獸醫(yī)檢驗(yàn)題庫與答案一、病原生物學(xué)與免疫學(xué)基礎(chǔ)1.【單選】某豬場暴發(fā)急性腹瀉，7日齡仔豬死亡率高達(dá)80%。剖檢見小腸壁變薄、充氣，腸內(nèi)容物呈黃色水樣。取小腸組織勻漿經(jīng)0.22μm濾膜過濾后，接種PK15細(xì)胞，48h出現(xiàn)明顯CPE，經(jīng)RNA提取、RTPCR擴(kuò)增獲得一條約1.7kb條帶，測序比對與PEDVS基因同源性99%。下列哪項(xiàng)實(shí)驗(yàn)可最終確定病原？A.免疫電鏡觀察病毒粒子形態(tài)B.乳鼠腦內(nèi)接種觀察發(fā)病C.固定病毒—稀釋血清中和試驗(yàn)D.熒光抗體染色檢測組織切片答案：C。固定病毒—稀釋血清中和試驗(yàn)可定量測定病毒被特異性抗體中和的能力，是病毒性腹瀉病原確診的“金標(biāo)準(zhǔn)”。2.【單選】犬細(xì)小病毒（CPV2）血凝特性依賴于其衣殼蛋白VP2第426位氨基酸。若該位點(diǎn)由天冬氨酸突變?yōu)楣劝彼?，則：A.血凝滴度升高4倍B.失去對豬紅細(xì)胞的凝集能力C.獲得對貓紅細(xì)胞的凝集能力D.血凝pH范圍拓寬至pH5.0–8.5答案：B。426位Asp→Glu突變使CPV2失去與豬紅細(xì)胞表面唾液酸受體結(jié)合能力，血凝陰性。3.【單選】布魯氏菌光滑型LPSO鏈缺陷突變株接種孕山羊，與野生株相比，最顯著的表型差異是：A.胎盤壞死灶內(nèi)菌量減少10倍B.流產(chǎn)時間推遲10天C.胎衣滯留率降低50%D.乳汁排菌持續(xù)時間縮短答案：A。O鏈缺失導(dǎo)致補(bǔ)體介導(dǎo)殺傷敏感性增高，胎盤絨毛膜巨噬細(xì)胞吞噬效率提升，菌量顯著下降。4.【單選】雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）VP5蛋白功能缺失株感染SPF雞，可觀察到：A.法氏囊萎縮提前24hB.病毒血癥持續(xù)時間延長2天C.中和抗體峰值下降1log2D.硬殼蛋比例增加答案：B。VP5通過抑制細(xì)胞凋亡促進(jìn)病毒釋放，缺失后病毒釋放受阻，但細(xì)胞內(nèi)復(fù)制延長，導(dǎo)致病毒血癥時間延長。5.【多選】下列哪些基因可用作產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌（STEC）O157:H7的分子靶標(biāo)？A.stx1B.stx2C.eaeD.hlyAE.rfbE答案：A、B、C、D。rfbE為O157O抗原合成基因，可用于血清群鑒定，但不直接提示毒力。6.【判斷】副豬嗜血桿菌（H.parasuis）血清5型強(qiáng)毒株的毒力與其莢膜多糖CPS5合成基因簇中wzy聚合酶基因完整度呈正相關(guān)。答案：正確。wzy缺失導(dǎo)致CPS5鏈縮短，血清殺菌活性增強(qiáng)，毒力下降≥100倍。7.【填空】新城疫病毒（NDV）F蛋白裂解位點(diǎn)序列為“RRQKR↓F”時，其裂解酶為________，宿主范圍包括________。答案：furin樣蛋白酶；雞、火雞、人等多種宿主。8.【簡答】簡述鑒別牛結(jié)核γ干擾素釋放試驗(yàn)（BOVIGAM）與皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)的互補(bǔ)意義。答案：BOVIGAM檢測細(xì)胞免疫，特異性>96%，可在注射PPD后24h得出結(jié)果，避免二次進(jìn)場；皮試檢測遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，敏感性高，可定位感染牛只。