安心顆粒對(duì)大鼠缺血心肌血管新生的干預(yù)機(jī)制探究一、引言1.1研究背景心血管疾病是全球范圍內(nèi)導(dǎo)致死亡和殘疾的主要原因之一，嚴(yán)重威脅著人類的健康和生活質(zhì)量?！吨袊难芙】蹬c疾病報(bào)告2022》顯示，我國心血管病患病率處于持續(xù)上升階段，推算心血管病現(xiàn)患人數(shù)3.3億，其中冠心病1139萬。冠心病作為心血管疾病的主要類型，其發(fā)病機(jī)制主要是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致血管狹窄或阻塞，進(jìn)而引起心肌缺血、缺氧，嚴(yán)重時(shí)可引發(fā)心肌梗死，對(duì)患者的生命健康構(gòu)成極大威脅。傳統(tǒng)的治療方法，如藥物治療、搭橋手術(shù)和介入手術(shù)等，雖在一定程度上能夠緩解癥狀，但仍存在諸多局限性，部分患者的治療效果并不理想，生活質(zhì)量也難以得到有效改善。因此，尋找新的治療策略和方法成為心血管領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。血管新生作為一種新興的治療策略，為心血管疾病的治療帶來了新的希望。血管新生是指在原有血管網(wǎng)絡(luò)的基礎(chǔ)上，通過血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化，形成新的毛細(xì)血管的過程。在心肌缺血的情況下，機(jī)體自身會(huì)啟動(dòng)血管新生機(jī)制，試圖建立側(cè)支循環(huán)，以增加缺血心肌的血液供應(yīng)，減輕心肌損傷。然而，這種內(nèi)源性的血管新生往往不足以滿足心肌的需求，無法有效改善心肌缺血的狀況。因此，通過外源性干預(yù)促進(jìn)血管新生，成為治療心血管疾病的一個(gè)重要方向。眾多研究表明，促進(jìn)血管新生可以改善心肌缺血區(qū)域的血液灌注，增強(qiáng)心肌功能，減少心肌梗死面積，降低心血管疾病的死亡率和致殘率。例如，一些生長因子如血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）等，被證實(shí)能夠有效促進(jìn)血管新生，為心血管疾病的治療提供了新的思路和方法。安心顆粒作為一種治療缺血性心臟病的中草藥制劑，在臨床應(yīng)用中顯示出了一定的療效。其主要由人參、桂枝、栝蔞皮、水蛭、茯苓等多味中藥組成。人參大補(bǔ)元?dú)?、補(bǔ)脾益肺、生津養(yǎng)血、安神益智，可增強(qiáng)機(jī)體免疫力，改善心肌代謝；桂枝發(fā)汗解肌、溫通經(jīng)脈、助陽化氣，能擴(kuò)張血管，促進(jìn)血液循環(huán)；栝蔞皮清熱滌痰、寬胸散結(jié)、潤燥滑腸，對(duì)心血管系統(tǒng)具有保護(hù)作用；水蛭破血通經(jīng)、逐瘀消癥，可改善血液流變學(xué)，抑制血栓形成；茯苓利水滲濕、健脾寧心，有助于調(diào)節(jié)機(jī)體水液代謝，減輕心臟負(fù)擔(dān)。這些中藥相互配伍，具有提高心肌功能、減輕心肌缺血癥狀的作用。已有研究表明，安心顆粒能夠調(diào)節(jié)血脂代謝，降低血脂紊亂新西蘭兔血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）、載脂蛋白B（ApoB）水平，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化病變有明顯的抑制作用；還能提高心肌梗死大鼠血清中的一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）含量，促進(jìn)血管新生。然而，目前關(guān)于安心顆粒促進(jìn)血管新生的具體作用機(jī)制尚未完全明確，仍需進(jìn)一步深入研究。本研究旨在通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，深入探究安心顆粒對(duì)大鼠缺血心肌中血管新生的干預(yù)作用及其潛在機(jī)制，為安心顆粒在心血管疾病治療中的臨床應(yīng)用提供更加堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)支持，有望為心血管疾病的治療開辟新的途徑，提高患者的治療效果和生活質(zhì)量，具有重要的科學(xué)意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。1.2研究目的與意義本研究的主要目的在于全面且深入地探究安心顆粒對(duì)大鼠缺血心肌中血管新生的干預(yù)作用，并進(jìn)一步闡明其潛在的作用機(jī)制。具體而言，通過建立大鼠缺血心肌模型，給予不同劑量的安心顆粒進(jìn)行干預(yù)，運(yùn)用組織學(xué)染色、免疫組化、分子生物學(xué)等多種技術(shù)手段，從宏觀和微觀層面觀察血管新生的情況，包括血管密度、血管形態(tài)、相關(guān)因子表達(dá)等指標(biāo)的變化，明確安心顆粒對(duì)缺血心肌血管新生的影響效果。同時(shí)，檢測(cè)與血管新生密切相關(guān)的信號(hào)通路和分子標(biāo)志物，如血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等，深入剖析安心顆粒促進(jìn)血管新生的作用機(jī)制，為安心顆粒在心血管疾病治療中的應(yīng)用提供科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)睦碚撝?。研究安心顆粒對(duì)缺血心肌血管新生的影響及機(jī)制具有重要的理論和實(shí)踐意義。從理論層面來看，盡管當(dāng)前對(duì)血管新生的研究已取得一定進(jìn)展，但對(duì)于中藥復(fù)方如安心顆粒促進(jìn)血管新生的具體分子機(jī)制和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路仍了解有限。本研究通過系統(tǒng)地探究安心顆粒的作用機(jī)制，有助于進(jìn)一步完善血管新生的理論體系，豐富中藥治療心血管疾病的作用機(jī)制研究，為心血管領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究提供新的思路和方向，拓展對(duì)中藥復(fù)方多靶點(diǎn)、多途徑治療疾病的認(rèn)識(shí)。在實(shí)踐方面，本研究成果對(duì)冠心病的治療具有深遠(yuǎn)影響。冠心病作為一種嚴(yán)重威脅人類健康的心血管疾病，目前的治療方法存在一定局限性。若能證實(shí)安心顆?？捎行Т龠M(jìn)缺血心肌血管新生，將為冠心病的治療提供一種全新的、安全有效的治療策略。這不僅可以為臨床醫(yī)生在治療冠心病時(shí)提供更多的治療選擇，還能提高冠心病的治療效果，改善患者的心肌血液供應(yīng)，增強(qiáng)心肌功能，減少心肌梗死面積，降低心血管事件的發(fā)生率，從而提高患者的生活質(zhì)量，減輕社會(huì)和家庭的醫(yī)療負(fù)擔(dān)。此外，安心顆粒作為一種中藥制劑，具有來源廣泛、副作用小、成本相對(duì)較低等優(yōu)勢(shì)，更易于被患者接受，有望在臨床治療中得到廣泛應(yīng)用，為廣大冠心病患者帶來福音。1.3國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在心血管疾病治療領(lǐng)域，血管新生相關(guān)研究是重要的前沿方向，安心顆粒作為潛在治療藥物也備受關(guān)注。國內(nèi)外學(xué)者圍繞血管新生和安心顆粒展開了多方面研究，取得了一定成果，也存在一些尚未明確的問題。在血管新生研究方面，國外研究起步較早且深入。大量研究表明，血管新生受多種內(nèi)源性調(diào)節(jié)因子精密調(diào)控，其中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是目前研究最為透徹的促血管新生因子之一。Ferrara等學(xué)者發(fā)現(xiàn)，VEGF能夠特異性地與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活下游一系列信號(hào)通路，如Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt等，從而促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和存活，在生理性和病理性血管新生過程中都發(fā)揮著關(guān)鍵作用。成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）家族同樣在血管新生中扮演重要角色，F(xiàn)GF-2可以通過與細(xì)胞表面的受體酪氨酸激酶結(jié)合，激活多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移，誘導(dǎo)新生血管形成。此外，Notch信號(hào)通路對(duì)血管新生的調(diào)控也成為研究熱點(diǎn)，它參與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化、血管的出芽和分支等過程，維持血管的正常發(fā)育和功能。國內(nèi)對(duì)血管新生的研究近年來也取得了顯著進(jìn)展，在深入探究國外已發(fā)現(xiàn)因子和信號(hào)通路的基礎(chǔ)上，還結(jié)合中醫(yī)藥特色進(jìn)行研究。