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《GB/T33420-2016壓力蒸汽滅菌生物指示物檢驗(yàn)方法》(2026年)深度解析目錄一

為何說(shuō)該標(biāo)準(zhǔn)是滅菌安全的“定盤星”?

專家視角解析GB/T33420-2016的核心價(jià)值與行業(yè)定位二

生物指示物檢驗(yàn)的“準(zhǔn)入密碼”是什么?

深度剖析標(biāo)準(zhǔn)中檢驗(yàn)對(duì)象與范圍的界定邏輯三

檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)不準(zhǔn)?

從儀器到試劑,

標(biāo)準(zhǔn)對(duì)檢驗(yàn)條件的剛性要求與實(shí)操要點(diǎn)四

核心檢驗(yàn)流程藏著哪些“

門道”?

專家拆解標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的培養(yǎng)與觀察關(guān)鍵環(huán)節(jié)五

結(jié)果判定憑什么“一錘定音”

?解讀標(biāo)準(zhǔn)中陽(yáng)性與陰性結(jié)果的界定依據(jù)與爭(zhēng)議處理六

不同場(chǎng)景檢驗(yàn)有何差異?

標(biāo)準(zhǔn)框架下醫(yī)療與食品行業(yè)的定制化檢驗(yàn)方案七

標(biāo)準(zhǔn)如何應(yīng)對(duì)技術(shù)迭代?

未來(lái)5年生物指示物檢驗(yàn)的創(chuàng)新方向與標(biāo)準(zhǔn)適應(yīng)性分析八

檢驗(yàn)數(shù)據(jù)如何“說(shuō)話”

?標(biāo)準(zhǔn)要求下記錄與報(bào)告的規(guī)范化管理與追溯價(jià)值九

常見檢驗(yàn)誤區(qū)如何規(guī)避?

基于標(biāo)準(zhǔn)條文的疑點(diǎn)解答與錯(cuò)誤操作警示十

標(biāo)準(zhǔn)落地如何“提質(zhì)增效”

