實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中抗原特異性Th17細(xì)胞分化調(diào)控機(jī)制的深度剖析一、引言1.1研究背景與意義葡萄膜炎是一種常見(jiàn)的眼部炎癥性疾病，也是全球范圍內(nèi)導(dǎo)致失明的重要原因之一，約占致盲總數(shù)的10%-25%。它主要累及葡萄膜、視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜血管及玻璃體，具有病程長(zhǎng)、易復(fù)發(fā)、發(fā)病機(jī)制復(fù)雜等特點(diǎn)。根據(jù)病因，葡萄膜炎可分為感染性和非感染性，其中非感染性葡萄膜炎被認(rèn)為主要由自身免疫反應(yīng)介導(dǎo)。由于人類葡萄膜炎的研究受到病源和倫理等因素的限制，實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（ExperimentalAutoimmuneUveitis，EAU）動(dòng)物模型成為研究葡萄膜炎發(fā)病機(jī)制的重要工具。EAU可模擬人類自身免疫性葡萄膜炎，其特點(diǎn)是自身免疫性T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)到易感動(dòng)物的眼部葡萄膜中，導(dǎo)致視網(wǎng)膜受到炎癥細(xì)胞跨越血液-視網(wǎng)膜屏障的直接浸潤(rùn)或?qū)せ畹囊暰W(wǎng)膜色素上皮的間接影響，最終造成光感受器細(xì)胞從視網(wǎng)膜色素上皮脫落，引發(fā)視網(wǎng)膜變性和視覺(jué)功能障礙。輔助性T細(xì)胞17（T-helpertype17，Th17）是一種新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞群，在自身免疫和炎癥疾病中發(fā)揮著廣泛作用。Th17細(xì)胞主要分泌白細(xì)胞介素17（IL-17）、IL-22等炎性細(xì)胞因子，在機(jī)體對(duì)抗細(xì)胞外細(xì)菌和霉菌的免疫反應(yīng)中扮演重要角色。然而，當(dāng)Th17細(xì)胞的功能失調(diào)時(shí)，也會(huì)引發(fā)過(guò)度的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生。越來(lái)越多的研究表明，Th17細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子在多種自身免疫性疾病，如多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病等的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。在這些疾病中，Th17細(xì)胞通過(guò)分泌IL-17等細(xì)胞因子，激活其他免疫細(xì)胞，如中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，引發(fā)炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致組織損傷和病理改變。在EAU中，Th17細(xì)胞同樣被認(rèn)為發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，EAU模型動(dòng)物體內(nèi)Th17細(xì)胞數(shù)量增加，且其分泌的IL-17等細(xì)胞因子水平升高，這些變化與炎癥的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。IL-17可以促進(jìn)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，增加血管通透性，誘導(dǎo)其他促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而加劇眼部炎癥反應(yīng)，破壞眼內(nèi)免疫穩(wěn)態(tài)。因此，深入研究Th17細(xì)胞在EAU中的分化調(diào)控機(jī)制，對(duì)于揭示葡萄膜炎的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。從治療角度來(lái)看，目前非感染性葡萄膜炎的治療主要依賴長(zhǎng)期使用系統(tǒng)性皮質(zhì)類固醇或免疫抑制劑。然而，這些傳統(tǒng)治療方法常常伴隨諸多副作用，如引發(fā)白內(nèi)障、青光眼等眼部并發(fā)癥，以及骨質(zhì)疏松、糖尿病等全身并發(fā)癥。而且，部分患者對(duì)這些傳統(tǒng)治療方法反應(yīng)不佳，病情難以得到有效控制。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)新的治療策略。由于Th17細(xì)胞在EAU發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵作用，靶向Th17細(xì)胞及其相關(guān)信號(hào)通路成為治療葡萄膜炎的一個(gè)極具潛力的方向。通過(guò)深入了解Th17細(xì)胞的分化調(diào)控機(jī)制，可以為開(kāi)發(fā)更加安全、有效的治療方法提供理論基礎(chǔ)，有望為葡萄膜炎患者帶來(lái)新的治療希望，改善他們的視力和生活質(zhì)量。綜上所述，研究實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中抗原特異性Th17細(xì)胞的分化調(diào)控具有重要的理論和臨床意義。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在國(guó)外，對(duì)EAU的研究開(kāi)展較早且深入。早在20世紀(jì)70年代，就有學(xué)者成功建立了EAU動(dòng)物模型，此后不斷有研究對(duì)模型的建立方法、發(fā)病機(jī)制等進(jìn)行完善和探索。關(guān)于Th17細(xì)胞在EAU中的作用，國(guó)外研究起步也相對(duì)較早。如在2006年，就有研究發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞及其分泌的IL-17在EAU的發(fā)病過(guò)程中顯著升高，且與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。后續(xù)研究進(jìn)一步揭示，Th17細(xì)胞通過(guò)分泌多種炎性細(xì)胞因子，如IL-17、IL-22等，招募和激活其他免疫細(xì)胞，破壞眼內(nèi)免疫穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致葡萄膜和視網(wǎng)膜的炎癥損傷。例如，IL-17可以促進(jìn)中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞向眼部組織浸潤(rùn)，增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附分子表達(dá)，從而使更多炎癥細(xì)胞進(jìn)入眼內(nèi)；IL-22則可以直接作用于眼部組織細(xì)胞，誘導(dǎo)其產(chǎn)生更多的炎性介質(zhì)，加重炎癥反應(yīng)。此外，國(guó)外研究還關(guān)注到Th17細(xì)胞分化的調(diào)控機(jī)制，發(fā)現(xiàn)TGF-β、IL-6、IL-23等細(xì)胞因子在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中起著關(guān)鍵的誘導(dǎo)和促進(jìn)作用。其中，TGF-β和IL-6協(xié)同作用，可以誘導(dǎo)初始CD4+T細(xì)胞表達(dá)RORγt轉(zhuǎn)錄因子，從而促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化；IL-23雖然不直接參與Th17細(xì)胞的初始分化，但可以維持Th17細(xì)胞的存活和功能，促進(jìn)其分泌更多的炎性細(xì)胞因子。在國(guó)內(nèi)，隨著對(duì)自身免疫性疾病研究的重視，對(duì)EAU和Th17細(xì)胞的研究也逐漸增多。國(guó)內(nèi)學(xué)者在EAU動(dòng)物模型的建立方面進(jìn)行了多種嘗試，優(yōu)化了免疫原的選擇、免疫方法等，提高了模型的成功率和穩(wěn)定性。在Th17細(xì)胞與EAU關(guān)系的研究上，國(guó)內(nèi)也取得了一些成果。有研究通過(guò)對(duì)EAU小鼠模型的研究，發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-23等在眼部組織中的表達(dá)水平明顯升高，且與炎癥程度密切相關(guān)。同時(shí)，國(guó)內(nèi)研究還關(guān)注到Th17細(xì)胞分化調(diào)控的其他方面，如微小RNA（miRNA）對(duì)Th17細(xì)胞分化的調(diào)控作用。一些miRNA可以通過(guò)靶向作用于Th17細(xì)胞分化相關(guān)的信號(hào)通路或轉(zhuǎn)錄因子，影響Th17細(xì)胞的分化和功能。例如，miR-155可以通過(guò)上調(diào)RORγt的表達(dá)，促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化；而miR-146a則可以通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路，抑制Th17細(xì)胞的分化。然而，目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中抗原特異性Th17細(xì)胞的分化調(diào)控研究仍存在一些不足和空白。在Th17細(xì)胞分化的上游信號(hào)通路方面，雖然已經(jīng)明確了一些關(guān)鍵的細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子，但對(duì)于它們之間復(fù)雜的相互作用網(wǎng)絡(luò)以及這些信號(hào)通路如何精確調(diào)控Th17細(xì)胞的分化，仍有待深入研究。例如，TGF-β和IL-6信號(hào)通路在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中是如何協(xié)同作用的，其中是否存在其他未知的調(diào)節(jié)因子參與，目前尚不清楚。在Th17細(xì)胞分化的表觀遺傳調(diào)控方面，雖然已經(jīng)有研究表明DNA甲基化、組蛋白修飾等表觀遺傳修飾參與了Th17細(xì)胞的分化調(diào)控，但具體的調(diào)控機(jī)制和相關(guān)的靶點(diǎn)基因仍有待進(jìn)一步探索。此外，關(guān)于抗原特異性Th17細(xì)胞在EAU中的致病機(jī)制，目前的研究還不夠全面和深入，對(duì)于它們?nèi)绾巫R(shí)別和結(jié)合眼部抗原，以及在炎癥微環(huán)境中如何進(jìn)一步活化和發(fā)揮致病作用，還需要更多的研究來(lái)闡明。在治療靶點(diǎn)的研究方面，雖然靶向Th17細(xì)胞及其相關(guān)信號(hào)通路為葡萄膜炎的治療提供了新的方向，但目前還缺乏特異性高、副作用小的治療靶點(diǎn)和藥物。因此，深入研究實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中抗原特異性Th17細(xì)胞的分化調(diào)控，對(duì)于填補(bǔ)這些研究空白，揭示葡萄膜炎的發(fā)病機(jī)制，開(kāi)發(fā)新的治療方法具有重要意義。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)本研究將綜合運(yùn)用多種實(shí)驗(yàn)方法，深入探究實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中抗原特異性Th17細(xì)胞的分化調(diào)控機(jī)制。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方面，選用特定品系的小鼠，如B10.RIII小鼠或C57BL/6小鼠，通過(guò)皮下注射光受體視黃醇類結(jié)合蛋白（IRBP）與完全弗氏佐劑的混合乳劑構(gòu)建EAU動(dòng)物模型。在免疫過(guò)程中，嚴(yán)格控制免疫原的劑量、注射次數(shù)和時(shí)間間隔，并給予腹腔注射白喉毒素，以增強(qiáng)免疫效果。注射完成后，利用裂隙燈、眼底鏡等設(shè)備定期觀察小鼠眼部的臨床表現(xiàn)，包括結(jié)膜充血、前房混濁、虹膜后粘連、眼底視網(wǎng)膜水腫充血等情況并詳細(xì)記錄。