有研究表明，中藥復(fù)方丹參滴丸可以通過上調(diào)VEGF及其受體的表達(dá)，促進(jìn)心肌缺血區(qū)血管新生，改善心肌血液灌注，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路中蛋白激酶的活性有關(guān)。一些單體中藥成分如人參皂苷Rg1也被證實(shí)能夠促進(jìn)血管新生，通過激活A(yù)kt/eNOS信號(hào)通路，增加一氧化氮（NO）的釋放，進(jìn)而促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移。關(guān)于安心顆粒的研究，目前主要集中在其對(duì)心血管疾病的整體治療效果和部分作用機(jī)制方面。國外雖對(duì)安心顆粒研究較少，但對(duì)其組成中藥的部分活性成分在心血管疾病治療中的作用有一定關(guān)注。國內(nèi)研究顯示，安心顆粒在臨床應(yīng)用中對(duì)冠心病心絞痛患者具有較好的治療效果，能有效緩解患者的心絞痛癥狀，改善心電圖表現(xiàn)。在實(shí)驗(yàn)研究方面，如前文所述，有研究證實(shí)安心顆粒能夠調(diào)節(jié)血脂代謝，降低血脂紊亂新西蘭兔血清中的總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）、載脂蛋白B（ApoB）水平，抑制動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)展；還能提高心肌梗死大鼠血清中的一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）含量，促進(jìn)血管新生。然而，這些研究主要從宏觀層面觀察安心顆粒對(duì)心血管疾病的影響，對(duì)于安心顆粒促進(jìn)血管新生的具體分子機(jī)制和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路仍缺乏深入系統(tǒng)的研究。雖然已知安心顆粒能促進(jìn)血管新生，但其中哪些成分起關(guān)鍵作用，這些成分如何與體內(nèi)的血管新生調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)相互作用，通過哪些具體信號(hào)通路來調(diào)控血管新生相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)等問題，尚未得到明確解答?？傮w而言，當(dāng)前對(duì)于血管新生的研究為安心顆粒的研究提供了理論基礎(chǔ)和研究思路，但安心顆粒在促進(jìn)缺血心肌血管新生方面的具體作用機(jī)制仍存在大量研究空白。深入探究安心顆粒促進(jìn)血管新生的作用機(jī)制，不僅有助于揭示其治療心血管疾病的本質(zhì)，也能為開發(fā)基于安心顆粒的新型心血管疾病治療策略提供科學(xué)依據(jù)，具有重要的研究?jī)r(jià)值和臨床意義。1.4研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)本研究采用多種研究方法，從不同層面深入探究安心顆粒對(duì)大鼠缺血心肌中血管新生的干預(yù)作用及機(jī)制。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面，選用Sprague-Dawley(SD)大鼠，通過冠脈結(jié)扎手術(shù)建立大鼠缺血心肌模型。該模型能夠較好地模擬人類心肌缺血的病理生理過程，為研究提供了可靠的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。將大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、安心顆粒低劑量組、安心顆粒中劑量組和安心顆粒高劑量組。除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠均接受冠脈結(jié)扎手術(shù)。術(shù)后，安心顆粒各劑量組分別給予不同劑量的安心顆粒進(jìn)行灌胃給藥，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等量生理鹽水灌胃。通過這種分組和給藥方式，能夠直觀地對(duì)比不同處理組大鼠的心肌狀況，明確安心顆粒對(duì)缺血心肌血管新生的影響。組織學(xué)染色是重要的研究手段之一，運(yùn)用蘇木精-伊紅（HE）染色法，可清晰觀察大鼠心肌組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，了解心肌細(xì)胞的形態(tài)變化、炎性細(xì)胞浸潤等情況，從組織形態(tài)學(xué)層面初步判斷安心顆粒對(duì)缺血心肌的保護(hù)作用以及對(duì)血管新生的影響。Masson三色染色法能特異性地將心肌組織中的膠原纖維染成藍(lán)色，用于觀察心肌組織的纖維化程度，因?yàn)檠苄律c心肌組織的纖維化密切相關(guān)，通過該染色可進(jìn)一步探究安心顆粒對(duì)缺血心肌微環(huán)境的影響，為血管新生研究提供更多信息。免疫組化方法用于檢測(cè)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等與血管新生密切相關(guān)因子的表達(dá)情況。免疫組化技術(shù)能夠在組織原位對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行定位和半定量分析，通過觀察這些因子在心肌組織中的表達(dá)部位和表達(dá)強(qiáng)度變化，深入剖析安心顆粒促進(jìn)血管新生的分子機(jī)制，明確安心顆粒是否通過調(diào)節(jié)這些因子的表達(dá)來影響血管新生過程。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。一是研究視角創(chuàng)新，目前針對(duì)安心顆粒治療心血管疾病的研究多集中在整體療效和部分作用機(jī)制上，而本研究聚焦于安心顆粒對(duì)缺血心肌血管新生的干預(yù)作用及機(jī)制，從血管新生這一關(guān)鍵環(huán)節(jié)深入探究安心顆粒的治療作用，為安心顆粒治療心血管疾病的機(jī)制研究開辟了新視角。二是研究方法創(chuàng)新，采用多技術(shù)聯(lián)合的研究策略，將動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、組織學(xué)染色、免疫組化以及后續(xù)可能涉及的分子生物學(xué)技術(shù)（如實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Westernblot等）相結(jié)合，從宏觀到微觀、從組織形態(tài)到分子水平全面系統(tǒng)地研究安心顆粒的作用機(jī)制，克服了單一研究方法的局限性，使研究結(jié)果更具說服力。三是可能揭示新的作用機(jī)制，通過深入研究，有望發(fā)現(xiàn)安心顆粒促進(jìn)血管新生的新的作用靶點(diǎn)和信號(hào)通路，豐富中藥復(fù)方治療心血管疾病的作用機(jī)制理論，為開發(fā)基于安心顆粒的新型心血管疾病治療策略提供全新的科學(xué)依據(jù)，在中藥治療心血管疾病領(lǐng)域具有重要的創(chuàng)新意義和潛在應(yīng)用價(jià)值。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1心肌缺血與血管新生理論2.1.1心肌缺血的病理機(jī)制心肌缺血是指心臟的血液灌注減少，導(dǎo)致心臟的供氧減少，心肌能量代謝異常，不能支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài)。其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，主要與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)。在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程中，血液中的脂質(zhì)成分，如低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）等，會(huì)逐漸沉積在冠狀動(dòng)脈內(nèi)膜下。這些脂質(zhì)物質(zhì)會(huì)引發(fā)炎癥反應(yīng)，吸引單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞聚集。巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)后形成泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞進(jìn)一步堆積，逐漸形成粥樣斑塊。隨著斑塊的不斷增大，會(huì)導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈管腔進(jìn)行性狹窄，當(dāng)狹窄程度超過一定范圍時(shí)，就會(huì)阻礙冠狀動(dòng)脈的血流，使得心肌的血液供應(yīng)無法滿足心肌代謝的需求，從而引發(fā)心肌缺血。除了冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致的血管狹窄外，冠狀動(dòng)脈痙攣也是引起心肌缺血的重要原因之一。