靶向二代測(cè)序在感染性疾病診療中的規(guī)范化應(yīng)用專家共識(shí)詳細(xì)解讀2026一、背景與目標(biāo)感染性疾病診療痛點(diǎn)病原體多元化、復(fù)雜化，傳統(tǒng)檢測(cè)（涂片、培養(yǎng)、PCR等）存在局限性（如耗時(shí)長(zhǎng)、靈敏度低）。tNGS技術(shù)優(yōu)勢(shì)：靶向富集病原體核酸，顯著提高檢測(cè)靈敏度（較mNGS提升約10倍），降低測(cè)序數(shù)據(jù)量（0.1M–3M序列）和成本。制定共識(shí)的必要性tNGS臨床應(yīng)用缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致樣本采集、檢測(cè)流程、結(jié)果解讀參差不齊。目標(biāo)人群：危急重癥感染患者；應(yīng)用場(chǎng)景：傳統(tǒng)檢測(cè)受限、病情復(fù)雜或需精準(zhǔn)治療的感染。二、tNGS與mNGS技術(shù)對(duì)比（共識(shí)1）參數(shù)mNGStNGS檢測(cè)原理無(wú)偏倚檢測(cè)所有微生物靶向捕獲100–300種特定病原體測(cè)序數(shù)據(jù)量≥20M序列0.1M–3M序列（超多重PCR法最低0.1M）生信分析難度高（需去人源背景）低（靶向富集，人源干擾?。z測(cè)范圍>10,000種微生物100–300種臨床常見致病病原體靈敏度易受人源DNA干擾高（病原體序列占比50%–90%）檢測(cè)周期/成本長(zhǎng)/高短/低共識(shí)1：tNGS具有靶向性、數(shù)據(jù)量要求低、生信分析簡(jiǎn)單、成本低、靈敏度高、周期短的特點(diǎn)，但檢測(cè)范圍較窄三、tNGS臨床應(yīng)用場(chǎng)景與推薦意見1.血流感染（共識(shí)2）適應(yīng)癥：疑似膿毒癥、感染性休克等危重癥。推薦意見：共識(shí)2：抗菌藥物使用前、用藥有效時(shí)、停用24h后或下次用藥前，同步送檢tNGS和血培養(yǎng)。注意：tNGS特異性低于培養(yǎng)，需結(jié)合臨床排除污染。2.呼吸系統(tǒng)感染（共識(shí)3–5）適應(yīng)癥：常規(guī)治療無(wú)效、3天內(nèi)病原學(xué)陰性、重癥肺炎（共識(shí)3）。特殊病原體（軍團(tuán)菌、支原體、分枝桿菌等）感染進(jìn)展快/免疫抑制者（共識(shí)4）。限制：共識(shí)5：疑似罕見/新發(fā)病原體（超出tNGS檢測(cè)范圍）推薦mNGS；樣本質(zhì)量差時(shí)不建議送檢。3.泌尿系統(tǒng)感染（共識(shí)6）首選方法：尿培養(yǎng)。tNGS適用：共識(shí)6：尿培養(yǎng)陰性且疑特殊病原體（支原體、結(jié)核分枝桿菌等）時(shí)，先采用靶向PCR；無(wú)明確懷疑方向時(shí)送檢tNGS。4.中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染（共識(shí)7–8）適應(yīng)癥：共識(shí)7：3天未明確病原體且經(jīng)驗(yàn)性治療無(wú)效的腦膜炎/腦炎。

共識(shí)8：疑隱球菌、結(jié)核分枝桿菌等特殊病原體且病情急/遷延者。5.局灶性感染（共識(shí)9）適應(yīng)癥：膿腫、骨髓炎、眼內(nèi)炎等，常規(guī)檢測(cè)陰性或治療無(wú)效。共識(shí)9：推薦送檢tNGS，尤其疑特殊病原體感染。6.其他感染（共識(shí)10）共識(shí)10：感染源不明、病情進(jìn)展或抗感染無(wú)效時(shí)送檢tNGS；復(fù)雜感染/多重感染首選mNGS。四、樣本采集規(guī)范（共識(shí)11）關(guān)鍵原則：優(yōu)先采集病灶部位樣本（陽(yáng)性率最高）。無(wú)菌操作，抗菌藥物使用前采樣。血液樣本僅用于無(wú)法獲取病灶樣本時(shí)（靈敏度較低）。共識(shí)11：按感染類型選擇樣本（如BALF、腦脊液、組織等），規(guī)范采集容器、時(shí)機(jī)、保存及運(yùn)輸條件（參考微生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)）五、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程1.樣本前處理（共識(shí)12）要點(diǎn)：共識(shí)12：tNGS無(wú)需去宿主處理（人源背景影響?。?。痰液/組織需完全消化/研磨破壁；血液按技術(shù)路線分離成分（探針捕獲法優(yōu)選血漿，超多重PCR法優(yōu)選全血）。2.核酸提?。ü沧R(shí)13）共識(shí)13：必須監(jiān)控核酸濃度、純度（A260/A280）、完整性；設(shè)置內(nèi)參/陰/陽(yáng)性質(zhì)控品；低濃度樣本需重提或重采。3.文庫(kù)構(gòu)建（共識(shí)14–15）建庫(kù)路線：檢測(cè)需求推薦建庫(kù)方法DNA+RNA共檢總核酸直接建庫(kù)或DNA/cDNA混合建庫(kù)僅DNA/RNA單獨(dú)建庫(kù)探針/引物設(shè)計(jì)：共識(shí)14：根據(jù)目標(biāo)病原體（致病性>95%）和耐藥基因選擇建庫(kù)路線。