在免疫后的特定時(shí)間點(diǎn)，處死小鼠并取出眼球，制作病理切片，通過(guò)蘇木精-伊紅（H-E）染色，在光鏡下觀察視網(wǎng)膜、葡萄膜等眼部組織的病理變化，如炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)紊亂、血管周圍炎等，并參照標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分系統(tǒng)對(duì)炎癥程度進(jìn)行量化評(píng)分。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)將從小鼠脾臟中提取CD4+T細(xì)胞，采用密度梯度離心法和免疫磁珠分選技術(shù)，以獲得高純度的細(xì)胞。將分選后的初始CD4+T細(xì)胞置于含有IRBP抗原的細(xì)胞培養(yǎng)板中，在不同的細(xì)胞因子組合條件下進(jìn)行體外培養(yǎng)，模擬Th17細(xì)胞的分化環(huán)境。設(shè)置對(duì)照組和多個(gè)實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組分別加入轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、IL-23、IL-27、全反式維A酸（ATRA）等細(xì)胞因子，以研究它們對(duì)Th17細(xì)胞分化的影響。培養(yǎng)一定時(shí)間后，收集細(xì)胞和上清液，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)IL-17的表達(dá)水平，以確定Th17細(xì)胞的分化比例；通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)培養(yǎng)上清液中IL-17、IL-22等Th17相關(guān)細(xì)胞因子的濃度，評(píng)估Th17細(xì)胞的功能狀態(tài)。在分子生物學(xué)技術(shù)方面，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)檢測(cè)Th17細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，如RORγt、RORα等的mRNA表達(dá)水平，明確細(xì)胞因子對(duì)這些轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的調(diào)控作用。采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路相關(guān)蛋白的磷酸化水平，如STAT3、Smad等，以揭示Th17細(xì)胞分化過(guò)程中的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。此外，構(gòu)建相關(guān)基因的過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和小干擾RNA（siRNA），通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將其導(dǎo)入CD4+T細(xì)胞，調(diào)控特定基因的表達(dá)，進(jìn)一步驗(yàn)證基因在Th17細(xì)胞分化中的功能。本研究的創(chuàng)新之處主要體現(xiàn)在多個(gè)方面。在研究角度上，聚焦于抗原特異性Th17細(xì)胞的分化調(diào)控，相比于以往對(duì)Th17細(xì)胞整體的研究，更加精準(zhǔn)地針對(duì)在EAU發(fā)病中起關(guān)鍵作用的抗原特異性Th17細(xì)胞，有助于深入理解其在疾病發(fā)生發(fā)展中的獨(dú)特機(jī)制。在研究?jī)?nèi)容上，不僅關(guān)注經(jīng)典的細(xì)胞因子和信號(hào)通路對(duì)Th17細(xì)胞分化的調(diào)控，還將探索一些新的調(diào)控因素，如非編碼RNA、表觀遺傳修飾等對(duì)Th17細(xì)胞分化的影響，有望發(fā)現(xiàn)新的調(diào)控靶點(diǎn)和機(jī)制。在研究方法上，綜合運(yùn)用多種先進(jìn)技術(shù)，如單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)，從單細(xì)胞水平解析Th17細(xì)胞的異質(zhì)性和分化軌跡；蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，全面分析Th17細(xì)胞分化過(guò)程中的蛋白質(zhì)表達(dá)變化，為研究提供更豐富、全面的數(shù)據(jù)支持。通過(guò)這些創(chuàng)新點(diǎn)，本研究有望在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中抗原特異性Th17細(xì)胞的分化調(diào)控研究領(lǐng)域取得新的突破，為葡萄膜炎的治療提供更具針對(duì)性的理論依據(jù)和治療靶點(diǎn)。二、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎與Th17細(xì)胞概述2.1實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎2.1.1疾病簡(jiǎn)介與發(fā)病機(jī)制實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）是一種器官特異性的、T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，常被用作研究人類自身免疫性葡萄膜炎發(fā)病機(jī)制和治療方法的動(dòng)物模型。EAU主要累及葡萄膜、視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜血管及玻璃體，可導(dǎo)致眼部出現(xiàn)一系列癥狀。在疾病早期，常表現(xiàn)為結(jié)膜充血，即眼部結(jié)膜血管擴(kuò)張，呈現(xiàn)紅色，這是炎癥反應(yīng)的常見(jiàn)表現(xiàn)，表明眼部組織已受到炎癥刺激。隨著病情發(fā)展，會(huì)出現(xiàn)前房混濁，前房?jī)?nèi)原本清晰的房水變得混濁，這是由于炎癥細(xì)胞和蛋白滲出到前房所致，影響光線通過(guò)，進(jìn)而影響視力。虹膜后粘連也是常見(jiàn)癥狀之一，虹膜與晶狀體表面發(fā)生粘連，導(dǎo)致瞳孔形狀不規(guī)則，這不僅會(huì)影響瞳孔的正常功能，還可能進(jìn)一步引發(fā)其他眼部并發(fā)癥。眼底視網(wǎng)膜水腫充血同樣是EAU的重要癥狀，視網(wǎng)膜血管擴(kuò)張充血，組織液滲出導(dǎo)致視網(wǎng)膜水腫，影響視網(wǎng)膜的正常功能，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致視網(wǎng)膜脫離，造成視力嚴(yán)重下降甚至失明。EAU的發(fā)病機(jī)制主要是由T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫反應(yīng)。當(dāng)機(jī)體的免疫系統(tǒng)誤將眼部自身抗原，如視網(wǎng)膜S抗原、光感受器視黃醇類結(jié)合蛋白（IRBP）等識(shí)別為外來(lái)抗原時(shí)，免疫反應(yīng)被異常激活。首先，抗原呈遞細(xì)胞（APC），如樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）攝取這些眼部自身抗原，并將其加工處理成抗原肽片段。然后，這些抗原肽片段與APC表面的主要組織相容性復(fù)合體（MHC）分子結(jié)合，形成MHC-抗原肽復(fù)合物。接著，表達(dá)特定T細(xì)胞受體（TCR）的初始CD4+T細(xì)胞識(shí)別APC表面的MHC-抗原肽復(fù)合物，并在共刺激信號(hào)和細(xì)胞因子的作用下被激活。激活后的初始CD4+T細(xì)胞開(kāi)始增殖、分化，其中一部分分化為效應(yīng)T細(xì)胞。在EAU中，Th1和Th17細(xì)胞是兩種重要的效應(yīng)T細(xì)胞亞群。Th1細(xì)胞主要分泌干擾素-γ（IFN-γ）等細(xì)胞因子，IFN-γ可以激活巨噬細(xì)胞，使其釋放多種炎性介質(zhì)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等，這些炎性介質(zhì)進(jìn)一步促進(jìn)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致眼部組織損傷。Th17細(xì)胞則主要分泌白細(xì)胞介素-17（IL-17）、IL-22等炎性細(xì)胞因子。IL-17可以招募中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞到炎癥部位，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。它還能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子，促進(jìn)炎癥細(xì)胞穿越血管壁進(jìn)入眼部組織。同時(shí)，IL-17可以刺激眼部組織細(xì)胞產(chǎn)生更多的炎性介質(zhì)，如趨化因子，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)。IL-22也可以作用于眼部組織細(xì)胞，影響細(xì)胞的功能和代謝，導(dǎo)致組織損傷。此外，Th17細(xì)胞還可以與其他免疫細(xì)胞相互作用，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的強(qiáng)度和方向。在EAU的發(fā)病過(guò)程中，Th1和Th17細(xì)胞相互協(xié)同，共同導(dǎo)致眼部的炎癥損傷。除了Th1和Th17細(xì)胞外，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）在維持免疫平衡中也起著重要作用。Treg細(xì)胞可以通過(guò)分泌抑制性細(xì)胞因子，如IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，抑制效應(yīng)T細(xì)胞的活化和功能，從而減輕炎癥反應(yīng)。然而，在EAU中，Treg細(xì)胞的功能可能受到抑制，導(dǎo)致其無(wú)法有效發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，使得炎癥反應(yīng)失控?？傊?，EAU的發(fā)病機(jī)制是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，涉及多種免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子的相互作用，打破了眼部的免疫平衡，最終導(dǎo)致眼部組織的炎癥損傷。2.1.2常用動(dòng)物模型構(gòu)建與評(píng)價(jià)在研究實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）時(shí)，常用的動(dòng)物模型包括小鼠、大鼠等，其中以小鼠模型應(yīng)用最為廣泛。以小鼠為例，構(gòu)建EAU小鼠模型常用的方法是IRBP誘導(dǎo)法。首先，準(zhǔn)備純度和質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)要求的IRBP肽。將IRBP肽與弗氏完全佐劑（FCA）按1:1體積比充分混合，制成均勻的乳化液。選擇6-8周齡、體重18-24g的B10.RIII品系小鼠，將小鼠進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境，減少應(yīng)激反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)小鼠實(shí)行單籠飼養(yǎng)，每籠1只，確保其生活環(huán)境安靜、清潔，溫度和濕度適宜。對(duì)小鼠進(jìn)行麻醉后，選擇頸背部、兩側(cè)腹肋部和尾根部共4個(gè)注射點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)皮下注射0.05mlIRBP乳化液，確保注射均勻，避免局部積液。在皮下注射IRBP乳化液后，立即進(jìn)行腹腔注射1.0μg百日咳毒素，注射時(shí)注意操作輕柔，避免損傷小鼠內(nèi)臟。對(duì)照組小鼠在相同部位皮下注射等體積的磷酸鹽緩沖溶液（PBS），不注射IRBP乳化液和百日咳毒素。對(duì)于構(gòu)建好的EAU動(dòng)物模型，需要進(jìn)行全面的評(píng)價(jià)。