冠狀動(dòng)脈痙攣是指冠狀動(dòng)脈在某些因素的刺激下，發(fā)生強(qiáng)烈的收縮，導(dǎo)致血管管腔急劇狹窄甚至閉塞。吸煙、寒冷刺激、精神緊張、某些藥物的使用等都可能誘發(fā)冠狀動(dòng)脈痙攣。當(dāng)冠狀動(dòng)脈發(fā)生痙攣時(shí)，即使冠狀動(dòng)脈本身沒有明顯的粥樣硬化病變，也會(huì)因血管的突然收縮而導(dǎo)致心肌供血不足，引發(fā)心肌缺血。此外，血液黏稠度增加、血小板聚集形成血栓等因素，也可能導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈血流受阻，進(jìn)一步加重心肌缺血的程度。心肌缺血發(fā)生后，心肌細(xì)胞會(huì)發(fā)生一系列病理變化。在急性心肌缺血早期，心肌細(xì)胞會(huì)因缺氧而導(dǎo)致能量代謝障礙。正常情況下，心肌細(xì)胞主要通過有氧氧化代謝產(chǎn)生三磷酸腺苷（ATP），為心肌的收縮和舒張?zhí)峁┠芰?。?dāng)心肌缺血時(shí)，氧供應(yīng)不足，有氧氧化過程受限，心肌細(xì)胞會(huì)轉(zhuǎn)而進(jìn)行無氧糖酵解來產(chǎn)生ATP。然而，無氧糖酵解產(chǎn)生的ATP量遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于有氧氧化，且會(huì)產(chǎn)生大量乳酸等酸性代謝產(chǎn)物，導(dǎo)致心肌細(xì)胞內(nèi)酸中毒。這種酸中毒會(huì)進(jìn)一步影響心肌細(xì)胞的正常功能，使心肌細(xì)胞的收縮和舒張能力下降。同時(shí)，由于能量供應(yīng)不足，心肌細(xì)胞膜上的離子泵功能受損，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載，引發(fā)心肌細(xì)胞的損傷和凋亡。隨著心肌缺血時(shí)間的延長和程度的加重，心肌組織會(huì)出現(xiàn)不可逆的損傷。心肌細(xì)胞的壞死范圍逐漸擴(kuò)大，纖維結(jié)締組織開始增生，形成瘢痕組織。瘢痕組織不具備心肌細(xì)胞的收縮和舒張功能，會(huì)嚴(yán)重影響心臟的泵血功能，導(dǎo)致心力衰竭的發(fā)生。此外，心肌缺血還會(huì)引發(fā)心律失常，這是因?yàn)樾募∪毖獣?huì)導(dǎo)致心肌細(xì)胞的電生理特性發(fā)生改變，使得心肌細(xì)胞的興奮性、自律性和傳導(dǎo)性異常，容易引發(fā)各種心律失常，如室性早搏、室性心動(dòng)過速、心室顫動(dòng)等，嚴(yán)重時(shí)可危及生命。2.1.2血管新生的生理過程血管新生是指在原有血管網(wǎng)絡(luò)的基礎(chǔ)上，通過血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化，形成新的毛細(xì)血管的過程。這一過程在胚胎發(fā)育、組織修復(fù)和傷口愈合等生理過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。在胚胎發(fā)育階段，血管新生是構(gòu)建完整血管系統(tǒng)的關(guān)鍵步驟，為胚胎的生長和發(fā)育提供充足的營養(yǎng)和氧氣供應(yīng)。在組織修復(fù)和傷口愈合過程中，血管新生能夠促進(jìn)受損組織的修復(fù)和再生，為組織的恢復(fù)提供必要的物質(zhì)基礎(chǔ)。血管新生的生理過程受到多種內(nèi)源性調(diào)節(jié)因子的精密調(diào)控，這些調(diào)節(jié)因子之間相互作用，形成了一個(gè)復(fù)雜而精細(xì)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是目前已知的最重要的促血管新生因子之一。VEGF具有高度的內(nèi)皮細(xì)胞特異性，能夠與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的特異性受體，如VEGFR-1和VEGFR-2等結(jié)合。當(dāng)VEGF與受體結(jié)合后，會(huì)激活受體的酪氨酸激酶活性，進(jìn)而啟動(dòng)下游一系列復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，如Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt等信號(hào)通路。這些信號(hào)通路的激活會(huì)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和存活，同時(shí)還能增加血管的通透性，有利于血漿蛋白和細(xì)胞外基質(zhì)成分滲出，為血管新生提供必要的物質(zhì)基礎(chǔ)。成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）家族在血管新生過程中也發(fā)揮著不可或缺的作用。FGF家族成員，如堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）等，能夠與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體酪氨酸激酶結(jié)合，激活多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。這些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可以促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移，誘導(dǎo)新生血管形成。FGF還能刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)成分和蛋白水解酶，參與血管基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的降解和重塑，為血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和新血管的形成創(chuàng)造有利條件。除了VEGF和FGF等促血管新生因子外，血管新生還受到一些抑制因子的調(diào)控，以維持血管生成的平衡。例如，血管抑素（angiostatin）和內(nèi)皮抑素（endostatin）等內(nèi)源性抑制因子，能夠通過抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，從而抑制血管新生。這些抑制因子在正常生理狀態(tài)下，能夠有效地控制血管新生的程度和速度，防止血管過度生成。在病理情況下，如心肌缺血時(shí)，促血管新生因子和抑制因子之間的平衡會(huì)被打破，促血管新生因子的表達(dá)和活性增強(qiáng)，從而啟動(dòng)血管新生機(jī)制，試圖建立側(cè)支循環(huán)，增加缺血心肌的血液供應(yīng)。在心肌梗死后的恢復(fù)過程中，血管新生起著至關(guān)重要的作用。心肌梗死后，梗死區(qū)域的心肌細(xì)胞因缺血缺氧而發(fā)生壞死，心臟的泵血功能受到嚴(yán)重影響。此時(shí)，機(jī)體自身會(huì)啟動(dòng)血管新生機(jī)制，試圖在梗死區(qū)域及其周邊建立新的血管網(wǎng)絡(luò)，以恢復(fù)缺血心肌的血液供應(yīng)，減輕心肌損傷，促進(jìn)心臟功能的恢復(fù)。血管新生形成的側(cè)支循環(huán)可以繞過阻塞的冠狀動(dòng)脈，為缺血心肌提供一定的血液灌注，從而減少梗死面積，降低心肌梗死后心力衰竭和心律失常的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。然而，內(nèi)源性的血管新生往往不足以滿足心肌恢復(fù)的需求，因此，通過外源性干預(yù)促進(jìn)血管新生，成為治療心肌梗死和改善心臟功能的重要策略之一。2.2安心顆粒的成分與作用機(jī)制安心顆粒作為一種治療缺血性心臟病的中草藥制劑，其主要成分包括人參、桂枝、栝蔞皮、水蛭、茯苓等多味中藥，這些成分相互配伍，共同發(fā)揮治療作用。人參，味甘、微苦，性微溫，歸脾、肺、心、腎經(jīng)，是安心顆粒中的重要成分之一?，F(xiàn)代研究表明，人參中富含多種人參皂苷，如人參皂苷Rg1、Rb1等。人參皂苷Rg1能夠通過激活A(yù)kt/eNOS信號(hào)通路，促進(jìn)一氧化氮（NO）的釋放，從而擴(kuò)張血管，增加冠狀動(dòng)脈血流量，改善心肌缺血狀況。同時(shí)，人參皂苷Rg1還能抑制心肌細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制可能與上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)有關(guān)。此外，人參中的多糖成分具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫力，減輕炎癥反應(yīng)對(duì)心肌的損傷，為心肌的修復(fù)和血管新生創(chuàng)造良好的內(nèi)環(huán)境。桂枝，味辛、甘，性溫，歸心、肺、膀胱經(jīng)。其主要化學(xué)成分包括桂皮醛、桂皮酸等。桂皮醛具有擴(kuò)張血管的作用，能夠直接作用于血管平滑肌，使血管舒張，降低血管阻力，增加心肌的血液供應(yīng)。同時(shí)，桂皮醛還能抑制血小板聚集，降低血液黏稠度，減少血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)，有助于維持冠狀動(dòng)脈的通暢。