?從實(shí)驗(yàn)室到產(chǎn)業(yè)鏈的全流程實(shí)施路徑與保障措施為何說(shuō)該標(biāo)準(zhǔn)是滅菌安全的“定盤星”?專家視角解析GB/T33420-2016的核心價(jià)值與行業(yè)定位標(biāo)準(zhǔn)出臺(tái)的“時(shí)代背景”:滅菌安全倒逼下的技術(shù)規(guī)范升級(jí)壓力蒸汽滅菌是醫(yī)療食品等領(lǐng)域的核心滅菌手段,而生物指示物是判斷滅菌是否達(dá)標(biāo)的關(guān)鍵依據(jù)。此前行業(yè)檢驗(yàn)方法混亂,結(jié)果可信度低,導(dǎo)致滅菌失敗風(fēng)險(xiǎn)頻發(fā)。GB/T33420-2016的出臺(tái),正是為解決這一痛點(diǎn),統(tǒng)一檢驗(yàn)技術(shù)要求,填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)專項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)空白。(二)核心價(jià)值:為滅菌效果“保駕護(hù)航”的技術(shù)標(biāo)尺該標(biāo)準(zhǔn)明確了檢驗(yàn)的全流程要求,從樣本處理到結(jié)果判定形成閉環(huán),確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性與一致性。其核心價(jià)值在于通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化檢驗(yàn),精準(zhǔn)識(shí)別滅菌缺陷,避免不合格滅菌產(chǎn)品流入市場(chǎng),保障醫(yī)療安全與食品衛(wèi)生,是行業(yè)安全防控的“第一道防線”。(三)行業(yè)定位:跨領(lǐng)域通用的基礎(chǔ)性技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)01標(biāo)準(zhǔn)適用于醫(yī)療健康食品加工藥品生產(chǎn)等多個(gè)領(lǐng)域,為不同行業(yè)的生物指示物檢驗(yàn)提供統(tǒng)一技術(shù)依據(jù)。它不僅是實(shí)驗(yàn)室的操作指南,也是監(jiān)管部門執(zhí)法企業(yè)質(zhì)量控制的重要參考,推動(dòng)滅菌行業(yè)從“經(jīng)驗(yàn)判斷”向“科學(xué)量化”轉(zhuǎn)型。02與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的銜接:兼顧本土需求與國(guó)際接軌標(biāo)準(zhǔn)在制定過(guò)程中參考了ISO相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)結(jié)合我國(guó)行業(yè)實(shí)際情況進(jìn)行優(yōu)化。既吸收國(guó)際先進(jìn)檢驗(yàn)理念,又針對(duì)國(guó)內(nèi)常見的滅菌設(shè)備類型生物指示物品種制定適配要求,實(shí)現(xiàn)了技術(shù)規(guī)范的國(guó)際同步與本土落地的平衡。生物指示物檢驗(yàn)的“準(zhǔn)入密碼”是什么?深度剖析標(biāo)準(zhǔn)中檢驗(yàn)對(duì)象與范圍的界定邏輯檢驗(yàn)對(duì)象的核心界定:哪些生物指示物被納入標(biāo)準(zhǔn)范圍?標(biāo)準(zhǔn)明確檢驗(yàn)對(duì)象為以嗜熱脂肪桿菌芽孢為指示微生物的壓力蒸汽滅菌生物指示物,包括自含式芽孢片等常見類型。界定依據(jù)主要基于該芽孢的耐熱性與代表性,其抗性與滅菌目標(biāo)微生物高度匹配,能精準(zhǔn)反映滅菌效果。(二)范圍邊界:哪些場(chǎng)景適用,又有哪些“例外情況”?適用范圍覆蓋醫(yī)療器材食品容器等的壓力蒸汽滅菌檢驗(yàn),尤其針對(duì)脈動(dòng)真空預(yù)真空等主流滅菌工藝。例外情況包括特殊定制的生物指示物(如含特殊芽孢菌株)及非壓力蒸汽滅菌方式,此類需參考專項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)。0102(三)界定邏輯:從“風(fēng)險(xiǎn)導(dǎo)向”出發(fā)的分類管控思路標(biāo)準(zhǔn)以滅菌風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)為核心邏輯,高風(fēng)險(xiǎn)領(lǐng)域(如外科手術(shù)器械)的生物指示物檢驗(yàn)要求更嚴(yán)格,檢驗(yàn)頻率與指標(biāo)更細(xì)化。