在臨床觀察方面，從造模當(dāng)天起，每日通過(guò)裂隙燈顯微鏡觀察小鼠眼前節(jié)情況，詳細(xì)記錄角膜是否出現(xiàn)混濁、水腫，虹膜的顏色、形態(tài)是否異常，前房?jī)?nèi)是否有滲出物等炎癥表現(xiàn)。使用直接眼底鏡觀察小鼠眼后段情況，記錄視網(wǎng)膜是否有水腫、出血、滲出，視網(wǎng)膜血管的形態(tài)是否改變，玻璃體是否混濁等病變情況。在病理檢查方面，一般在免疫后第14天，將小鼠處死，取出眼球。對(duì)眼球進(jìn)行固定、脫水、包埋、切片，并進(jìn)行蘇木精-伊紅（H-E）染色。參照Caspi等的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)病理切片進(jìn)行評(píng)分：0.5分表示局部單核細(xì)胞浸潤(rùn)至視網(wǎng)膜；1分表示單核細(xì)胞浸潤(rùn)至血管旁及玻璃體腔；2分表示視網(wǎng)膜內(nèi)肉芽腫形成，閉塞性血管炎伴視網(wǎng)膜脫離，光感受器層丟失；3分表示上述病變伴視網(wǎng)膜色素上皮層內(nèi)肉芽腫，視網(wǎng)膜下新生血管；4分表示3分的病變侵犯更深更廣范圍。通過(guò)臨床觀察和病理檢查的綜合評(píng)價(jià)，可以準(zhǔn)確判斷EAU動(dòng)物模型的成功與否以及炎癥的嚴(yán)重程度，為后續(xù)研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。2.2Th17細(xì)胞2.2.1Th17細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)與特性Th17細(xì)胞作為一種獨(dú)特的輔助性T細(xì)胞亞群，其發(fā)現(xiàn)歷程在免疫學(xué)領(lǐng)域具有重要意義。在20世紀(jì)，免疫學(xué)家普遍認(rèn)為輔助性T細(xì)胞主要分為Th1和Th2兩類，Th1細(xì)胞主要分泌干擾素-γ（IFN-γ）等細(xì)胞因子，介導(dǎo)細(xì)胞免疫，在抵御細(xì)胞內(nèi)病原體感染和自身免疫性疾病中發(fā)揮作用；Th2細(xì)胞則主要分泌白細(xì)胞介素-4（IL-4）、IL-5等細(xì)胞因子，參與體液免疫，與過(guò)敏反應(yīng)等相關(guān)。然而，隨著研究的深入，一些現(xiàn)象無(wú)法用Th1/Th2細(xì)胞理論來(lái)解釋。例如，在某些自身免疫性疾病中，即使阻斷Th1和Th2細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子，炎癥反應(yīng)仍然持續(xù)存在。2005年，清華大學(xué)免疫學(xué)研究所董晨教授與CaseyTWeaver教授共同發(fā)現(xiàn)了Th17細(xì)胞。在此之前，已有研究表明白細(xì)胞介素-17（IL-17）與自身免疫疾病，尤其是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎密切相關(guān)。董晨教授團(tuán)隊(duì)通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)IL-17的分泌細(xì)胞在發(fā)育上獨(dú)立于Th1和Th2細(xì)胞，具有獨(dú)特的基因表達(dá)譜。他們發(fā)現(xiàn)Icos基因敲除小鼠不會(huì)發(fā)生膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎，且IL-17在ICOS缺失小鼠中顯著減少，而IFN-γ和TNFα表達(dá)量沒(méi)有差別，這表明IL-17的調(diào)控不同于IFN-γ。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Ifng、Tbx21、Il4、Stat6等基因缺陷小鼠，其Th1和Th2細(xì)胞發(fā)育存在障礙，但I(xiàn)L-17的分泌并不受到影響。同時(shí)，DanCua的研究小組表明IL-23可以擴(kuò)增表達(dá)IL-17的T細(xì)胞，而IL-12可以選擇性擴(kuò)增表達(dá)IFN-γ的細(xì)胞（Th1）。這些研究結(jié)果共同表明，存在一類新型的輔助性T細(xì)胞，即Th17細(xì)胞，其以分泌IL-17為主要特征。Th17細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)打破了免疫學(xué)家二十多年來(lái)對(duì)輔助性T細(xì)胞只有Th1和Th2兩類的認(rèn)知，開(kāi)啟了免疫學(xué)研究的新領(lǐng)域。Th17細(xì)胞具有獨(dú)特的特性，其標(biāo)志性轉(zhuǎn)錄因子為維甲酸相關(guān)孤核受體γt（RORγt）。RORγt在Th17細(xì)胞的分化過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，它可以調(diào)控一系列與Th17細(xì)胞功能相關(guān)基因的表達(dá)。在小鼠體內(nèi)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）和IL-6發(fā)揮協(xié)同作用，刺激T細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞向Th17分化。Th17細(xì)胞主要分泌IL-17家族成員，如IL-17A、IL-17F等。IL-17A是Th17細(xì)胞分泌的主要效應(yīng)細(xì)胞因子之一，它可以通過(guò)與多種細(xì)胞表面的IL-17受體結(jié)合，激活下游信號(hào)通路，如核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路。這些信號(hào)通路的激活可以誘導(dǎo)上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等分泌多種促炎細(xì)胞因子，如IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、趨化因子（如CXCL1、CXCL8）等。IL-6可以進(jìn)一步促進(jìn)炎癥反應(yīng)的放大，激活其他免疫細(xì)胞；TNF-α可以直接損傷組織細(xì)胞，破壞組織的正常結(jié)構(gòu)和功能；趨化因子則可以招募中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞到炎癥部位，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。此外，Th17細(xì)胞還分泌IL-22、IL-21等細(xì)胞因子。IL-22可以作用于上皮細(xì)胞，促進(jìn)上皮細(xì)胞增殖和產(chǎn)生抗菌肽，在維持黏膜屏障功能和抵御病原體感染中發(fā)揮作用。IL-21則可以調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞自身的分化和增殖，同時(shí)也可以影響其他免疫細(xì)胞的功能。總之，Th17細(xì)胞通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子，在炎癥反應(yīng)和自身免疫疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。2.2.2Th17細(xì)胞在自身免疫疾病中的作用Th17細(xì)胞在多種自身免疫疾病中扮演著關(guān)鍵的致病角色。在多發(fā)性硬化癥（MS）中，MS是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫性疾病，以神經(jīng)髓鞘脫失和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)為主要病理特征。在MS的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）小鼠模型中，Th17細(xì)胞被證實(shí)是介導(dǎo)病理學(xué)的關(guān)鍵T細(xì)胞群。在EAE早期，共表達(dá)αβ和γδTCR的T細(xì)胞被招募到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，這些高度活化的T細(xì)胞通過(guò)提供IL-17而充當(dāng)炎癥反應(yīng)的初始觸發(fā)器。IL-17可以促進(jìn)血腦屏障的破壞，使得炎癥細(xì)胞更容易進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。它還能激活小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞，使其釋放更多的炎性介質(zhì)，如一氧化氮（NO）、TNF-α等，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞損傷和髓鞘脫失。研究表明，阻斷IL-17信號(hào)通路可以顯著減輕EAE小鼠的癥狀，減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和髓鞘脫失的程度。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）中，RA是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎為主要特征的自身免疫性疾病，可導(dǎo)致關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、畸形，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。Th17細(xì)胞及其分泌的IL-17在RA的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。在RA患者的滑膜組織中，Th17細(xì)胞數(shù)量明顯增加，且IL-17的表達(dá)水平升高。IL-17可以刺激滑膜成纖維細(xì)胞增殖，促進(jìn)其分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs），如MMP-1、MMP-3等。這些MMPs可以降解關(guān)節(jié)軟骨和基質(zhì)中的膠原蛋白、蛋白聚糖等成分，導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨破壞和骨質(zhì)侵蝕。IL-17還可以招募中性粒細(xì)胞到關(guān)節(jié)滑膜，中性粒細(xì)胞釋放的活性氧（ROS）和蛋白水解酶等物質(zhì)進(jìn)一步加重關(guān)節(jié)炎癥和組織損傷。同時(shí)，IL-17可以協(xié)同其他炎癥因子，如TNF-α、IL-1β等，放大炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致慢性組織破壞。在炎癥性腸?。↖BD）中，包括潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病，IBD是一組以腸道慢性炎癥為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病，其發(fā)病機(jī)制涉及遺傳、環(huán)境、免疫等多種因素?；顒?dòng)性潰瘍性結(jié)腸炎或克羅恩病患者的血清和炎癥粘膜中IL-17的表達(dá)顯著增加。對(duì)結(jié)腸炎小鼠模型的研究表明，由Th17細(xì)胞和/或固有淋巴細(xì)胞（ILC）產(chǎn)生的IL-17在慢性腸道炎癥中起著關(guān)鍵作用。IL-17可以破壞腸道黏膜屏障功能，導(dǎo)致腸道通透性增加，使得腸道內(nèi)的病原體和抗原更容易進(jìn)入機(jī)體，引發(fā)免疫反應(yīng)。它還能促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子，招募炎癥細(xì)胞到腸道組織，導(dǎo)致腸道炎癥的發(fā)生和發(fā)展。然而，IL-17與IL-22在限制腸道真菌和細(xì)菌感染方面也起到保護(hù)作用，這表明Th17細(xì)胞在IBD中的作用具有復(fù)雜性。雖然Th17細(xì)胞在大多數(shù)情況下與自身免疫疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，但在某些情況下，它也可能具有免疫調(diào)節(jié)的作用。在一些慢性炎癥過(guò)程中，Th17細(xì)胞可以轉(zhuǎn)化為分泌IL-10的調(diào)節(jié)性Th17細(xì)胞。IL-10是一種重要的抗炎細(xì)胞因子，它可以抑制其他免疫細(xì)胞的活化和功能，如抑制Th1和Th2細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子分泌，抑制巨噬細(xì)胞的活化和炎性介質(zhì)釋放。