桂枝中的揮發(fā)油成分具有抗炎作用，能夠減輕心肌缺血時(shí)的炎癥反應(yīng)，減少炎性細(xì)胞浸潤，保護(hù)心肌細(xì)胞。栝蔞皮，味甘、微苦，性寒，歸肺、胃、大腸經(jīng)。其含有多種活性成分，如栝蔞酸、三萜皂苷等。栝蔞酸能夠調(diào)節(jié)血脂代謝，降低血液中膽固醇和甘油三酯的含量，減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。三萜皂苷具有抗氧化作用，能夠清除體內(nèi)過多的自由基，減輕氧化應(yīng)激對(duì)心肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，保護(hù)血管內(nèi)皮功能，促進(jìn)血管新生。此外，栝蔞皮還具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流量的作用，能夠直接改善心肌缺血狀況。水蛭，咸、苦，平；有小毒，歸肝經(jīng)。其主要有效成分是水蛭素，水蛭素是一種天然的抗凝物質(zhì)，能夠特異性地抑制凝血酶的活性，阻止纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，從而抑制血栓形成。在心肌缺血時(shí)，血栓形成會(huì)進(jìn)一步加重冠狀動(dòng)脈阻塞，水蛭素通過抑制血栓形成，能夠有效改善冠狀動(dòng)脈的血流，為心肌提供充足的血液供應(yīng)。同時(shí)，水蛭素還能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放一氧化氮，增強(qiáng)血管的舒張功能，有利于血管新生。此外，水蛭中的其他成分還具有抗炎、抗纖維化作用，能夠減輕心肌缺血后的炎癥反應(yīng)和心肌纖維化程度，保護(hù)心肌結(jié)構(gòu)和功能。茯苓，味甘、淡，性平，歸心、肺、脾、腎經(jīng)。茯苓中含有茯苓多糖、茯苓酸等成分。茯苓多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，提高機(jī)體對(duì)病原體的抵抗力，減輕心肌缺血時(shí)的炎癥反應(yīng)。茯苓酸具有利尿作用，能夠促進(jìn)體內(nèi)多余水分的排出，減輕心臟的前負(fù)荷，改善心臟功能。此外，茯苓還能調(diào)節(jié)機(jī)體的水液代謝，維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，為心肌的正常代謝和血管新生提供良好的條件。安心顆粒治療缺血性心臟病的作用機(jī)制可能是多靶點(diǎn)、多途徑的。一方面，通過調(diào)節(jié)血脂代謝，降低血清中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）等脂質(zhì)成分的含量，減少脂質(zhì)在血管壁的沉積，抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展，從而降低冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。另一方面，安心顆粒能夠減輕心肌缺血時(shí)的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，通過提高超氧化物歧化酶（SOD）等抗氧化酶的活性，降低丙二醛（MDA）等氧化產(chǎn)物的含量，清除體內(nèi)過多的自由基，減輕氧化應(yīng)激對(duì)心肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷。同時(shí)，抑制炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的表達(dá)和釋放，減輕炎癥細(xì)胞浸潤，保護(hù)心肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞。此外，安心顆粒還可能通過促進(jìn)血管新生，增加缺血心肌的血液供應(yīng)，改善心肌缺血狀況。其促進(jìn)血管新生的機(jī)制可能與上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）等促血管新生因子的表達(dá)，激活相關(guān)信號(hào)通路有關(guān)。通過多成分、多靶點(diǎn)、多途徑的協(xié)同作用，安心顆粒發(fā)揮治療缺血性心臟病的作用，為心血管疾病的治療提供了新的思路和方法。三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與材料準(zhǔn)備本實(shí)驗(yàn)選用SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠60只，體重200-220g，購自[供應(yīng)商名稱]。選擇SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，是因?yàn)槠渚哂羞z傳背景清晰、個(gè)體差異小、對(duì)實(shí)驗(yàn)處理反應(yīng)較為一致的特點(diǎn)，能夠保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和重復(fù)性。同時(shí)，SD大鼠的心血管系統(tǒng)生理結(jié)構(gòu)和功能與人類有一定的相似性，在心血管疾病研究中被廣泛應(yīng)用，通過對(duì)SD大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，能夠?yàn)槿祟愋难芗膊〉闹委熖峁┯袃r(jià)值的參考。大鼠購入后，置于溫度（22±2）℃、相對(duì)濕度（50±10）%的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，自由攝食和飲水，使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境，減少環(huán)境因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。實(shí)驗(yàn)所需的主要儀器設(shè)備包括：小動(dòng)物呼吸機(jī)（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家]），用于在手術(shù)過程中維持大鼠的呼吸功能，保證大鼠在麻醉狀態(tài)下的氧氣供應(yīng)，維持正常的生理代謝；生物信號(hào)采集系統(tǒng)（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家]），可實(shí)時(shí)記錄大鼠的心電圖等生物信號(hào)，通過分析心電圖的變化，如ST段抬高、T波改變等，判斷心肌缺血的發(fā)生和程度，為模型的建立和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評(píng)估提供重要依據(jù)；電子天平（精度[具體精度]，[生產(chǎn)廠家]），用于準(zhǔn)確稱量大鼠的體重，以便根據(jù)體重計(jì)算給藥劑量，保證實(shí)驗(yàn)給藥的準(zhǔn)確性；石蠟切片機(jī)（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家]），能夠?qū)⒐潭ê蟮男募〗M織切成厚度均勻的薄片，用于后續(xù)的組織學(xué)染色和觀察；光學(xué)顯微鏡（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家]），用于在組織學(xué)染色后，觀察心肌組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化，如心肌細(xì)胞的形態(tài)、排列，血管的分布等，從微觀層面了解安心顆粒對(duì)缺血心肌的影響。主要試劑藥品有：安心顆粒，由[生產(chǎn)廠家]提供，按照一定比例進(jìn)行提取和制備，其主要成分包括人參、桂枝、栝蔞皮、水蛭、茯苓等，具有益氣通陽、化痰逐瘀、利水寧心的功效；戊巴比妥鈉，購自[供應(yīng)商名稱]，為一種常用的巴比妥類麻醉藥物，通過腹腔注射的方式使大鼠進(jìn)入麻醉狀態(tài)，便于進(jìn)行手術(shù)操作；肝素鈉，購自[供應(yīng)商名稱]，是一種抗凝劑，在手術(shù)前給予大鼠注射，可防止血液凝固，減少血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)，保證手術(shù)過程中血液的正常流動(dòng)；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒，購自[供應(yīng)商名稱]，用于對(duì)心肌組織切片進(jìn)行染色，使心肌細(xì)胞的細(xì)胞核染成藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)染成紅色，能夠清晰地顯示心肌組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，便于觀察心肌細(xì)胞的損傷情況和血管的形態(tài)；Masson三色染色試劑盒，購自[供應(yīng)商名稱]，能將心肌組織中的膠原纖維染成藍(lán)色，肌纖維染成紅色，用于觀察心肌組織的纖維化程度，評(píng)估安心顆粒對(duì)心肌纖維化的影響；兔抗大鼠血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）多克隆抗體、兔抗大鼠成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）多克隆抗體、兔抗大鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）多克隆抗體，均購自[供應(yīng)商名稱]，用于免疫組化實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)相應(yīng)因子的表達(dá)，通過特異性結(jié)合目標(biāo)蛋白，再利用顯色反應(yīng)，直觀地顯示出這些因子在心肌組織中的表達(dá)部位和表達(dá)強(qiáng)度，從而深入探究安心顆粒促進(jìn)血管新生的分子機(jī)制；二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒，購自[供應(yīng)商名稱]，在免疫組化實(shí)驗(yàn)中作為顯色劑，與抗體結(jié)合的辣根過氧化物酶作用，使目標(biāo)蛋白所在部位呈現(xiàn)棕色，便于觀察和分析。