這種分類界定既確保高風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)景的安全,又避免低風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)景的過(guò)度檢驗(yàn),提升行業(yè)檢驗(yàn)效率。0102實(shí)踐中的模糊地帶:如何準(zhǔn)確判定檢驗(yàn)對(duì)象歸屬?對(duì)于復(fù)合型生物指示物(含多種芽孢),標(biāo)準(zhǔn)明確以主要指示微生物為準(zhǔn),若含嗜熱脂肪桿菌芽孢則需符合本標(biāo)準(zhǔn)要求。判定時(shí)需結(jié)合產(chǎn)品說(shuō)明書與微生物組成,必要時(shí)通過(guò)芽孢鑒別試驗(yàn)確認(rèn),避免因界定不清導(dǎo)致檢驗(yàn)失準(zhǔn)。檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)不準(zhǔn)?從儀器到試劑,標(biāo)準(zhǔn)對(duì)檢驗(yàn)條件的剛性要求與實(shí)操要點(diǎn)核心儀器設(shè)備:培養(yǎng)箱滅菌器的技術(shù)參數(shù)與校準(zhǔn)要求標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定培養(yǎng)箱溫度需控制在55-60℃,波動(dòng)范圍不超過(guò)±1℃,且需每日校準(zhǔn);滅菌器需符合GB8599要求,滅菌溫度與壓力參數(shù)需定期驗(yàn)證。儀器校準(zhǔn)需使用法定計(jì)量器具,校準(zhǔn)記錄至少保存3年,確保設(shè)備處于合規(guī)狀態(tài)。(二)試劑與培養(yǎng)基:質(zhì)量管控的“第一道關(guān)卡”培養(yǎng)基需符合GB/T4789.28要求,外觀無(wú)渾濁沉淀,滅菌后pH值在7.0-7.4之間。試劑需在有效期內(nèi)使用,儲(chǔ)存條件符合說(shuō)明書,且每批次試劑需做空白對(duì)照試驗(yàn),確認(rèn)無(wú)污染后方可使用,避免試劑問(wèn)題影響結(jié)果。12(三)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境:無(wú)菌與溫濕度的剛性約束檢驗(yàn)需在百級(jí)潔凈實(shí)驗(yàn)室或無(wú)菌操作臺(tái)中進(jìn)行,環(huán)境溫濕度控制在20-25℃40%-60%。實(shí)驗(yàn)室需定期進(jìn)行環(huán)境微生物監(jiān)測(cè),沉降菌菌落數(shù)不得超過(guò)10CFU/皿,防止環(huán)境微生物污染樣本,確保檢驗(yàn)環(huán)境合規(guī)。12實(shí)操要點(diǎn):從設(shè)備預(yù)熱到試劑準(zhǔn)備的細(xì)節(jié)把控01培養(yǎng)箱使用前需預(yù)熱30分鐘,確保溫度穩(wěn)定;培養(yǎng)基融化后需冷卻至45-50℃再接種,避免高溫殺死芽孢;無(wú)菌操作時(shí)需戴無(wú)菌手套,操作區(qū)域定期消毒。這些細(xì)節(jié)把控是保障檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。02核心檢驗(yàn)流程藏著哪些“門道”?專家拆解標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的培養(yǎng)與觀察關(guān)鍵環(huán)節(jié)樣本制備:生物指示物的活化與接種的規(guī)范操作01自含式指示物需按說(shuō)明書激活,芽孢片則需用無(wú)菌生理鹽水洗脫,洗脫液振蕩30秒確保芽孢均勻分散。接種時(shí)需取1mL洗脫液接入培養(yǎng)基,每個(gè)樣本做3個(gè)平行樣,接種過(guò)程需在1分鐘內(nèi)完成,減少污染風(fēng)險(xiǎn)。02(二)培養(yǎng)過(guò)程:時(shí)間與溫度的“雙重把控”標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定培養(yǎng)時(shí)間為48小時(shí),培養(yǎng)期間不得隨意開啟培養(yǎng)箱門。