調(diào)節(jié)性Th17細(xì)胞通過(guò)分泌IL-10，可以減輕炎癥反應(yīng)，對(duì)自身免疫疾病的發(fā)展起到一定的抑制作用。此外，Th17細(xì)胞與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）之間存在相互作用和平衡關(guān)系。在正常生理狀態(tài)下，Treg細(xì)胞可以抑制Th17細(xì)胞的分化和功能，維持免疫穩(wěn)態(tài)。然而，在自身免疫疾病中，這種平衡可能被打破，導(dǎo)致Th17細(xì)胞功能亢進(jìn)，引發(fā)炎癥反應(yīng)。但在某些情況下，Th17細(xì)胞也可能通過(guò)與Treg細(xì)胞的相互作用，促進(jìn)Treg細(xì)胞的功能，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用?？傊?，Th17細(xì)胞在自身免疫疾病中的作用具有雙重性，既可以作為致病因素促進(jìn)疾病的發(fā)展，也可能在一定條件下參與免疫調(diào)節(jié)，影響疾病的進(jìn)程。三、抗原特異性Th17細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中的分化過(guò)程3.1初始T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化的啟動(dòng)信號(hào)3.1.1TCR信號(hào)的激活初始T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化的起始步驟是T細(xì)胞受體（TCR）信號(hào)的激活。TCR是T細(xì)胞表面特異性識(shí)別抗原的受體，由α和β兩條鏈組成，其可變區(qū)能夠識(shí)別抗原呈遞細(xì)胞（APC）表面的抗原肽-主要組織相容性復(fù)合體（MHC）復(fù)合物。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中，眼部的自身抗原，如光感受器視黃醇類結(jié)合蛋白（IRBP）等，被APC攝取、加工處理后，以抗原肽的形式與APC表面的MHC-II類分子結(jié)合，形成抗原肽-MHC-II復(fù)合物。當(dāng)初始CD4+T細(xì)胞表面的TCR與APC表面的抗原肽-MHC-II復(fù)合物特異性結(jié)合時(shí)，TCR的構(gòu)象發(fā)生改變，引發(fā)一系列的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)事件。TCR胞內(nèi)部分較短，需要借助CD3分子將刺激信號(hào)傳到細(xì)胞內(nèi)部。CD3分子由γ、δ、ε、ζ四種鏈組成，其中ζ鏈含有多個(gè)免疫受體酪氨酸活化基序（ITAM）。當(dāng)TCR與抗原肽-MHC-II復(fù)合物結(jié)合后，CD3分子的ζ鏈發(fā)生聚集，使得Lck、Fyn等蛋白酪氨酸激酶（PTK）被激活。激活的PTK使ζ鏈上的ITAM酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化。磷酸化的ITAM能夠招募ZAP-70激酶，ZAP-70被激活后，進(jìn)一步激活下游的磷脂酶C-γ（PLC-γ）等信號(hào)分子。PLC-γ水解磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2），生成三磷酸肌醇（IP3）和二酰甘油（DAG）。IP3能夠促使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放鈣離子，使細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高。升高的鈣離子與鈣調(diào)蛋白結(jié)合，激活鈣調(diào)磷酸酶，進(jìn)而使轉(zhuǎn)錄因子NF-AT去磷酸化，進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)。DAG則激活蛋白激酶C（PKC），PKC通過(guò)激活Ras-Raf-MEK-ERK等信號(hào)通路，使轉(zhuǎn)錄因子AP-1激活，進(jìn)入細(xì)胞核，與NF-AT協(xié)同作用，調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。TCR信號(hào)的激活對(duì)于Th17細(xì)胞的分化至關(guān)重要。它不僅啟動(dòng)了初始T細(xì)胞的活化過(guò)程，還為后續(xù)的分化提供了必要的信號(hào)基礎(chǔ)。研究表明，TCR信號(hào)的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間會(huì)影響初始T細(xì)胞的分化方向。適度的TCR信號(hào)刺激有利于初始T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化，而過(guò)強(qiáng)或過(guò)弱的TCR信號(hào)可能導(dǎo)致初始T細(xì)胞向其他T細(xì)胞亞群分化。例如，在體外實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)調(diào)整抗原肽的濃度來(lái)改變TCR信號(hào)的強(qiáng)度，發(fā)現(xiàn)當(dāng)抗原肽濃度適中時(shí)，初始CD4+T細(xì)胞在細(xì)胞因子的作用下更傾向于分化為Th17細(xì)胞；而當(dāng)抗原肽濃度過(guò)高或過(guò)低時(shí)，Th17細(xì)胞的分化比例明顯降低。此外，TCR信號(hào)還可以通過(guò)影響細(xì)胞內(nèi)的代謝途徑，為Th17細(xì)胞的分化提供能量和物質(zhì)基礎(chǔ)。激活的TCR信號(hào)會(huì)促使初始T細(xì)胞從糖酵解途徑轉(zhuǎn)向脂肪酸氧化途徑，以滿足Th17細(xì)胞分化過(guò)程中對(duì)能量和生物合成的需求?？傊?，TCR信號(hào)的激活是初始T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化的起始關(guān)鍵步驟，其通過(guò)復(fù)雜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，調(diào)控基因表達(dá)和細(xì)胞代謝，影響Th17細(xì)胞的分化命運(yùn)。3.1.2共刺激信號(hào)的協(xié)同作用除了TCR信號(hào)外，共刺激信號(hào)在初始T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化的啟動(dòng)過(guò)程中也起著不可或缺的協(xié)同作用。共刺激信號(hào)主要由APC表面的共刺激分子與T細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合提供。在眾多共刺激分子中，CD28是最為重要的一種。CD28分子是T細(xì)胞表面的同源二聚體糖蛋白，其配體為APC表面的B7-1（CD80）和B7-2（CD86）。當(dāng)TCR與抗原肽-MHC-II復(fù)合物結(jié)合后，T細(xì)胞表面的CD28分子與APC表面的B7分子結(jié)合，形成CD28-B7共刺激信號(hào)。CD28-B7共刺激信號(hào)可以通過(guò)多種途徑促進(jìn)初始T細(xì)胞的活化和Th17細(xì)胞的分化。從細(xì)胞增殖角度來(lái)看，CD28-B7共刺激信號(hào)能夠促進(jìn)T細(xì)胞表達(dá)白細(xì)胞介素-2（IL-2）及其受體IL-2R。IL-2是一種重要的T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，它與IL-2R結(jié)合后，通過(guò)激活JAK-STAT信號(hào)通路，促進(jìn)T細(xì)胞的增殖。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，充足的細(xì)胞增殖是分化得以進(jìn)行的基礎(chǔ)，更多的初始T細(xì)胞能夠在后續(xù)細(xì)胞因子等因素的作用下有機(jī)會(huì)分化為Th17細(xì)胞。在基因表達(dá)調(diào)控方面，CD28-B7共刺激信號(hào)可以激活磷脂酰肌醇3激酶（PI3K），PI3K通過(guò)激活下游的AKT等信號(hào)分子，使轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活化。活化的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。這些基因包括與Th17細(xì)胞分化密切相關(guān)的細(xì)胞因子基因、轉(zhuǎn)錄因子基因等。例如，NF-κB可以促進(jìn)IL-6、IL-23等細(xì)胞因子基因的表達(dá)，而這些細(xì)胞因子對(duì)于Th17細(xì)胞的分化至關(guān)重要。IL-6和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）協(xié)同作用，能夠誘導(dǎo)初始T細(xì)胞表達(dá)維甲酸相關(guān)孤核受體γt（RORγt），從而促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化。IL-23雖然不直接參與Th17細(xì)胞的初始分化，但可以維持Th17細(xì)胞的存活和功能，促進(jìn)其分泌更多的炎性細(xì)胞因子。此外，CD28-B7共刺激信號(hào)還可以增強(qiáng)T細(xì)胞的代謝活性。它可以促進(jìn)T細(xì)胞攝取葡萄糖、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，增強(qiáng)糖酵解、脂肪酸合成等代謝途徑，為T細(xì)胞的活化和分化提供充足的能量和物質(zhì)基礎(chǔ)。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，需要大量的能量和生物合成原料來(lái)支持細(xì)胞的增殖和功能發(fā)揮，CD28-B7共刺激信號(hào)通過(guò)增強(qiáng)代謝活性，滿足了這一需求?？傊珻D28-B7共刺激信號(hào)與TCR信號(hào)相互協(xié)同，從細(xì)胞增殖、基因表達(dá)調(diào)控和細(xì)胞代謝等多個(gè)方面，共同促進(jìn)初始T細(xì)胞向Th17細(xì)胞的分化啟動(dòng)。三、抗原特異性Th17細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中的分化過(guò)程3.2細(xì)胞因子對(duì)Th17細(xì)胞分化的調(diào)控3.2.1關(guān)鍵促分化細(xì)胞因子（IL-6、TGF-β、IL-23等）在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，白細(xì)胞介素6（IL-6）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）發(fā)揮著協(xié)同啟動(dòng)的關(guān)鍵作用。IL-6是一種多功能細(xì)胞因子，由多種細(xì)胞產(chǎn)生，如巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等。在EAU中，當(dāng)抗原呈遞細(xì)胞攝取眼部自身抗原后，被激活并分泌IL-6。IL-6通過(guò)與初始CD4+T細(xì)胞表面的IL-6受體結(jié)合，激活下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）?；罨腟TAT3發(fā)生磷酸化，進(jìn)入細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。其中，STAT3可以誘導(dǎo)Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子維甲酸相關(guān)孤核受體γt（RORγt）和維甲酸相關(guān)孤核受體α（RORα）的表達(dá)。RORγt和RORα是Th17細(xì)胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，它們可以調(diào)控一系列與Th17細(xì)胞功能相關(guān)基因的表達(dá)，從而促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化。TGF-β同樣是一種重要的細(xì)胞因子，在Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞分化中發(fā)揮重要作用。