兩者聯(lián)合可兼顧敏感性與特異性，符合OIE“DIVA”策略，利于無疫區(qū)認(rèn)證。二、病理學(xué)與剖檢診斷9.【單選】某奶牛場2歲荷斯坦牛突發(fā)死亡，尸僵完全，天然孔流出泡沫性血液。剖檢見脾臟腫大3倍，脾髓呈黑紅色，軟化如泥；肝表面散布粟粒大灰白壞死灶；鏡檢肝中央靜脈周圍肝細(xì)胞呈“菊花瓣”樣壞死，邊緣見細(xì)菌鏈。最可能的病原是：A.炭疽芽孢桿菌B.多殺性巴氏桿菌C.牛分枝桿菌D.產(chǎn)氣莢膜梭菌A型答案：A。脾髓軟化、泡沫性血液、肝“菊花瓣”壞死及細(xì)菌鏈為炭疽典型三聯(lián)征。10.【單選】雞猝死綜合征（SDS）與雞肺動脈高壓綜合征（PHS）的共同剖檢特征是：A.右心室擴(kuò)張B.肝表面纖維素滲出C.腎尿酸鹽沉積D.胸肌蒼白答案：A。兩者均因右心負(fù)荷驟增導(dǎo)致右心室擴(kuò)張，SDS為急性心電紊亂，PHS為慢性缺氧。11.【多選】下列哪些病變可作為豬丹毒慢性型診斷指標(biāo)？A.心瓣膜菜花樣增生B.關(guān)節(jié)軟骨“骰子樣”龜裂C.皮膚菱形壞死痂皮D.腎皮質(zhì)點(diǎn)狀出血E.咽背淋巴結(jié)干酪樣壞死答案：A、B、C。慢性型丹毒以心內(nèi)膜炎、關(guān)節(jié)炎和皮膚壞死為特征，腎出血多見于急性敗血型。12.【判斷】馬鼻疽結(jié)節(jié)與馬放線桿菌肉芽腫的主要組織學(xué)區(qū)別是前者可見干酪樣壞死及Langhans巨細(xì)胞。答案：錯誤。馬鼻疽結(jié)節(jié)以化膿性炎癥為主，無典型干酪樣壞死；Langhans巨細(xì)胞見于結(jié)核樣肉芽腫，非鼻疽特征。13.【填空】奶牛脂肪肝的病理分級中，肝濕重脂滴面積占比30%–50%屬于________級，對應(yīng)肝甘油三酯濃度約為________mg/g。答案：Ⅱ級；>80mg/g。14.【簡答】描述牛海綿狀腦?。˙SE）腦干組織病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)。答案：必選腦區(qū)為延腦閂部（obex），HE染色見灰質(zhì)神經(jīng)纖維網(wǎng)內(nèi)散在或成簇空泡，呈雙側(cè)對稱分布，空泡直徑>20μm，伴神經(jīng)元丟失及膠質(zhì)增生；免疫組化顯示異常朊蛋白（PrPSc）沉積于神經(jīng)突觸，呈“桑葚樣”或“線樣”沉積，方可確診。三、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)15.【單選】采用熒光定量PCR檢測禽白血病病毒（ALV）前病毒DNA，提取的基因組DNA經(jīng)紫外分?光光度計測得A260/A280=1.42，提示：A.蛋白污染嚴(yán)重，需重新純化B.酚殘留，需乙醇沉淀C.RNA殘留，需RNase處理D.濃度適宜，可直接檢測答案：A。A260/A280<1.6提示蛋白污染，抑制Taq酶活性，需重新純化。16.【單選】犬全血EDTA抗凝樣本用于血常規(guī)，若放置室溫24h后測定，最先出現(xiàn)顯著假性升高的指標(biāo)是：A.MCVB.MPVC.WBCD.PLT答案：B。室溫儲存導(dǎo)致血小板腫脹，MPV假性升高；PLT因聚集而假性降低。17.【單選】采用改良Kinyoun抗酸染色檢測鸚鵡糞便中分枝桿菌，鏡檢見紅色短桿狀菌體，背景藍(lán)色，但菌體長度<1μm，應(yīng)首選的驗(yàn)證試驗(yàn)是：A.金胺O熒光染色B.PCRREA鑒定hsp65C.Middlebrook7H9培養(yǎng)D.鳥分枝桿菌特異性qPCR答案：D。