若培養(yǎng)16小時(shí)后觀察到明顯陽(yáng)性反應(yīng)(培養(yǎng)基渾濁),可提前判定,但需補(bǔ)做48小時(shí)培養(yǎng)確認(rèn)。溫度波動(dòng)超過(guò)±1℃時(shí),需重新進(jìn)行檢驗(yàn)。No.1(三)觀察方法:肉眼觀察與微生物鑒別相結(jié)合的判斷方式No.2首先通過(guò)肉眼觀察培養(yǎng)基是否渾濁,陽(yáng)性樣本需進(jìn)一步進(jìn)行涂片染色鏡檢,確認(rèn)是否為嗜熱脂肪桿菌芽孢。鏡檢時(shí)需觀察菌體形態(tài)與染色特性,必要時(shí)進(jìn)行生化試驗(yàn)鑒別,避免誤判其他微生物污染導(dǎo)致的陽(yáng)性結(jié)果。平行樣與對(duì)照樣:結(jié)果可靠性的“雙重保障”每個(gè)樣本的3個(gè)平行樣需全部一致方可判定結(jié)果,若出現(xiàn)1個(gè)不一致需重新取樣檢驗(yàn)。同時(shí)需設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照(已知嗜熱脂肪桿菌芽孢)與陰性對(duì)照(無(wú)菌生理鹽水),對(duì)照樣結(jié)果異常時(shí),本次檢驗(yàn)無(wú)效。結(jié)果判定憑什么“一錘定音”?解讀標(biāo)準(zhǔn)中陽(yáng)性與陰性結(jié)果的界定依據(jù)與爭(zhēng)議處理No.1陰性結(jié)果界定:滅菌合格的核心判定標(biāo)準(zhǔn)No.2陰性結(jié)果需滿足三個(gè)條件:培養(yǎng)基澄清透明涂片鏡檢無(wú)嗜熱脂肪桿菌芽孢生化試驗(yàn)無(wú)對(duì)應(yīng)反應(yīng)。該結(jié)果表明滅菌過(guò)程有效,指示微生物被完全殺滅,可判定滅菌合格,相關(guān)產(chǎn)品可投入使用。(二)陽(yáng)性結(jié)果界定:滅菌失敗的明確信號(hào)與處理要求只要出現(xiàn)培養(yǎng)基渾濁或鏡檢發(fā)現(xiàn)嗜熱脂肪桿菌芽孢,即判定為陽(yáng)性。此時(shí)需立即停止相關(guān)滅菌批次產(chǎn)品的使用,追溯滅菌過(guò)程,排查設(shè)備故障操作失誤等原因,并重新進(jìn)行滅菌與檢驗(yàn),直至結(jié)果陰性。(三)疑似結(jié)果的處理:模糊地帶的科學(xué)判定方法對(duì)于培養(yǎng)基輕微渾濁鏡檢菌體形態(tài)不典型的疑似樣本,標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行增菌培養(yǎng)。將樣本轉(zhuǎn)接至新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí),若渾濁加重則判定陽(yáng)性,若恢復(fù)澄清則需結(jié)合滅菌參數(shù)綜合判斷,必要時(shí)咨詢專業(yè)機(jī)構(gòu)。當(dāng)企業(yè)與監(jiān)管部門對(duì)結(jié)果存在爭(zhēng)議時(shí),需由雙方認(rèn)可的第三方實(shí)驗(yàn)室按本標(biāo)準(zhǔn)重新檢驗(yàn)。復(fù)檢需采用相同樣本或同批次留樣,檢驗(yàn)過(guò)程全程記錄,最終以第三方結(jié)果為判定依據(jù),確保爭(zhēng)議解決的公正性與科學(xué)性。02爭(zhēng)議結(jié)果的解決路徑:從復(fù)檢到第三方驗(yàn)證的流程01不同場(chǎng)景檢驗(yàn)有何差異?標(biāo)準(zhǔn)框架下醫(yī)療與食品行業(yè)的定制化檢驗(yàn)方案醫(yī)療行業(yè):高風(fēng)險(xiǎn)導(dǎo)向下的高頻與嚴(yán)格檢驗(yàn)方案醫(yī)療領(lǐng)域(如手術(shù)器械)需每批次滅菌都進(jìn)行生物指示物檢驗(yàn),且需使用自含式生物指示物,方便快速檢測(cè)。對(duì)于植入性醫(yī)療器械,除常規(guī)檢驗(yàn)外,還需增加芽孢計(jì)數(shù)試驗(yàn),確保滅菌徹底,降低感染風(fēng)險(xiǎn)。(二)食品行業(yè):批量導(dǎo)向下的抽樣檢驗(yàn)與風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)方案食品行業(yè)按滅菌批量抽樣檢驗(yàn),每1000件產(chǎn)品抽1件,最少抽3件。