當(dāng)激活的初始CD4+T細(xì)胞在僅TGF-β作用下，會(huì)分化為Foxp3+Treg細(xì)胞；而在TGF-β和IL-6的聯(lián)合誘導(dǎo)下，則會(huì)分化為Th17細(xì)胞。TGF-β主要通過(guò)激活Smad信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮作用。TGF-β與初始CD4+T細(xì)胞表面的TGF-β受體結(jié)合，使受體激酶活化，進(jìn)而磷酸化Smad2和Smad3蛋白。磷酸化的Smad2和Smad3與Smad4形成復(fù)合物，進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。TGF-β可以上調(diào)IL-23受體（IL-23R）的表達(dá)水平，從而促進(jìn)Th17細(xì)胞分化。同時(shí)，TGF-β還能促進(jìn)ForkheadboxP3（Foxp3）和RORγt的表達(dá)。然而，F(xiàn)oxp3會(huì)抑制RORγt的表達(dá)。因此，當(dāng)TGF-β濃度過(guò)高時(shí)，會(huì)誘導(dǎo)高水平的Foxp3表達(dá)，以拮抗轉(zhuǎn)錄因子RORγt的分化促進(jìn)作用，從而抑制Th17細(xì)胞的分化。不過(guò)，F(xiàn)oxp3的作用會(huì)受到IL-6和IL-21的抑制。在EAU中，TGF-β和IL-6的協(xié)同作用至關(guān)重要，它們通過(guò)復(fù)雜的信號(hào)通路和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，共同促進(jìn)初始CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化。IL-23雖然不直接參與Th17細(xì)胞的早期分化，但在Th17細(xì)胞的擴(kuò)增和功能維持階段發(fā)揮著不可或缺的作用。IL-23是一種異二聚體細(xì)胞因子，由p19和EBI3兩個(gè)亞基組成。在EAU中，抗原呈遞細(xì)胞在攝取和處理眼部自身抗原后，會(huì)分泌IL-23。IL-23與Th17細(xì)胞表面的IL-23受體結(jié)合，激活JAK-STAT信號(hào)通路。具體來(lái)說(shuō)，IL-23與受體結(jié)合后，導(dǎo)致Jak2和Tyk2的磷酸化，從而促進(jìn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子1（STAT1）、STAT3、STAT4和STAT5的磷酸化。其中，STAT3的激活對(duì)于IL-23維持Th17細(xì)胞的功能和促進(jìn)其分泌炎性細(xì)胞因子至關(guān)重要。IL-23可以促進(jìn)Th17細(xì)胞的增殖，維持細(xì)胞亞群的穩(wěn)定性。在自身免疫性疾病的機(jī)制中，IL-23是促進(jìn)Th17細(xì)胞引起的免疫病理?yè)p傷的重要效應(yīng)因子。它可以與TGF-β、IL-6和IL-21一起上調(diào)Th17細(xì)胞表面的IL-23R的表達(dá)，并促進(jìn)IL-17A、IL-17F和IL-22的產(chǎn)生。在EAU模型中，阻斷IL-23信號(hào)通路可以顯著減輕眼部炎癥反應(yīng)，減少Th17細(xì)胞的數(shù)量和活性，表明IL-23在EAU中Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥過(guò)程中起著關(guān)鍵作用?？傊琁L-6、TGF-β和IL-23等細(xì)胞因子在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中相互協(xié)同，通過(guò)不同的信號(hào)通路和作用階段，共同調(diào)控Th17細(xì)胞的分化、增殖和功能發(fā)揮。3.2.2抑制性細(xì)胞因子（IL-27等）白細(xì)胞介素27（IL-27）作為一種重要的抑制性細(xì)胞因子，在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵的負(fù)調(diào)控作用。IL-27主要由抗原呈遞細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等產(chǎn)生。它是一種異二聚體細(xì)胞因子，由EBI3和p28這兩個(gè)亞基構(gòu)成。IL-27通過(guò)由gp130和IL27Rα（也稱為WSX-1或TCCR）組成的受體復(fù)合物發(fā)出信號(hào)，激活下游的JAK-STAT信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮生物學(xué)作用。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，IL-27可以抑制初始CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞的分化。其分子機(jī)制主要涉及對(duì)信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控。一方面，IL-27激活STAT1信號(hào)通路。當(dāng)IL-27與初始CD4+T細(xì)胞表面的受體復(fù)合物結(jié)合后，使JAK激酶活化，進(jìn)而磷酸化STAT1?；罨腟TAT1進(jìn)入細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，抑制Th17細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)。例如，STAT1可以抑制RORγt的表達(dá)，RORγt是Th17細(xì)胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，其表達(dá)受到抑制后，Th17細(xì)胞的分化進(jìn)程也會(huì)受到阻礙。另一方面，IL-27可以通過(guò)抑制STAT3的磷酸化來(lái)抑制Th17細(xì)胞分化。在正常情況下，IL-6等促分化細(xì)胞因子通過(guò)激活STAT3，促進(jìn)Th17細(xì)胞分化。而IL-27可以干擾IL-6介導(dǎo)的STAT3激活過(guò)程，減少STAT3的磷酸化水平。具體來(lái)說(shuō)，IL-27可能通過(guò)與IL-6競(jìng)爭(zhēng)受體相關(guān)的信號(hào)分子，或者激活其他抑制性信號(hào)通路，來(lái)抑制STAT3的磷酸化。STAT3磷酸化水平降低后，其對(duì)Th17細(xì)胞分化相關(guān)基因的促進(jìn)作用減弱，從而抑制Th17細(xì)胞的分化。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型中，研究發(fā)現(xiàn)給予外源性IL-27可以顯著減輕眼部炎癥反應(yīng)。進(jìn)一步研究表明，IL-27的抗炎作用與抑制Th17細(xì)胞分化密切相關(guān)。在IL-27處理的EAU小鼠中，Th17細(xì)胞的數(shù)量明顯減少，其分泌的炎性細(xì)胞因子，如IL-17、IL-22等水平也顯著降低。這表明IL-27通過(guò)抑制Th17細(xì)胞分化，減少了Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，從而對(duì)EAU起到保護(hù)作用。此外，IL-27還可以促進(jìn)初始CD4+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，以維持免疫系統(tǒng)的平衡。在EAU中，這種免疫平衡的調(diào)節(jié)對(duì)于控制炎癥反應(yīng)、保護(hù)眼部組織具有重要意義。總之，IL-27作為一種抑制性細(xì)胞因子，通過(guò)復(fù)雜的分子機(jī)制抑制Th17細(xì)胞分化，在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中發(fā)揮著重要的免疫調(diào)節(jié)作用。3.3轉(zhuǎn)錄因子在Th17細(xì)胞分化中的關(guān)鍵作用3.3.1RORγt的核心調(diào)控維甲酸相關(guān)孤核受體γt（RORγt）作為Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子，在Th17細(xì)胞的分化和功能中起著無(wú)可替代的核心調(diào)控作用。RORγt由Rorc基因編碼，其表達(dá)水平與Th17細(xì)胞的分化程度密切相關(guān)。在初始CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化的過(guò)程中，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）和白細(xì)胞介素6（IL-6）發(fā)揮協(xié)同作用，刺激T細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt的表達(dá)。具體而言，IL-6通過(guò)激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3），使其發(fā)生磷酸化，進(jìn)入細(xì)胞核，與RORγt基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進(jìn)RORγt的轉(zhuǎn)錄。TGF-β則通過(guò)激活Smad信號(hào)通路，使Smad2和Smad3蛋白磷酸化，與Smad4形成復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核，與RORγt基因的相關(guān)調(diào)控區(qū)域相互作用，也促進(jìn)RORγt的表達(dá)。RORγt可以調(diào)控一系列與Th17細(xì)胞功能相關(guān)基因的表達(dá)。它能夠直接結(jié)合到IL-17A、IL-17F、IL-22等Th17細(xì)胞特征性細(xì)胞因子基因的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子區(qū)域，促進(jìn)這些基因的轉(zhuǎn)錄，從而促使Th17細(xì)胞分泌大量的炎性細(xì)胞因子，發(fā)揮其在炎癥反應(yīng)中的作用。研究表明，敲除Rorc基因，導(dǎo)致RORγt缺失后，Th17細(xì)胞的分化受到顯著抑制，IL-17等細(xì)胞因子的分泌也明顯減少。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）模型中，RORγt缺陷的小鼠Th17細(xì)胞數(shù)量大幅降低，EAE的癥狀也明顯減輕，說(shuō)明RORγt對(duì)于Th17細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展至關(guān)重要。此外，RORγt還可以通過(guò)調(diào)控Th17細(xì)胞表面的細(xì)胞因子受體表達(dá)，影響Th17細(xì)胞對(duì)其他細(xì)胞因子的反應(yīng)。例如，RORγt可以促進(jìn)Th17細(xì)胞表面IL-23受體（IL-23R）的表達(dá)，使得Th17細(xì)胞能夠更好地對(duì)IL-23作出反應(yīng)，維持其功能和穩(wěn)定性。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中，RORγt同樣發(fā)揮著核心調(diào)控作用。當(dāng)眼部自身抗原激活免疫反應(yīng)，在TGF-β和IL-6等細(xì)胞因子的作用下，初始CD4+T細(xì)胞表達(dá)RORγt，進(jìn)而分化為Th17細(xì)胞。這些Th17細(xì)胞在RORγt的調(diào)控下，分泌IL-17等細(xì)胞因子，導(dǎo)致眼部炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展。阻斷RORγt的功能，有望抑制Th17細(xì)胞的分化和功能，從而減輕EAU的炎癥癥狀?？傊?，RORγt在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中處于核心地位，通過(guò)復(fù)雜的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，決定了Th17細(xì)胞的分化命運(yùn)和功能發(fā)揮。3.3.2其他轉(zhuǎn)錄因子的協(xié)同與調(diào)節(jié)除了RORγt，其他轉(zhuǎn)錄因子如Foxp3、T-bet等在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中也與RORγt存在相互作用，共同對(duì)Th17細(xì)胞的分化發(fā)揮協(xié)同或調(diào)節(jié)作用。