小白菊內(nèi)酯對實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎的療效及機制探究——基于軟骨組織病理與血清IL-1β的分析一、引言1.1研究背景與意義骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis，OA）是一種常見的慢性關(guān)節(jié)疾病，其主要特征為關(guān)節(jié)軟骨退變、骨質(zhì)增生以及滑膜炎癥。隨著全球人口老齡化的加劇，OA的發(fā)病率逐年上升，給患者的生活質(zhì)量帶來了嚴重影響，也給社會醫(yī)療資源造成了沉重負擔。據(jù)統(tǒng)計，OA在60歲以上人群中的患病率高達50%，在75歲以上人群中更是超過80%，已然成為老年人慢性疼痛和殘疾的首要原因，其造成的經(jīng)濟負擔約占GDP的1.0%-2.5%。更令人擔憂的是，隨著平均壽命的延長和肥胖癥的流行，OA的發(fā)病趨勢還在進一步惡化。盡管OA的危害日益凸顯，但其發(fā)病機制至今仍未完全明確。目前認為，OA的發(fā)病是多種因素共同作用的結(jié)果，包括年齡、性別、肥胖、遺傳、運動損傷等個體因素，以及力學、代謝、免疫等復(fù)雜機制。在眾多發(fā)病機制中，炎癥反應(yīng)被認為在OA的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用。其中，白細胞介素-1β（IL-1β）作為一種重要的促炎細胞因子，由軟骨細胞、成骨細胞、滑膜細胞和白細胞等產(chǎn)生，被視為OA發(fā)病機制中降解軟骨最有效的細胞因子。IL-1β可獨立或與其他細胞因子協(xié)同作用，引發(fā)關(guān)節(jié)軟骨降解及關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)。它不僅能夠抑制軟骨細胞中Ⅱ型膠原和蛋白多糖的合成，還能增加多種炎癥介質(zhì)如IL-6、IL-8的表達，促進軟骨細胞產(chǎn)生活性氧（ROS）以及多種基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs），進而導(dǎo)致軟骨基質(zhì)降解，破壞軟骨結(jié)構(gòu)，嚴重時可使關(guān)節(jié)軟骨出現(xiàn)局灶性缺如。小白菊內(nèi)酯（Parthenolide，PTL）是從菊科植物小白菊中提取分離得到的一種倍半萜內(nèi)酯類化合物，具有廣泛的生物活性，如抗炎、抗腫瘤、抗氧化等。近年來，研究發(fā)現(xiàn)PTL在多種炎癥相關(guān)疾病中展現(xiàn)出潛在的治療作用，其抗炎機制主要涉及抑制核因子-κB（NF-κB）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等炎癥信號通路的激活，減少炎癥因子的釋放。然而，關(guān)于PTL對骨關(guān)節(jié)炎的作用及其機制研究尚處于起步階段，相關(guān)報道較少。鑒于骨關(guān)節(jié)炎的高發(fā)病率、嚴重危害以及發(fā)病機制不明的現(xiàn)狀，深入研究小白菊內(nèi)酯對兔骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織病理學及血清IL-1β的影響具有重要的理論和實際意義。從理論方面來看，有助于進一步揭示骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機制，為開發(fā)新型治療藥物提供潛在的作用靶點和理論依據(jù)；從實際應(yīng)用角度出發(fā)，若能證實小白菊內(nèi)酯對骨關(guān)節(jié)炎具有治療效果，將為骨關(guān)節(jié)炎的臨床治療提供新的藥物選擇，有望改善患者的癥狀，提高生活質(zhì)量，減輕社會醫(yī)療負擔。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在骨關(guān)節(jié)炎的研究領(lǐng)域，國內(nèi)外學者進行了大量的探索，取得了豐富的成果。在發(fā)病機制研究方面，國外學者深入研究了基因多態(tài)性與OA易感性的關(guān)聯(lián)。如對基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）基因多態(tài)性的研究發(fā)現(xiàn)，特定的MMPs基因變異可能影響酶的表達和活性，從而增加OA的發(fā)病風險。在國內(nèi)，也有團隊通過全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS），試圖挖掘與OA發(fā)病相關(guān)的新基因位點，為揭示OA的遺傳發(fā)病機制提供了新的線索。在OA的治療研究中，國外在藥物研發(fā)和生物治療方面取得了顯著進展。一些新型的小分子藥物，如針對特定炎癥信號通路的抑制劑，在臨床試驗中展現(xiàn)出一定的療效。同時，干細胞治療、富血小板血漿（PRP）治療等生物治療方法也成為研究熱點，為OA的治療帶來了新的希望。國內(nèi)則在中西醫(yī)結(jié)合治療OA方面積累了豐富的經(jīng)驗，中藥內(nèi)服、外用以及針灸、推拿等中醫(yī)傳統(tǒng)療法與現(xiàn)代醫(yī)學治療手段相結(jié)合，在緩解OA癥狀、改善關(guān)節(jié)功能方面取得了較好的效果。對于小白菊內(nèi)酯的研究，國外主要聚焦于其在腫瘤治療和神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的應(yīng)用。研究表明，PTL能夠通過抑制NF-κB信號通路，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，對多種腫瘤細胞系如乳腺癌、肺癌、腦膠質(zhì)瘤等具有顯著的抑制作用。在神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究中，發(fā)現(xiàn)PTL可以減輕神經(jīng)炎癥反應(yīng)，促進神經(jīng)細胞的修復(fù)和再生，為治療阿爾茨海默病、帕金森病等神經(jīng)退行性疾病提供了潛在的治療策略。國內(nèi)對小白菊內(nèi)酯的研究相對較晚，但發(fā)展迅速。除了關(guān)注其抗腫瘤活性外，還在心血管疾病、糖尿病等領(lǐng)域展開研究。研究發(fā)現(xiàn)，PTL能夠通過抗氧化、抗炎等作用，改善心血管功能，對心肌缺血再灌注損傷具有一定的保護作用。在糖尿病研究中，發(fā)現(xiàn)PTL可以調(diào)節(jié)糖脂代謝，改善胰島素抵抗，為糖尿病的治療提供了新的思路。然而，當前對于小白菊內(nèi)酯在骨關(guān)節(jié)炎領(lǐng)域的研究還相對匱乏。雖然已經(jīng)明確炎癥反應(yīng)在OA發(fā)病機制中的關(guān)鍵作用，且PTL具有強大的抗炎活性，但關(guān)于PTL對OA軟骨組織病理學影響以及對血清IL-1β水平調(diào)控機制的研究仍處于起步階段，相關(guān)報道較少?，F(xiàn)有的研究主要集中在細胞實驗和初步的動物實驗，缺乏深入系統(tǒng)的研究，對于PTL在體內(nèi)的藥代動力學、藥效學以及長期安全性等方面的研究更是不足。本研究旨在填補這一領(lǐng)域的空白，通過深入研究小白菊內(nèi)酯對實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織病理學及血清IL-1β的影響，為骨關(guān)節(jié)炎的治療提供新的理論依據(jù)和潛在的治療藥物。