(19)國家知識產(chǎn)權(quán)局(71)申請人山東鉑源生物醫(yī)藥有限公司地址264670山東省煙臺市高新區(qū)科技大道39號A61P25/24(2006.01)A61P1/08(2006.01)A61P39/06(2006.01)(72)發(fā)明人劉珂付信珍范華英寇麗娟A61K9/19(2006.01)A61K31/05(2006.01)A61K47/26(2006.01)A61K47/10(2006.01)A61K47/42(2017.01)A61K9/10(2006.01)A61P25/08(2006.01)A61P25/22(2006.01)(54)發(fā)明名稱大麻二酚納米晶及其制備方法本發(fā)明提供了一種難溶性藥物大麻二酚納米晶制備方法。將大麻二酚溶于有機溶劑中，得有機相緩慢加入水相中在一定的轉(zhuǎn)速下攪拌，制得大麻二酚納米混懸液。本發(fā)明制得的大麻二酚納米混懸液及其凍干品能夠顯著減小藥物粒徑，增加藥物的溶解度。使用5%的海藻糖或2%~5%的白蛋白作為凍干保護劑，可長期穩(wěn)定保存，使用時將其復溶即可恢復凍干前的狀態(tài)。本發(fā)明經(jīng)過粒徑分布測定、掃描電鏡、體內(nèi)外實驗等測21.一種大麻二酚納米晶體的制備方法，其特征在于采用如下步驟制備：(1)配制含0.1%～1%穩(wěn)定劑的水溶液，制得水相；(3)將有機相與水相混合并持續(xù)攪拌，得到大麻二酚納米混懸液；(4)用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將大麻二酚納米混懸液中的有機溶劑去除。(5)將去除有機溶劑的納米混懸液加入凍干保護劑真空冷凍干燥得到大麻二酚納米晶體凍干粉。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大麻二酚納米晶的制備方法，其特征在于：處方工藝中所涉及的穩(wěn)定劑為羥丙甲纖維素、泊洛沙姆188、卵磷脂、吐溫80、聚乙烯醇、十3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大麻二酚納米晶的制備方法，其特征在于：處方工藝中所涉及4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大麻二酚納米晶的制備方法，其特征在于：處方工藝中所涉及的混合方法為含藥有機相緩慢加入水相，在轉(zhuǎn)速為100～800rpm條件下攪拌5～20min。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大麻二酚納米晶的制備方法，其特征在于：處方工藝中所涉及的旋蒸溫度為35～40℃。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大麻二酚納米晶的制備方法，其特征在于：處方工藝中所涉及7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的大麻二酚納米晶的制備方法，其特征為：處方工藝中所涉及的凍干保護劑濃度為1%～20%,優(yōu)選1%～10%,更優(yōu)選2%～5%。8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的大麻二酚納米晶的制備方法，其特征在于：吐溫80的濃度為9.根據(jù)權(quán)利要求1-6所述的大麻二酚納米晶的制備方法，其特征在于：制得的大麻二酚納米晶粒徑為粒徑為100～500nm,優(yōu)選粒徑范圍在130～250nm,更優(yōu)選150～200nm,優(yōu)選所制得的納米晶中大麻二酚含量為5～20mg/ml。10.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項所述的制備方法獲得的大麻二酚納米晶，其特征在于所述的大麻二酚納米晶采用肌肉注射劑型，劑型為混懸液或凍干粉針。