hsp65PCRREA可區(qū)分結(jié)核復(fù)合群與非結(jié)核分枝桿菌，但耗時；鳥分枝桿菌qPCR特異性高，2h出結(jié)果，適合臨床。18.【多選】關(guān)于布魯氏菌熒光偏振試驗(yàn)（FPA），下列描述正確的是：A.使用FITC標(biāo)記LPSO鏈多糖B.陽性閾值≥90mPC.可區(qū)分疫苗S19抗體與自然感染D.檢測血清無需加熱滅活E.適用于乳池混合奶樣篩查答案：A、B、E。FPA無法區(qū)分S19疫苗抗體；血清需56℃滅活30min避免干擾。19.【判斷】采用ELISA檢測豬肺炎支原體抗體，若樣本OD450值≥0.4且陽性對照OD450值≥0.8，則判定為陽性，該Cutoff值設(shè)定方法為“均值+3SD”法。答案：錯誤。0.4/0.8為“固定比值法”（樣本/陽性≥0.5），非均值+3SD。20.【填空】采用MALDITOFMS鑒定細(xì)菌時，用于校正的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品通常為________，質(zhì)量范圍________Da。答案：EscherichiacoliDH5α提取物；2000–20000Da。21.【簡答】列舉兩種可區(qū)分新城疫病毒疫苗株與強(qiáng)毒株的分子生物學(xué)方法并說明原理。答案：①F蛋白裂解位點(diǎn)RTRFLP：強(qiáng)毒株裂解位點(diǎn)含多個堿性氨基酸，可被EcoRI酶切，疫苗株無該位點(diǎn)；②TaqMan探針qPCR：設(shè)計裂解位點(diǎn)特異性探針，強(qiáng)毒株Ct值<30，疫苗株無擴(kuò)增。兩者均基于F基因序列差異，2h內(nèi)完成鑒別。四、獸藥殘留與食品安全檢驗(yàn)22.【單選】牛肌肉中β受體激動劑克倫特羅殘留檢測，UPLCMS/MS法采用內(nèi)標(biāo)法，若內(nèi)標(biāo)為克倫特羅D9，其作用是：A.校正提取回收率B.校正離子抑制效應(yīng)C.校正進(jìn)樣體積誤差D.以上均是答案：D。同位素內(nèi)標(biāo)可全程跟蹤，消除基質(zhì)效應(yīng)與操作誤差。23.【單選】蜂蜜中四環(huán)素族殘留，采用微生物抑制法（B.stearothermophilusATCC10149），若樣品孔抑菌圈直徑>18mm，則：A.四環(huán)素含量<10μg/kgB.四環(huán)素含量>50μg/kgC.氯霉素陽性D.鏈霉素陽性答案：B。抑菌圈>18mm對應(yīng)四環(huán)素>50μg/kg，為歐盟MRL（最大殘留限量）判定閾值。24.【單選】雞蛋中氟苯尼考胺（FFA）殘留檢測，樣品經(jīng)乙酸乙酯提取后，需用________凈化，方可進(jìn)行LCMS/MS測定。A.C18固相萃取柱B.陰離子交換柱（MAX）C.親水親脂平衡柱（HLB）D.分子印跡柱（MIP）答案：B。FFA為堿性化合物，MAX可去除酸性脂質(zhì)，提高回收率至>90%。25.【多選】關(guān)于動物源性食品中硝基呋喃代謝物檢測，下列說法正確的是：A.采用2硝基苯甲醛衍生化B.衍生反應(yīng)需37℃避光16hC.檢測限需達(dá)0.5μg/kgD.內(nèi)標(biāo)為同位素標(biāo)記代謝物E.陽性結(jié)果需以游離代謝物確認(rèn)答案：A、B、C、D。硝基呋喃類原藥已代謝，無需再測游離代謝物。26.【判斷】牛奶中磺胺二甲嘧啶殘留快速檢測試紙條采用競爭法，T線顏色越深，表明殘留量越高。答案：錯誤。競爭法T線顏色與殘留量呈負(fù)相關(guān)，顏色越深殘留越低。27.【填空】根據(jù)GB316502019，牛肌肉中阿苯達(dá)唑亞砜+砜總量MRL為________μg/kg，停藥期為________天。