降壓類健康產(chǎn)品中3種非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)及確證方法研究降壓類健康產(chǎn)品中3種非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)及確證方法研究[摘要]目的：建立了降壓類健康產(chǎn)品中3種非法添加化學(xué)藥物的高效液相色譜檢測(cè)法及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用確證方法。方法：采用高效液相色譜法，Phenomenon柱（250×4.6mm，5μm）色譜柱分離，以0.2%磷酸溶液（A）-乙腈（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫；流速1.0mL/min，柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，外標(biāo)法定量，液質(zhì)聯(lián)用進(jìn)一步定性確證。結(jié)果：在本色譜條件下，3種化學(xué)成分分離度良好，方法檢出限為54～62μg/g，平均加樣回收率在100.9%～111.6%之間，RSD在2.0%～3.5%之間。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確度高、可靠性強(qiáng)、簡(jiǎn)便快捷，適用于降壓類非法添加化學(xué)藥物的檢測(cè)。[關(guān)鍵詞]降壓類健康產(chǎn)品；非法添加；高效液相色譜法；液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

RapidDetectionandConfirmationofThreeIllegallyAddedChemicalsinHypotensiveHealthProducts[Abstract]Objective:ToestablishamethodforthedeterminationofthreeillegallyaddedchemicalsinantihypertensivehealthproductsbyHPLCandLC-MS/MS.Methods:Phenomenoncolumn(250*4.6mm,5um)wasusedforseparationbyhighperformanceliquidchromatographywithgradientelutionusing0.2%phosphoricacidsolution(A)-acetonitrile(B)asmobilephase.Theflowratewas1.0mL/min,columntemperaturewas35C,detectionwavelengthwas220nm,externalstandardmethodwasusedforquantitativeanalysis,andLC-MS/MSwasusedforfurtherqualitativeconfirmation.Results:Underthischromatographiccondition,theseparationdegreeofthethreechemicalcomponentswasgood.Thedetectionlimitofthemethodwas54-62ug/g.Theaveragerecoveryofsampleadditionrangedfrom103.1%to112.5%,andRSDwasbetween.Conclusion:Themethodisaccurate,reliable,simpleandfast,andsuitableforthedetectionofillegaladditivesofantihypertensivedrugs.[Keywords]Chinesepatentmedicinehealthfoods;illegallyadded;HPLC;LC-MS/MS

