(10)授權(quán)公告號CN107011125B(21)申請?zhí)?0171031431(65)同一申請的已公布的文獻號(43)申請公布日2017.08.04(73)專利權(quán)人云南漢木森生物科技有限責任公司地址657000云南省昭通市昭陽區(qū)工業(yè)園國際玩具城20幢(56)對比文件審查員陳東旭(72)發(fā)明人項偉劉紹興李泳霖顧文云吳玉金(74)專利代理機構(gòu)北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙)11411代理人鄭自群(54)發(fā)明名稱一種富集大麻二酚的方法(57)摘要本發(fā)明屬于化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種富葉在120℃條件下干燥0.5～4小時，粉碎至50目以上，在30～55℃、13～30MPa的條件下二氧化碳超臨界萃取1～9小時，回收二氧化碳，得大麻花葉初提物；S2、將大麻花葉初提物溶解于乙醇或在層析柱中裝入預處理好的填料，用濕法或干法正丁醇、丙酮和氯仿中的一種或它們中任意幾種的混合液進行梯度洗脫或等度洗脫；收集富含大21.一種富集大麻二酚的方法，其特征在于，包括如下步驟：S1、將大麻花葉在120℃條件下干燥0.5～4小時，粉碎至50目以上，在30～55℃、13～30MPa的條件下二氧化碳超臨界萃度洗脫或等度洗脫；收集富含大麻二酚的洗脫段次；采用濕法上樣前先用1BV的磷酸緩沖液進行柱平衡，再用2BV的10%(v/v)乙醇溶液進行柱平衡；所述步驟S4包括如下步驟：2)用2～6BV的35%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液Ⅱ;3)用2～6BV的45%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液Ⅲ;4)用2～6BV的55%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液IV;5)用2～6BV的65%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液V;7)用2～6BV的85%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液V;8)用2～6BV的95%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液VⅢ;收集洗出液IV、V和VI;將洗出液IV和VI合并，濃縮至相對密度為1.1～1.4,上樣于層析硅膠柱進行層析，用2～3BV的65%(v/v)的乙醇溶液進行洗脫，得洗出液IX,將洗出液IX與洗出液V合并，旋轉(zhuǎn)蒸干，得大麻二酚粗品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富集大麻二酚的方法，其特征在于，采用濕法上樣前先用1BV的磷酸緩沖液柱平衡，再用2BV的10%甲醇水溶液進行柱平衡。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的富集大麻二酚的方法，其特征在于，所述步驟S4包括如下步1)用3～5BV的甲醇：水=30:70(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液I;2)用2～5BV的甲醇：水=50:50(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液Ⅱ;3)用3～5BV的甲醇：水=60:40(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液Ⅲ;4)用2～4BV的甲醇：水=70:30(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液IV;5)用2～5BV的甲醇：水=80:20(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液V;6)用2～5BV的甲醇：水=90:10(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液VI;7)再用100%(v/v)甲醇進行洗柱；收集洗出液Ⅲ、IV和V;將洗出液Ⅲ和V合并后濃縮至相對密度1.1～1.4,上樣于層析硅膠柱進行層析，用2～3BV的甲醇：水=80:20(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液VⅡ,將洗出4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的富集大麻二酚的方法，其特征在于，將大麻二酚粗品按上樣量5～15wt%,向裝填大孔吸附樹脂并預處理后的層析柱上樣，上樣結(jié)束后用超純水洗脫2~4BV;再用水：乙醇：二甲基亞砜=25:74:1(v/v)洗脫3～5BV,收集洗脫液，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸35.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富集大麻二酚的方法，其特征在于，所述填料為苯乙烯大孔吸附樹脂或?qū)游龉枘z。