代謝組學(xué)profiling服務(wù)規(guī)范一、服務(wù)流程規(guī)范（一）樣本采集與預(yù)處理樣本采集需根據(jù)類型（血液、尿液、組織等）制定標(biāo)準(zhǔn)化操作流程。對(duì)于血液樣本，應(yīng)使用真空采血管，抗凝劑選擇需依據(jù)檢測(cè)目標(biāo)：肝素鋰適用于非靶向代謝組學(xué)，EDTA-K2用于脂質(zhì)組學(xué)分析，避免使用肝素鈉（可能干擾質(zhì)譜信號(hào)）。采血后需在30分鐘內(nèi)4℃離心（3000×g，10分鐘），分離血清/血漿后立即分裝至無酶離心管，每管體積不低于200μL，-80℃保存。尿液樣本需采集晨尿或隨機(jī)尿，采集前需空腹8小時(shí)，使用無菌容器，添加NaN?（終濃度0.05%）抑制微生物活性，4℃運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室后經(jīng)0.22μm濾膜過濾，分裝保存。組織樣本需在液氮中速凍，保存溫度不低于-80℃，避免反復(fù)凍融（≤3次），樣本量干重不低于20mg。（二）代謝物提取與檢測(cè)非靶向代謝組學(xué)采用甲醇-乙腈-水（2:2:1，v/v/v）提取體系，樣本與提取液比例為1:10（mg/μL），冰浴超聲30分鐘（功率300W，間隔30秒），4℃靜置1小時(shí)后12000×g離心15分鐘，取上清液進(jìn)行真空干燥，復(fù)溶體積為初始樣本量的1/2（如20mg組織復(fù)溶至10μL）。靶向代謝組學(xué)需根據(jù)目標(biāo)物特性調(diào)整提取條件，如膽汁酸檢測(cè)采用含0.1%氨水的甲醇溶液，氨基酸分析使用5%高氯酸沉淀蛋白。檢測(cè)平臺(tái)選擇遵循“非靶向優(yōu)先LC-MS，靶向結(jié)合GC-MS”原則：LC-MS采用反相色譜柱（C18，100mm×2.1mm，1.8μm），流動(dòng)相A為0.1%甲酸水，B為0.1%甲酸乙腈，梯度洗脫程序（0-2min5%B，2-15min5%-95%B，15-18min95%B）；GC-MS需進(jìn)行衍生化處理（如甲氧胺鹽酸鹽+N-甲基-N-三甲基硅基三氟乙酰胺，80℃反應(yīng)60分鐘），色譜柱選用DB-5MS（30m×0.25mm×0.25μm），程序升溫（50℃保持2分鐘，5℃/min升至300℃，保持5分鐘）。（三）數(shù)據(jù)分析與報(bào)告生成原始數(shù)據(jù)經(jīng)CompoundDiscoverer軟件預(yù)處理（基線校正、峰對(duì)齊、降噪），保留信噪比（S/N）≥3、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）≤30%的特征峰。非靶向分析采用XCMS在線平臺(tái)進(jìn)行峰匹配，結(jié)合mzCloud數(shù)據(jù)庫（覆蓋率≥80%）和自建標(biāo)準(zhǔn)品庫（4000+代謝物）進(jìn)行鑒定，匹配得分≥80分的代謝物納入后續(xù)分析。定量采用同位素內(nèi)標(biāo)法，每個(gè)樣本添加13C標(biāo)記的L-亮氨酸（終濃度1μg/mL）作為內(nèi)標(biāo)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線（R2≥0.99）計(jì)算絕對(duì)濃度。統(tǒng)計(jì)分析包括單變量分析（t檢驗(yàn)、ANOVA，P<0.05）和多變量分析（PCA、PLS-DA，R2Y≥0.8，Q2≥0.5），篩選VIP>1且P<0.05的差異代謝物，進(jìn)行KEGG通路富集分析（FDR<0.05）。報(bào)告需包含樣本信息、檢測(cè)方法、代謝物列表（含保留時(shí)間、質(zhì)荷比、豐度）、差異分析結(jié)果及通路圖，附加原始數(shù)據(jù)和質(zhì)控報(bào)告。二、技術(shù)參數(shù)規(guī)范（一）儀器性能指標(biāo)LC-MS系統(tǒng)：液相部分采用WatersACQUITYUPLC，流速精度≤0.1%RSD，柱溫控制精度±0.5℃；質(zhì)譜采用ThermoQExactiveHF-X，分辨率≥120,000（m/z200），質(zhì)量精度≤5ppm，掃描范圍m/z50-1200，靈敏度（利血平）S/N≥1000:1。