目錄6334_WPSOffice_Level1引言 110882_WPSOffice_Level11相關(guān)概念 212512_WPSOffice_Level21.1降壓類健康產(chǎn)品 222199_WPSOffice_Level31.1.1健康產(chǎn)品及降壓類健康產(chǎn)品簡(jiǎn)介 213966_WPSOffice_Level31.1.2健康產(chǎn)品發(fā)展現(xiàn)狀及存在問(wèn)題 228261_WPSOffice_Level31.1.3降壓類健康產(chǎn)品發(fā)展現(xiàn)狀及存在問(wèn)題 37805_WPSOffice_Level12研究部分 311853_WPSOffice_Level22.1實(shí)驗(yàn)材料 327073_WPSOffice_Level32.1.1實(shí)驗(yàn)儀器 421799_WPSOffice_Level32.1.2實(shí)驗(yàn)試劑 424161_WPSOffice_Level22.2實(shí)驗(yàn)方法 412897_WPSOffice_Level32.2.1HPLC色譜條件 412682_WPSOffice_Level32.2.2LC-MS/MS色譜條件 49218_WPSOffice_Level32.2.3對(duì)照品溶液的制備 56257_WPSOffice_Level32.2.4供試品溶液的制備 517551_WPSOffice_Level32.2.5檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 57455_WPSOffice_Level32.2.6三種降壓類化學(xué)物色譜特征 520768_WPSOffice_Level22.3方法學(xué)驗(yàn)證 616059_WPSOffice_Level32.3.1專屬性 620740_WPSOffice_Level32.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限 624848_WPSOffice_Level32.3.3檢出限試驗(yàn) 75030_WPSOffice_Level32.3.4重復(fù)性試驗(yàn) 728004_WPSOffice_Level32.3.5精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn) 732410_WPSOffice_Level32.3.6加樣回收率試驗(yàn) 822231_WPSOffice_Level32.3.7實(shí)際樣品的測(cè)定 813553_WPSOffice_Level32.3.8LC-MS/MS法定性確證結(jié)果 91761_WPSOffice_Level13討論 1110820_WPSOffice_Level23.1分離條件的選擇 116832_WPSOffice_Level33.1.1流動(dòng)相的選擇 111823_WPSOffice_Level33.1.2色譜柱的選擇 1124682_WPSOffice_Level23.2對(duì)照品及樣品處理 1212717_WPSOffice_Level23.3其他 1215275_WPSOffice_Level14結(jié)論 129426_WPSOffice_Level1參考文獻(xiàn) 134780_WPSOffice_Level1致謝 1520764_WPSOffice_Level1附錄A3種降壓類化學(xué)藥物的紫外光譜圖 1612799_WPSOffice_Level1附錄B樣品信息 17引言隨著社會(huì)的發(fā)展，生活水平不斷提高，人們對(duì)自身的健康程度越來(lái)越重視，生活中更加注重食品的質(zhì)量及其營(yíng)養(yǎng)功能保健，市面上出現(xiàn)的健康產(chǎn)品也越來(lái)越受到人們的青睞。目前，我國(guó)的健康產(chǎn)品種類繁多，相應(yīng)輔助各種疾病的健康產(chǎn)品亦日趨完善，其應(yīng)用范圍十分廣泛。隨著國(guó)家經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展，健康產(chǎn)品行業(yè)有著極為廣闊的發(fā)展空間，與此同時(shí)，高利潤(rùn)吸引著越來(lái)越多的企業(yè)加入保健品行業(yè)，使得該行業(yè)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)變得異常激烈，導(dǎo)致健康產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)[1]。我國(guó)人口眾多，經(jīng)濟(jì)發(fā)展迅速，快節(jié)奏生活模式給人們帶來(lái)了巨大的生存壓力，處于亞健康的群體日漸龐大，使用健康產(chǎn)品平衡改善身體狀態(tài)的人群也越來(lái)越多，這意味著健康產(chǎn)品的地位日漸上升。目前我國(guó)已批準(zhǔn)的健康產(chǎn)品的保健功能有減肥、緩解體力疲勞、增強(qiáng)免疫力、抗氧化、輔助降血脂、輔助降血壓、輔助降血糖、改善睡眠、輔助改善記憶力、改善營(yíng)養(yǎng)性貧血等[2]。