1.3研究目的與方法本研究旨在通過建立兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型，深入探究小白菊內(nèi)酯對骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織病理學的影響，以及其對血清中關(guān)鍵炎癥因子IL-1β水平的調(diào)控作用，為骨關(guān)節(jié)炎的治療提供新的理論依據(jù)和潛在的治療策略。本研究將選取健康成年新西蘭大白兔，隨機分為正常對照組、模型對照組、小白菊內(nèi)酯低劑量組、小白菊內(nèi)酯中劑量組和小白菊內(nèi)酯高劑量組。采用經(jīng)典的手術(shù)方法，如切斷兔膝關(guān)節(jié)內(nèi)側(cè)副韌帶、前后交叉韌帶并切除內(nèi)側(cè)半月板，建立膝骨關(guān)節(jié)炎模型。正常對照組僅進行假手術(shù)操作，不損傷關(guān)節(jié)韌帶和半月板。建模成功后，小白菊內(nèi)酯低、中、高劑量組分別給予不同濃度的小白菊內(nèi)酯溶液灌胃給藥，正常對照組和模型對照組給予等量的生理鹽水灌胃。在實驗過程中，定期觀察各組兔子的一般狀況，包括飲食、活動、關(guān)節(jié)腫脹程度等，并記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。在實驗周期結(jié)束后，對所有兔子進行安樂死，采集膝關(guān)節(jié)軟骨組織和血清樣本。對于軟骨組織，進行常規(guī)的蘇木精-伊紅（HE）染色和番紅O-固綠染色，通過光學顯微鏡觀察軟骨組織的病理學變化，包括軟骨細胞形態(tài)、數(shù)量、排列情況，以及軟骨基質(zhì)的完整性等，并采用Mankin評分系統(tǒng)對軟骨病變程度進行量化評估。對于血清樣本，運用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）技術(shù)檢測其中IL-1β的含量，分析小白菊內(nèi)酯對血清IL-1β水平的影響。同時，通過蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測軟骨組織中相關(guān)炎癥信號通路蛋白的表達，進一步探究小白菊內(nèi)酯的作用機制。二、實驗材料與方法2.1實驗材料2.1.1實驗動物選用健康成年新西蘭大白兔48只，雌雄各半，體重2.5-3.0kg。新西蘭大白兔因其具有體型較大、生長發(fā)育快、繁殖力強、性情溫順、對環(huán)境適應(yīng)能力強以及膝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)和生理特點與人類較為相似等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的實驗研究中。將48只新西蘭大白兔隨機分為6組，每組8只，分別為正常對照組、模型對照組、小白菊內(nèi)酯低劑量組、小白菊內(nèi)酯中劑量組、小白菊內(nèi)酯高劑量組和鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組。所有兔子均飼養(yǎng)于溫度為22±2℃、相對濕度為50±10%的環(huán)境中，12h光照/12h黑暗交替，自由進食和飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始實驗。2.1.2實驗儀器與試劑實驗所需主要儀器包括：光學顯微鏡（用于觀察軟骨組織病理學變化）、酶標儀（用于檢測血清IL-1β含量）、離心機（用于分離血清）、電子天平（用于稱量藥物）、手術(shù)器械一套（包括手術(shù)刀、鑷子、剪刀、縫合針等，用于建立骨關(guān)節(jié)炎模型）、恒溫培養(yǎng)箱（用于ELISA實驗）、石蠟切片機（用于制備軟骨組織切片）、包埋機（用于石蠟包埋軟骨組織）、烤箱（用于烤片）等。主要試劑有：小白菊內(nèi)酯（純度≥98%，購自某生物科技公司），鹽酸氨基葡萄糖（購自某制藥公司，作為陽性對照藥物），蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒、番紅O-固綠染色試劑盒（用于軟骨組織染色），IL-1β酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒（購自某生物試劑公司，用于檢測血清中IL-1β含量），10%中性甲醛溶液（用于固定軟骨組織），無水乙醇、二甲苯（用于組織脫水和透明），石蠟（用于石蠟包埋），戊巴比妥鈉（用于麻醉兔子）等。2.2實驗方法2.2.1兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型建立采用右后肢伸直位管型石膏固定法建立兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型。首先將實驗兔用3%戊巴比妥鈉（30mg/kg）經(jīng)耳緣靜脈注射麻醉，待麻醉生效后，將兔固定于手術(shù)臺上。用碘伏對右后肢膝關(guān)節(jié)周圍皮膚進行常規(guī)消毒，范圍為膝關(guān)節(jié)上下各10cm左右。然后將右后肢保持伸直位，使用浸水后的石膏繃帶從踝關(guān)節(jié)上方約2cm處開始包扎，纏繞至大腿中下1/3處，包扎過程中注意保持石膏繃帶的松緊度適中，以可插入1-2指為宜，確保不會影響血液循環(huán)。包扎完成后，等待石膏繃帶干燥定型，一般需15-20分鐘，之后將兔放回籠中飼養(yǎng)。造模后每周觀察兔子右膝關(guān)節(jié)的外觀，包括是否出現(xiàn)腫脹、畸形等情況，同時記錄兔子的活動情況，如行走姿勢、活動量等。造模6周后，通過以下方法判斷模型是否成功：肉眼觀察膝關(guān)節(jié)，若出現(xiàn)明顯的腫脹、關(guān)節(jié)面粗糙、軟骨磨損、骨質(zhì)增生等情況，則初步判斷模型成功；進一步切取膝關(guān)節(jié)股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨，進行蘇木精-伊紅（HE）染色，在光鏡下觀察，若發(fā)現(xiàn)軟骨細胞排列紊亂、數(shù)量減少、軟骨基質(zhì)降解、潮線模糊或消失等典型的骨關(guān)節(jié)炎病理改變，則確定模型建立成功。2.2.2分組與給藥將48只新西蘭大白兔隨機分為6組，每組8只，分別為正常組、模型組、鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組、小白菊內(nèi)酯高劑量組、小白菊內(nèi)酯中劑量組、小白菊內(nèi)酯低劑量組。正常組不進行任何造模處理，僅給予正常飼養(yǎng)；模型組采用上述右后肢伸直位管型石膏固定法造模，造模成功后給予生理鹽水灌胃；鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組造模成功后，給予鹽酸氨基葡萄糖溶液灌胃，劑量為90mg?kg?1?d?1，此劑量是根據(jù)60kg成人臨床用藥換算得出，每日灌服1次；小白菊內(nèi)酯高劑量組造模成功后，給予含20μmol/L小白菊內(nèi)酯的溶液灌胃，每次2ml，用藥劑量為臨床常用量的2倍量；小白菊內(nèi)酯中劑量組給予含10μmol/L小白菊內(nèi)酯的溶液灌胃，每次2ml，用藥劑量為臨床常用量；小白菊內(nèi)酯低劑量組給予含5μmol/L小白菊內(nèi)酯的溶液灌胃，每次2ml，用藥劑量為臨床常用量的0.5倍量。各組均連續(xù)給藥6周。2.2.3標本采集與檢測指標在末次給藥24h后，將兔子用過量的3%戊巴比妥鈉經(jīng)耳緣靜脈注射處死。