備案號(hào)：56063-2017DB11北京市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布 2規(guī)范性引用文件 3樣品采集 5檢測(cè)數(shù)據(jù)處理 6檢測(cè)結(jié)果判定 本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由北京市農(nóng)業(yè)局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由北京市農(nóng)業(yè)局組織實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：北京市獸藥監(jiān)察所、北京農(nóng)學(xué)院、北京市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、北京市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理辦公室。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：杜繼紅、呂濤、劉鈞、崔德鳳、劉曉冬、李根平、周德剛、張永紅、張小飛、馬志軍、任偉、劉文菊、沈紅、孫志文、王亞芳、王海良、孫化一。動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)消毒效果評(píng)價(jià)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)消毒后樣品采集、檢測(cè)、檢測(cè)數(shù)據(jù)處理和檢測(cè)結(jié)果判定的方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于北京地區(qū)畜禽養(yǎng)殖場(chǎng)和普通級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4789.2食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定GB/T18204.3—2013公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法第3部分：空氣微生物3樣品采集3.1舍內(nèi)物體表面樣品分別于消毒處理前后15min～30min(或根據(jù)消毒劑作用效果產(chǎn)生時(shí)間自定）進(jìn)行采樣。3.1.3采樣點(diǎn)采樣區(qū)域包括舍內(nèi)墻壁和設(shè)備設(shè)施（籠具、水線、料槽）。墻壁選擇4點(diǎn)（東、南、西、北墻各1點(diǎn)距地面垂直高度為0.8m～1.5m，分別位于墻壁的中央平整處，避開通風(fēng)和降溫設(shè)施；籠具選擇4點(diǎn)，位于整體中央平整處；水線選擇均勻分布4點(diǎn)，位于整體中央平整處；料槽選擇4點(diǎn)，位于槽的外壁中央平整處。將邊長(zhǎng)10cm的正方形規(guī)板用火焰滅菌后，放置于物品表面，用蘸取適量滅菌生理鹽水的棉拭子在規(guī)板范圍內(nèi)橫、豎各5次滾動(dòng)涂抹取樣(同一采樣拭子不應(yīng)在同一表面重復(fù)涂抹)，無菌操作放入裝有10mL含適宜中和劑（中和劑的驗(yàn)證試驗(yàn)參見附錄A）的滅菌生理鹽水試管中，塞緊試管，標(biāo)記并記錄。3.2舍內(nèi)空氣樣品2分別于消毒處理前和消毒處理后15～30min（或根據(jù)消毒劑作用效果產(chǎn)生時(shí)間自定）進(jìn)行采樣(消毒時(shí)要關(guān)閉畜舍門窗)。3.2.2采樣點(diǎn)采用5點(diǎn)法布置測(cè)點(diǎn)，布置方法按GB/T18204.3—2013中附錄A的規(guī)定執(zhí)行，采樣高度根據(jù)養(yǎng)殖場(chǎng)情況設(shè)定，地面養(yǎng)殖動(dòng)物為地面，籠養(yǎng)動(dòng)物高度為籠架高度的中央水平面。舍內(nèi)面積不大于50m2的布置5個(gè)測(cè)點(diǎn)，每增加20m2增加2個(gè)測(cè)點(diǎn)。采用空氣沉降菌法檢測(cè)，按GB/T18204.3—2013進(jìn)行操作。3.3場(chǎng)區(qū)道路樣品（硬化道路或土路）分別于消毒處理前和消毒處理后15～30min（或根據(jù)消毒劑作用效果產(chǎn)生時(shí)間自定）進(jìn)行采樣。3.3.2采樣點(diǎn)采樣區(qū)域?yàn)轲B(yǎng)殖場(chǎng)主干道，選擇均勻分布4點(diǎn)，位于道路中央平整處。