照目前形勢(shì)來(lái)看，市面上涌現(xiàn)出來(lái)的健康產(chǎn)品越來(lái)越多，商人因利益驅(qū)動(dòng)，部分廠家企業(yè)制售假藥，在健康產(chǎn)品中非法添加化學(xué)藥物，使生產(chǎn)出來(lái)的產(chǎn)品達(dá)到廣告宣傳效果。由于我國(guó)健康產(chǎn)品行業(yè)發(fā)展起步晚，企業(yè)素質(zhì)參差不齊，健康產(chǎn)品因非法添加化學(xué)藥物而對(duì)人們身體健康造成巨大影響的情況屢有報(bào)道[3]。目前，我國(guó)在監(jiān)管健康產(chǎn)品生產(chǎn)、上市、銷售等方面力度有所加強(qiáng)，但還是會(huì)存在有不法商家頂風(fēng)作案，尤是在些針對(duì)老年病、高發(fā)病和慢性病出臺(tái)的健康產(chǎn)品中進(jìn)行非法添加[4]。高血壓是世界上公認(rèn)的常見(jiàn)病和多發(fā)病，近些年，我國(guó)高血壓患病率已超過(guò)1.2億，呈逐年增長(zhǎng)的發(fā)展趨勢(shì)。面對(duì)如此高的發(fā)病率，我國(guó)抗高血壓藥物品種和劑型繁多，但這些藥物在服用過(guò)程中難免會(huì)出現(xiàn)毒副作用。為了更好的鞏固控制疾病，人們?cè)谧襻t(yī)囑服用藥物的期間，難免會(huì)使用些健康產(chǎn)品加以輔助。由于此類健康產(chǎn)品的需求量大，品種繁多，修訂統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)方法相對(duì)比較困難，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)尚未能滿足日益增多的健康產(chǎn)品的檢驗(yàn)，為此需要繼續(xù)對(duì)檢驗(yàn)降壓類健康產(chǎn)品中非法添加化學(xué)藥物的方法進(jìn)行調(diào)研，更新補(bǔ)充現(xiàn)有的檢驗(yàn)方法[5-10]。本論文通過(guò)采用高效液相色譜法的檢測(cè)手段，研究降壓類健康產(chǎn)品中非法添加馬來(lái)酸依那普利、西地那非、厄貝沙坦3中化學(xué)藥物的檢測(cè)方法，建立準(zhǔn)確可靠、方便快捷的檢測(cè)方法，并用液相色譜-質(zhì)譜連用法進(jìn)行校準(zhǔn)確證，為監(jiān)督管理部門(mén)提供有效快捷的方法。

1相關(guān)概念1.1降壓類健康產(chǎn)品1.1.1健康產(chǎn)品及降壓類健康產(chǎn)品簡(jiǎn)介健康產(chǎn)品，即保健食品和中成藥的統(tǒng)稱，保健食品食指表明特定保健功能或者以補(bǔ)充維生素、礦物質(zhì)為目的的食品，即適用于特定人群食用，具有調(diào)節(jié)肌體功能、不以治療疾病為目的，并且對(duì)人體不產(chǎn)生任何急性、亞急性或者慢性危害的食品[11]。中成藥則指以中草藥為原料，經(jīng)制劑加工制成各種不同劑型的制品，常見(jiàn)的劑型有注射劑、口服液體劑型（溶液型、混懸劑、乳劑）、口服固體劑型（散劑、膠囊劑、片劑、丸劑）等。中成藥是以中藥材為原料，進(jìn)而提取加工炮制成飲片、丸劑等，目前全國(guó)在炮制工藝上尚未有統(tǒng)一的規(guī)定，而中藥材因產(chǎn)地種屬不同而導(dǎo)致品質(zhì)不一，其生物利用度、配伍原理等都產(chǎn)生了區(qū)別，這給中成藥的質(zhì)量管理帶來(lái)一定的困難。降血壓類健康產(chǎn)品，顧名思義，即為輔助高血壓人群鞏固穩(wěn)定血壓，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力的產(chǎn)品。一般這些降壓類健康產(chǎn)品都是通過(guò)活血血管，增加血管彈性的方式來(lái)調(diào)理病情。該類健康產(chǎn)品中不得含有任何非法化學(xué)成分的添加。1.1.2健康產(chǎn)品發(fā)展現(xiàn)狀及存在問(wèn)題目前我國(guó)保健食品市場(chǎng)的規(guī)模居世界第二。截止2012年，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局共批準(zhǔn)保健食品12332個(gè)，其中國(guó)產(chǎn)保健食品11667個(gè)，進(jìn)口保健食品665個(gè)，我國(guó)城鄉(xiāng)居民保健類消費(fèi)支出以15%—30%的速度增長(zhǎng)，明顯高于發(fā)達(dá)國(guó)家12%的增長(zhǎng)速度[12-13]。保健品市場(chǎng)主要被功能性飲品、保健酒以及各種中老年和嬰幼兒食品所占據(jù)。