3技術領域[0001]本發(fā)明屬于藥物納米晶制備領域，具體為大麻二酚納米晶及其制備方法和應用。背景技術[0002]大麻二酚(Cannabidiol,CBD),又稱麻繁愫，是從大麻植物中提取的純天然成分。與四氫大麻酚不同的是，大麻二酚是大麻中的非成癮性成分。大麻二酚分子式為C?1H?00?,幾乎不溶于水。2013年美國有線電視新聞網(wǎng)報道了challotte的病例，使大麻制劑治療難治性[0003]大麻二酚是一種白色至淡黃色樹脂或結(jié)晶目前主要以油基膠囊或懸浮液制劑給藥，其口服生物利用度很低，小于15%,部分原因是大麻二酚在腸道和肝臟較高的首關消除，而導致進入全身血液循環(huán)內(nèi)的藥物量較少，且其血漿蛋白結(jié)合率較高(>99%),致使血漿中游離態(tài)的有效藥物量減少。設計安全有效且使用方便的大麻二酚新制劑具有重要的臨床價值。[0004]納米藥物晶體是藥物僅借助少量表面活性劑或高分子聚合物的穩(wěn)定作用，將納米級別的藥物分子懸浮于分散介質(zhì)中，通過控制晶體的析出過程或者是機械粉碎的方法形成的穩(wěn)定的亞微米膠體分散體系。國外從20世紀末就已開始進行有關的研究，作為一種新的納米微粒藥物傳遞系統(tǒng)，其能減小藥物的粒徑，增大藥物的比表面積，很好地改善難溶性藥變小，從而加快溶出。除此之外，比表面積增大有利于增加藥物與腸壁的接觸面積，使得接觸時間增加，可使藥物在靶點充分有效的吸收。[0005]納米結(jié)晶技術的應用仍受到設備能耗高、易磨損等因素的制約，藥物本身的性質(zhì)如脆碎性和熱敏感性也限制了納米結(jié)晶技術的應用，很難做到產(chǎn)業(yè)化開發(fā)。因此，開發(fā)出一種低成本、便于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的藥物納米晶的制備工藝具有重要意義。發(fā)明內(nèi)容[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種大麻二酚納米晶組合物，組合物含有大麻二酚納米晶94～97.9%,0.1%～1%的吐溫80,2%～5%甘露醇、海藻糖或白蛋白；所述組合物分散性良好，粒徑大小均勻，殘留溶劑少，可顯著提高大麻二酚的溶出度與生物利用度。本發(fā)明同[0007]本發(fā)明制備的大麻二酚納米晶的粒徑為100～500nm,優(yōu)選粒徑范圍在130~250nm,更優(yōu)選150～200nm。[0008]本發(fā)明所涉及制備方法為：[0009](1)配制含0.1%～1%穩(wěn)定劑的水溶液，制得水相；4[0011](3)將有機相與水相混合并持續(xù)攪拌，得到大麻二酚納米混懸液；[0012](4)用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將大麻二酚納米混懸液中的有機溶劑去除。[0013](5)將去除有機溶劑的納米混懸液加入凍干保護劑真空冷凍干燥得到大麻二酚納米晶體凍干粉。[0016]本處方工藝中所涉及的混合方法為含藥有機相緩慢加入水相，在轉(zhuǎn)速為100~800rpm條件下攪拌5～20min。[0017]本處方工藝中所涉及的旋蒸溫度為35～40℃。[0018]本處方工藝中所涉及的凍干保護劑為甘露醇、海藻糖、人血白蛋白、牛血白蛋白、麥芽糖，優(yōu)選人血白蛋白和牛血白蛋白，更優(yōu)選人血白蛋白。[0019]本處方工藝中所涉及的人血白蛋白作為凍干保護劑的濃度為1%～20%,優(yōu)選1%~10%,更優(yōu)選2%～5%。[0020]本處方工藝中所涉及吐溫80的濃度為0.1%～1%,制得的大麻二酚納米晶粒徑為粒徑為100～500nm,優(yōu)選粒徑范圍在130～250nm,更優(yōu)選150～200nm;所制得的納米晶中大麻二酚濃度為5～20mg/ml。