ForkheadboxP3（Foxp3）是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的特異性轉(zhuǎn)錄因子，在免疫調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，F(xiàn)oxp3與RORγt之間存在復(fù)雜的相互關(guān)系。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）在Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞分化中發(fā)揮重要作用。當(dāng)激活的初始CD4+T細(xì)胞在僅TGF-β作用下，會(huì)分化為Foxp3+Treg細(xì)胞；而在TGF-β和白細(xì)胞介素6（IL-6）的聯(lián)合誘導(dǎo)下，則會(huì)分化為Th17細(xì)胞。TGF-β可以上調(diào)Foxp3和RORγt的表達(dá)。然而，F(xiàn)oxp3會(huì)抑制RORγt的表達(dá)。當(dāng)TGF-β濃度過(guò)高時(shí)，會(huì)誘導(dǎo)高水平的Foxp3表達(dá)，以拮抗轉(zhuǎn)錄因子RORγt的分化促進(jìn)作用，從而抑制Th17細(xì)胞的分化。不過(guò)，F(xiàn)oxp3的作用會(huì)受到IL-6和白細(xì)胞介素21（IL-21）的抑制。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中，這種Foxp3與RORγt之間的平衡關(guān)系對(duì)于維持眼部免疫穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。如果Foxp3表達(dá)不足，無(wú)法有效抑制RORγt，可能導(dǎo)致Th17細(xì)胞過(guò)度分化，引發(fā)過(guò)度的炎癥反應(yīng)，加重EAU的病情；反之，如果Foxp3表達(dá)過(guò)高，過(guò)度抑制RORγt，可能影響機(jī)體正常的免疫防御功能。T-box轉(zhuǎn)錄因子（T-bet）是Th1細(xì)胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子，在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中也有重要影響。T-bet與RORγt之間存在相互拮抗的關(guān)系。在初始CD4+T細(xì)胞分化過(guò)程中，T-bet的表達(dá)會(huì)抑制RORγt的表達(dá)，從而抑制Th17細(xì)胞的分化，促進(jìn)Th1細(xì)胞的分化。反之，RORγt也可以抑制T-bet的表達(dá)，減少Th1細(xì)胞的分化。在炎癥環(huán)境中，細(xì)胞因子的變化會(huì)影響T-bet和RORγt的表達(dá)平衡。例如，干擾素-γ（IFN-γ）是Th1細(xì)胞分泌的主要細(xì)胞因子，它可以激活T-bet的表達(dá)，進(jìn)而抑制RORγt，減少Th17細(xì)胞的分化。而在Th17細(xì)胞占優(yōu)勢(shì)的炎癥微環(huán)境中，RORγt的高表達(dá)會(huì)抑制T-bet，使得Th1細(xì)胞的分化受到抑制。在EAU中，Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞都參與了炎癥過(guò)程。T-bet和RORγt之間的相互調(diào)節(jié)作用決定了Th1細(xì)胞和Th17細(xì)胞的分化比例，進(jìn)而影響炎癥的發(fā)展方向和程度。如果T-bet的表達(dá)相對(duì)較高，Th1細(xì)胞分化增多，可能導(dǎo)致以Th1細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)為主；如果RORγt的表達(dá)占優(yōu)勢(shì)，Th17細(xì)胞分化增多，則以Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)為主。因此，T-bet和RORγt之間的相互作用在EAU的發(fā)病機(jī)制中起著重要的調(diào)節(jié)作用?？傊?，F(xiàn)oxp3、T-bet等轉(zhuǎn)錄因子與RORγt相互作用，通過(guò)復(fù)雜的調(diào)節(jié)機(jī)制，共同影響Th17細(xì)胞的分化，在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎的免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。四、影響抗原特異性Th17細(xì)胞分化的因素4.1免疫細(xì)胞的相互作用4.1.1樹(shù)突狀細(xì)胞對(duì)Th17細(xì)胞分化的影響樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）作為體內(nèi)功能最強(qiáng)的專職抗原呈遞細(xì)胞，在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中發(fā)揮著不可或缺的作用。DC能夠高效地?cái)z取、加工和呈遞抗原，啟動(dòng)初始T細(xì)胞的活化，為Th17細(xì)胞的分化提供關(guān)鍵的抗原信號(hào)。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中，眼部的自身抗原，如光感受器視黃醇類結(jié)合蛋白（IRBP）等，被DC攝取。DC通過(guò)其表面的模式識(shí)別受體（PRR），如Toll樣受體（TLR）等，識(shí)別抗原相關(guān)分子模式（PAMP），從而激活DC。激活后的DC開(kāi)始成熟，其表面的MHC-II類分子、共刺激分子（如CD80、CD86）等表達(dá)上調(diào)。MHC-II類分子將加工后的抗原肽呈遞給初始CD4+T細(xì)胞表面的T細(xì)胞受體（TCR），形成TCR-抗原肽-MHC-II復(fù)合物，啟動(dòng)TCR信號(hào)。同時(shí)，DC表面上調(diào)表達(dá)的共刺激分子CD80、CD86與初始CD4+T細(xì)胞表面的CD28分子結(jié)合，提供共刺激信號(hào)。TCR信號(hào)和共刺激信號(hào)的協(xié)同作用，使得初始CD4+T細(xì)胞被激活，為其向Th17細(xì)胞分化奠定基礎(chǔ)。除了提供抗原信號(hào)和共刺激信號(hào)外，DC還通過(guò)分泌細(xì)胞因子對(duì)Th17細(xì)胞分化產(chǎn)生重要影響。在炎癥環(huán)境下，DC可以分泌多種細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素6（IL-6）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）、IL-23等。IL-6和TGF-β在Th17細(xì)胞分化的啟動(dòng)階段發(fā)揮關(guān)鍵作用。DC分泌的IL-6與初始CD4+T細(xì)胞表面的IL-6受體結(jié)合，激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）?；罨腟TAT3發(fā)生磷酸化，進(jìn)入細(xì)胞核，與相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，促進(jìn)Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子維甲酸相關(guān)孤核受體γt（RORγt）和維甲酸相關(guān)孤核受體α（RORα）的表達(dá)。TGF-β則通過(guò)激活Smad信號(hào)通路，使Smad2和Smad3蛋白磷酸化，與Smad4形成復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核，與RORγt基因的相關(guān)調(diào)控區(qū)域相互作用，促進(jìn)RORγt的表達(dá)。IL-23雖然不直接參與Th17細(xì)胞的早期分化，但在Th17細(xì)胞的擴(kuò)增和功能維持階段至關(guān)重要。DC分泌的IL-23與Th17細(xì)胞表面的IL-23受體結(jié)合，激活JAK-STAT信號(hào)通路，促進(jìn)Th17細(xì)胞的增殖，維持細(xì)胞亞群的穩(wěn)定性，促進(jìn)其分泌炎性細(xì)胞因子。此外，DC還可以通過(guò)分泌其他細(xì)胞因子，如IL-1β等，協(xié)同促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化。IL-1β可以增強(qiáng)IL-6和TGF-β對(duì)Th17細(xì)胞分化的誘導(dǎo)作用，進(jìn)一步促進(jìn)RORγt的表達(dá)和Th17細(xì)胞的分化?？傊?，樹(shù)突狀細(xì)胞通過(guò)攝取、加工和呈遞抗原，以及分泌細(xì)胞因子等多種方式，在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用。4.1.2巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用巨噬細(xì)胞作為重要的免疫細(xì)胞，在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中也發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。巨噬細(xì)胞可以通過(guò)分泌細(xì)胞因子和與T細(xì)胞相互作用等方式，影響Th17細(xì)胞的分化。在炎癥環(huán)境中，巨噬細(xì)胞被激活后，能夠分泌多種細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子在Th17細(xì)胞分化中具有重要作用。巨噬細(xì)胞可以分泌IL-6、IL-1β、IL-23等促炎細(xì)胞因子。IL-6和IL-1β在Th17細(xì)胞分化的啟動(dòng)階段發(fā)揮協(xié)同作用。IL-6通過(guò)激活STAT3信號(hào)通路，促進(jìn)RORγt和RORα等Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，從而促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化。IL-1β可以增強(qiáng)IL-6的作用，進(jìn)一步促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化。研究表明，在體外培養(yǎng)初始CD4+T細(xì)胞時(shí)，加入IL-6和IL-1β，可以顯著提高Th17細(xì)胞的分化比例。IL-23雖然不參與Th17細(xì)胞的初始分化，但可以維持Th17細(xì)胞的功能和穩(wěn)定性。巨噬細(xì)胞分泌的IL-23與Th17細(xì)胞表面的IL-23受體結(jié)合，激活JAK-STAT信號(hào)通路，促進(jìn)Th17細(xì)胞的增殖，維持細(xì)胞亞群的穩(wěn)定性，促進(jìn)其分泌炎性細(xì)胞因子，如IL-17、IL-22等。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型中，阻斷IL-23信號(hào)通路，可以顯著減輕眼部炎癥反應(yīng)，減少Th17細(xì)胞的數(shù)量和活性，表明巨噬細(xì)胞分泌的IL-23在Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。巨噬細(xì)胞還可以通過(guò)與T細(xì)胞直接相互作用來(lái)調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞的分化。巨噬細(xì)胞表面表達(dá)的主要組織相容性復(fù)合體（MHC）-II類分子可以將抗原肽呈遞給T細(xì)胞表面的T細(xì)胞受體（TCR），啟動(dòng)TCR信號(hào)，激活T細(xì)胞。同時(shí)，巨噬細(xì)胞表面的共刺激分子，如CD80、CD86等，與T細(xì)胞表面的CD28分子結(jié)合，提供共刺激信號(hào)，協(xié)同促進(jìn)T細(xì)胞的活化。此外，巨噬細(xì)胞還可以通過(guò)分泌細(xì)胞外囊泡（EVs）與T細(xì)胞進(jìn)行通訊。EVs是一種納米級(jí)別的膜泡，攜帶了巨噬細(xì)胞的蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)等生物分子。巨噬細(xì)胞來(lái)源的EVs可以將其攜帶的信號(hào)分子傳遞給T細(xì)胞，影響T細(xì)胞的功能和分化。