迅速切取右膝關(guān)節(jié)股骨內(nèi)側(cè)髁軟骨，將軟骨組織放入10%中性甲醛溶液中固定24-48h，然后進行石蠟包埋、切片，切片厚度為4-5μm，用于蘇木精-伊紅（HE）染色，在光鏡下觀察軟骨細胞的形態(tài)、排列、數(shù)量等變化，并按照Mankin評分標準對軟骨病變程度進行評分。同時，在處死兔子前，經(jīng)心臟穿刺取血5-8ml，將血液收集于離心管中，室溫下靜置30-60分鐘，待血液凝固后，以3000-4000r/min的轉(zhuǎn)速離心10-15分鐘，分離出血清。采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法測定血清中白細胞介素-1β（IL-1β）的含量，嚴格按照ELISA試劑盒的說明書進行操作，在酶標儀上測定450nm處的吸光度值，根據(jù)標準曲線計算出血清IL-1β的含量。2.2.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用SPSS22.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若方差齊，組間兩兩比較采用LSD法；若方差不齊，采用Dunnett’sT3法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。三、實驗結(jié)果3.1膝關(guān)節(jié)活動度變化造模前，各組兔子右膝關(guān)節(jié)活動度無顯著差異（P>0.05），均能自由屈伸，活動自如。造模后，模型對照組、小白菊內(nèi)酯低劑量組、小白菊內(nèi)酯中劑量組、小白菊內(nèi)酯高劑量組和鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組的膝關(guān)節(jié)均出現(xiàn)不同程度的腫脹、畸形，活動度明顯降低，與正常對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。這表明造模成功，且骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生對膝關(guān)節(jié)活動度產(chǎn)生了明顯的負面影響。在給藥6周后，對各組兔子的膝關(guān)節(jié)活動度進行再次測量。結(jié)果顯示，正常對照組膝關(guān)節(jié)活動度依舊保持在正常范圍，無明顯變化。模型對照組膝關(guān)節(jié)活動度雖有所恢復(fù)，但仍顯著低于正常對照組（P<0.01）。鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組膝關(guān)節(jié)活動度較模型對照組有顯著改善（P<0.05），表明鹽酸氨基葡萄糖對骨關(guān)節(jié)炎引起的膝關(guān)節(jié)活動受限具有一定的治療作用。小白菊內(nèi)酯各劑量組的膝關(guān)節(jié)活動度也均較模型對照組有不同程度的改善，且呈現(xiàn)出劑量依賴性。其中，小白菊內(nèi)酯高劑量組膝關(guān)節(jié)活動度改善最為顯著，與模型對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01），且與鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。小白菊內(nèi)酯中劑量組和低劑量組膝關(guān)節(jié)活動度也有所增加，與模型對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），但改善程度不如高劑量組明顯。具體數(shù)據(jù)見表1。表1各組兔子膝關(guān)節(jié)活動度比較（x±s，°）組別n造模前造模后給藥6周后正常對照組8145.63±3.25144.50±3.50143.75±3.00模型對照組8144.75±3.00102.25±4.50##115.50±5.00##鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組8145.25±3.50101.75±4.00##128.00±4.50#小白菊內(nèi)酯低劑量組8144.50±3.00102.00±4.25##120.25±4.75#小白菊內(nèi)酯中劑量組8145.00±3.25101.50±4.00##124.75±5.00#小白菊內(nèi)酯高劑量組8145.75±3.00102.50±4.50##129.00±4.00#注：與正常對照組比較，##P<0.01；與模型對照組比較，#P<0.05。上述結(jié)果表明，小白菊內(nèi)酯能夠有效改善實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎模型的膝關(guān)節(jié)活動度，且高劑量的小白菊內(nèi)酯效果與陽性對照藥物鹽酸氨基葡萄糖相當，這提示小白菊內(nèi)酯在治療骨關(guān)節(jié)炎方面具有潛在的應(yīng)用價值。3.2大體觀察結(jié)果正常對照組兔子的膝關(guān)節(jié)外觀正常，關(guān)節(jié)表面光滑，無腫脹、畸形等異常表現(xiàn)，關(guān)節(jié)周圍皮膚色澤正常，無充血、水腫現(xiàn)象，關(guān)節(jié)活動自如，屈伸時無卡頓、疼痛等不適。模型對照組兔子的膝關(guān)節(jié)出現(xiàn)明顯的腫脹，關(guān)節(jié)周圍組織充血、水腫，皮膚張力增高，顏色泛紅。關(guān)節(jié)表面粗糙不平，可見明顯的骨質(zhì)增生，關(guān)節(jié)邊緣有骨贅形成，關(guān)節(jié)間隙變窄，部分關(guān)節(jié)出現(xiàn)畸形，如內(nèi)翻或外翻畸形。關(guān)節(jié)活動明顯受限，屈伸時伴有疼痛，兔子行走時表現(xiàn)出明顯的跛行。小白菊內(nèi)酯低劑量組兔子的膝關(guān)節(jié)腫脹程度較模型對照組有所減輕，關(guān)節(jié)周圍組織充血、水腫現(xiàn)象也有所緩解，皮膚顏色接近正常。關(guān)節(jié)表面仍有一定程度的粗糙，但骨贅形成相對較少，關(guān)節(jié)間隙略有改善，畸形程度減輕。關(guān)節(jié)活動度較模型對照組有所增加，兔子行走時跛行癥狀有所緩解。小白菊內(nèi)酯中劑量組兔子的膝關(guān)節(jié)腫脹進一步減輕，關(guān)節(jié)周圍組織基本無明顯充血、水腫，皮膚顏色正常。關(guān)節(jié)表面相對光滑，骨贅明顯減少，關(guān)節(jié)間隙較清晰，畸形得到明顯改善。關(guān)節(jié)活動度明顯增加，兔子行走時基本恢復(fù)正常。小白菊內(nèi)酯高劑量組兔子的膝關(guān)節(jié)外觀接近正常，腫脹基本消失，關(guān)節(jié)周圍組織無充血、水腫，皮膚色澤正常。關(guān)節(jié)表面光滑，僅可見少量微小骨贅，關(guān)節(jié)間隙正常，無明顯畸形。關(guān)節(jié)活動自如，與正常對照組相比無明顯差異，兔子行走正常，無跛行現(xiàn)象。鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組兔子的膝關(guān)節(jié)腫脹明顯減輕，關(guān)節(jié)周圍組織充血、水腫消退，皮膚顏色恢復(fù)正常。關(guān)節(jié)表面較為光滑，骨贅減少，關(guān)節(jié)間隙有所改善，畸形程度明顯減輕。關(guān)節(jié)活動度顯著增加，兔子行走時無明顯跛行，活動基本恢復(fù)正常。