這些儀器設(shè)備和試劑藥品的準(zhǔn)備，為實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行提供了有力保障。3.2大鼠缺血心肌模型的建立3.2.1手術(shù)操作步驟將適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后的SD大鼠稱重，使用10%水合氯醛溶液，按3.5ml/kg的劑量經(jīng)腹腔注射進(jìn)行麻醉。麻醉成功的標(biāo)志為大鼠呼吸平穩(wěn)，肢體肌肉松弛，對(duì)疼痛刺激無明顯反應(yīng)，如用鑷子輕夾大鼠的腳趾，大鼠無肢體回縮等反應(yīng)。將麻醉后的大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，四肢伸展，用膠帶或絲線將大鼠的四肢固定在手術(shù)臺(tái)上，確保大鼠在手術(shù)過程中不會(huì)移動(dòng)。在大鼠四肢皮下分別插入心電圖電極，連接生物信號(hào)采集系統(tǒng)，記錄標(biāo)準(zhǔn)肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖，作為后續(xù)判斷心肌缺血的基礎(chǔ)。在大鼠頸部正中進(jìn)行備皮，范圍約為2-3cm，用碘伏消毒3次，以減少手術(shù)感染的風(fēng)險(xiǎn)。沿頸部正中切開皮膚，長度約為1-1.5cm，鈍性分離頸部肌肉，暴露氣管。在氣管上做一橫向切口，切口長度約為氣管周徑的1/3，插入氣管插管，連接小動(dòng)物呼吸機(jī)，設(shè)置呼吸頻率為80-100次/分鐘，潮氣量為8-10ml/kg，吸呼比為1:1.5，以維持大鼠的正常呼吸功能，保證在手術(shù)過程中大鼠的氧氣供應(yīng)。在大鼠左前胸去毛，范圍約為3-4cm，碘伏消毒3次，鋪無菌手術(shù)巾。沿胸骨左緣第3-4肋間切開皮膚，長度約為1.5-2cm，逐層分離胸大肌、胸小肌等肌肉組織，用撐開器輕輕撐開肋間，暴露胸腔。用鑷子小心地撕開心包膜，充分暴露心臟。輕輕擠壓大鼠胸廓，將心臟擠出胸腔，找到左心耳與肺動(dòng)脈圓錐之間的冠狀動(dòng)脈前降支。使用7-0無創(chuàng)縫合線，在距主動(dòng)脈根部約2-3mm處，小心地穿過冠狀動(dòng)脈前降支下方的心肌組織，注意避免損傷周圍的血管和心肌組織。然后進(jìn)行結(jié)扎，結(jié)扎力度要適中，過松可能導(dǎo)致結(jié)扎失敗，無法造成心肌缺血；過緊則可能切斷血管或造成心肌撕裂。結(jié)扎完成后，將心臟小心地放回胸腔，觀察心臟的跳動(dòng)情況和心肌的顏色變化。逐層縫合胸腔，在縫合肌肉層時(shí)，要確保肌肉對(duì)合良好，避免留有空隙，用絲線進(jìn)行間斷縫合；縫合皮膚層時(shí)，可采用連續(xù)縫合或間斷縫合的方式，縫合后用碘伏再次消毒傷口。術(shù)后，將大鼠置于溫暖的環(huán)境中，如使用加熱墊保持大鼠的體溫，避免因體溫過低影響大鼠的恢復(fù)。待大鼠蘇醒后，給予自由進(jìn)食和飲水，并密切觀察大鼠的一般狀況，如精神狀態(tài)、飲食情況、活動(dòng)能力等。術(shù)后連續(xù)3天肌肉注射青霉素，劑量為8萬單位/只，以預(yù)防感染。3.2.2模型成功的判定標(biāo)準(zhǔn)心電圖是判斷大鼠缺血心肌模型成功的重要指標(biāo)之一。在結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支后，持續(xù)監(jiān)測(cè)心電圖變化。若心電圖出現(xiàn)ST段弓背向上抬高，抬高幅度超過基線0.1mV，且T波高聳或倒置，呈現(xiàn)弓背向上的形態(tài)，同時(shí)伴有心律失常，如室性早搏、室性心動(dòng)過速等，可初步判定心肌缺血模型建立成功。這是因?yàn)楣跔顒?dòng)脈結(jié)扎后，心肌供血急劇減少，心肌細(xì)胞發(fā)生缺血缺氧，導(dǎo)致心肌的電生理特性發(fā)生改變，從而在心電圖上表現(xiàn)出相應(yīng)的變化。肉眼觀察心臟的形態(tài)和顏色也可輔助判斷模型是否成功。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支后，若觀察到結(jié)扎線遠(yuǎn)端的心肌顏色變暗，呈現(xiàn)蒼白色或灰白色，且心肌的收縮活動(dòng)明顯減弱或消失，表明該區(qū)域心肌因缺血而出現(xiàn)了功能障礙，進(jìn)一步支持模型建立成功。這是由于缺血導(dǎo)致心肌細(xì)胞的代謝紊亂，能量供應(yīng)不足，無法維持正常的收縮功能，同時(shí)血液灌注減少使得心肌顏色發(fā)生改變。組織染色是判斷模型成功的關(guān)鍵標(biāo)準(zhǔn)之一。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取出心臟，用生理鹽水沖洗干凈，然后將心臟切成厚度約為2-3mm的切片。采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法對(duì)心肌切片進(jìn)行染色，TTC是一種脂溶性光敏感復(fù)合物，正常的心肌組織中含有琥珀酸脫氫酶，可將TTC還原為紅色的三苯甲臜，而缺血壞死的心肌組織由于琥珀酸脫氫酶活性降低或消失，不能使TTC還原，故呈現(xiàn)蒼白色。若染色后觀察到切片上出現(xiàn)明顯的蒼白色梗死區(qū)域，且梗死區(qū)域位于結(jié)扎線遠(yuǎn)端，與正常心肌組織有明顯的界限，即可判定心肌缺血模型成功建立。此外，還可采用蘇木精-伊紅（HE）染色法對(duì)心肌切片進(jìn)行染色，觀察心肌細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。在缺血心肌組織中，可見心肌細(xì)胞腫脹、變性，細(xì)胞核固縮、碎裂，間質(zhì)水腫，炎性細(xì)胞浸潤等病理改變，這些變化也能進(jìn)一步證實(shí)心肌缺血模型的成功建立。通過綜合運(yùn)用心電圖、肉眼觀察和組織染色等多種判定標(biāo)準(zhǔn)，能夠準(zhǔn)確判斷大鼠缺血心肌模型是否建立成功，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。3.3安心顆粒給藥方案將成功建立缺血心肌模型且存活的50只SD大鼠，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為模型對(duì)照組、安心顆粒低劑量組、安心顆粒中劑量組、安心顆粒高劑量組。另取10只未進(jìn)行冠脈結(jié)扎手術(shù)的正常SD大鼠作為正常對(duì)照組。根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)以及相關(guān)文獻(xiàn)資料，確定安心顆粒的給藥劑量。安心顆粒低劑量組給予安心顆粒0.5g/kg，安心顆粒中劑量組給予1.0g/kg，安心顆粒高劑量組給予2.0g/kg。將安心顆粒用蒸餾水配制成相應(yīng)濃度的溶液，采用灌胃的方式進(jìn)行給藥。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組則給予等量的蒸餾水進(jìn)行灌胃。每天灌胃給藥1次，給藥時(shí)間固定在上午9-10點(diǎn)，以減少晝夜節(jié)律對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。連續(xù)給藥4周，在給藥期間，密切觀察大鼠的飲食、飲水、精神狀態(tài)、活動(dòng)情況等一般狀況，每周稱量一次大鼠體重，根據(jù)體重變化調(diào)整給藥體積，確保給藥劑量的準(zhǔn)確性。通過這種不同劑量的給藥設(shè)置，能夠全面觀察安心顆粒在不同濃度下對(duì)大鼠缺血心肌血管新生的影響，為后續(xù)分析安心顆粒的作用機(jī)制和最佳給藥劑量提供豐富的數(shù)據(jù)支持。3.4檢測(cè)指標(biāo)與方法3.4.1組織學(xué)染色在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)各組大鼠進(jìn)行安樂死處理，迅速取出心臟，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗干凈，以去除心臟表面的血液和雜質(zhì)。