對(duì)即食食品等高危品類,檢驗(yàn)頻率提高至每500件抽1件。檢驗(yàn)重點(diǎn)關(guān)注芽孢是否存活,同時(shí)結(jié)合食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn),形成全鏈條安全保障。(三)共性要求與個(gè)性差異:標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一性與適配性平衡01共性要求為核心檢驗(yàn)流程與結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),個(gè)性差異體現(xiàn)在抽樣比例檢驗(yàn)頻率與附加試驗(yàn)上。這種設(shè)計(jì)既保證了標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一性,又能適配不同行業(yè)的風(fēng)險(xiǎn)特點(diǎn),避免“一刀切”導(dǎo)致的檢驗(yàn)資源浪費(fèi)或安全漏洞。02特殊場(chǎng)景:應(yīng)急滅菌與小型滅菌設(shè)備的檢驗(yàn)調(diào)整應(yīng)急滅菌(如突發(fā)公共衛(wèi)生事件)可采用快速生物指示物,縮短培養(yǎng)時(shí)間至3小時(shí),但需后續(xù)補(bǔ)做48小時(shí)常規(guī)檢驗(yàn)。小型滅菌設(shè)備(容積<50L)需每季度進(jìn)行一次全面檢驗(yàn),確保設(shè)備在小批量滅菌中仍能達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求。12標(biāo)準(zhǔn)如何應(yīng)對(duì)技術(shù)迭代?未來(lái)5年生物指示物檢驗(yàn)的創(chuàng)新方向與標(biāo)準(zhǔn)適應(yīng)性分析快速檢驗(yàn)技術(shù):從48小時(shí)到1小時(shí)的突破與標(biāo)準(zhǔn)銜接未來(lái)快速生物指示物(如基于ATP生物發(fā)光技術(shù))將廣泛應(yīng)用,這類技術(shù)可將檢驗(yàn)時(shí)間縮短至1-4小時(shí)。標(biāo)準(zhǔn)雖未明確此類技術(shù),但預(yù)留了技術(shù)接口,只要其準(zhǔn)確性通過(guò)驗(yàn)證,可作為輔助檢驗(yàn)手段,主流判定仍需以標(biāo)準(zhǔn)方法為準(zhǔn)。(二)智能化檢驗(yàn)設(shè)備:自動(dòng)化操作對(duì)標(biāo)準(zhǔn)流程的優(yōu)化升級(jí)全自動(dòng)生物培養(yǎng)儀可實(shí)現(xiàn)樣本接種培養(yǎng)觀察的全自動(dòng)化,減少人為誤差。標(biāo)準(zhǔn)將逐步納入此類設(shè)備的技術(shù)要求,明確校準(zhǔn)方法與數(shù)據(jù)傳輸標(biāo)準(zhǔn),推動(dòng)檢驗(yàn)從“人工操作”向“智能管控”轉(zhuǎn)型,提升檢驗(yàn)效率與準(zhǔn)確性。(三)新型指示微生物:應(yīng)對(duì)特殊滅菌需求的標(biāo)準(zhǔn)擴(kuò)展空間01針對(duì)低溫壓力蒸汽滅菌等特殊工藝,新型指示微生物(如枯草桿菌黑色變種芽孢)將得到應(yīng)用。標(biāo)準(zhǔn)未來(lái)可能會(huì)增加相關(guān)附錄,明確這類微生物的檢驗(yàn)方法,拓展標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍,滿足行業(yè)多樣化的滅菌檢驗(yàn)需求。02標(biāo)準(zhǔn)修訂趨勢(shì):兼顧穩(wěn)定性與創(chuàng)新性的動(dòng)態(tài)更新機(jī)制標(biāo)準(zhǔn)將建立每3-5年一次的修訂周期,跟蹤行業(yè)技術(shù)發(fā)展,納入成熟的新技術(shù)新方法。修訂過(guò)程中會(huì)廣泛征求企業(yè)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)管部門意見,確保標(biāo)準(zhǔn)既能保持技術(shù)穩(wěn)定性,又能及時(shí)應(yīng)對(duì)行業(yè)創(chuàng)新帶來(lái)的檢驗(yàn)變革。12檢驗(yàn)數(shù)據(jù)如何“說(shuō)話”?