面對(duì)如此龐大的健康產(chǎn)品市場(chǎng)，隨之而來(lái)的種種問(wèn)題也呼之欲出。生產(chǎn)環(huán)節(jié)存在的問(wèn)題：生產(chǎn)企業(yè)眾多，生產(chǎn)工藝落后、擅自更改配方，違法添加禁用原輔料、委托加工方方式亟待規(guī)范、產(chǎn)品標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)夸大宣傳產(chǎn)品功能。其中，商家為達(dá)到廣告宣傳效果，增大利潤(rùn)收益，在健康產(chǎn)品中非法添加化學(xué)物質(zhì)的情況尤為嚴(yán)重，普通患者無(wú)法識(shí)別非法化學(xué)藥物成分，在不知情的情況下服用甚至隨意增加用量，導(dǎo)致病情發(fā)展更加嚴(yán)重。部分患者發(fā)生藥物的不良反應(yīng)，造成無(wú)法挽回的后果，如氫氯噻嗪、鹽酸可樂(lè)定、硝苯地平等藥物會(huì)導(dǎo)致患者低血鈉、下肢水腫、心臟移植、腎臟損害等[14-15]。目前，檢測(cè)健康產(chǎn)品中非法添加化學(xué)藥物的方法通常是由4種技術(shù)組合而成:理化鑒別技術(shù)、層色譜技術(shù)、高效液相色譜技術(shù)和液相質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)[16-18]。有關(guān)監(jiān)督部門(mén)抽查整治市場(chǎng)的時(shí)候，通常采用高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用分析技術(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)分析，這兩種方法簡(jiǎn)便可靠，方便快捷，提高了監(jiān)督檢驗(yàn)效率。但由于健康產(chǎn)品發(fā)展迅速，品類繁多，故需不斷對(duì)健康產(chǎn)品中非法添加化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行研究，更新和補(bǔ)充國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局下發(fā)的標(biāo)準(zhǔn)。1.1.3降壓類健康產(chǎn)品發(fā)展現(xiàn)狀及存在問(wèn)題就目前來(lái)說(shuō)，市面上銷售的降壓類健康產(chǎn)品種類和數(shù)量呈高度增長(zhǎng)狀態(tài)，世界衛(wèi)生組織規(guī)定的四代健康產(chǎn)品都有一一對(duì)應(yīng)的品種。市場(chǎng)需求量增加，意味著市場(chǎng)將會(huì)越來(lái)越發(fā)，那么投身于此發(fā)展的商家自然也多了。國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)管部門(mén)多年來(lái)一直緊盯著健康產(chǎn)品市場(chǎng)，但無(wú)奈還是無(wú)法徹底遏制健康產(chǎn)品的亂象。降壓類健康產(chǎn)品中非法添加藥物檢測(cè)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（藥品補(bǔ)充檢驗(yàn)法2009032及2014008）涉及12種成分（硝苯地平、阿替洛爾、鹽酸可樂(lè)定、氫氯噻嗪、卡托普利、哌唑嗪、利血平、氨氯地平、尼群地平、尼莫地平、尼索地平、非洛地平），此外文獻(xiàn)[19-23]還報(bào)道了其他多種非法添加成分（如氨苯蝶啶、氯沙坦、比索洛爾等）。除此之外，其他降壓類化學(xué)藥物被作為降壓類健康產(chǎn)品的非法添加的事件也屢有發(fā)生，如依那普利、厄貝沙坦等。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局下發(fā)的監(jiān)督檢驗(yàn)方法和手段難以全面、準(zhǔn)確的鑒別各種違添的化學(xué)物質(zhì)，研究和建立非法化學(xué)物質(zhì)的檢測(cè)方法已成為監(jiān)管部門(mén)的主要任務(wù)。2研究部分2.1實(shí)驗(yàn)材料2.1.1實(shí)驗(yàn)儀器島津LC20A高效液相色譜儀；API5500液質(zhì)連用儀；Milli-QReference超純水系統(tǒng)；SartoriusCPA224s型電子天平；KQ-300DE型超聲波清洗器。