[0021]本發(fā)明還提供了大麻二酚納米晶的劑型，可以是片劑、膠囊劑、粉針劑等多種形式[0022]本發(fā)明中肌肉注射劑型的使用在藥效學實驗中得到體現(xiàn)。[0024]本發(fā)明的制備工藝操作簡潔、高效、無污染，并且條件溫和，所得產(chǎn)品具有分散性[0025]本發(fā)明方法制備得到的大麻二酚納米晶混懸液及其凍干制劑能夠顯著減小藥物的粒徑，增加藥物溶出度和生物利用度。制備得到的納米晶混懸液在室溫避光條件下可以穩(wěn)定保存。[0026]本發(fā)明制備的大麻二酚凍干制劑，在水中可迅速復溶再分散成納米混懸液，并且粒徑與之前無變化。[0027]本發(fā)明制備的大麻二酚凍干品，加入優(yōu)選凍干保護劑的凍干制劑，復溶后大麻二酚納米粒呈球形，肌肉刺激性小。[0028]本發(fā)明制備的大麻二酚凍干制劑可以進一步制備成片劑、膠囊劑、粉針劑等多種形式的制劑。[0029]本發(fā)明注射給藥后，納米晶可以較傳統(tǒng)注射劑獲得更好的藥物濃度、更長的血漿半衰期和更高的血藥濃度-時間曲線下面積(AUC)。[0030]本發(fā)明凍干制劑通過復溶，顯示出良好的復溶性，復溶后用于藥效學實驗，針對大鼠坐骨神經(jīng)分支選擇損傷模型，作為受試藥物，顯示出與上市藥物普瑞巴林相近的鎮(zhèn)痛效5附圖說明[0031]圖1為大麻二酚納米晶體混懸液粒徑圖；[0032]圖2為大麻二酚納米晶體凍干粉末加水復溶后粒徑圖；[0033]圖3為大麻二酚納米晶體透射電鏡圖；[0034]圖4為大麻二酚納米晶體掃描電鏡圖；[0035]圖5為X射線粉末衍射圖；[0036]圖6為差示掃描量熱圖；[0037]圖7為體外溶出曲線圖；[0038]圖8為血藥濃度-時間曲線圖；[0039]圖9為藥效學實驗中連續(xù)給藥14天的鎮(zhèn)痛效果比較。具體實施方式[0040]為使本發(fā)明更好地被理解，下面結(jié)合具體實例對本發(fā)明的實施方法進行詳細敘述。但是本發(fā)明所要求的保護范圍完全不限制于此。如實施方法中未標注具體條件，則按常規(guī)條件以及制造商建議的條件進行；如所用儀器或試劑未標注生產(chǎn)廠家，則視為均可以通過市場購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。[0041]實施例1:大麻二酚納米混懸液的制備[0042]采用反溶劑法制備大麻二酚納米混懸液。稱取0.025～0.1g大麻二酚，溶于1～4ml作為水相。即藥物與輔料之比為1:1,良溶劑與不良溶劑(乙醇與純水)的比為1:5.然后在室溫下，將有機相于水相液面下緩慢滴加，經(jīng)磁力攪拌器攪拌，轉(zhuǎn)速為100～800rpm,攪拌時間為5～20min,制得的納米晶混懸液。使用馬爾文粒徑儀測定其粒度，根據(jù)圖1顯示，平均粒徑為：130.7±2.57nm,多分散性系數(shù)(PDI)為：0.212±0.02。[0043]實施例2:大麻二酚納米晶體混懸液形態(tài)測定[0044]將實例1中制備的大麻二酚納米晶體混懸液稀釋至0.1mg/ml,吸取5μ1滴到230目的銅網(wǎng)上，空氣中自然晾干，用2%磷鎢酸染色2min,透射電鏡下觀察粒子的形態(tài)(圖3),為圓整球形。[0045]實施例3:大麻二酚納米晶體混懸液凍干制劑的制備[0046]實例1制備的大麻二酚納米晶體混懸液，加入0.5ml2%～5%的凍干保護劑后進加入0.5ml純水復溶，使用馬爾文粒徑儀測定其粒度，不同凍干保護劑復溶后粒徑如表1,白蛋白復溶后如圖2顯示，平均粒徑為：129.8±1.66nm,多分散性系數(shù)(PDI)為：0.179±0.02。[0047]表1:不同凍干保護劑復溶后粒徑及PDI6平均粒徑(nm)平均PDI無保護劑人血清白蛋白肉眼可見肉眼可見肉眼可見肉眼可見[0049]實施例4:掃描電鏡測定[0050]將不同凍干保護劑的固化物樣品固定在銅臺的導電膠上，減壓下噴涂膠體金10min,掃描電鏡觀察固化物表面藥物粒子聚集情況，操作電壓為15kV。