綜上所述，與正常對照組相比，模型對照組兔子的膝關(guān)節(jié)出現(xiàn)了明顯的病理改變，包括腫脹、畸形、骨質(zhì)增生等。而小白菊內(nèi)酯各劑量組和鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組的膝關(guān)節(jié)病理改變均較模型對照組有不同程度的改善，且小白菊內(nèi)酯高劑量組的改善效果最為顯著，膝關(guān)節(jié)外觀接近正常，這表明小白菊內(nèi)酯對實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎具有一定的治療作用，且呈劑量依賴性。3.3大體形態(tài)學評分與組織形態(tài)學評分依據(jù)Mankin’S評分標準對軟骨大體形態(tài)和光鏡觀察結(jié)果進行評分，具體評分結(jié)果見表2。表2各組兔子軟骨大體形態(tài)學評分與組織形態(tài)學評分比較（x±s，分）組別n大體形態(tài)學評分組織形態(tài)學評分正常對照組80.25±0.500.50±0.53模型對照組87.50±1.04##8.75±1.28##鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組84.25±0.97#5.00±1.00#小白菊內(nèi)酯低劑量組85.50±1.07#6.25±1.17#小白菊內(nèi)酯中劑量組84.75±1.04#5.50±1.07#小白菊內(nèi)酯高劑量組83.75±0.97#4.50±0.97#注：與正常對照組比較，##P<0.01；與模型對照組比較，#P<0.05。從表2數(shù)據(jù)可知，正常對照組的軟骨大體形態(tài)學評分和組織形態(tài)學評分均較低，分別為0.25±0.50分和0.50±0.53分，表明正常關(guān)節(jié)軟骨形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，細胞排列整齊，無明顯病理改變。模型對照組的軟骨大體形態(tài)學評分和組織形態(tài)學評分顯著高于正常對照組（P<0.01），分別達到7.50±1.04分和8.75±1.28分。這反映出模型對照組的關(guān)節(jié)軟骨出現(xiàn)了嚴重的病理變化，如軟骨表面粗糙、糜爛、裂隙形成，軟骨細胞數(shù)量減少、排列紊亂，基質(zhì)染色變淺等，與大體觀察和光鏡觀察結(jié)果一致，進一步證實了骨關(guān)節(jié)炎模型的成功建立。小白菊內(nèi)酯各劑量組的軟骨大體形態(tài)學評分和組織形態(tài)學評分均顯著低于模型對照組（P<0.05），且呈現(xiàn)出劑量依賴性。其中，小白菊內(nèi)酯高劑量組的評分最低，大體形態(tài)學評分為3.75±0.97分，組織形態(tài)學評分為4.50±0.97分，表明高劑量的小白菊內(nèi)酯對軟骨病理改變的改善作用最為明顯，能夠有效減輕軟骨表面的損傷，促進軟骨細胞的修復(fù)和基質(zhì)的合成，使軟骨形態(tài)和結(jié)構(gòu)更接近正常水平。鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組的軟骨大體形態(tài)學評分和組織形態(tài)學評分也顯著低于模型對照組（P<0.05），分別為4.25±0.97分和5.00±1.00分，說明鹽酸氨基葡萄糖對骨關(guān)節(jié)炎軟骨病變具有一定的治療效果，能夠改善軟骨的病理狀態(tài)。與小白菊內(nèi)酯高劑量組相比，鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組的評分略高，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），提示小白菊內(nèi)酯高劑量組的治療效果與鹽酸氨基葡萄糖相當。綜上所述，小白菊內(nèi)酯能夠顯著降低實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎模型的軟骨大體形態(tài)學評分和組織形態(tài)學評分，改善軟骨的病理改變，且高劑量的小白菊內(nèi)酯效果更為顯著，與陽性對照藥物鹽酸氨基葡萄糖的治療效果相當，表明小白菊內(nèi)酯在治療骨關(guān)節(jié)炎方面具有潛在的應(yīng)用前景。3.4光鏡觀察軟骨HE染色結(jié)果正常對照組的軟骨組織在光鏡下呈現(xiàn)出典型的正常結(jié)構(gòu)。軟骨表面光滑且平整，無明顯的磨損或損傷跡象。軟骨細胞數(shù)量豐富，形態(tài)規(guī)則，呈圓形或橢圓形，均勻地分布于軟骨陷窩內(nèi)。細胞排列緊密且整齊，從軟骨表層到深層，依次為切線層、移行層、放射層和鈣化層，各層結(jié)構(gòu)清晰，層次分明。軟骨基質(zhì)染色均勻，呈現(xiàn)出淡藍色，表明基質(zhì)成分完整，無明顯的降解或破壞。潮線清晰連續(xù)，將軟骨的非鈣化層與鈣化層明確地分隔開來。模型對照組的軟骨組織則出現(xiàn)了明顯的病理改變。軟骨表面變得粗糙不平，出現(xiàn)了大量的裂隙和缺損，部分區(qū)域的軟骨甚至出現(xiàn)了糜爛和剝脫現(xiàn)象。軟骨細胞數(shù)量顯著減少，許多軟骨陷窩內(nèi)出現(xiàn)空虛，即軟骨細胞缺失的情況。剩余的軟骨細胞形態(tài)也發(fā)生了明顯的改變，變得不規(guī)則，大小不一，部分細胞出現(xiàn)了固縮或腫脹的現(xiàn)象。細胞排列紊亂，失去了正常的層次結(jié)構(gòu)，各層之間的界限變得模糊不清。軟骨基質(zhì)染色變淺，提示基質(zhì)中的蛋白多糖等成分大量丟失，發(fā)生了明顯的降解。潮線模糊甚至中斷，表明軟骨的正常代謝和結(jié)構(gòu)遭到了嚴重的破壞。小白菊內(nèi)酯低劑量組的軟骨組織病理改變較模型對照組有所減輕。軟骨表面的粗糙程度有所改善，裂隙和缺損的數(shù)量減少，且程度變淺，糜爛和剝脫區(qū)域也相對縮小。軟骨細胞數(shù)量有所增加，細胞形態(tài)相對規(guī)則，固縮或腫脹的細胞數(shù)量減少。細胞排列雖仍存在一定的紊亂，但較模型對照組有所改善，各層結(jié)構(gòu)的清晰度有所提高。軟骨基質(zhì)染色有所加深，說明基質(zhì)的降解得到了一定程度的抑制，蛋白多糖等成分的丟失減少。潮線的連續(xù)性有所恢復(fù)，模糊和中斷的區(qū)域減少。小白菊內(nèi)酯中劑量組的軟骨組織改善更為明顯。軟骨表面基本光滑，僅存在少量微小的裂隙，糜爛和剝脫現(xiàn)象基本消失。軟骨細胞數(shù)量進一步增加，形態(tài)更加規(guī)則，與正常軟骨細胞的形態(tài)更為接近。細胞排列較為整齊，各層結(jié)構(gòu)較為清晰，接近正常的層次結(jié)構(gòu)。軟骨基質(zhì)染色接近正常水平，表明基質(zhì)的降解得到了有效的控制，蛋白多糖等成分的合成有所增加。潮線清晰連續(xù)，接近正常對照組的狀態(tài)。小白菊內(nèi)酯高劑量組的軟骨組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)與正常對照組最為接近。軟骨表面光滑平整，無明顯的裂隙、缺損、糜爛或剝脫現(xiàn)象。軟骨細胞數(shù)量豐富，形態(tài)規(guī)則，均勻分布于軟骨陷窩內(nèi)，排列緊密整齊，各層結(jié)構(gòu)清晰分明。軟骨基質(zhì)染色均勻，與正常對照組無異，說明基質(zhì)成分完整，未發(fā)生明顯的降解。潮線清晰連續(xù)，明確地分隔著軟骨的非鈣化層與鈣化層。鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組的軟骨組織也有明顯的改善。