共識(shí)15：每個(gè)物種需設(shè)計(jì)≥3對(duì)捕獲區(qū)域（常見病原體≥5對(duì)）。4.測(cè)序與生信分析（共識(shí)16–18）數(shù)據(jù)量要求：共識(shí)16：探針捕獲法≥1M序列；超多重PCR法≥0.1M序列。生信質(zhì)控：共識(shí)17：去除低質(zhì)量序列（Q<20、N堿基>5%、長(zhǎng)度<30bp）。

共識(shí)18：報(bào)告需含數(shù)據(jù)量、Q30比例、內(nèi)參序列數(shù)、物種拉丁名/歸一化序列數(shù)、覆蓋度/擴(kuò)增子數(shù)。六、結(jié)果解讀與報(bào)告（共識(shí)19–23）1.陽(yáng)性閾值與報(bào)告原則（共識(shí)19）共識(shí)19：低于閾值不報(bào)告；達(dá)閾值且排除污染后報(bào)陽(yáng)性。灰區(qū)結(jié)果（低序列數(shù)）：結(jié)合臨床驗(yàn)證（如qPCR）；高致病病原體（如結(jié)核分枝桿菌）需確認(rèn)。2.病原體分級(jí)報(bào)告（共識(shí)20–22）分級(jí)判定標(biāo)準(zhǔn)臨床意義致病性微生物明確致病菌（如結(jié)核分枝桿菌）直接視為病原體（共識(shí)21）條件致病微生物結(jié)合宿主免疫狀態(tài)、治療反應(yīng)等綜合判斷（共識(shí)21）定植/微生態(tài)微生物無(wú)相關(guān)臨床表現(xiàn)通常非病原體；免疫抑制時(shí)謹(jǐn)慎考慮（共識(shí)22）3.耐藥基因解讀（共識(shí)23）共識(shí)23：重點(diǎn)報(bào)告臨床常見耐藥基因（如ESBL的blaCTX-M、碳青霉烯酶的blaKPC、萬(wàn)古霉素vanA等），需注意基因型與表型可能不一致。七、質(zhì)量控制體系1.人員與培訓(xùn)（共識(shí)24–25）共識(shí)24：人員需按崗位培訓(xùn)（濕實(shí)驗(yàn)：分子生物學(xué)技能；干實(shí)驗(yàn)：生信分析；報(bào)告解讀：感染病學(xué)背景）。

共識(shí)25：建立全流程SOP及質(zhì)控手冊(cè)。2.檢驗(yàn)前–中–后質(zhì)控（共識(shí)26–28）檢驗(yàn)前：共識(shí)26：規(guī)范知情同意、申請(qǐng)單填寫、樣本接收/拒收標(biāo)準(zhǔn)。檢驗(yàn)中：共識(shí)27：分區(qū)操作（防污染），監(jiān)控每批次陰/陽(yáng)性質(zhì)控。檢驗(yàn)后：共識(shí)28：雙人復(fù)核報(bào)告；剩余樣本保存>2周；環(huán)境定期消殺。3.性能確認(rèn)（共識(shí)29）共識(shí)29：驗(yàn)證全流程精密度、檢出限、交叉反應(yīng)；生信分析需模擬數(shù)據(jù)集測(cè)試。八、局限性與前景局限性檢測(cè)范圍未統(tǒng)一：可能導(dǎo)致漏檢（需制定行業(yè)最低檢測(cè)范圍標(biāo)準(zhǔn)）。低載量病原體偏向性：超多重PCR法存在擴(kuò)增偏倚，探針捕獲法對(duì)低豐度病原靈敏度不足。污染風(fēng)險(xiǎn)高：需自動(dòng)化流程及嚴(yán)格環(huán)境監(jiān)控。前景聯(lián)合傳統(tǒng)方法（培養(yǎng)、PCR）提升診斷效能；技術(shù)迭代后有望實(shí)現(xiàn)感染性疾病早診早治。總結(jié)本共識(shí)系統(tǒng)規(guī)范了tNGS從臨床應(yīng)用到實(shí)驗(yàn)室操作的29條核心建議