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的富集大麻二酚的方法，其特征在于，所述苯乙烯大孔吸附樹脂4一種富集大麻二酚的方法技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種富集大麻二酚的方法。背景技術(shù)本，高1～3米。大麻中含有的其它麻類的四氫大麻酚(THC)和大麻二酚(CBD)成分，是目前在其它動植物中尚未分離出的酚類化合物，具有很高的藥用價值。研究表明，濫用THC將嚴重癥因化療而引起的惡心以及治療哮喘等功能。近年來科學家還發(fā)現(xiàn)四氫大麻酚(THC)和大麻二酚(CBD)均為強力抗氧化劑，大麻二酚(CBD)是非成癮性成分，具有阻斷某些多酚對人體神經(jīng)的不利影響，并且具有阻斷乳腺癌轉(zhuǎn)移、治療癲癇、抗類風濕性關(guān)節(jié)炎、抗失眠等一系列生理活性功能。根據(jù)大麻所含有的四氫大麻酚(THC)的比例，通常把它分為工業(yè)大麻和毒品大麻兩類。工業(yè)大麻屬低毒大麻，其中四氫大麻酚(THC)的含量最高不超0.3%,不具有毒品利用價值；而在毒品大麻的葉子和花枝中四氫大麻酚(THC)的含量較高，屬高毒大麻。[0003]申請公布日為2017年1月4日，申請公布號為CN106278828A的中國發(fā)明專利申請，公開了一種從工業(yè)大麻葉中提取大麻二酚的方法，包括以下步驟：將工業(yè)大麻的花葉粉碎、烘干得到藥材粉末；將藥材粉末采用30-100v%的乙醇提取得到提取液；將提取液濃縮得到浸膏；將浸膏進行水沉，去除雜質(zhì)得到水沉液；將水沉液離心并向獲得的沉淀中加入10-100v%乙醇，溶解得到沉淀物的醇溶液；將沉淀物的醇溶液進行柱層析；濃縮柱層析后洗脫獲得的洗脫液，加入乙醇過飽和溶解，獲得結(jié)晶物；將結(jié)晶物加入純化水或乙醇洗滌，得到[0004]申請公布日為2014年4月23日，申請公布號為CN10379585A的中國發(fā)明專利申請，萃取以及濃縮分離過程。[0005]上述兩篇專利公開的大麻二酚的提取方法在一定程度上提高了大麻二酚的純度，但是大麻二酚的純度還不夠高，而且在大麻二酚中四氫大麻酚的含量較高。發(fā)明內(nèi)容[0006]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種提高大麻二酚純度、降低四氫大麻酚含量的大麻二酚富集方法。[0007]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案為：[0009]S1、將大麻花葉在120℃~30MPa的條件下二氧化碳超臨界萃取1～9小時，回收二氧化碳，得大麻花葉初提物；CN107011125B說明書2/7頁5[0012]S4、用水、甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮和氯仿中的一種或它們中任意幾種的混合液進行梯度洗脫或等度洗脫；收集富含大麻二酚的洗脫段次。[0013]在本發(fā)明提供的富集大麻二酚的方法中，優(yōu)選地，采用濕法上樣前先用1BV的磷酸[0014]在本發(fā)明提供的富集大麻二酚的方法中，優(yōu)選地，所述步驟S4包括如下步驟：[0019]5)用2～6BV的65%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液V;[0020]6)用2～6BV的75%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液VI;[0021]7)用2～6BV的85%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液V;[0022]8)用2～6BV的95%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液VⅢ;[0023]收集洗出液IV、V和VI;將洗出液IV和VI合并，濃縮至相對密度為1.1～1.4,上樣于層析硅膠柱進行層析，用2～3BV的65%(v/v)的乙醇溶液進行洗脫，得洗出液IX,將洗出液IX與洗出液V合并，旋轉(zhuǎn)蒸干，得大麻二酚粗品。[0024]在本發(fā)明提供的富集大麻二酚的方法中，優(yōu)選地，采用濕法上樣前先用1BV的磷酸緩沖液柱平衡，再用2BV的10%(v/v)甲醇水溶液進行柱平衡。[0025]在本發(fā)明提供的富集大麻二酚的方法中，優(yōu)選地，所述步驟S4包括如下步驟：[0026]1)用3～5BV的甲醇：水=30:70(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液I;[0027]2)用2～5BV的甲醇：水=50:50(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液Ⅱ;[0028]3)用3～5BV的甲醇：水=60:40(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液Ⅲ;[0029]4)用2～4BV的甲醇：水=70:30(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液IV;[0030]5)用2～5BV的甲醇：水=80:20(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液V;[0031]6)用2～5BV的甲醇：水=90:10(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液VI;[0032]7)再用100%(v/v)甲醇進行洗柱；[0033]收集洗出液Ⅲ、IV和V;將洗出液Ⅲ和V合并后濃縮至相對密度1.1～1.4,上樣于層析硅膠柱進行層析，用2～3BV的甲醇：水=80:20(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液VⅡ,將洗出液VⅡ與洗出液IV合并，旋轉(zhuǎn)蒸干，得大麻二酚粗品。