ICS01.040.85DB43Y32DeterminationofinsolublesaccharidesofreedsinDongtingLake湖南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 12規(guī)范性引用文件 13術語及定義 1 15儀器和試劑 16樣品準備 27高效液相色譜儀操作條件 28試驗步驟 39結果報告 4 4本標準按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則編寫。本標準起草單位：常德市產(chǎn)商品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所/國家生活用紙質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心。本標準主要起草人：彭小悅、郭盛、孫華、羅云鷹、張樂華、代泳波。本標準由湖南省生活用紙標準化技術委員會歸口。本標準為首次發(fā)布。1洞庭湖荻葦中不可溶性糖含量的測定液相色譜法本標準規(guī)定了測定洞庭湖荻葦原料中不可溶性糖含量的測定方法和規(guī)范。本標準適用于不含抽提物的荻葦原料。對于未經(jīng)處理的含有抽提物的荻葦原料樣品，必須事先去除樣品中的抽提物才能進行分析。本標準同樣適用于酸或堿處理后（洗滌至不含殘余酸或堿）以及發(fā)酵剩余物質(zhì)中固體樣品的不可溶性糖含量測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T2677.1造紙原料用分析試樣的采取GB/T2677.2造紙原料水分的測定GB/T2677.5造紙原料有機溶劑抽出物含量的測定3術語及定義3.1新鮮荻葦原料當年現(xiàn)場取用的荻葦原料。3.2絕干質(zhì)量不含水的生物質(zhì)原料質(zhì)量，按照GB/T2677.2標準方法所述步驟在105℃烘干獲得。3.3準備好的生物質(zhì)樣品根據(jù)GB/T2677.1標準方法處理得到的固體含量大于85%的生物質(zhì)樣品。3.4不含抽提物的生物質(zhì)樣品根據(jù)GB/T2677.5標準方法處理得到的不含有抽提物的樣品，該方法可去除荻葦原料中包括可溶性糖在內(nèi)的各種可溶性組分。4原理荻葦原料中的不可溶性糖，通過兩段硫酸水解后可轉(zhuǎn)化為其相對應的單糖。采用高效液相色譜檢測水解液中的單糖含量后，通過計算可得到生物質(zhì)原料中的不可溶性糖。5儀器和試劑25.1儀器和材料5.1.1分析天平：讀數(shù)精度0.1mg；5.1.2高壓反應器：控溫要求121±3℃;5.1.3水浴鍋：控溫要求30±1℃;5.1.4鼓風干燥箱：控溫要求45±3℃、105±3℃;5.1.5干燥器：裝有無水硫酸鈣或其它干燥劑；5.1.6高效液相色譜：配備示差折光檢測器；5.1.7進樣瓶；5.1.8一次性注射器（1mL和3mL）；5.1.9一次性水相濾頭（0.22μm）；5.1.10玻璃血清瓶(125mL)具備耐腐蝕性的橡膠密封塞（如有聚四氟乙烯覆膜層）和鋁制密封圈。也可用其它具有耐高溫、耐高壓、耐腐蝕性的可嚴密密封的容器取代。5.1.11稱量紙；5.1.12玻璃試管（16×100mm）；5.1.13錐形瓶（容積50mL）；5.1.14pH試紙。5.2試劑除非特別說明，本標準所用試劑均為分析純試劑。所用水的純度必須滿足實驗室用水二級水的標準。5.2.1碳酸鈣5.2.2高純度標準品(≥98%）：葡萄糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖，均在45±3℃下烘干至恒重。5.2.3濃硫酸5.2.4稀硫酸（72%w/w或12.00±0.02mol/L）：在冰浴及充分攪拌的條件下，緩緩將665mL的濃硫酸（5.2.4）加入至300mL水中；將溶液溫度調(diào)整至20℃,并將其相對密度調(diào)整至1.6338。6樣品準備按照GB/T2677.1標準方法，將新鮮的生物質(zhì)原料樣品進行干燥、粉碎、篩分，得到準備好的生物質(zhì)原料樣品；然后，依照GB/T2677.5所述標準步驟對準備好的生物質(zhì)原料樣品進行抽提，去除其含有的抽提物，經(jīng)干燥后得到不含抽提物的生物質(zhì)原料樣品。