答案：100；28。28.【簡答】簡述液相色譜高分辨質(zhì)譜（LCHRMS）在獸藥非靶向篩查中的優(yōu)勢。答案：HRMS可獲取精確質(zhì)量數(shù)（<2ppm），通過同位素豐度比與二級碎片庫匹配，實(shí)現(xiàn)未知物篩查；無需標(biāo)準(zhǔn)品即可初步定性，結(jié)合譜庫搜索（如mzCloud）可快速識別新型衍生物，適用于預(yù)警與溯源。五、分子流行病學(xué)與生物信息學(xué)29.【單選】對2018–2022年華東地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）ORF5序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現(xiàn)所有田間株與NADC30like株聚為一支，Bootstrap值>95，而與JXA1P80疫苗株距離>0.08，提示：A.田間株為疫苗株重組B.疫苗株可提供完全保護(hù)C.需更新疫苗毒株D.田間株為歐洲型答案：C。遺傳距離>0.08表明抗原性差異顯著，現(xiàn)有疫苗可能保護(hù)不足。30.【單選】采用全基因組測序（WGS）溯源沙門氏菌，單核苷酸多態(tài)性（SNP）閾值通常設(shè)定為：A.≤5SNPB.≤10SNPC.≤20SNPD.≤50SNP答案：B?！?0SNP提示近期共同祖先，適合暴發(fā)溯源。31.【單選】奶牛結(jié)核病VNTR（可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)）分型中，位點(diǎn)ETRA重復(fù)單元為：A.12bpB.24bpC.46bpD.77bp答案：D。ETRA為77bp重復(fù)，重復(fù)數(shù)差異大，分辨率高。32.【多選】下列哪些數(shù)據(jù)庫可用于禽流感病毒血凝素（HA）糖基化位點(diǎn)預(yù)測？A.NetNGlycB.NetOGlycC.UniProtD.NCBIInfluenzaDBE.GlyConnect答案：A、B、E。UniProt與NCBI為序列庫，不直接預(yù)測糖基化。33.【判斷】采用BEAST軟件估算PRRSVTimetoMostRecentCommonAncestor(tMRCA)，需先利用ModelTest確定最佳替代模型，通常選擇GTR+Γ+I。答案：正確。GTR+Γ+I對RNA病毒基因組擬合度最佳。34.【填空】根據(jù)OneHealth理念，人畜環(huán)境界面耐藥基因傳播研究中，________基因常用于指示多黏菌素耐藥，其上游通常伴隨________插入序列。答案：mcr1；ISApl1。35.【簡答】說明利用Nanopore測序進(jìn)行非洲豬瘟病毒（ASFV）現(xiàn)場快速分型的實(shí)驗(yàn)流程與質(zhì)控要點(diǎn)。答案：流程：①現(xiàn)場采集脾臟0.1g，加入TrisEDTA緩沖液，便攜式勻漿；②使用SQKRBK004試劑盒，10min完成文庫；③MinION測序≥1Gb數(shù)據(jù)；④基于B646L基因（p72）與EP402R基因（p54）實(shí)時BLAST，確定基因型；⑤使用參考株Georgia2007/1比對，覆蓋度>90%、深度>50×為質(zhì)控合格；⑥EPI2MEARMA插件在線報告，全程<6h。質(zhì)控：加入PhiX內(nèi)標(biāo)，Qscore≥7；陰性對照需無ASFVreads，陽性對照誤差<2SNP。六、綜合案例分析36.【案例】某羊場飼養(yǎng)湖羊600只，2023年3月起陸續(xù)出現(xiàn)懷孕母羊流產(chǎn)，流產(chǎn)率12%，公羊睪丸炎，部分羊跛行。