抗原抗體反應(yīng)purposemaster:

1.抗原抗體反應(yīng)原理及特點(diǎn)。

2.帶現(xiàn)象、前帶、后帶、親合力、親和力概念。befamiliar:

影響抗原抗體反應(yīng)的因素。know:

免疫學(xué)檢測(cè)的類(lèi)型。

（antigen-antibodyreaction）

概念：抗原抗體反應(yīng)是指抗原抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)體內(nèi)殺菌、溶菌、調(diào)理、中和毒素免疫病理?yè)p傷—超敏反應(yīng)、免疫性疾病等體外：凝集、沉淀、溶細(xì)胞、中和毒素、補(bǔ)體結(jié)合等曾稱(chēng)：serologicalreaction本章內(nèi)容：§1抗原抗體反應(yīng)的原理§2抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)§3影響抗原抗體反應(yīng)的因素§4免疫學(xué)檢測(cè)的類(lèi)型Section1

抗原抗體反應(yīng)的原理基本原理：特異性（AD----HVR）可見(jiàn)性（凝集、沉淀、溶血等）結(jié)合力(4種)高度互補(bǔ)（AD-HVR）緊密接觸產(chǎn)生結(jié)合力抗原

抗體帶電離子異性相吸靜電引力分子極化范德華引力形成氫鍵氫鍵引力形成疏水基團(tuán)

疏水作用力作用最小最具特異性作用最大抗原抗體結(jié)合可見(jiàn)反應(yīng)比例合適圖抗原抗體結(jié)合力1.靜電引力（electrostaticforces）或庫(kù)侖引力（Cou-lombicforces）指帶電離子基團(tuán)（如：—NH3+和—COO-）之間的引力，距離越近引力越大。2.范德華引力（VanderWaalsforces）

分子間（或原子間)相互接近，分子極化產(chǎn)生引力，其作用取決于分子空間構(gòu)型，如：凹槽與凸起互補(bǔ)，抗原與抗體，酶與底物。能量小于靜電引力。（3）氫鍵結(jié)合力（hydrogenboundingforce）

指供氫體氫原子與受氫體原子之間的引力—“氫鍵橋梁”，能量大于范德華引力。4.疏水作用力（hydrophobicforce）

指疏水基團(tuán)間排斥水分子，相互聚集的力。作用力最強(qiáng)，占總結(jié)合力的50％。

抗原抗體結(jié)合力大小都與兩分子間的距離密切相關(guān)只有兩分子表面密切接觸時(shí)，才能產(chǎn)生足夠的力使其結(jié)合抗原與抗體之間高度的空間互補(bǔ)結(jié)構(gòu)恰好為這些結(jié)合力的發(fā)揮提供了條件

結(jié)合力的大小

親和力（affinity）表示

親合力（avidity）一個(gè)抗體結(jié)合點(diǎn)與一個(gè)抗原表位間的結(jié)合強(qiáng)度?！埃╯inglepoint－－－singlepoint）”親和力用平衡常數(shù)表示：K=K1/K2親和力（affinity）：即：結(jié)合常數(shù)/解離常數(shù)

K值越大，親和力越高，與抗原的結(jié)合越牢固親合力（avidity）指整個(gè)抗體分子與抗原表位之間結(jié)合的強(qiáng)度

“allpoints-------allpoints”與抗體的結(jié)合價(jià)直接相關(guān)。親合力高，與抗原結(jié)合牢固不易解離。Section2

抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)一、特異性（specificity）概念：一種抗原只能與其相應(yīng)的抗體結(jié)合起反應(yīng)（eg.）分子基礎(chǔ)：Ag-ADHVR-Ab空間結(jié)構(gòu)高度互補(bǔ)VH和VL各具三個(gè)HVR與AD互補(bǔ)意義免檢中常用已知Ag未知Ab

，反之亦然。查相對(duì)性：當(dāng)抗原之間有相同或相似結(jié)構(gòu)的AD時(shí)（共同抗原）交叉反應(yīng)（crossreaction）干擾結(jié)果實(shí)驗(yàn)診斷如何解決？如何利用？?jī)煞N不同的抗原分子具有相同或類(lèi)似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖交叉反應(yīng)（crossreactions）二、比例性

(proportionality)指抗原抗體的量比關(guān)系，即只有當(dāng)抗原抗體的濃度比例適當(dāng)時(shí)，才出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。以沉淀反應(yīng)為例（Ab量固定,Ag量遞增）

圖Question：等價(jià)帶前帶后帶

抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖Why?抗原多價(jià)，抗體雙價(jià)二者比例合適Ag/Ab過(guò)剩網(wǎng)格學(xué)說(shuō)網(wǎng)格學(xué)說(shuō)（圖）抗體的兩個(gè)Fab段分別結(jié)合兩個(gè)Ag分子，相互交叉結(jié)合連接成巨大的網(wǎng)格狀立體聚合物，（可見(jiàn)）。二者比例合適：Ab/Ag過(guò)剩過(guò)剩方的結(jié)合價(jià)得不到飽和，大多數(shù)游離存在，只形成小分子復(fù)合物（不可見(jiàn)）。網(wǎng)格學(xué)說(shuō)（圖）切記?。。?！確定