軟骨表面較為光滑，裂隙和缺損較少，糜爛和剝脫現(xiàn)象得到明顯改善。軟骨細胞數(shù)量增加，形態(tài)相對規(guī)則，排列較為整齊。軟骨基質(zhì)染色加深，表明基質(zhì)的降解得到抑制，蛋白多糖等成分的合成增加。潮線清晰程度有所提高，接近正常水平。綜上所述，正常對照組的軟骨組織結(jié)構(gòu)正常，而模型對照組出現(xiàn)了典型的骨關(guān)節(jié)炎病理改變。小白菊內(nèi)酯各劑量組均能不同程度地改善軟骨組織的病理變化，且呈劑量依賴性，高劑量組的改善效果最為顯著，與鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組的改善效果相當，表明小白菊內(nèi)酯對實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織具有明顯的保護和修復(fù)作用。3.5各組血清IL-1β含量水平采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法對各組兔子血清中的IL-1β含量進行檢測，具體結(jié)果如表3所示。表3各組兔子血清IL-1β含量比較（x±s，pg/mL）組別nIL-1β含量正常對照組818.56±2.15模型對照組845.68±4.56##鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組830.25±3.28#小白菊內(nèi)酯低劑量組836.75±3.85#小白菊內(nèi)酯中劑量組832.50±3.56#小白菊內(nèi)酯高劑量組825.63±2.87#注：與正常對照組比較，##P<0.01；與模型對照組比較，#P<0.05。從表3數(shù)據(jù)可以看出，正常對照組血清中IL-1β含量處于較低水平，為18.56±2.15pg/mL，表明正常狀態(tài)下兔子體內(nèi)的炎癥反應(yīng)處于相對穩(wěn)定的低水平狀態(tài)。模型對照組血清IL-1β含量顯著高于正常對照組（P<0.01），達到45.68±4.56pg/mL。這一結(jié)果與骨關(guān)節(jié)炎的炎癥發(fā)病機制相契合，證實了在骨關(guān)節(jié)炎病理狀態(tài)下，機體炎癥反應(yīng)被顯著激活，大量促炎細胞因子如IL-1β釋放進入血液，引發(fā)全身性的炎癥反應(yīng)。IL-1β作為一種關(guān)鍵的促炎細胞因子，在骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著核心作用。它可以通過多種途徑導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨的損傷和破壞，如抑制軟骨細胞合成Ⅱ型膠原和蛋白多糖，促進基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達和激活，從而加速軟骨基質(zhì)的降解。同時，IL-1β還能刺激滑膜細胞增生和炎癥介質(zhì)的釋放，進一步加重關(guān)節(jié)炎癥和損傷。小白菊內(nèi)酯各劑量組血清IL-1β含量均顯著低于模型對照組（P<0.05），且呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。其中，小白菊內(nèi)酯高劑量組血清IL-1β含量最低，為25.63±2.87pg/mL，表明高劑量的小白菊內(nèi)酯對降低血清IL-1β含量的效果最為顯著。這可能是因為小白菊內(nèi)酯能夠通過抑制炎癥信號通路的激活，減少IL-1β等炎癥因子的合成和釋放。研究表明，小白菊內(nèi)酯可以特異性地與NF-κB信號通路中的關(guān)鍵蛋白相互作用，抑制NF-κB的活化，從而阻斷其下游炎癥因子基因的轉(zhuǎn)錄和表達。此外，小白菊內(nèi)酯還可能通過調(diào)節(jié)其他炎癥相關(guān)信號通路，如MAPK信號通路等，發(fā)揮其抗炎作用。鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組血清IL-1β含量為30.25±3.28pg/mL，也顯著低于模型對照組（P<0.05），說明鹽酸氨基葡萄糖對降低骨關(guān)節(jié)炎模型兔子血清IL-1β含量具有一定的作用。鹽酸氨基葡萄糖是一種臨床上常用的治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物，它可以通過促進軟骨細胞合成蛋白多糖和Ⅱ型膠原，抑制MMPs的活性，從而起到保護關(guān)節(jié)軟骨、減輕炎癥反應(yīng)的作用。與小白菊內(nèi)酯高劑量組相比，鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組血清IL-1β含量略高，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），提示小白菊內(nèi)酯高劑量組在降低血清IL-1β含量方面的效果與鹽酸氨基葡萄糖相當。綜上所述，小白菊內(nèi)酯能夠顯著降低實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎模型血清中的IL-1β含量，減輕機體的炎癥反應(yīng)，且高劑量的小白菊內(nèi)酯效果更為顯著，與陽性對照藥物鹽酸氨基葡萄糖的療效相當，進一步表明小白菊內(nèi)酯在治療骨關(guān)節(jié)炎方面具有潛在的應(yīng)用價值。四、分析與討論4.1兔骨關(guān)節(jié)炎模型的有效性在本研究中，采用右后肢伸直位管型石膏固定法建立兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型。從實驗結(jié)果來看，該模型具有較高的有效性和可靠性。造模后，模型對照組及各給藥組兔子的膝關(guān)節(jié)均出現(xiàn)了明顯的病理改變。肉眼觀察可見膝關(guān)節(jié)腫脹、畸形，關(guān)節(jié)周圍組織充血、水腫，關(guān)節(jié)表面粗糙不平，有明顯的骨質(zhì)增生和骨贅形成，關(guān)節(jié)間隙變窄。這些大體觀察到的變化與臨床骨關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)表現(xiàn)高度相似，直觀地反映了骨關(guān)節(jié)炎的病理特征。在組織病理學方面，光鏡下觀察模型對照組的軟骨組織，可見軟骨表面粗糙、糜爛，出現(xiàn)大量裂隙和缺損，軟骨細胞數(shù)量顯著減少，形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，各層結(jié)構(gòu)模糊不清，軟骨基質(zhì)染色變淺，潮線模糊甚至中斷。這些組織學改變符合骨關(guān)節(jié)炎的典型病理變化，進一步證實了模型的成功建立。此外，通過對膝關(guān)節(jié)活動度的測量發(fā)現(xiàn)，造模后模型對照組及各給藥組的膝關(guān)節(jié)活動度較正常對照組明顯降低，表明骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生導(dǎo)致了關(guān)節(jié)功能的受損，這也與臨床實際情況相符。綜合以上大體觀察、組織病理學檢查以及膝關(guān)節(jié)活動度測量的結(jié)果，可以明確本研究中采用的右后肢伸直位管型石膏固定法能夠成功建立兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型，該模型能夠較好地模擬人類骨關(guān)節(jié)炎的病理過程和臨床癥狀，為后續(xù)研究小白菊內(nèi)酯對骨關(guān)節(jié)炎的治療作用提供了可靠的實驗基礎(chǔ)。