剖檢流產(chǎn)胎兒肝表面有灰白色結(jié)節(jié)，鏡檢見胞內(nèi)球狀菌，ZiehlNeelsen染色紅色。采集胎盤、胎兒胃內(nèi)容物及母羊血清，分別進(jìn)行細(xì)菌分離、PCR及虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBPT）。結(jié)果：①胎盤接種布氏瓊脂，5%CO237℃培養(yǎng)72h，見0.5mm透明小菌落，涂片為革蘭陰性短桿菌，氧化酶陽性，尿素酶陽性，單相抗A血清凝集陽性；②PCRAMOS鑒定為羊種布魯氏菌（B.melitensis）生物3型；③RBPT63份血清陽性率85%，補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）滴度≥1:160占70%。請回答：（1）該場疫情最可能的傳染源與傳播途徑？（2）若需進(jìn)行撲殺評估，應(yīng)補(bǔ)充哪些實(shí)驗(yàn)室檢測？（3）請給出凈化方案的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)。答案：（1）傳染源為流產(chǎn)羊胎盤、陰道分泌物及乳汁；傳播途徑為經(jīng)口（污染飼料）、經(jīng)生殖道（交配）、經(jīng)呼吸道（塵埃）。（2）需補(bǔ)充：①乳汁環(huán)試驗(yàn)（MRT）確定排菌牛；②VNTR16分型確認(rèn)是否為本地流行株；③ELISAIgG2區(qū)分疫苗Rev.1抗體與自然感染；④qPCR定量環(huán)境樣本（墊料、水槽）菌載量，評估污染范圍。（3）凈化方案：①立即封鎖，流產(chǎn)羊與陽性羊撲殺深埋，石灰消毒；②剩余羊每6周RBPT+ELISA篩查，連續(xù)2次陰性視為無感染；③環(huán)境采樣qPCR陰性3次后解除封鎖；④引進(jìn)羊只須來自無疫區(qū)，隔離45天，雙份血清檢測陰性方可混群；⑤人員防護(hù)，場區(qū)出入口設(shè)消毒池，疫苗Rev.1僅用于陰性羔羊，皮下接種，劑量20×10^9CFU，12月齡加強(qiáng)一次；⑥建立追溯檔案，上報國家布魯氏菌病監(jiān)測平臺，持續(xù)監(jiān)測24個月無陽轉(zhuǎn)方可認(rèn)證凈化。37.【案例】2023年10月，某寵物醫(yī)院接診3月齡金毛犬，體溫40.2℃，嘔吐、血便，白細(xì)胞1.8×10^9/L，中性粒細(xì)胞占比90%，淋巴5%，單核5%，血小板30×10^9/L；犬細(xì)小病毒抗原試紙陽性。治療第3天，犬仍嘔吐，血便加重，生化ALT180U/L（參考10–80），ALP250U/L（20–150），TBIL85μmol/L（<10）。請回答：（1）解釋ALT、ALP、TBIL升高的病理機(jī)制；（2）給出2項(xiàng)可評估預(yù)后的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)并說明理由；（3）若采用糞便病毒定量qPCR，如何設(shè)定判定閾值以區(qū)分疫苗排毒與野毒感染？答案：（1）CPV2導(dǎo)致腸黏膜屏障破壞，細(xì)菌內(nèi)毒素易位至門靜脈，激活Kupffer細(xì)胞釋放TNFα，引發(fā)肝細(xì)胞壞死與膽汁淤積；同時嘔吐脫水致低灌注，肝缺血再灌注損傷，ALT升高；膽汁酸淤積刺激ALP合成；TBIL升高提示肝細(xì)胞性黃疸合并膽汁淤積。（2）①血清乳酸（Lac）：>4mmol/L提示組織低灌注，與死亡率正相關(guān)；②C反應(yīng)蛋白（CRP）：>100mg/L提示全身炎癥風(fēng)暴，持續(xù)高值者預(yù)后差。