研究發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞來(lái)源的EVs可以促進(jìn)初始CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化，其機(jī)制可能與EVs攜帶的細(xì)胞因子、miRNA等信號(hào)分子有關(guān)。例如，EVs中含有的miR-155可以通過(guò)靶向作用于Th17細(xì)胞分化相關(guān)的信號(hào)通路或轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化?？傊?，巨噬細(xì)胞通過(guò)分泌細(xì)胞因子和與T細(xì)胞相互作用等多種方式，對(duì)Th17細(xì)胞的分化發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。4.2信號(hào)通路的調(diào)控4.2.1MAPK信號(hào)通路絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。該通路主要包括p38、ERK1/2、JNK等成員，它們通過(guò)級(jí)聯(lián)反應(yīng)傳遞信號(hào)，影響細(xì)胞的多種生物學(xué)功能。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，這些MAPK信號(hào)通路成員被不同的刺激激活，進(jìn)而調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞的分化相關(guān)基因表達(dá)和細(xì)胞因子分泌。p38MAPK信號(hào)通路在Th17細(xì)胞分化中具有重要作用。研究表明，細(xì)胞外刺激，如脂多糖（LPS）、細(xì)胞因子等，可以激活p38MAPK信號(hào)通路。當(dāng)p38MAPK被激活后，它可以通過(guò)磷酸化下游的轉(zhuǎn)錄因子，如ATF2、Elk-1等，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，p38MAPK信號(hào)通路可以促進(jìn)Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt的表達(dá)。通過(guò)抑制p38MAPK的活性，RORγt的表達(dá)會(huì)受到抑制，進(jìn)而減少Th17細(xì)胞的分化。p38MAPK還可以調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的分泌。它可以促進(jìn)IL-17、IL-22等細(xì)胞因子的產(chǎn)生，增強(qiáng)Th17細(xì)胞的炎性效應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型中，阻斷p38MAPK信號(hào)通路可以顯著減輕眼部炎癥反應(yīng)，減少Th17細(xì)胞的數(shù)量和活性，表明p38MAPK信號(hào)通路在EAU中Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。ERK1/2MAPK信號(hào)通路也參與了Th17細(xì)胞分化的調(diào)控。在初始CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化的過(guò)程中，ERK1/2可以被T細(xì)胞受體（TCR）信號(hào)、共刺激信號(hào)等激活。激活的ERK1/2通過(guò)磷酸化下游的轉(zhuǎn)錄因子，如AP-1等，調(diào)節(jié)基因表達(dá)。ERK1/2MAPK信號(hào)通路可以促進(jìn)Th17細(xì)胞的增殖。在體外實(shí)驗(yàn)中，抑制ERK1/2的活性可以減少Th17細(xì)胞的數(shù)量，表明ERK1/2在Th17細(xì)胞的增殖過(guò)程中起著重要作用。ERK1/2還可以調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。它可以促進(jìn)IL-17等細(xì)胞因子的產(chǎn)生，增強(qiáng)Th17細(xì)胞的功能。然而，ERK1/2MAPK信號(hào)通路對(duì)Th17細(xì)胞分化的調(diào)控作用較為復(fù)雜，在不同的實(shí)驗(yàn)條件下可能會(huì)產(chǎn)生不同的結(jié)果。在某些情況下，ERK1/2的激活可能會(huì)抑制Th17細(xì)胞的分化，這可能與ERK1/2對(duì)其他信號(hào)通路或轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)有關(guān)。JNKMAPK信號(hào)通路同樣在Th17細(xì)胞分化中發(fā)揮作用。JNK可以被多種刺激激活，如細(xì)胞應(yīng)激、細(xì)胞因子等。激活的JNK通過(guò)磷酸化下游的轉(zhuǎn)錄因子，如c-Jun等，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，JNKMAPK信號(hào)通路可以促進(jìn)Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的分泌。研究表明，抑制JNK的活性可以減少IL-17等細(xì)胞因子的產(chǎn)生，表明JNK在Th17細(xì)胞的炎性效應(yīng)中起著重要作用。JNK還可以調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞的存活和凋亡。在一定程度上，JNK的激活可以促進(jìn)Th17細(xì)胞的存活，抑制其凋亡。然而，過(guò)度激活JNK可能會(huì)導(dǎo)致Th17細(xì)胞的凋亡增加，這可能與JNK對(duì)細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)節(jié)有關(guān)?？傊?，p38、ERK1/2、JNK等MAPK信號(hào)通路在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中通過(guò)不同的機(jī)制發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，它們的異常激活或抑制可能會(huì)影響Th17細(xì)胞的分化、增殖和功能，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎的發(fā)生發(fā)展。4.2.2NF-κB信號(hào)通路核因子-κB（NF-κB）信號(hào)通路在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中具有關(guān)鍵的調(diào)控作用，其激活機(jī)制和對(duì)Th17細(xì)胞分化相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響十分復(fù)雜。在靜息狀態(tài)下，NF-κB二聚體與抑制蛋白IκB結(jié)合，以無(wú)活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)細(xì)胞受到多種刺激，如促炎細(xì)胞因子（如白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子α（TNF-α））、病原體相關(guān)分子模式（PAMPs）等時(shí)，IκB激酶（IKK）復(fù)合物被激活。IKK復(fù)合物由IKKα、IKKβ和調(diào)節(jié)亞基NEMO組成。激活的IKKβ磷酸化IκB蛋白上的特定絲氨酸殘基，使IκB發(fā)生泛素化修飾，隨后被蛋白酶體降解。NF-κB二聚體得以釋放，進(jìn)入細(xì)胞核，與靶基因啟動(dòng)子區(qū)域的κB位點(diǎn)結(jié)合，啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，NF-κB信號(hào)通路的激活對(duì)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄起著重要的調(diào)控作用。NF-κB可以直接結(jié)合到Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子維甲酸相關(guān)孤核受體γt（RORγt）基因的啟動(dòng)子區(qū)域，促進(jìn)RORγt的轉(zhuǎn)錄。RORγt是Th17細(xì)胞分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，它的表達(dá)對(duì)于Th17細(xì)胞的分化和功能至關(guān)重要。NF-κB還可以調(diào)控Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)錄。它可以促進(jìn)白細(xì)胞介素17（IL-17）、IL-22等細(xì)胞因子基因的表達(dá)，增強(qiáng)Th17細(xì)胞的炎性效應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中，阻斷NF-κB信號(hào)通路可以顯著減少Th17細(xì)胞的分化和IL-17等細(xì)胞因子的分泌，減輕眼部炎癥反應(yīng)。這表明NF-κB信號(hào)通路在EAU中Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥過(guò)程中起著關(guān)鍵的促進(jìn)作用。此外，NF-κB信號(hào)通路與其他信號(hào)通路之間存在復(fù)雜的相互作用，共同調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞的分化。例如，NF-κB信號(hào)通路與MAPK信號(hào)通路相互交聯(lián)。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，MAPK信號(hào)通路的激活可以影響NF-κB信號(hào)通路的活性。p38MAPK可以磷酸化NF-κB的亞基，增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性；ERK1/2MAPK也可以通過(guò)調(diào)節(jié)IKK復(fù)合物的活性，影響NF-κB的激活。反之，NF-κB信號(hào)通路的激活也可以反饋調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路。NF-κB可以促進(jìn)一些MAPK信號(hào)通路相關(guān)分子的表達(dá)，如細(xì)胞因子等，這些分子可以進(jìn)一步激活MAPK信號(hào)通路。NF-κB信號(hào)通路與JAK-STAT信號(hào)通路也存在相互作用。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，IL-6等細(xì)胞因子通過(guò)激活JAK-STAT信號(hào)通路，促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化。同時(shí)，NF-κB信號(hào)通路的激活可以增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)IL-6等細(xì)胞因子的反應(yīng)性，協(xié)同促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化。總之，NF-κB信號(hào)通路通過(guò)復(fù)雜的激活機(jī)制和與其他信號(hào)通路的相互作用，對(duì)Th17細(xì)胞分化相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄進(jìn)行調(diào)控，在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎中Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著核心作用。4.3代謝因素的影響4.3.1糖代謝與Th17細(xì)胞分化糖代謝在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色，尤其是糖酵解途徑的變化對(duì)Th17細(xì)胞分化具有重要影響。當(dāng)初始CD4+T細(xì)胞受到刺激向Th17細(xì)胞分化時(shí)，其代謝模式會(huì)發(fā)生顯著改變，糖酵解途徑被高度激活。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中，眼部抗原刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，使得初始CD4+T細(xì)胞活化，這些活化的細(xì)胞迅速攝取葡萄糖，增強(qiáng)糖酵解通量。