4.2小白菊內(nèi)酯對軟骨組織病理學的影響本研究通過大體觀察、形態(tài)學評分以及光鏡觀察等多種方法，深入探究了小白菊內(nèi)酯對實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織病理學的影響。在大體觀察中，正常對照組的膝關(guān)節(jié)外觀正常，關(guān)節(jié)表面光滑，無腫脹、畸形等異常表現(xiàn)，這表明正常的膝關(guān)節(jié)軟骨組織結(jié)構(gòu)完整，能夠維持正常的生理功能。而模型對照組的膝關(guān)節(jié)則出現(xiàn)了明顯的腫脹、畸形，關(guān)節(jié)表面粗糙不平，有明顯的骨質(zhì)增生和骨贅形成，關(guān)節(jié)間隙變窄。這些病理改變與骨關(guān)節(jié)炎的典型臨床表現(xiàn)相符，說明模型建立成功，同時也表明骨關(guān)節(jié)炎會對膝關(guān)節(jié)軟骨組織造成嚴重的破壞。小白菊內(nèi)酯各劑量組的膝關(guān)節(jié)病理改變較模型對照組均有不同程度的改善，且呈現(xiàn)出劑量依賴性。低劑量組的膝關(guān)節(jié)腫脹程度有所減輕，關(guān)節(jié)表面粗糙程度改善，骨贅形成相對減少；中劑量組的腫脹進一步減輕，關(guān)節(jié)表面相對光滑，骨贅明顯減少；高劑量組的膝關(guān)節(jié)外觀接近正常，腫脹基本消失，關(guān)節(jié)表面光滑，僅可見少量微小骨贅。這一系列變化直觀地顯示出小白菊內(nèi)酯能夠有效減輕骨關(guān)節(jié)炎引起的膝關(guān)節(jié)病理損傷，且隨著劑量的增加，改善效果更加顯著。在形態(tài)學評分方面，依據(jù)Mankin’S評分標準對軟骨大體形態(tài)和光鏡觀察結(jié)果進行評分。正常對照組的軟骨大體形態(tài)學評分和組織形態(tài)學評分均較低，分別為0.25±0.50分和0.50±0.53分，反映出正常關(guān)節(jié)軟骨形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，細胞排列整齊，無明顯病理改變。模型對照組的評分顯著高于正常對照組（P<0.01），分別達到7.50±1.04分和8.75±1.28分，這進一步證實了模型對照組的關(guān)節(jié)軟骨出現(xiàn)了嚴重的病理變化。小白菊內(nèi)酯各劑量組的評分均顯著低于模型對照組（P<0.05），且呈現(xiàn)出劑量依賴性。高劑量組的評分最低，大體形態(tài)學評分為3.75±0.97分，組織形態(tài)學評分為4.50±0.97分。這表明高劑量的小白菊內(nèi)酯對軟骨病理改變的改善作用最為明顯，能夠有效減輕軟骨表面的損傷，促進軟骨細胞的修復(fù)和基質(zhì)的合成，使軟骨形態(tài)和結(jié)構(gòu)更接近正常水平。光鏡觀察軟骨HE染色結(jié)果進一步揭示了小白菊內(nèi)酯對軟骨組織病理學的影響。正常對照組的軟骨組織在光鏡下呈現(xiàn)出典型的正常結(jié)構(gòu)，軟骨表面光滑平整，軟骨細胞數(shù)量豐富，形態(tài)規(guī)則，排列緊密整齊，各層結(jié)構(gòu)清晰，層次分明，軟骨基質(zhì)染色均勻，潮線清晰連續(xù)。模型對照組的軟骨組織則出現(xiàn)了明顯的病理改變，軟骨表面粗糙不平，出現(xiàn)大量裂隙和缺損，軟骨細胞數(shù)量顯著減少，形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，軟骨基質(zhì)染色變淺，潮線模糊甚至中斷。小白菊內(nèi)酯低劑量組的軟骨組織病理改變較模型對照組有所減輕，軟骨表面的粗糙程度有所改善，裂隙和缺損數(shù)量減少，軟骨細胞數(shù)量有所增加，細胞排列雖仍存在一定的紊亂，但較模型對照組有所改善。中劑量組的軟骨組織改善更為明顯，軟骨表面基本光滑，僅存在少量微小的裂隙，軟骨細胞數(shù)量進一步增加，形態(tài)更加規(guī)則，排列較為整齊，各層結(jié)構(gòu)較為清晰。高劑量組的軟骨組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)與正常對照組最為接近，軟骨表面光滑平整，無明顯的裂隙、缺損，軟骨細胞數(shù)量豐富，形態(tài)規(guī)則，排列緊密整齊，各層結(jié)構(gòu)清晰分明，軟骨基質(zhì)染色均勻，潮線清晰連續(xù)。綜合以上結(jié)果，小白菊內(nèi)酯能夠顯著改善實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎模型的軟骨組織病理學變化，減輕軟骨損傷，促進軟骨修復(fù)，且這種改善作用呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴關(guān)系。高劑量的小白菊內(nèi)酯對軟骨組織的保護和修復(fù)作用最為顯著，能夠使軟骨形態(tài)和結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常，這為小白菊內(nèi)酯在骨關(guān)節(jié)炎治療中的應(yīng)用提供了有力的實驗依據(jù)。4.3小白菊內(nèi)酯對血清IL-1β的影響IL-1β作為一種關(guān)鍵的促炎細胞因子，在骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著極為重要的角色。在本研究中，通過ELISA法檢測血清IL-1β含量，結(jié)果顯示正常對照組血清IL-1β含量處于較低水平，為18.56±2.15pg/mL，這表明在正常生理狀態(tài)下，機體的炎癥反應(yīng)處于相對穩(wěn)定的低水平，關(guān)節(jié)軟骨未受到明顯的炎癥刺激，能夠維持正常的生理功能。模型對照組血清IL-1β含量顯著高于正常對照組（P<0.01），高達45.68±4.56pg/mL。這一顯著升高的結(jié)果與骨關(guān)節(jié)炎的炎癥發(fā)病機制高度契合。在骨關(guān)節(jié)炎病理狀態(tài)下，關(guān)節(jié)軟骨細胞、滑膜細胞等受到多種因素刺激，如機械應(yīng)力改變、氧化應(yīng)激等，會大量合成并釋放IL-1β等促炎細胞因子。IL-1β可以通過多條信號通路對關(guān)節(jié)軟骨造成損傷。它能夠抑制軟骨細胞合成Ⅱ型膠原和蛋白多糖，這兩種物質(zhì)是軟骨基質(zhì)的重要組成成分，它們的合成減少會導(dǎo)致軟骨基質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能受損，使軟骨失去彈性和抗壓能力。IL-1β還能激活基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）基因的表達，促進MMPs的合成和釋放，MMPs可以降解軟骨基質(zhì)中的各種成分，如膠原纖維、蛋白多糖等，加速軟骨基質(zhì)的降解，導(dǎo)致軟骨組織的破壞和缺損。IL-1β還可以刺激滑膜細胞增生，促使滑膜細胞分泌更多的炎癥介質(zhì)，如前列腺素E2（PGE2）、一氧化氮（NO）等，進一步加重關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)，形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致骨關(guān)節(jié)炎的病情不斷進展。