將心臟置于4%多聚甲醛溶液中固定24-48小時(shí)，使心肌組織的形態(tài)和結(jié)構(gòu)得以固定，防止組織自溶和變形。固定后的心臟經(jīng)梯度酒精脫水，依次經(jīng)過70%、80%、90%、95%和100%的酒精溶液浸泡，每個(gè)濃度浸泡時(shí)間根據(jù)組織大小和質(zhì)地適當(dāng)調(diào)整，一般為1-3小時(shí)，目的是去除組織中的水分，為后續(xù)的石蠟包埋做準(zhǔn)備。脫水后的心臟用二甲苯透明，使組織變得透明，便于石蠟浸入。然后將心臟包埋于石蠟中，制成石蠟切片，切片厚度為4-5μm，以保證切片能夠清晰地顯示心肌組織的細(xì)微結(jié)構(gòu)。采用蘇木精-伊紅（HE）染色法對(duì)石蠟切片進(jìn)行染色。將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中脫蠟10-15分鐘，使石蠟溶解，以便染料能夠進(jìn)入組織。然后將切片依次經(jīng)過100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ、95%酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精進(jìn)行水化，每個(gè)濃度浸泡3-5分鐘，使組織恢復(fù)到含水狀態(tài)。將水化后的切片放入蘇木精染液中染色5-10分鐘，蘇木精能夠使細(xì)胞核染成藍(lán)色。染色后的切片用自來水沖洗，去除多余的蘇木精染液。接著將切片放入1%鹽酸酒精分化液中分化數(shù)秒，使細(xì)胞核的顏色更加清晰。分化后的切片再次用自來水沖洗，然后放入伊紅染液中染色3-5分鐘，伊紅能夠使細(xì)胞質(zhì)染成紅色。染色完成后，切片依次經(jīng)過80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ脫水，每個(gè)濃度浸泡3-5分鐘。最后用二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明10-15分鐘，中性樹膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察心肌組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，記錄心肌細(xì)胞的形態(tài)、排列情況，觀察是否存在心肌細(xì)胞腫脹、變性、壞死，以及間質(zhì)水腫、炎性細(xì)胞浸潤等病理變化，評(píng)估安心顆粒對(duì)缺血心肌組織形態(tài)學(xué)的影響。運(yùn)用Masson三色染色法對(duì)石蠟切片進(jìn)行染色，以觀察心肌組織的纖維化程度。切片脫蠟、水化步驟同HE染色。將水化后的切片放入Bouin氏固定液中固定1-2小時(shí)，使組織進(jìn)一步固定，增強(qiáng)染色效果。固定后的切片用自來水沖洗10-15分鐘，去除Bouin氏固定液。將切片放入Weigert氏鐵蘇木精染液中染色5-10分鐘，使細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。染色后的切片用自來水沖洗，然后放入麗春紅酸性品紅染液中染色5-10分鐘，使細(xì)胞質(zhì)和膠原纖維染成紅色。染色后的切片用1%磷鉬酸溶液分化3-5分鐘，使膠原纖維和其他組織的顏色對(duì)比更加明顯。分化后的切片直接放入苯胺藍(lán)染液中染色5-10分鐘，使膠原纖維染成藍(lán)色。染色完成后，切片用0.2%冰醋酸溶液沖洗，然后依次經(jīng)過95%酒精、100%酒精Ⅰ、100%酒精Ⅱ脫水，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明，中性樹膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察心肌組織中膠原纖維的分布和含量，通過圖像分析軟件測(cè)量藍(lán)色膠原纖維的面積百分比，定量評(píng)估心肌組織的纖維化程度，分析安心顆粒對(duì)心肌纖維化的影響。3.4.2免疫組化免疫組化實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等與血管新生密切相關(guān)因子的表達(dá)情況。將石蠟切片脫蠟、水化后，用3%過氧化氫溶液室溫孵育10-15分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，避免非特異性染色。然后將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，進(jìn)行抗原修復(fù)，可采用微波修復(fù)或高壓修復(fù)等方法，使抗原決定簇暴露，增強(qiáng)抗原抗體的結(jié)合能力?？乖迯?fù)后，切片自然冷卻至室溫，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。將切片用5%牛血清白蛋白（BSA）封閉液室溫封閉30-60分鐘，以減少非特異性背景染色。封閉后，傾去封閉液，不洗，直接滴加適當(dāng)稀釋的兔抗大鼠VEGF多克隆抗體、兔抗大鼠FGF多克隆抗體、兔抗大鼠TGF-β多克隆抗體，4℃孵育過夜，使抗體與組織中的目標(biāo)抗原特異性結(jié)合。次日，將切片從4℃冰箱取出，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30-60分鐘，使二抗與一抗特異性結(jié)合。孵育結(jié)束后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘。滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30-60分鐘。用PBS緩沖液沖洗3次，每次5分鐘后，使用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒進(jìn)行顯色，根據(jù)顯色情況控制顯色時(shí)間，一般為3-10分鐘，顯色反應(yīng)使目標(biāo)抗原所在部位呈現(xiàn)棕色。當(dāng)顯色達(dá)到理想效果時(shí)，用自來水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核3-5分鐘，然后用自來水沖洗，鹽酸酒精分化數(shù)秒，再用自來水沖洗返藍(lán)。切片依次經(jīng)過梯度酒精脫水、二甲苯透明，中性樹膠封片。在光學(xué)顯微鏡下觀察VEGF、FGF、TGF-β等因子在心肌組織中的表達(dá)部位和表達(dá)強(qiáng)度，通過圖像分析軟件對(duì)陽性染色區(qū)域進(jìn)行定量分析，計(jì)算陽性表達(dá)的平均光密度值，比較各組之間的差異，探究安心顆粒對(duì)這些血管新生相關(guān)因子表達(dá)的影響。3.4.3分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（如有需要）在后續(xù)研究中，可能采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測(cè)與血管新生相關(guān)基因的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，迅速取大鼠缺血心肌組織，放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。使用Trizol試劑提取心肌組織中的總RNA，按照試劑說明書的步驟進(jìn)行操作，包括勻漿、分層、沉淀、洗滌等過程，以獲得高質(zhì)量的總RNA。通過核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定RNA的濃度和純度，要求OD260/OD280比值在1.8-2.0之間，以保證RNA的質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)要求。利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，反應(yīng)體系和反應(yīng)條件按照試劑盒說明書進(jìn)行設(shè)置。以cDNA為模板，設(shè)計(jì)特異性引物，進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增。引物的設(shè)計(jì)遵循相關(guān)原則，如引物長度一般為18-25bp，GC含量在40%-60%之間，避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的形成等。反應(yīng)體系包括cDNA模板、上下游引物、SYBRGreenMasterMix、ddH2O等，在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。反應(yīng)條件一般為95℃預(yù)變性3-5分鐘，然后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)的95℃變性15-30秒，60℃退火30-60秒，72℃延伸30-60秒。擴(kuò)增結(jié)束后，通過分析Ct值和熔解曲線，對(duì)目的基因的表達(dá)水平進(jìn)行相對(duì)定量分析，以β-actin等管家基因作為內(nèi)參，計(jì)算目的基因相對(duì)于內(nèi)參基因的表達(dá)倍數(shù)變化，深入探究安心顆粒對(duì)血管新生相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控作用。