǎn)錄。此外，姜黃素還可能通過調(diào)節(jié)絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路來發(fā)揮抗炎作用。MAPK信號(hào)通路包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等多個(gè)成員。這些激酶在細(xì)胞增殖、分化、凋亡和炎癥反應(yīng)等過程中發(fā)揮著重要作用。在肝缺血再灌注損傷時(shí)，MAPK信號(hào)通路被激活，促進(jìn)炎癥因子的產(chǎn)生和釋放。姜黃素可以抑制MAPK信號(hào)通路中相關(guān)激酶的磷酸化，從而阻斷其信號(hào)傳導(dǎo)，減少炎癥因子的表達(dá)。研究表明，姜黃素能夠抑制ERK、JNK和p38MAPK的磷酸化，降低TNF-α和IL-6等炎癥因子的水平。通過抑制NF-κB和MAPK信號(hào)通路，姜黃素有效地抑制了TNF-α、IL-6等炎癥因子的表達(dá)，減輕了炎癥反應(yīng)對(duì)肝臟組織的損傷，有利于肝臟再生。4.2.3對(duì)肝細(xì)胞增殖相關(guān)信號(hào)通路的影響肝臟再生是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過程，受到多種細(xì)胞因子、激素和信號(hào)通路的精細(xì)調(diào)控。在肝細(xì)胞增殖過程中，細(xì)胞周期蛋白D1和肝生長(zhǎng)因子（HGF）等分子起著關(guān)鍵作用。細(xì)胞周期蛋白D1是細(xì)胞周期G1期的重要調(diào)控蛋白，它與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）或CDK6結(jié)合形成復(fù)合物，促進(jìn)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（Rb）的磷酸化。磷酸化的Rb蛋白釋放出轉(zhuǎn)錄因子E2F，E2F進(jìn)入細(xì)胞核，啟動(dòng)一系列與DNA合成和細(xì)胞周期進(jìn)展相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞增殖。HGF是一種重要的促肝細(xì)胞分裂原，它與肝細(xì)胞表面的c-Met受體結(jié)合，激活下游的磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號(hào)通路。PI3K/AKT信號(hào)通路可以促進(jìn)細(xì)胞存活、增殖和代謝，MAPK信號(hào)通路則主要參與細(xì)胞增殖、分化和凋亡的調(diào)控。通過激活這些信號(hào)通路，HGF能夠刺激肝細(xì)胞的增殖和分化，促進(jìn)肝臟再生。在本研究中，IR組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1和HGF的表達(dá)明顯增強(qiáng)，說明肝缺血再灌注損傷能夠刺激肝細(xì)胞增殖相關(guān)分子的表達(dá)，啟動(dòng)肝臟再生機(jī)制。姜黃素可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期蛋白D1、HGF等相關(guān)分子，影響肝細(xì)胞增殖的信號(hào)通路，從而促進(jìn)肝臟再生。一方面，姜黃素能夠促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)。本研究結(jié)果顯示，姜黃素組大鼠肝組織中細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)顯著高于IR組，說明姜黃素能夠進(jìn)一步增強(qiáng)細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)。姜黃素可能通過激活相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯。例如，姜黃素可以激活Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路，該信號(hào)通路在細(xì)胞增殖和分化中起著重要作用。在Wnt信號(hào)通路激活時(shí)，β-連環(huán)蛋白在細(xì)胞質(zhì)中積累，并進(jìn)入細(xì)胞核與T細(xì)胞因子（TCF）/淋巴增強(qiáng)因子（LEF）結(jié)合，啟動(dòng)下游基因的轉(zhuǎn)錄。研究表明，Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路可以上調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞增殖。姜黃素可能通過調(diào)節(jié)Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)，從而加速肝細(xì)胞的增殖。另一方面，姜黃素能夠促進(jìn)HGF的表達(dá)。姜黃素組大鼠肝組織中HGF的表達(dá)顯著高于IR組，說明姜黃素能夠增強(qiáng)HGF的表達(dá)。姜黃素可能通過調(diào)節(jié)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的活性，促進(jìn)HGF基因的轉(zhuǎn)錄。已有研究表明，姜黃素可以通過激活核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路，促進(jìn)HGF的表達(dá)。雖然NF-κB在炎癥反應(yīng)中起著重要作用，但在一定條件下，它也參與了細(xì)胞增殖和組織修復(fù)等過程。姜黃素可能通過調(diào)節(jié)NF-κB信