[0034]在本發(fā)明提供的富集大麻二酚的方法中，優(yōu)選地，將大麻二酚粗品按上樣量3~15wt%,向裝填大孔吸附樹脂并預處理后的層析柱上樣，上樣結(jié)束后用超純水洗脫2～4BV;再用水：乙醇：二甲基亞砜=25:74:1(v/v)洗脫3～5BV,收集洗脫液，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸干，得大麻二酚。[0035]在本發(fā)明提供的富集大麻二酚的方法中，優(yōu)選地，所述填料為苯乙烯大孔吸附樹脂或?qū)游龉枘z。[0037]采用上述技術(shù)方案，使用一次二氧化碳超臨界萃取和一次柱層析就可以將大麻二酚的含量提高至39.53%以上，四氫大麻酚降低至0.22%以下；將經(jīng)過一次二氧化碳超臨界6萃取和一次柱層析所得到的大麻二酚粗品再經(jīng)一次柱層析，就能將大麻二酚的含量提高至88.56%以上，四氫大麻酚降低至0.06%以下；在第二次柱層析中，二甲基亞砜對提高大麻二酚和降低四氫大麻酚的含量起著至關(guān)重要的作用。具體實施方式[0038]下面對本發(fā)明的具體實施方式作進一步說明。在此需要說明的是，對于這些實施方式的說明用于幫助理解本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限定。此外，下面所描述的本發(fā)明各個實施方式中所涉及的技術(shù)特征只要彼此之間未構(gòu)成沖突就可以相互組合。[0040]本實施例提供了一種富集大麻二酚的方法，包括如下步驟：氧化碳超臨界萃取2小時，回收二氧化碳，得大麻花葉初提物；[0042]S2、將大麻花葉初提物溶解于10倍重量的乙醇中，再將溶液冷卻至0℃,保持溫度[0043]S3、在層析柱中裝入已經(jīng)預先處理好的D101大孔吸附樹脂，先用1BV的磷酸緩沖液柱平衡，再用2BV的10%(v/v)乙醇溶液進行柱平衡；將步驟S2中精細過濾所得的大麻花葉初提物用乙醇溶解，按上樣量為5wt%上樣于層析柱中；[0044]S4、用不同濃度的乙醇溶液按如下步驟進行洗脫：[0045]1)用4BV的25%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液I;[0046]2)用3BV的35%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液Ⅱ;[0047]3)用5BV的45%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液Ⅲ;[0048]4)用2BV的55%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液IV;[0049]5)用3BV的65%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液V;[0050]6)用3BV的75%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液VI;[0051]7)用3BV的85%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液V;[0052]8)用3BV的95%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液VⅢ;[0053]收集洗出液IV、V和VI;將洗出液IV和VI合并，濃縮至相對密度為1.8,上樣于層析硅膠柱進行層析，用3BV的65%(v/v)的乙醇溶液進行洗脫，得洗出液IX,將洗出液IX與洗出[0054]實施例2[0055]本實施例提供了一種富集大麻二酚的方法，包括如下步驟：氧化碳超臨界萃取7小時，回收二氧化碳，得大麻花葉初提物；[0057]S2、將大麻花葉初提物溶解于10倍重量的甲醇中，將溶液冷卻至0℃,保持溫度不[0058]S3、在層析柱中裝入已經(jīng)預先處理好的AB-8大孔吸附樹脂，先用1BV的磷酸緩沖液柱平衡，再用2BV的甲醇：水=15:85(v/v)的溶液進行柱平衡；將步驟S2中精細過濾所得的大麻花葉初提物用甲醇溶解，按上樣量為5wt%上樣于層析柱中；[0059]S4、用不同濃度的甲醇溶液按如下步驟進行洗脫：7[0060]1)用4BV的甲醇：水=30:70(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液I;[0061]2)用3BV的甲醇：水=50:50(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