研究表明，在Th17細(xì)胞分化的啟動(dòng)階段，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）和白細(xì)胞介素6（IL-6）等促分化細(xì)胞因子不僅可以調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)，還能通過(guò)激活PI3K-AKT-mTOR信號(hào)通路，促進(jìn)糖酵解相關(guān)基因的表達(dá)。PI3K被激活后，使AKT磷酸化，活化的AKT進(jìn)一步激活mTOR。mTOR作為細(xì)胞內(nèi)重要的能量感受器和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，能夠調(diào)節(jié)糖酵解途徑中關(guān)鍵酶的表達(dá)和活性。例如，mTOR可以上調(diào)己糖激酶2（HK2）、磷酸果糖激酶1（PFK1）等糖酵解關(guān)鍵酶的表達(dá)。HK2能夠催化葡萄糖磷酸化，使其無(wú)法自由擴(kuò)散出細(xì)胞，從而促進(jìn)葡萄糖的攝取和利用；PFK1則是糖酵解過(guò)程中的限速酶，其活性的增強(qiáng)可以加速糖酵解通量，為Th17細(xì)胞分化提供更多的能量和生物合成原料。糖酵解途徑產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物對(duì)Th17細(xì)胞分化也具有重要的調(diào)控作用。糖酵解過(guò)程中產(chǎn)生的磷酸戊糖途徑（PPP）中間產(chǎn)物，如核糖-5-磷酸等，對(duì)于Th17細(xì)胞的增殖和功能發(fā)揮至關(guān)重要。核糖-5-磷酸是合成核苷酸的重要原料，而核苷酸是DNA和RNA合成的基本單位，在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，細(xì)胞需要大量增殖，因此對(duì)核苷酸的需求增加，糖酵解途徑通過(guò)提供核糖-5-磷酸，滿足了Th17細(xì)胞增殖對(duì)核苷酸的需求。糖酵解產(chǎn)生的乳酸也參與了Th17細(xì)胞分化的調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)，高濃度的乳酸環(huán)境可以促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化，其機(jī)制可能與乳酸調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的pH值和信號(hào)通路有關(guān)。乳酸可以降低細(xì)胞外環(huán)境的pH值，影響細(xì)胞表面受體和離子通道的功能，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，乳酸可能通過(guò)影響T細(xì)胞受體（TCR）信號(hào)通路或細(xì)胞因子信號(hào)通路，促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化。此外，乳酸還可以作為一種信號(hào)分子，激活細(xì)胞內(nèi)的特定轉(zhuǎn)錄因子，如缺氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）等。HIF-1α可以促進(jìn)Th17細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)，如RORγt等，從而促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化?？傊?，糖代謝尤其是糖酵解途徑的變化，通過(guò)提供能量、生物合成原料以及調(diào)節(jié)信號(hào)通路和基因表達(dá)等多種方式，對(duì)Th17細(xì)胞分化產(chǎn)生重要影響。4.3.2脂代謝的作用脂代謝在Th17細(xì)胞分化和功能維持中發(fā)揮著重要作用，脂肪酸代謝過(guò)程對(duì)Th17細(xì)胞具有多方面的影響。在Th17細(xì)胞分化過(guò)程中，脂肪酸的攝取和合成增加。初始CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞分化時(shí)，細(xì)胞需要構(gòu)建新的細(xì)胞膜和細(xì)胞器，這就需要大量的脂質(zhì)作為原料。研究表明，Th17細(xì)胞高表達(dá)脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，如脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（FATP1）和脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）等，這些蛋白可以促進(jìn)脂肪酸從細(xì)胞外環(huán)境進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸在脂肪酸合成酶（FAS）等酶的作用下，參與甘油三酯和磷脂的合成。甘油三酯可以作為能量?jī)?chǔ)存物質(zhì)，為Th17細(xì)胞的代謝和功能提供能量；磷脂則是細(xì)胞膜的主要成分，對(duì)于維持細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能完整性至關(guān)重要。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中，Th17細(xì)胞的活化和增殖需要大量的能量和物質(zhì)支持，脂肪酸代謝的增強(qiáng)為其提供了必要的條件。脂肪酸代謝產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物對(duì)Th17細(xì)胞的功能也有重要影響。脂肪酸β-氧化是脂肪酸代謝的重要途徑之一，其產(chǎn)生的乙酰輔酶A不僅可以進(jìn)入三羧酸循環(huán)（TCA）產(chǎn)生能量，還可以作為信號(hào)分子參與基因表達(dá)的調(diào)控。在Th17細(xì)胞中，乙酰輔酶A可以通過(guò)調(diào)節(jié)組蛋白乙?；?，影響Th17細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)。組蛋白乙?；且环N重要的表觀遺傳修飾，它可以改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)，使基因更容易被轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，從而促進(jìn)基因表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，脂肪酸β-氧化產(chǎn)生的乙酰輔酶A可以增加Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt基因啟動(dòng)子區(qū)域的組蛋白乙?；?，促進(jìn)RORγt的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化和功能維持。脂肪酸代謝還與Th17細(xì)胞的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。一些不飽和脂肪酸，如花生四烯酸等，是合成炎癥介質(zhì)的前體物質(zhì)?；ㄉ南┧嵩诃h(huán)氧合酶（COX）和脂氧合酶（LOX）等酶的作用下，可轉(zhuǎn)化為前列腺素、白三烯等炎癥介質(zhì)。在Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中，這些炎癥介質(zhì)可以招募和激活其他免疫細(xì)胞，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。例如，前列腺素E2（PGE2）可以促進(jìn)Th17細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子分泌，白三烯B4（LTB4）可以吸引中性粒細(xì)胞到炎癥部位，進(jìn)一步加重炎癥損傷?？傊?，脂代謝通過(guò)影響脂肪酸的攝取、合成、代謝產(chǎn)物以及與炎癥反應(yīng)的關(guān)聯(lián)等方面，對(duì)Th17細(xì)胞的分化和功能產(chǎn)生重要作用。五、調(diào)控抗原特異性Th17細(xì)胞分化在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎治療中的應(yīng)用前景5.1基于Th17細(xì)胞分化調(diào)控的治療策略探索5.1.1細(xì)胞因子靶向治療針對(duì)白細(xì)胞介素17（IL-17）、白細(xì)胞介素23（IL-23）等細(xì)胞因子的抗體或拮抗劑在治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中展現(xiàn)出了極具潛力的應(yīng)用前景。IL-17作為Th17細(xì)胞分泌的關(guān)鍵炎性細(xì)胞因子，在EAU的發(fā)病機(jī)制中起著核心作用。它可以通過(guò)多種途徑促進(jìn)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致眼部組織損傷。IL-17能夠誘導(dǎo)眼部血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子，如細(xì)胞間黏附分子1（ICAM-1）、血管細(xì)胞黏附分子1（VCAM-1）等。這些黏附分子的表達(dá)增加，使得炎癥細(xì)胞更容易黏附并穿越血管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)入眼部組織，從而加劇炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。IL-17還可以刺激眼部組織細(xì)胞分泌多種促炎細(xì)胞因子和趨化因子，如腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素6（IL-6）、CXC趨化因子配體8（CXCL8）等。TNF-α可以直接損傷眼部組織細(xì)胞，破壞組織的正常結(jié)構(gòu)和功能；IL-6可以進(jìn)一步激活免疫細(xì)胞，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的放大；CXCL8則可以招募中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞到炎癥部位，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。此外，IL-17還能促進(jìn)眼部成纖維細(xì)胞增殖和分泌細(xì)胞外基質(zhì)，導(dǎo)致眼部組織纖維化，影響眼部正常功能?；贗L-17在EAU中的關(guān)鍵作用，開(kāi)發(fā)針對(duì)IL-17的抗體或拮抗劑成為治療EAU的重要策略。蘇金單抗（Secukinumab）是一種全人源化的抗IL-17A單克隆抗體，已在一些自身免疫性疾病的治療中取得了一定成效。在EAU模型中，給予蘇金單抗治療后，眼部炎癥明顯減輕。研究發(fā)現(xiàn)，蘇金單抗可以特異性地結(jié)合IL-17A，阻斷其與受體的結(jié)合，從而抑制IL-17A的生物學(xué)活性。這使得炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)減少，促炎細(xì)胞因子的分泌降低，眼部組織損傷得到緩解。依奇珠單抗（Ixekizumab）也是一種抗IL-17A單克隆抗體，它與IL-17A具有高親和力。在EAU的研究中，依奇珠單抗能夠有效降低眼部炎癥評(píng)分，改善視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)。它通過(guò)阻斷IL-17A介導(dǎo)的信號(hào)通路，抑制Th17細(xì)胞的功能，減少炎癥反應(yīng)對(duì)眼部組織的破壞。IL-23同樣在Th17細(xì)胞的分化和功能維持中起著關(guān)鍵作用。IL-23主要由抗原呈遞細(xì)胞分泌，它可以與Th17細(xì)胞表面的IL-23受體結(jié)合，激活JAK-STAT信號(hào)通路。這一信號(hào)通路的激活能夠促進(jìn)Th17細(xì)胞的增殖，維持細(xì)胞亞群的穩(wěn)定性，并促進(jìn)其分泌更多的炎性細(xì)胞因子。在EAU中，IL-23的異常表達(dá)會(huì)導(dǎo)致Th17細(xì)胞過(guò)度活化，加重炎癥反應(yīng)。古塞奇尤單抗（Guselkumab）是一種靶向IL-23的單克隆抗體。在EAU動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，使用古