2.1.2實(shí)驗(yàn)試劑馬來(lái)酸依那普利（批號(hào)100705-201203）、厄貝沙坦（批號(hào)100607-201804）、西地那非（批號(hào)510068-201401）、甲醇（廣州化學(xué)試劑廠）2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1HPLC色譜條件色譜柱為PhenomenexLunaC18(2.0mm×100mm,5μm);流動(dòng)相:以0.5%甲酸水溶液為流動(dòng)相A,乙腈為流動(dòng)相B,梯度洗脫,見(jiàn)流動(dòng)相為0.2%磷酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫：0～5min，90%A；5～20min，90%～60%A；20～28min,60%～30%A；28～38min，30%A；38～39min，30%～90%A；39～45min，90%A。流速1.0mL/min，柱溫35℃；進(jìn)樣量10μL。2.2.2LC-MS/MS色譜條件液相色譜條件色譜柱：ThermoODS-2Hypersil柱（2.1×150mm,5μm）；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：2μL；流動(dòng)相：A為甲醇，B為0.02mol/mL乙酸銨水溶液，流速：0.3mL/min，梯度洗脫程序：0～4min,10%～55%A；4～6min，55%～65%A；6～8min，65%～75%A；8～10min，75%～90%A；10～12min，90%A；12～13min，90%～10%A；13～17min，10%A。質(zhì)譜條件電噴霧離子源（ESI）、正離子檢測(cè)方式；離子源溫度：450℃；離子噴霧氣流速7500ml/min，檢測(cè)方式為MRM+MS2全掃描。3種降壓藥物的質(zhì)譜分析參數(shù)見(jiàn)表1。表13種降壓藥物的質(zhì)譜分析參數(shù)序號(hào)成分定性離子對(duì)(m/z)掃描范圍(amu)碰撞電壓(v)1馬來(lái)酸依那普利376.9/234.050-500232西地那非475.2/283.450-500463厄貝沙坦429.4/207.050-500232.2.3對(duì)照品溶液的制備精密稱取馬來(lái)酸依那普利、西地那非、厄貝沙坦對(duì)照品各10mg，分別置于10mL量瓶中，加甲醇適量超聲溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度均為1mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。2.2.4供試品溶液的制備取膠囊劑內(nèi)容物、片劑以及丸劑各適量，分別置于研缽中，研磨均勻成粉末狀。分別精密稱取粉末0.3g，置50mL量瓶中，加甲醇溶液約25mL，超聲處理15min，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻后初濾，再取續(xù)濾液經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液。2.2.5檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取上述溶液10μL進(jìn)樣測(cè)定，從高效液相色譜儀中的光譜圖查看各物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)（見(jiàn)附錄A），其中馬來(lái)酸依那普利在210nm處有最大吸收，厄貝沙坦在220nm處有最大吸收，西地那非在290nm處有最大吸收，為兼顧3種成分同時(shí)測(cè)定，因此選定220nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，并同時(shí)采集200～400nm的光譜圖。2.2.6三種降壓類化學(xué)物色譜特征取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，按“2.2.1”的色譜條件進(jìn)樣，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，3種化學(xué)物的分離良好，如圖1。圖13種降壓類化學(xué)物對(duì)照品的高效液相色譜圖3種化學(xué)物色譜峰從左到右依次為馬來(lái)酸依那普利、西地那非、厄貝沙坦2.3方法學(xué)驗(yàn)證2.3.1專屬性取“2.2.4”項(xiàng)下3種溶液按“2.2.1”色譜條件各進(jìn)樣10μL測(cè)定，所得到的3種劑型陰性樣品溶液的色譜圖，均未出現(xiàn)干擾3種目標(biāo)化學(xué)成分的色譜峰。