7高效液相色譜儀操作條件3以HPModel1090型高效液相色譜儀（含示差折光檢測器）、BioRadAminexHPX-87C或HPX-87P型色譜柱（配備合適的保護柱）為例，其操作條件為：進樣體積50μL，淋洗液為去離子水（氦氣或真空脫氣、電阻18M歐姆、0.2μm濾膜過濾柱流量0.6mL/min，柱溫85℃,數(shù)據(jù)采集20分鐘、后運行15分鐘。8試驗步驟8.1標準曲線8.1.1標準溶液配制分別準確稱取4.0g的葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖，溶解至1L的超純水中，配制成濃度為4.0g/L的混合糖標準溶液，并用一次性0.22μm水相濾頭將其過濾。將該標準溶液按照相應比例進行稀釋，分別得到7個水平（0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0g/L）的混合糖標準溶液。8.1.2高效液相色譜檢測對于具有自動進樣器的高效液相色譜儀，用移液槍移取約1.5mL的上述七個水平的混合糖標準溶液、并分裝至進樣瓶中，進行糖含量檢測。對于需要手動進樣的高效液相色譜儀，用一次性注射器移取約1mL的混合糖標準溶液，打入手動進樣閥的閥口、進行糖含量檢測。記錄不同濃度下各種糖的液相色譜信號值。8.1.3建立標準工作曲線分別以五種糖的濃度為橫坐標、液相色譜信號值為縱坐標做圖，并利用線性回歸工具擬合圖中數(shù)據(jù)點，得到各種糖的標準工作曲線，即：=knAn+bn（1）式中：n——糖種類標識；cn——某糖在溶液中的濃度（g/L）；An——某糖的液相色譜信號值；kn——某糖標準工作曲線的斜率（g/Lbn——某糖標準工作曲線的截距（g/L）。8.2荻葦樣品處理及檢測8.2.172%硫酸預水解準確稱取300±10mg不含抽提物的粉狀生物質(zhì)原料、重量精確至0.1mg。將稱量好的不含抽提物的粉狀生物質(zhì)原料轉(zhuǎn)移至玻璃試管中，準確加入3.00±0.01mL（4.92±0.01g）72%硫酸，并用攪動至固液完全混合。將該試管放入30±1℃的水浴鍋中，水解時間為1小時；為了確保樣品完全混合、潤濕，每隔15分鐘攪動一次。8.2.2水解產(chǎn)物稀釋將按照8.2.1處理后的全部水解產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至玻璃血清瓶中，使用84.00±0.04mL的水將其稀釋至硫酸濃度4%w/w。在轉(zhuǎn)移、稀釋過程中，可采用多次洗滌的方式將所有水解后固體及水解液轉(zhuǎn)移至玻璃血清瓶，由此獲得的水解產(chǎn)物稀釋液、其總重應為89.22g或總體積87mL。將裝有稀釋好的水解產(chǎn)物的玻璃血清瓶用橡膠塞和鋁蓋密封。48.2.3高溫水解將8.2.2所述密封好的玻璃血清瓶放入高壓反應器內(nèi)，在121±3℃下水解1小時。水解完成后，將玻璃血清瓶取出、在室溫下冷卻20分鐘。8.2.4水解液中和與過濾將玻璃血清瓶的密封鋁蓋及橡膠塞打開，移取20mL的水解液至50mL的錐形瓶中；將碳酸鈣緩緩加至瓶中，用pH試紙檢測水解液pH值、直至溶液pH值在5~6之間為止，切不可過度中和至pH值高于6。為了避免產(chǎn)生泡沫及由于液體過熱產(chǎn)生水蒸氣而導致的水損失，碳酸鈣加入速度一定要緩慢。用3mL的一次性注射器吸取上清液，然后配合一次性0.22μm水相濾頭將其過濾至進樣瓶中。如糖濃度過高，可將濾液按需求進行稀釋（稀釋比例記為D再加入至進樣瓶中。8.2.5水解液糖含量測定按照8.1.2檢測水解液或其稀釋液中的糖含量，記錄各種糖的檢測信號An,0。9結果報告9.1荻葦樣品中糖含量的計算以絕干原料計，荻葦樣品中的糖含量可用下式計算式中：n——糖種類標識；cn,0——荻葦原料中某糖的含量（%）；D——水解液檢測前的稀釋倍數(shù)（8.2.4）；An,0——荻葦原料水解后的待測液中某糖的液相色譜信號值；——87.0酸水解過程中液體在室溫下的總體積（mL）；————m1用于檢測的不含抽提物的荻葦原料絕干質(zhì)量（g）；————w1不