硬化道路樣品采集方法同3.1.4；土路為用滅菌不銹鋼勺鏟取道路表面土樣20g～30g,裝于含適宜中和劑（中和劑的驗(yàn)證試驗(yàn)見附錄A）的滅菌容器內(nèi)，蓋好，標(biāo)記并記錄。4檢測(cè)4.1消毒前后樣品檢測(cè)4.1.1舍內(nèi)物體表面用力震蕩采樣試管10～15次或用漩渦混合器混勻樣品，使樣品中的細(xì)菌洗入滅菌生理鹽水中，用滅菌吸管或加樣器吸取0.5mL，加入裝有4.5mL滅菌生理鹽水的試管中，10倍系列倍比稀釋，每個(gè)稀釋度分別取0.5mL混合液于滅菌平皿，用傾注法倒入培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)48h進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)。每個(gè)稀釋度均需作平行樣，計(jì)算樣品平均菌落數(shù)。細(xì)菌計(jì)數(shù)采用平板計(jì)數(shù)法，按GB4789.2的規(guī)定操作。4.1.2舍內(nèi)空氣將采樣平皿置36℃±1℃培養(yǎng)48h進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)，按GB/T18204.3—2013計(jì)算舍內(nèi)空氣平均菌落數(shù)。4.1.3場(chǎng)區(qū)道路4.1.3.1硬路4.1.3.2土路無菌稱取混合后土樣10g，放入100mL滅菌生理鹽水中，用力震蕩，混勻，靜置片刻，待泥沙下沉后，取上清液作10倍系列倍比稀釋。根據(jù)土壤中含菌情況，選擇3個(gè)適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度分別取0.5mL混合液于滅菌平皿，用傾注法倒入培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)48h進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)。每個(gè)稀釋度均需作平行樣，計(jì)算樣品平均菌落數(shù)。4.2對(duì)照試驗(yàn)4.2.1空白對(duì)照將未用的同批培養(yǎng)基置36℃±1℃培養(yǎng)48h，若有菌生長(zhǎng)，說明所用培養(yǎng)基有污染，試驗(yàn)無效，更換后重新進(jìn)行。4.2.2陰性對(duì)照取0.5mL稀釋液（即滅菌生理鹽水）放入滅菌平皿中，用傾注法倒入培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)48h，若有菌生長(zhǎng)，說明所用稀釋液有污染，試驗(yàn)無效，更換后重新進(jìn)行。4.2.3陽性對(duì)照4.2.3.1標(biāo)準(zhǔn)菌檢測(cè)使用標(biāo)準(zhǔn)菌為金黃色葡萄球菌（ATCC6583）和大腸桿菌（ATCC25922）。4.2.3.2方法取過夜培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)菌懸液，10-7稀釋后取0.5mL稀釋液放入滅菌平皿中，用傾注法倒入培養(yǎng)基，36℃±1℃培養(yǎng)48h，細(xì)菌計(jì)數(shù)約為50cfu/皿，表明標(biāo)準(zhǔn)菌狀態(tài)良好，所用培養(yǎng)基適用性好。5檢測(cè)數(shù)據(jù)處理5.1殺菌率的計(jì)算平板計(jì)數(shù)方法見GB4789.2，以全部采樣點(diǎn)的平均菌落數(shù)作為樣品平均菌落數(shù)，根據(jù)消毒前后樣品平均菌落數(shù)計(jì)算殺菌率，見公式(1)，以殺菌率評(píng)價(jià)消毒效果。因現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)環(huán)境條件變化較多，難以統(tǒng)一，無法測(cè)定準(zhǔn)確的自然沉降率，故不考慮自然衰亡因素。R——?dú)⒕?；N0——消毒前樣品平均菌落數(shù)；N1——消毒后樣品平均菌落數(shù)。45.2數(shù)據(jù)選擇范圍按GB4789.2規(guī)定進(jìn)行。6檢測(cè)結(jié)果判定動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)依據(jù)平均殺菌率判定消毒效果的方法見表1。表1動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)消毒效果評(píng)價(jià)表優(yōu)>90.0>90.0>90.0良<80.0<80.0<80.0中和劑驗(yàn)證試驗(yàn)A.1.1中和劑驗(yàn)證試驗(yàn)方法通過設(shè)定下列實(shí)驗(yàn)來確定所選的中和劑是否