結(jié)果顯示，3種劑型中所含的中藥成分均不干擾目標(biāo)物的測(cè)定，方法專屬性強(qiáng)。2.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限精密量取“2.2.3”項(xiàng)下的3種對(duì)照品儲(chǔ)備液，稀釋配制成100μg/ml、50μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、5μg/ml一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。將上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各取10μL進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度c為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)（r2）見(jiàn)表2表23種降壓類化學(xué)藥物的線性方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)成分線性方程線性范圍（μg/mL）相關(guān)系數(shù)r馬來(lái)酸依那普利y=8003.5x+295495.0-100.60.9992西地那非y=33895x+484315.2-100.30.9994厄貝沙坦y=34968x+285045.1-100.80.99992.3.3檢出限試驗(yàn)精密稱取3種化學(xué)藥物對(duì)照品溶液混合后稀釋若干倍，取10μL進(jìn)樣檢測(cè)。分別在波長(zhǎng)為210nm、240nm和290nm下觀察峰面積（見(jiàn)圖2），測(cè)得檢出限馬來(lái)酸依那普利為62.2μg/g、西地那非為59.9μg/g、厄貝沙坦為54.1μg/g。圖23種化學(xué)藥物混合對(duì)照品檢出限色譜圖3種化學(xué)物色譜峰從左到右依次為馬來(lái)酸依那普利、西地那非、厄貝沙坦2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)取“2.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液50μg/ml對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果以峰面積算，馬來(lái)酸依那普利、西地那非、厄貝沙坦的RSD分別為0.9%、0.5%、0.6%（n=6），表明該方法重復(fù)性較好。2.3.5精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液50μg/ml對(duì)照品溶液進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)行六次測(cè)定精密度，馬來(lái)酸依那普利、西地那非、厄貝沙坦峰面積的的RSD分別為2.2%、0.3%、0.3%，重復(fù)性良好。分別于0、4、8、16、20、24h將上述溶液進(jìn)行分析，馬來(lái)酸依那普利、西地那非厄貝沙坦的峰面積RSD分別為3.2%、2.8%、2.8%。表明3種降壓類化學(xué)藥物在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。2.3.6加樣回收率試驗(yàn)精密稱取代表性陰性樣品9份，每份0.3g，分別置于50mL量瓶中，加入混合對(duì)照品適量，配制3個(gè)質(zhì)量濃度，每個(gè)濃度水平配制9份，結(jié)果見(jiàn)表3。表3回收率結(jié)果成分實(shí)測(cè)量（mg）平均含量（mg）平均回收率（%）RSD馬來(lái)酸依那普利3.0482.0171.0253.2952.1481.060108.1106.5103.42.3%西地那非3.0402.0111.0123.3922.2311.087111.6110.9107.52.0%厄貝沙坦3.0222.0321.0363.2702.1251.046108.2104.6100.93.5%2.3.7實(shí)際樣品的測(cè)定本次研究共收集降壓類健康產(chǎn)品39批次，取各品種樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，其中5批樣品檢出非法添加成分馬來(lái)酸依那普利、西地那非，陽(yáng)性率為12.8%。結(jié)果見(jiàn)表4。