若進(jìn)一步深入研究，可采用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術(shù)檢測(cè)與血管新生相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。取適量的缺血心肌組織，加入含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的細(xì)胞裂解液，在冰上充分勻漿，裂解細(xì)胞，釋放細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。將裂解后的樣品在4℃、12000rpm條件下離心15-30分鐘，取上清液，即為總蛋白提取物。采用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度，按照試劑盒說明書的步驟進(jìn)行操作，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的蛋白濃度。根據(jù)蛋白濃度，將樣品與上樣緩沖液混合，煮沸變性5-10分鐘，使蛋白質(zhì)變性為線性結(jié)構(gòu)，便于后續(xù)的電泳分離。將變性后的樣品進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，根據(jù)目標(biāo)蛋白的分子量大小選擇合適濃度的凝膠，一般采用8%-12%的分離膠和5%的濃縮膠。在電泳過程中，蛋白質(zhì)在電場(chǎng)的作用下向正極移動(dòng)，根據(jù)分子量大小在凝膠中分離。電泳結(jié)束后，將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，可采用濕轉(zhuǎn)或半干轉(zhuǎn)的方法，轉(zhuǎn)移條件根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況進(jìn)行優(yōu)化。轉(zhuǎn)移后的PVDF膜用5%脫脂牛奶封閉液室溫封閉1-2小時(shí)，以減少非特異性背景染色。封閉后，將PVDF膜與適當(dāng)稀釋的兔抗大鼠VEGF多克隆抗體、兔抗大鼠FGF多克隆抗體、兔抗大鼠TGF-β多克隆抗體等一抗4℃孵育過夜。次日，將PVDF膜用TBST緩沖液沖洗3次，每次10-15分鐘，然后與辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗室溫孵育1-2小時(shí)。孵育結(jié)束后，用TBST緩沖液沖洗3次，每次10-15分鐘。使用化學(xué)發(fā)光試劑對(duì)PVDF膜進(jìn)行顯影，通過凝膠成像系統(tǒng)采集圖像，分析目標(biāo)蛋白條帶的灰度值，以內(nèi)參蛋白（如β-actin）作為對(duì)照，計(jì)算目標(biāo)蛋白相對(duì)于內(nèi)參蛋白的表達(dá)量變化，從蛋白質(zhì)水平進(jìn)一步闡明安心顆粒促進(jìn)血管新生的作用機(jī)制。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析4.1安心顆粒對(duì)缺血心肌組織形態(tài)的影響通過蘇木精-伊紅（HE）染色，對(duì)各組大鼠心肌組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察。正常對(duì)照組大鼠心肌細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，排列緊密且整齊，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，位于細(xì)胞中央，細(xì)胞質(zhì)染色均勻，肌纖維紋理清晰，未見明顯的病理改變，心肌間質(zhì)內(nèi)血管分布正常，血管壁結(jié)構(gòu)完整（見圖1A）。模型對(duì)照組大鼠心肌組織出現(xiàn)明顯的病理變化，心肌細(xì)胞腫脹，形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，部分心肌細(xì)胞出現(xiàn)變性、壞死，細(xì)胞核固縮、碎裂，細(xì)胞質(zhì)嗜酸性增強(qiáng)，肌纖維斷裂、溶解，心肌間質(zhì)明顯水腫，可見大量炎性細(xì)胞浸潤，以中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞為主，梗死區(qū)域周圍血管數(shù)量減少，血管管徑變細(xì)（見圖1B）。與模型對(duì)照組相比，安心顆粒各劑量組的心肌組織病理變化均有不同程度的改善。安心顆粒低劑量組心肌細(xì)胞腫脹和變性程度有所減輕，部分心肌細(xì)胞形態(tài)趨于正常，排列相對(duì)整齊，炎性細(xì)胞浸潤減少，但仍可見少量壞死心肌細(xì)胞，間質(zhì)水腫有所緩解，梗死區(qū)域周邊血管數(shù)量較模型對(duì)照組有所增加，血管管徑有所增粗（見圖1C）。安心顆粒中劑量組心肌細(xì)胞形態(tài)和排列進(jìn)一步改善，壞死心肌細(xì)胞明顯減少，炎性細(xì)胞浸潤顯著降低，間質(zhì)水腫基本消失，心肌間質(zhì)內(nèi)血管數(shù)量明顯增多，血管分布相對(duì)均勻，管徑較粗（見圖1D）。安心顆粒高劑量組心肌組織形態(tài)接近正常，心肌細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，排列緊密整齊，細(xì)胞核形態(tài)正常，細(xì)胞質(zhì)染色均勻，肌纖維紋理清晰，僅見極少量炎性細(xì)胞浸潤，幾乎無壞死心肌細(xì)胞，梗死區(qū)域周邊血管豐富，血管結(jié)構(gòu)完整，管徑與正常對(duì)照組相似（見圖1E）。通過對(duì)各組心肌組織形態(tài)學(xué)變化的觀察和比較，初步表明安心顆粒能夠減輕缺血心肌的損傷程度，促進(jìn)心肌組織的修復(fù)，并且這種作用呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性，高劑量組的效果最為顯著。采用Masson三色染色法，對(duì)各組大鼠心肌組織的纖維化程度進(jìn)行了觀察和分析。正常對(duì)照組大鼠心肌組織中，膠原纖維呈淡藍(lán)色，主要分布在心肌間質(zhì)和血管周圍，含量較少，心肌細(xì)胞呈紅色，排列緊密整齊，心肌組織結(jié)構(gòu)正常，未見明顯的纖維化區(qū)域（見圖2A）。模型對(duì)照組大鼠心肌組織中，梗死區(qū)域和周邊組織的膠原纖維大量增生，呈深藍(lán)色，交織成網(wǎng)狀，取代了正常的心肌組織，心肌細(xì)胞被膠原纖維分隔、擠壓，排列紊亂，纖維化面積明顯增大，提示心肌纖維化程度嚴(yán)重（見圖2B）。與模型對(duì)照組相比，安心顆粒各劑量組的心肌纖維化程度均有不同程度的減輕。安心顆粒低劑量組心肌組織中，膠原纖維增生程度有所緩解，藍(lán)色的膠原纖維區(qū)域面積減小，部分心肌細(xì)胞之間的膠原纖維間隔變薄，心肌細(xì)胞排列相對(duì)改善，但仍可見較多的纖維化區(qū)域（見圖2C）。安心顆粒中劑量組心肌纖維化程度進(jìn)一步減輕，膠原纖維含量明顯減少，藍(lán)色區(qū)域明顯縮小，心肌細(xì)胞排列較為整齊，大部分心肌細(xì)胞之間的膠原纖維間隔明顯變薄，梗死區(qū)域周邊的心肌組織結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)正常（見圖2D）。安心顆粒高劑量組心肌組織中，膠原纖維增生受到明顯抑制，僅在血管周圍和少量心肌間質(zhì)中可見淡藍(lán)色的膠原纖維，纖維化面積顯著減小，心肌細(xì)胞排列緊密整齊，與正常對(duì)照組相似，表明安心顆粒高劑量組對(duì)心肌纖維化的抑制作用最為明顯（見圖2E）。通過圖像分析軟件對(duì)藍(lán)色膠原纖維的面積百分比進(jìn)行定量測(cè)量，結(jié)果顯示，模型對(duì)照組的纖維化面積百分比顯著高于正常對(duì)照組（P<0.01）；安心顆粒各劑量組的纖維化面積百分比均顯著低于模型對(duì)照組（P<0.05或P<0.01），且隨著安心顆粒劑量的增加，纖維化面積百分比逐漸降低，呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性（P<0.05）。這表明安心顆粒能夠有效抑制缺血心肌的纖維化進(jìn)程，減少膠原纖維的沉積，改善心肌組織結(jié)構(gòu)，對(duì)心肌起到保護(hù)作用。4.2安心顆粒對(duì)血管新生相關(guān)指標(biāo)的影響免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示，正常對(duì)照組大鼠心肌組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等因子均有一定程度的表達(dá)，主要表達(dá)于心肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿中，呈棕黃色顆粒狀，表達(dá)分布較為均勻，且表達(dá)強(qiáng)度較弱（見圖3A）。模型對(duì)照組大鼠心肌組織中這些因子的表達(dá)水平顯著升高，陽性染色區(qū)域明顯增多，表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng)，主要集中在梗死區(qū)域周邊的心肌細(xì)胞和新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞中（見圖3B）。