的濃度非常重要，即在實(shí)驗(yàn)中需對(duì)Ag/Ab進(jìn)行適當(dāng)?shù)?/p>

，調(diào)整二者的比例，產(chǎn)生可見(jiàn)反應(yīng)。一般原則：固定

含量（Ag/Ab

）的濃度，稀釋

含量的(Ab/Ag)。一般可溶性Ag稀釋

，顆粒性Ag，稀釋

。Ag/Ab稀釋低高AgAb三、可逆性（reversibility）或表面性解離1.Ag+AbAg—Ab一定條件（動(dòng)態(tài)平衡）

動(dòng)態(tài)平衡公式:

[Ag]+[Ab][Ag-Ab]

K1:結(jié)合常數(shù)；K2：解離常數(shù)K1K2四、階段性特異性結(jié)合兩個(gè)階段可見(jiàn)反應(yīng)階段數(shù)秒～數(shù)分鐘，肉眼不可見(jiàn)數(shù)分～數(shù)小時(shí)肉眼可見(jiàn)Section3

影響抗原抗體反應(yīng)的因素一、Ag/Ab自身因素（一）Ag

理化性狀：顆粒性Ag、可溶性Ag、

R型細(xì)菌Ag等出現(xiàn)不同的Ag-Abreaction.AD的種類(lèi)與數(shù)目：?jiǎn)蝺r(jià)Ag

來(lái)源（二）AbR型Ab

：等價(jià)帶寬，易出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。H型Ab

：等價(jià)帶窄，易出現(xiàn)前帶或后帶現(xiàn)象McAb:不宜用于凝集和沉淀反應(yīng)。濃度：相對(duì)Ag而言，比例要和適，故實(shí)驗(yàn)前需滴定，以求最適Ag與Ab比例。特異性與親合力：關(guān)鍵因素，選擇特異性與親合力高的Ab。二、環(huán)境因素（一）電解質(zhì)作用：中和膠體表面電荷，破壞水化層，使Ag-Ab聚集。常用：8.5g/LNaCl溶液，緩沖液、Ca2+、

Mg2+等。注意：鹽析（salting）即電解質(zhì)濃度過(guò)高引起的非特異性蛋白質(zhì)沉淀。（二）酸堿度Ag、Ab多為蛋白質(zhì)，具兩性電離特性，有其故有的PI,pH過(guò)高或過(guò)低均可影響Ag、Ab反應(yīng)。一般：pH6～8為宜，補(bǔ)體參與時(shí)pH7.2～7.4。注意：自凝現(xiàn)象------即pH達(dá)到或接近顆粒性抗原的PI時(shí)，引起的抗原非特異性自身凝集現(xiàn)象。（三）溫度—影響反應(yīng)速度一般：15～40℃為宜，最適溫度：37℃,

過(guò)高（>56）:Ag-Ab解離，Ag、Ab變性，補(bǔ)體失活。冷凝集實(shí)驗(yàn)：4℃凝集，>20解離。（四）其他振蕩、攪拌等可加速反應(yīng)免疫檢驗(yàn)技術(shù)發(fā)展進(jìn)程的主要階段自然的肉眼觀察的抗原抗體反應(yīng)（沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)）加速的肉眼觀察的抗原抗體反應(yīng)（電泳技術(shù)、分離技術(shù)）標(biāo)記性免疫技術(shù)提高抗原抗體反應(yīng)的特異性、敏感性半自動(dòng)、自動(dòng)化檢驗(yàn)儀器與免疫反應(yīng)原理結(jié)合，加快了反應(yīng)過(guò)程標(biāo)記技術(shù)、單克隆技術(shù)、高智能自動(dòng)化技術(shù)的最佳組合年代學(xué)者貢獻(xiàn)1894J.Bordet補(bǔ)體與溶菌活性1896H.Durham,M.vonGruber特異凝集反應(yīng)1896G.Widal,A.Sicad肥達(dá)試驗(yàn)1897R.Kraus沉淀試驗(yàn)1900J.Bordet,O.Gengou補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1900K.Landsteiner人類(lèi)ABO血型及其抗體1906A.Wassermann梅毒補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1935M.Heidelberger,F.Kendall純化抗體,定量沉淀反應(yīng)1941A.Coons免疫熒光標(biāo)記1946J.Oudin凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)1948O.Ouchterlony,S.Elek雙擴(kuò)散沉淀反應(yīng)1953P.Grabar,C.Williams免疫電泳分析,Ig多樣性1960R.Yallow,S.Berson放射免疫標(biāo)記1966S.Avrames,J.Uriel,etal酶標(biāo)免疫技術(shù)1975G.Kohler,C.Milstein雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展史

表

抗原抗體反應(yīng)的基本類(lèi)型表反應(yīng)類(lèi)型實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)方法敏感度沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀、檢測(cè)濁度+，++++

瓊脂凝膠擴(kuò)散觀察掃描沉淀線或環(huán)