典型的形態(tài)分布測保護劑為球形，且粒徑在100nm左右，以甘露醇、乳糖、麥芽糖作為凍干保護劑均肌肉注射刺激性嚴重，且不易復溶或粒徑增大，以海藻糖作為凍干保護劑雖為球形，但粒徑增大至微米級別，故以白蛋白為最佳保護劑。[0052]實例3制備的樣品以及大麻二酚原料藥、空白輔料及物理混合物采用Cu靶，實驗電壓和電流為40kV和40mA,步寬0.02,以4°/min掃描速度測試樣品的角度范圍為5-80°的X粉末射線衍射圖譜見圖5,結(jié)果可知大麻二酚納米凍干制劑中藥物以無定形的形式存在。[0053]實施例6:差示掃描量熱法[0054]實例3制備的樣品、大麻二酚原料藥、空白輔料及物理混合物各稱取3～5mg于DSC見圖6結(jié)果表明大麻二酚原料藥顯示出明顯的晶體熔化特征：69.2℃,出現(xiàn)最強吸收峰；而凍干品則未出現(xiàn)晶體熔化特征峰，進一步說明大麻二酚凍干品以無定形存在。[0055]實施例7:大麻二酚納米晶體外溶出度的測定[0056]實例3制備的樣品、大麻二酚原料藥及物理混合物各取適量，置于100ml含2%SDS磷酸鹽緩沖液(pH7.4)。具體方法為：配制新鮮的2%SDS磷酸鹽緩沖液(pH7.4),取適量制劑于100mL釋放介質(zhì)中。調(diào)控儀器參數(shù)：37℃,100rpm。分別于5min,15min,30min,45min,60min,90min,120min,180min,240min取樣，14000rpm,離心10min,結(jié)果見圖7。在體外累積溶出研究中，CBD-NS在15min內(nèi)累積釋放量為91.57%,與原料藥粉末(累積釋放量釋放42.91%)相比，釋放速度相對較快。[0057]實施例8:實施例3藥代動力學研究[0059]實驗分組：分為大麻二酚油溶液(口服)、大麻二酚納米晶體混懸液(肌肉注射)和大麻二酚真溶液(靜脈注射)組，每組6只。給藥前隔夜禁食不禁水，給藥后持續(xù)禁食。[0060]給藥方案：口服給藥劑量為15mg/kg,濃度為15mg/ml,給藥體積為1ml/kg。肌肉給藥劑量為5mg/kg,濃度為5mg/ml,給藥體積為1ml/kg。靜脈給藥劑量為4mg/kg,濃度為4mg/ml,給藥體積為1ml/kg。[0061]樣品采集：大麻二酚油溶液口服組于給藥前和給藥后15min、30min、45min、1h、大麻二酚真溶液靜脈注射組于給藥前和給藥后7大麻二酚納米晶體混懸液肌肉[0062]結(jié)果：藥-時曲線見圖8。平均血藥濃度數(shù)據(jù)用PhoenixWinNonlin擬合，計算藥代[0063]表2:CBD藥代動力學參數(shù)[0065]結(jié)果表明，大麻二酚口服油溶液的生物利用度為22.56%,大麻二酚納米晶混懸液肌肉注射生物利用度為285.08%。與大麻二酚油溶液相比，大麻二酚納米晶體混懸液肌肉注射組的最大血藥濃度均顯著增加，達峰時間縮短，藥時曲線下面積顯著增加，生物利用度顯著提高。而文獻中提出CBD原料藥口服的絕對生物利用度僅為6%(PeruccaE,BialerM.CriticalAspectsAffectingCannabidiolElimination,andRelatedClinicalImplications[J].CNS步說明CBD制備成納米晶的優(yōu)勢所在。[0066]實施例9:藥效學實驗[0067]實驗目的：對SD大鼠建立坐骨神經(jīng)分支選擇損傷(SNI)模型，使大鼠產(chǎn)生慢性神經(jīng)性疼痛臨床病癥，欲探索肌肉注射大麻二酚納米晶治療神經(jīng)病理性疼痛的藥效。[0069]模型制備：動物術前禁食8-10h,做好標記。實驗開始前，手術器械消毒處理，結(jié)扎線浸泡于生理鹽水或消毒酒精中，室溫維持24～26℃。用10%水合氯醛按大鼠體重30~40m