而小白菊內(nèi)酯各劑量組血清IL-1β含量均顯著低于模型對照組（P<0.05），且呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。其中，小白菊內(nèi)酯高劑量組血清IL-1β含量最低，為25.63±2.87pg/mL。這充分表明小白菊內(nèi)酯能夠有效地降低血清IL-1β的水平，減輕機體的炎癥反應(yīng)。小白菊內(nèi)酯的這種抗炎作用可能是通過多種機制實現(xiàn)的。研究表明，小白菊內(nèi)酯可以特異性地與NF-κB信號通路中的關(guān)鍵蛋白相互作用。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥反應(yīng)中起著核心調(diào)控作用。在正常情況下，NF-κB與其抑制蛋白IκB結(jié)合，以無活性的形式存在于細胞質(zhì)中。當細胞受到炎癥刺激時，IκB會被IκB激酶（IKK）磷酸化，然后被泛素化降解，釋放出NF-κB。NF-κB進入細胞核后，與炎癥相關(guān)基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，啟動這些基因的轉(zhuǎn)錄和表達，從而促進炎癥因子如IL-1β、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等的合成和釋放。小白菊內(nèi)酯可以抑制IKK的活性，阻止IκB的磷酸化和降解，從而使NF-κB無法進入細胞核，阻斷其下游炎癥因子基因的轉(zhuǎn)錄和表達，減少IL-1β等炎癥因子的產(chǎn)生。小白菊內(nèi)酯還可能通過調(diào)節(jié)其他炎癥相關(guān)信號通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路等，發(fā)揮其抗炎作用。MAPK信號通路包括細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等多個成員，它們在細胞增殖、分化、凋亡和炎癥反應(yīng)等過程中發(fā)揮著重要作用。在骨關(guān)節(jié)炎中，MAPK信號通路被激活，參與了炎癥因子的釋放和軟骨細胞的凋亡。小白菊內(nèi)酯可能通過抑制MAPK信號通路中相關(guān)激酶的活性，減少炎癥因子的產(chǎn)生，同時抑制軟骨細胞的凋亡，從而對骨關(guān)節(jié)炎起到治療作用。鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組血清IL-1β含量為30.25±3.28pg/mL，也顯著低于模型對照組（P<0.05），說明鹽酸氨基葡萄糖對降低骨關(guān)節(jié)炎模型兔子血清IL-1β含量具有一定的作用。鹽酸氨基葡萄糖是一種臨床上常用的治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物，它可以通過促進軟骨細胞合成蛋白多糖和Ⅱ型膠原，抑制MMPs的活性，從而起到保護關(guān)節(jié)軟骨、減輕炎癥反應(yīng)的作用。與小白菊內(nèi)酯高劑量組相比，鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組血清IL-1β含量略高，但差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），這提示小白菊內(nèi)酯高劑量組在降低血清IL-1β含量方面的效果與鹽酸氨基葡萄糖相當。綜上所述，小白菊內(nèi)酯能夠顯著降低實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎模型血清中的IL-1β含量，減輕機體的炎癥反應(yīng)，且高劑量的小白菊內(nèi)酯效果更為顯著，與陽性對照藥物鹽酸氨基葡萄糖的療效相當。這進一步表明小白菊內(nèi)酯在治療骨關(guān)節(jié)炎方面具有潛在的應(yīng)用價值，其作用機制可能與抑制NF-κB、MAPK等炎癥信號通路，減少IL-1β等炎癥因子的合成和釋放有關(guān)。4.4與對照藥物鹽酸氨基葡萄糖的比較鹽酸氨基葡萄糖作為臨床上常用的治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物，其療效已得到廣泛認可。在本研究中，將鹽酸氨基葡萄糖作為陽性對照藥物，與小白菊內(nèi)酯進行對比，旨在進一步明確小白菊內(nèi)酯在治療骨關(guān)節(jié)炎方面的優(yōu)勢與不足，為其臨床應(yīng)用提供更有價值的參考。在改善軟骨組織形態(tài)方面，從大體觀察結(jié)果來看，鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組兔子的膝關(guān)節(jié)腫脹明顯減輕，關(guān)節(jié)周圍組織充血、水腫消退，皮膚顏色恢復(fù)正常，關(guān)節(jié)表面較為光滑，骨贅減少，關(guān)節(jié)間隙有所改善，畸形程度明顯減輕。小白菊內(nèi)酯高劑量組的膝關(guān)節(jié)外觀接近正常，腫脹基本消失，關(guān)節(jié)表面光滑，僅可見少量微小骨贅，關(guān)節(jié)間隙正常，無明顯畸形，改善效果與鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組相當。小白菊內(nèi)酯中、低劑量組也有不同程度的改善，但效果相對較弱。在形態(tài)學評分方面，依據(jù)Mankin’S評分標準，鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組的軟骨大體形態(tài)學評分和組織形態(tài)學評分分別為4.25±0.97分和5.00±1.00分，小白菊內(nèi)酯高劑量組的評分分別為3.75±0.97分和4.50±0.97分，兩組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），表明小白菊內(nèi)酯高劑量組在改善軟骨大體形態(tài)和組織形態(tài)方面與鹽酸氨基葡萄糖效果相當。小白菊內(nèi)酯中、低劑量組的評分雖低于模型對照組，但高于鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組和小白菊內(nèi)酯高劑量組，說明其改善軟骨病理改變的效果不如后兩者明顯。在光鏡觀察軟骨HE染色結(jié)果中，鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組的軟骨組織有明顯改善，軟骨表面較為光滑，裂隙和缺損較少，糜爛和剝脫現(xiàn)象得到明顯改善，軟骨細胞數(shù)量增加，形態(tài)相對規(guī)則，排列較為整齊，軟骨基質(zhì)染色加深，潮線清晰程度有所提高，接近正常水平。小白菊內(nèi)酯高劑量組的軟骨組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)與正常對照組最為接近，軟骨表面光滑平整，無明顯的裂隙、缺損，軟骨細胞數(shù)量豐富，形態(tài)規(guī)則，排列緊密整齊，各層結(jié)構(gòu)清晰分明，軟骨基質(zhì)染色均勻，潮線清晰連續(xù)，改善效果與鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組相當。小白菊內(nèi)酯中、低劑量組的軟骨組織病理改變較模型對照組有所減輕，但仍存在一定程度的異常，如軟骨細胞排列仍不夠整齊，基質(zhì)染色較淺等。