這是因?yàn)樾募∪毖毖鯐?huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生一系列應(yīng)激反應(yīng)，誘導(dǎo)這些血管新生相關(guān)因子的表達(dá)上調(diào)，以促進(jìn)血管新生，試圖改善心肌缺血狀況。與模型對(duì)照組相比，安心顆粒各劑量組大鼠心肌組織中VEGF、FGF、TGF-β等因子的表達(dá)水平均有不同程度的進(jìn)一步升高，且呈現(xiàn)出劑量依賴性。安心顆粒低劑量組大鼠心肌組織中，VEGF、FGF、TGF-β等因子的陽性染色區(qū)域較模型對(duì)照組有所增加，表達(dá)強(qiáng)度增強(qiáng)，但仍低于中、高劑量組（見圖3C）。安心顆粒中劑量組大鼠心肌組織中，這些因子的表達(dá)水平進(jìn)一步升高，陽性染色區(qū)域更加廣泛，表達(dá)強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，在梗死區(qū)域周邊的心肌細(xì)胞和新生血管內(nèi)皮細(xì)胞中均有較強(qiáng)的陽性染色（見圖3D）。安心顆粒高劑量組大鼠心肌組織中，VEGF、FGF、TGF-β等因子的表達(dá)水平達(dá)到最高，陽性染色區(qū)域幾乎遍布整個(gè)心肌組織，特別是在梗死區(qū)域周邊，陽性染色強(qiáng)度最強(qiáng)，與正常對(duì)照組和模型對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）（見圖3E）。通過圖像分析軟件對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行定量分析，計(jì)算陽性表達(dá)的平均光密度值，結(jié)果顯示，模型對(duì)照組VEGF、FGF、TGF-β等因子的平均光密度值顯著高于正常對(duì)照組（P<0.01）；安心顆粒各劑量組VEGF、FGF、TGF-β等因子的平均光密度值均顯著高于模型對(duì)照組（P<0.05或P<0.01），且隨著安心顆粒劑量的增加，平均光密度值逐漸升高，呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性（P<0.05）。這表明安心顆粒能夠顯著上調(diào)缺血心肌中VEGF、FGF、TGF-β等血管新生相關(guān)因子的表達(dá)，且高劑量的安心顆粒促進(jìn)因子表達(dá)的作用更為顯著。在血管密度方面，正常對(duì)照組大鼠心肌組織中血管分布均勻，血管密度較高，每高倍視野下可見較多的微血管，血管形態(tài)規(guī)則，管腔清晰（見圖4A）。模型對(duì)照組大鼠心肌組織中梗死區(qū)域周邊的血管密度明顯降低，與正常對(duì)照組相比差異顯著（P<0.01），微血管數(shù)量減少，部分血管出現(xiàn)狹窄、閉塞等改變，血管形態(tài)不規(guī)則（見圖4B）。安心顆粒各劑量組大鼠心肌組織中梗死區(qū)域周邊的血管密度均有不同程度的增加，且隨著安心顆粒劑量的升高，血管密度增加越明顯。安心顆粒低劑量組血管密度較模型對(duì)照組有所增加，但增加幅度較小（見圖4C）；安心顆粒中劑量組血管密度進(jìn)一步增加，微血管數(shù)量明顯增多，部分血管形態(tài)得到改善（見圖4D）；安心顆粒高劑量組血管密度顯著增加，與模型對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），每高倍視野下可見大量新生的微血管，血管分布較為均勻，形態(tài)基本恢復(fù)正常，接近正常對(duì)照組水平（見圖4E）。通過對(duì)血管密度的分析，進(jìn)一步證實(shí)了安心顆粒能夠促進(jìn)缺血心肌的血管新生，增加血管密度，改善心肌的血液供應(yīng)，且這種作用與安心顆粒的劑量密切相關(guān)，高劑量組效果最為顯著。4.3安心顆粒作用機(jī)制的初步探討綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，安心顆粒促進(jìn)缺血心肌血管新生的作用機(jī)制可能是多方面的。從組織學(xué)染色結(jié)果來看，安心顆粒能夠改善缺血心肌的組織形態(tài)，減輕心肌細(xì)胞的損傷，抑制心肌纖維化。這為血管新生提供了一個(gè)良好的微環(huán)境，因?yàn)樾募±w維化會(huì)導(dǎo)致心肌組織僵硬，阻礙血管的生長和延伸，而安心顆粒通過抑制纖維化，使得心肌組織的彈性和結(jié)構(gòu)得到改善，有利于血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和增殖，從而促進(jìn)血管新生。從免疫組化檢測(cè)結(jié)果分析，安心顆粒顯著上調(diào)了缺血心肌中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）等血管新生相關(guān)因子的表達(dá)。VEGF作為最重要的促血管新生因子之一，能夠與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合，激活下游的Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/Akt等信號(hào)通路。在Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路中，Ras被激活后，會(huì)依次激活Raf、MEK和ERK，這些激酶的活化能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和存活。PI3K/Akt信號(hào)通路的激活則可以抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞的存活能力，同時(shí)還能調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝活動(dòng)，為血管新生提供必要的能量和物質(zhì)基礎(chǔ)。安心顆粒可能通過促進(jìn)VEGF的表達(dá)，激活這些信號(hào)通路，從而促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，誘導(dǎo)血管新生。FGF同樣在血管新生中發(fā)揮關(guān)鍵作用。它與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體酪氨酸激酶結(jié)合后，激活的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可以促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移。FGF還能刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)成分和蛋白水解酶，參與血管基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的降解和重塑，為血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和新血管的形成創(chuàng)造有利條件。安心顆粒上調(diào)FGF的表達(dá)，可能通過增強(qiáng)這些作用，進(jìn)一步促進(jìn)缺血心肌的血管新生。TGF-β在血管新生過程中具有雙重調(diào)節(jié)作用。在血管新生的早期階段，TGF-β可以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，刺激血管生成相關(guān)基因的表達(dá)。同時(shí)，TGF-β還能調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的合成和降解，維持血管壁的穩(wěn)定性。安心顆粒上調(diào)TGF-β的表達(dá)，可能在血管新生的早期階段，發(fā)揮其促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的作用，促進(jìn)新血管的形成。此外，安心顆粒中的多種中藥成分可能協(xié)同發(fā)揮作用。人參中的人參皂苷Rg1能夠激活A(yù)kt/eNOS信號(hào)通路，促進(jìn)一氧化氮（NO）的釋放，NO不僅可以擴(kuò)張血管，增加冠狀動(dòng)脈血流量，還能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，對(duì)血管新生具有積極的促進(jìn)作用。桂枝中的桂皮醛具有擴(kuò)張血管、抑制血小板聚集的作用，能夠改善心肌的血液供應(yīng)，為血管新生提供充足的營養(yǎng)和氧氣。栝蔞皮中的三萜皂苷具有抗氧化作用，能夠減輕氧化應(yīng)激對(duì)心肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，保護(hù)血管內(nèi)皮功能，有利于血管新生。水蛭中的水蛭素作為天然的抗凝物質(zhì)，能夠抑制血栓形成，改善冠狀動(dòng)脈的血流，同時(shí)還能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放一氧化氮，增強(qiáng)血管的舒張功能，促進(jìn)血管新生。茯苓中的茯苓多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，減輕炎癥反應(yīng)對(duì)心肌的損傷，為血管新生創(chuàng)造良好的內(nèi)環(huán)境。