表4實(shí)際樣品測(cè)定結(jié)果成分檢出數(shù)（批）檢出率馬來(lái)酸依那普利410.3%西地那非12.6%表5樣品含量測(cè)定結(jié)果樣品非法添加成分測(cè)得含量（%）平均含量（%）XX膠囊馬來(lái)酸依那普利3.293.023.2XX降壓寶馬來(lái)酸依那普利XX丹參天麻膠囊馬來(lái)酸依那普利1.401.441.4XX牌藏雪寧膠囊馬來(lái)酸依那普利2.562.882.7XX降壓定西地那非0.020.020.022.3.8LC-MS/MS法定性確證結(jié)果對(duì)于選擇離子全掃描二級(jí)質(zhì)譜，由于受目標(biāo)成分濃度和基質(zhì)影響，很難采用全譜進(jìn)行定性評(píng)價(jià)，因此在相同分析條件下，一般采用與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液比較是否具有特征碎片離子峰的方法進(jìn)行定性評(píng)價(jià)。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，馬來(lái)酸依那普利、西地那非、厄貝沙坦的特征碎片離子峰分別為376.9/234.0、476.1/99.2、429.4/207.0，本次實(shí)驗(yàn)使用液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)三種成分也出現(xiàn)了相應(yīng)的特征碎片離子峰。厄貝沙坦馬來(lái)酸依那普利厄貝沙坦馬來(lái)酸依那普利圖3馬來(lái)酸依那普利和厄貝沙坦對(duì)照品溶液的二級(jí)質(zhì)譜圖馬來(lái)酸依那普利總離子流圖厄貝沙坦總離子流圖馬來(lái)酸依那普利總離子流圖厄貝沙坦總離子流圖圖4代表性陽(yáng)性樣品的總離子流圖厄貝沙坦陽(yáng)性樣品馬來(lái)酸依那普利陽(yáng)性樣品圖5厄貝沙坦陽(yáng)性樣品馬來(lái)酸依那普利陽(yáng)性樣品3討論3.1分離條件的選擇3.1.1流動(dòng)相的選擇參考國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公布的降壓類健康產(chǎn)品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法以及多數(shù)文獻(xiàn)中的補(bǔ)充方法[24-30]，本實(shí)驗(yàn)采用梯度洗脫程序，選擇“磷酸水溶液-乙腈”作為HPLC法流動(dòng)相、“乙酸銨水溶液-甲醇”作為L(zhǎng)C-MS/MS法流動(dòng)相。經(jīng)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，此系統(tǒng)可將馬來(lái)酸依那普利西地那非、厄貝沙坦同時(shí)分離，且具有良好的分離效果。3.1.2色譜柱的選擇本實(shí)驗(yàn)中所采用的梯度洗脫方法進(jìn)行3種組分的分離時(shí)，采用不同的色譜柱出現(xiàn)不同的結(jié)果。采用Ultimate-C18柱進(jìn)行分析時(shí)，厄貝沙坦的分離效果更好，但馬來(lái)酸依那普利卻分離不出來(lái)，若只對(duì)厄貝沙坦進(jìn)行分析，應(yīng)選擇Ultimate-C18柱；采用PhenomenexLunaC18柱時(shí)，3種組分分離良好，重復(fù)進(jìn)樣的各組分保留時(shí)間的精密度良好。因此本實(shí)驗(yàn)選擇PhenomenexLunaC18柱分離效果較好。3.2對(duì)照品及樣品處理綜合3種成分理化性質(zhì)的分析，各組分溶解性質(zhì)有一定差異，但基本能溶于甲醇，因此本實(shí)驗(yàn)最終選擇用甲醇作為配制對(duì)照品及供試品溶液的溶劑。本實(shí)驗(yàn)所選擇的3種成分中有些化合物不穩(wěn)定，如馬來(lái)酸依那普利易降解變質(zhì)，因此在溶液的制備及存儲(chǔ)過(guò)程應(yīng)盡量避光及縮短操作時(shí)間。3.3其他本實(shí)驗(yàn)擬建立非法添加藥物檢測(cè)的HPLC的方法及LC-MS/MS定性確證方法。4結(jié)論本論文建立了降壓類健康產(chǎn)品中非法添加馬來(lái)酸依那普利、西地那非、厄貝沙坦等降壓類化學(xué)藥物的高效液相色譜法及LC-MS/MS定性確證方法。通過(guò)上述方法的檢測(cè)，馬來(lái)酸依那普利、西地那非、厄貝沙坦等成分在所建立的色譜系統(tǒng)中都能得到很好的分離，空白溶劑無(wú)干擾，結(jié)果表明該方法專屬性較強(qiáng)、靈敏度高、適用性廣。

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