在降低血清IL-1β含量方面，鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組血清IL-1β含量為30.25±3.28pg/mL，顯著低于模型對照組（P<0.05），說明鹽酸氨基葡萄糖能夠有效降低骨關(guān)節(jié)炎模型兔子血清中的IL-1β含量，減輕炎癥反應(yīng)。小白菊內(nèi)酯高劑量組血清IL-1β含量為25.63±2.87pg/mL，也顯著低于模型對照組（P<0.05），且與鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），表明小白菊內(nèi)酯高劑量組在降低血清IL-1β含量方面的效果與鹽酸氨基葡萄糖相當。小白菊內(nèi)酯中、低劑量組血清IL-1β含量雖低于模型對照組，但高于鹽酸氨基葡萄糖陽性對照組和小白菊內(nèi)酯高劑量組，說明其降低炎癥因子的效果相對較弱。綜合以上各個方面的比較結(jié)果，小白菊內(nèi)酯高劑量組在改善軟骨組織形態(tài)、降低血清IL-1β含量方面的療效與鹽酸氨基葡萄糖相當，且在某些方面表現(xiàn)出更好的改善效果。小白菊內(nèi)酯作為一種天然的化合物，具有來源廣泛、副作用相對較小等優(yōu)勢，在骨關(guān)節(jié)炎的治療中展現(xiàn)出了巨大的潛力，有望成為治療骨關(guān)節(jié)炎的新型藥物。然而，本研究僅為初步探索，后續(xù)還需進一步開展深入的研究，包括小白菊內(nèi)酯的作用機制、藥代動力學、長期安全性等方面的研究，以全面評估其臨床應(yīng)用價值。4.5研究結(jié)果的臨床意義與展望本研究結(jié)果表明，小白菊內(nèi)酯對實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎具有顯著的治療作用，這一發(fā)現(xiàn)具有重要的臨床意義。從軟骨組織病理學角度來看，小白菊內(nèi)酯能夠有效改善骨關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致的軟骨損傷，促進軟骨修復(fù)，使軟骨形態(tài)和結(jié)構(gòu)更接近正常水平。這對于延緩骨關(guān)節(jié)炎的病情進展、減輕患者關(guān)節(jié)疼痛、改善關(guān)節(jié)功能具有重要的潛在價值。在臨床實踐中，骨關(guān)節(jié)炎患者往往因關(guān)節(jié)軟骨的持續(xù)破壞而導(dǎo)致關(guān)節(jié)功能嚴重受損，生活質(zhì)量急劇下降。而小白菊內(nèi)酯的這種對軟骨組織的保護和修復(fù)作用，有望為患者帶來新的治療希望，減少關(guān)節(jié)畸形和殘疾的發(fā)生風險。從降低血清IL-1β含量方面來看，小白菊內(nèi)酯能夠顯著抑制炎癥反應(yīng)，減少炎癥因子對關(guān)節(jié)軟骨的破壞。這不僅有助于緩解骨關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)炎癥癥狀，如腫脹、疼痛等，還能從根本上阻斷炎癥介導(dǎo)的軟骨損傷通路，對骨關(guān)節(jié)炎的治療具有重要的靶向意義。IL-1β作為骨關(guān)節(jié)炎炎癥發(fā)病機制中的關(guān)鍵因子，其水平的降低能夠有效減輕關(guān)節(jié)局部和全身的炎癥反應(yīng)，為骨關(guān)節(jié)炎的治療提供了一個重要的干預(yù)靶點。小白菊內(nèi)酯通過降低IL-1β含量發(fā)揮抗炎作用，為臨床治療骨關(guān)節(jié)炎提供了新的藥物作用機制和治療思路。與臨床常用藥物鹽酸氨基葡萄糖相比，小白菊內(nèi)酯高劑量組在改善軟骨組織形態(tài)和降低血清IL-1β含量方面具有相當?shù)寞熜?，且在某些方面表現(xiàn)出更好的改善效果。這為骨關(guān)節(jié)炎的臨床治療提供了一種新的藥物選擇。小白菊內(nèi)酯作為一種天然的化合物，具有來源廣泛、副作用相對較小等優(yōu)勢，更易于被患者接受，有望成為治療骨關(guān)節(jié)炎的新型藥物。在當前骨關(guān)節(jié)炎治療藥物有限，且部分藥物存在副作用較大等問題的情況下，小白菊內(nèi)酯的出現(xiàn)為臨床醫(yī)生和患者提供了更多的治療選擇，具有廣闊的應(yīng)用前景。然而，本研究仍存在一定的局限性，也為后續(xù)研究指明了方向。在作用機制方面，雖然本研究推測小白菊內(nèi)酯可能通過抑制NF-κB、MAPK等炎癥信號通路發(fā)揮作用，但具體的分子機制尚未完全明確。后續(xù)研究可進一步深入探討小白菊內(nèi)酯在細胞和分子水平的作用機制，例如通過基因敲除、RNA干擾等技術(shù)，明確其作用的關(guān)鍵靶點和信號通路，為其臨床應(yīng)用提供更堅實的理論基礎(chǔ)。在藥代動力學方面，本研究未對小白菊內(nèi)酯在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄情況進行深入研究。了解藥代動力學特性對于確定最佳給藥劑量、給藥途徑和給藥頻率至關(guān)重要。后續(xù)可開展相關(guān)的藥代動力學實驗，采用先進的分析技術(shù)，如液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS/MS）等，精確測定小白菊內(nèi)酯在體內(nèi)的藥代動力學參數(shù)，為臨床合理用藥提供依據(jù)。在長期安全性方面，本研究僅進行了短期的實驗觀察，對于小白菊內(nèi)酯的長期使用安全性尚不清楚。藥物的安全性是臨床應(yīng)用的重要前提，因此后續(xù)需要進行長期的動物實驗和臨床試驗，觀察小白菊內(nèi)酯長期使用對機體各器官系統(tǒng)的影響，評估其潛在的不良反應(yīng)和毒性，確保其臨床應(yīng)用的安全性。還可進一步研究小白菊內(nèi)酯與其他藥物聯(lián)合使用的效果，探索聯(lián)合治療方案，以提高骨關(guān)節(jié)炎的治療效果。也可開展小白菊內(nèi)酯不同劑型（如注射劑、外用制劑等）的研究，優(yōu)化給藥方式，提高藥物的生物利用度和療效。相信通過不斷的深入研究，小白菊內(nèi)酯有望在骨關(guān)節(jié)炎的臨床治療中發(fā)揮重要作用，為廣大患者帶來福音。五、結(jié)論5.1主要研究成果總結(jié)本研究通過建立兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型，深入探究了小白菊內(nèi)酯對實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎軟骨組織病理學及血清IL-1β的影響，取得了以下主要研究成果：兔骨關(guān)節(jié)炎模型建立成功：采用右后肢伸直位管型石膏固定法成功建立兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型。造模后，模型對照組及各給藥組兔子膝關(guān)節(jié)出現(xiàn)明顯腫脹、畸形，關(guān)節(jié)活動度顯著降低，肉眼觀察可見關(guān)節(jié)表面粗糙不平、骨質(zhì)增生、骨贅形成、關(guān)節(jié)間隙變窄等病理改變。組織病理學檢查顯示，軟骨表面粗糙、糜爛，有大量裂隙和缺損，軟骨細胞數(shù)量顯著減少，形態(tài)不規(guī)則，排列紊亂，軟骨基質(zhì)染色變淺，潮線模糊甚至中斷，符合骨關(guān)節(jié)炎的典型病理變化，為后續(xù)研究提供了可靠的實驗基礎(chǔ)。小白菊內(nèi)酯改善軟骨組織病理學變化：小白菊內(nèi)酯各劑量組均能不同程度地改善實驗性兔骨關(guān)節(jié)炎模型的軟骨組織病理學變化，且呈現(xiàn)出劑量依賴性。大體觀察