液Ⅱ;[0062]3)用5BV的甲醇：水=60:40(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液Ⅲ;[0063]4)用2BV的甲醇：水=70:30(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液IV;[0064]5)用3BV的甲醇：水=80:20(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液V;[0065]6)用3BV的甲醇：水=90:10(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液VI;[0066]7)用3BV的100%(v/v)甲醇進行洗柱；[0067]收集洗出液Ⅲ、IV和V;將洗出液Ⅲ和V合并后濃縮至相對密度1.6,上樣于層析硅膠柱進行層析，用2BV的甲醇：水=80:20(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液VⅡ,將洗出液VⅡ與洗出液IV合并，旋轉(zhuǎn)蒸干，得大麻二酚粗品。[0068]實施例3[0069]本實施例提供了一種富集大麻二酚的方法，包括如下步驟：[0070]S1、將大麻花葉在120℃條件下干燥4小時，粉碎至70目，在45℃、30MPa的條件下二氧化碳超臨界萃取9小時，回收二氧化碳，得大麻花葉初提物；[0071]S2、將大麻花葉初提物溶解于10倍重量的甲醇中，將溶液冷卻至0℃,保持溫度不變，并靜置12小時，精細過濾除去雜質(zhì)，蒸干溶劑，備用；[0072]S3、在層析柱中裝入已經(jīng)預先處理好的HPD-100A大孔吸附樹脂，先用1BV的磷酸緩沖液柱平衡，再用2BV的甲醇：水=35:65(v/v)的溶液進行柱平衡；將步驟S2中精細過濾所得的大麻花葉初提物用甲醇溶解，按上樣量為6wt%上樣于層析柱中；[0073]S4、用甲醇：水=75:25(v/v)的溶液進行等度洗脫，HPLC分析大麻二酚含量降低至含量小于30%時，用100%甲醇洗柱。[0074]實施例4[0075]本實施例提供了一種富集大麻二酚的方法，包括如下步驟：[0076]S1、將大麻花葉在120℃條件下干燥3小時，粉碎至80目，在52℃、30MPa的條件下二氧化碳超臨界萃取8小時，回收二氧化碳，得大麻花葉初提物；[0077]S2、將大麻花葉初提物溶解于8倍重量的乙醇中，再將溶液冷卻至0℃,保持溫度不變，靜置10小時，精細過濾去除雜質(zhì)，蒸干溶劑后備用；[0078]S3、在層析柱中裝入已經(jīng)預先處理好的DA201大孔吸附樹脂，先用1BV的磷酸緩沖液柱平衡，再用2BV的15%(v/v)乙醇溶液進行柱平衡；將步驟S2中精細過濾所得的大麻花葉初提物用乙醇溶解，按上樣量為10wt%上樣于層析柱中；[0079]S4、用不同濃度的乙醇溶液按如下步驟進行洗脫：[0080]1)用3BV的25%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液I;[0081]2)用2BV的35%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液Ⅱ;[0082]3)用2BV的45%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液Ⅲ;[0083]4)用3BV的55%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液IV;[0084]5)用3BV的65%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液V;[0085]6)用2BV的75%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液VI;[0086]7)用3BV的85%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液VⅡ;[0087]8)用3BV的95%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液VⅢ;8[0088]收集洗出液IV、V和VI;將洗出液IV和VI合并，濃縮至相對密度為1.6,上樣于層析硅膠柱進行層析，用2BV的65%(v/v)的乙醇溶液進行洗脫，得洗出液IX,將洗出液IX與洗出[0089]S5、將大麻二酚粗品按上樣量5wt%,向裝填大孔吸附樹脂并預處理后的層析柱上樣，上樣結(jié)束后用超純水洗脫4BV;再用水：乙醇：二甲基亞砜=25:74:1(v/v)洗脫3BV,收集[0091]本實施例提供了一種富集大麻二酚的方法，包括如下步驟：氧化碳超臨界萃取8小時，回收二氧化碳，得大麻花葉初提物；[0093]S2、將大麻花葉初提物溶解于9倍重量的甲醇中，將溶液冷卻至0℃,保持溫度不[0094]S3、在層析柱中裝入已經(jīng)預先處理好的AB-8大孔吸附樹脂，先用1BV的磷酸緩沖液柱平衡，再用2BV的甲醇：水=10:90(v/v)的溶液進行柱平衡；將步驟S2中精細過濾所得的大麻花葉初提物用甲醇溶解，按上樣量為5wt%上樣于層析柱中；[0095]S4、用不同濃度的甲醇溶液按如下步驟進行洗脫：[0096]1)用3BV的甲