標(biāo)準(zhǔn)要求下記錄與報(bào)告的規(guī)范化管理與追溯價(jià)值檢驗(yàn)記錄:全流程信息的“無(wú)死角”記錄要求記錄需包含樣本信息(來(lái)源批次數(shù)量)儀器參數(shù)(培養(yǎng)箱溫度滅菌器壓力)試劑信息(批號(hào)有效期)操作步驟觀察結(jié)果等。記錄需實(shí)時(shí)填寫,字跡清晰,修改處需簽字確認(rèn),確保信息可追溯。0102(二)檢驗(yàn)報(bào)告:標(biāo)準(zhǔn)化格式與核心信息的完整呈現(xiàn)01報(bào)告需采用標(biāo)準(zhǔn)格式,包含檢驗(yàn)單位檢驗(yàn)日期樣本信息檢驗(yàn)依據(jù)(GB/T33420-2016)檢驗(yàn)結(jié)果判定結(jié)論等。報(bào)告需由檢驗(yàn)員與審核員雙重簽字,并加蓋檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)公章,方可作為正式依據(jù)使用。02(三)數(shù)據(jù)保存:電子與紙質(zhì)的雙重備份與保管要求01紙質(zhì)記錄與報(bào)告需歸檔保存至少5年,電子數(shù)據(jù)需加密存儲(chǔ),定期備份,保存期限不少于10年。數(shù)據(jù)保存需符合檔案管理規(guī)定,便于監(jiān)管部門檢查與企業(yè)內(nèi)部追溯,在出現(xiàn)質(zhì)量問(wèn)題時(shí)能快速定位原因。02通過(guò)檢驗(yàn)數(shù)據(jù)可追溯滅菌設(shè)備的運(yùn)行狀態(tài)操作人員的操作行為試劑的質(zhì)量情況等。在出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí),能快速倒查問(wèn)題環(huán)節(jié),明確責(zé)任主體;同時(shí)為滅菌工藝優(yōu)化提供數(shù)據(jù)支持,提升整體滅菌質(zhì)量。追溯價(jià)值:從檢驗(yàn)數(shù)據(jù)到滅菌全流程的責(zé)任倒查010201常見檢驗(yàn)誤區(qū)如何規(guī)避?基于標(biāo)準(zhǔn)條文的疑點(diǎn)解答與錯(cuò)誤操作警示誤區(qū)一:僅靠肉眼觀察判定結(jié)果,忽略鏡檢驗(yàn)證部分實(shí)驗(yàn)室因圖省事,僅觀察培養(yǎng)基渾濁就判定陽(yáng)性。標(biāo)準(zhǔn)明確要求陽(yáng)性樣本需鏡檢確認(rèn),避免環(huán)境雜菌污染導(dǎo)致的誤判。規(guī)避方法:嚴(yán)格按流程進(jìn)行涂片染色鏡檢,必要時(shí)補(bǔ)充生化試驗(yàn),確保結(jié)果準(zhǔn)確。12(二)誤區(qū)二:培養(yǎng)時(shí)間不足就判定結(jié)果,急于出報(bào)告01有實(shí)驗(yàn)室為縮短周期,培養(yǎng)24小時(shí)就判定陰性。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定需培養(yǎng)48小時(shí),因部分芽孢萌發(fā)緩慢,短時(shí)間培養(yǎng)可能漏判陽(yáng)性。規(guī)避方法:嚴(yán)格遵守培養(yǎng)時(shí)間,即使16小時(shí)無(wú)陽(yáng)性反應(yīng),也需培養(yǎng)至48小時(shí)再判定。02(三)誤區(qū)三:儀器未校準(zhǔn)就使用,導(dǎo)致結(jié)果失準(zhǔn)01部分小型實(shí)驗(yàn)室忽視儀器校準(zhǔn),培養(yǎng)箱溫度不準(zhǔn)導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果偏差。標(biāo)準(zhǔn)要求儀器需定期校準(zhǔn),每日使用前檢查。規(guī)避方法:建立儀器校準(zhǔn)臺(tái)賬,按周期委托法定計(jì)量機(jī)構(gòu)校準(zhǔn),使用前確認(rèn)參數(shù)正常。02常見僅設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照或不設(shè)置對(duì)照的情況,無(wú)法判斷試劑污染或操作失誤。標(biāo)準(zhǔn)要求必須同時(shí)設(shè)置陽(yáng)陰性對(duì)照。規(guī)避方法:每次檢驗(yàn)都同步準(zhǔn)備對(duì)照樣,對(duì)照樣

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