醇：水=30:70(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液I;[0097]2)用2BV的甲醇：水=50:50(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液Ⅱ;[0098]3)用5BV的甲醇：水=60:40(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液Ⅲ;[0099]4)用3BV的甲醇：水=70:30(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液IV;[0100]5)用3BV的甲醇：水=80:20(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液V;[0101]6)用4BV的甲醇：水=90:10(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液VI;[0102]7)用3BV的100%(v/v)甲醇溶液進行洗柱；[0103]收集洗出液Ⅲ、IV和V;將洗出液Ⅲ和V合并后濃縮至相對密度1.8,上樣于層析硅膠柱進行層析，用2BV的甲醇：水=80:20(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液VⅡ,將洗出液VⅡ[0104]S5、將大麻二酚粗品按上樣量6wt%,向裝填大孔吸附樹脂并預處理后的層析柱上樣，上樣結(jié)束后用超純水洗脫2BV;再用水：乙醇：二甲基亞砜=25:74:1(v/v)洗脫5BV,收集[0106]本實施例提供了一種富集大麻二酚的方法，包括如下步驟：氧化碳超臨界萃取8小時，回收二氧化碳，得大麻花葉初提物；[0108]S2、將大麻花葉初提物溶解于8倍重量的乙醇中，再將溶液冷卻至0℃,保持溫度不[0109]S3、在層析柱中裝入已經(jīng)預先處理好的DA201大孔吸附樹脂，先用1BV的磷酸緩沖液柱平衡，再用2BV的15%(v/v)乙醇溶液進行柱平衡；將步驟S2中精細過濾所得的大麻花葉初提物用乙醇溶解，按上樣量為6wt%上樣于層析柱中；[0110]S4、用不同濃度的乙醇溶液按如下步驟進行洗脫：9[0111]1)用3BV的25%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液I;[0112]2)用2BV的35%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液Ⅱ;[0113]3)用2BV的45%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液Ⅲ;[0114]4)用3BV的55%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液IV;[0115]5)用3BV的65%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液V;[0116]6)用2BV的75%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液VI;[0117]7)用3BV的85%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液VI;[0118]8)用3BV的95%(v/v)乙醇溶液進行洗脫，得洗出液VⅢ;[0119]收集洗出液IV、V和VI;將洗出液IV和VI合并，濃縮至相對密度為1.2,上樣于層析硅膠柱進行層析，用2BV的65%(v/v)的乙醇溶液進行洗脫，得洗出液IX,將洗出液IX與洗出液V合并，旋轉(zhuǎn)蒸干，得大麻二酚粗品。[0120]S5、將大麻二酚粗品按上樣量5wt%,向裝填大孔吸附樹脂并預處理后的層析柱上樣，上樣結(jié)束后用超純水洗脫4BV;再用水：乙醇=25:75(v/v)洗脫3BV,收集洗脫液，將洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸干，得大麻二酚。[0121]實施例7[0122]本實施例提供了一種富集大麻二酚的方法，包括如下步驟：[0123]S1、將大麻花葉在120℃條件下干燥2小時，粉碎至65目，在46℃、25MPa的條件下二氧化碳超臨界萃取8小時，回收二氧化碳，得大麻花葉初提物；[0124]S2、將大麻花葉初提物溶解于9倍重量的甲醇中，將溶液冷卻至0℃,保持溫度不[0125]S3、在層析柱中裝入已經(jīng)預先處理好的AB-8大孔吸附樹脂，先用1BV的磷酸緩沖液柱平衡，再用2BV的甲醇：水=10:90(v/v)的溶液進行柱平衡；將步驟S2中精細過濾所得的大麻花葉初提物用甲醇溶解，按上樣量為5wt%上樣于層析柱中；[0126]S4、用不同濃度的甲醇溶液按如下步驟進行洗脫：[0127]1)用3BV的甲醇：水=30:70(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液I;[0128]2)用2BV的甲醇：水=50:50(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液Ⅱ;[0129]3)用5BV的甲醇：水=60:40(v/v)的溶液進行洗脫，得洗出液Ⅲ;[013