GC-MS系統(tǒng)：Agilent7890B-5977B，離子源溫度230℃，四極桿溫度150℃，掃描速度≥5譜圖/秒，質(zhì)量范圍m/z35-650，檢測(cè)限（十六烷）≤1pg/μL。NMR平臺(tái)：BrukerAVANCEIIIHD600MHz，探頭溫度25℃±0.1℃，譜寬≥20ppm，弛豫時(shí)間≥5秒，累加次數(shù)≥128次，信噪比（乳酸）≥500:1。（二）方法學(xué)驗(yàn)證要求線性范圍：靶向代謝物標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度梯度≥5個(gè)點(diǎn)，覆蓋預(yù)期樣本濃度的20%-150%，R2≥0.99。精密度：日內(nèi)精密度（n=6）RSD≤10%，日間精密度（n=3天）RSD≤15%。準(zhǔn)確度：加標(biāo)回收率80%-120%，基質(zhì)效應(yīng)（ME）80%-120%（ME=（基質(zhì)加標(biāo)峰面積/純?nèi)軇┘訕?biāo)峰面積）×100%）。穩(wěn)定性：樣本在4℃放置4小時(shí)、-20℃凍存7天及3次凍融循環(huán)后，目標(biāo)物峰面積變化率≤20%。檢測(cè)限（LOD）和定量限（LOQ）通過3倍和10倍信噪比法確定，LOQ濃度下RSD≤20%。（三）樣本質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)樣本驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：血清/血漿無溶血（血紅蛋白濃度<0.5g/L）、無脂血（甘油三酯<5mmol/L），尿液pH4.5-8.0，組織樣本RNA殘留<10ng/mg。不合格樣本處理：溶血樣本需標(biāo)注并建議重新采集，反復(fù)凍融樣本需在報(bào)告中說明可能影響的代謝物（如乳酸、丙酮酸）。樣本追蹤系統(tǒng)需記錄采集時(shí)間、運(yùn)輸條件、處理人員等元數(shù)據(jù)，采用區(qū)塊鏈技術(shù)確保溯源性（每個(gè)樣本生成唯一二維碼，包含18項(xiàng)關(guān)鍵參數(shù)）。三、質(zhì)量控制體系（一）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控空白對(duì)照：每批次樣本設(shè)置溶劑空白（提取液）、基質(zhì)空白（無代謝物的模擬樣本），空白中目標(biāo)物峰面積需低于LOQ的50%。質(zhì)控樣本（QC）：每10個(gè)樣本插入1個(gè)混合QC（所有樣本等量混合），非靶向分析QC樣本中檢測(cè)到的代謝物數(shù)量變異系數(shù)（CV）≤20%，靶向分析CV≤15%。儀器校準(zhǔn)：每日開機(jī)進(jìn)行質(zhì)量軸校準(zhǔn)（使用校準(zhǔn)液m/z121.0509和922.0098），每周進(jìn)行靈敏度驗(yàn)證（利血平標(biāo)準(zhǔn)品信噪比≥500:1），每月檢查色譜柱柱效（理論塔板數(shù)≥10000/m）。（二）實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)控參與國家計(jì)量認(rèn)證（CMA）組織的能力驗(yàn)證計(jì)劃，每年至少2次，如“血清中20種氨基酸測(cè)定”“尿液有機(jī)酸分析”，結(jié)果需為“滿意”（Z值≤2）。建立實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)機(jī)制，與3家以上權(quán)威機(jī)構(gòu)（如中科院大連化物所、復(fù)旦大學(xué)代謝組學(xué)平臺(tái)）同步檢測(cè)同一批樣本（n=20），代謝物定量結(jié)果的相對(duì)偏差≤25%，差異代謝物重疊率≥70%。（三）異常值處理機(jī)制數(shù)據(jù)異常判定標(biāo)準(zhǔn)：QC樣本中代謝物保留時(shí)間偏移>0.2分鐘、峰面積CV>30%，或樣本中內(nèi)標(biāo)回收率<50%或>150%。異常處理流程：①立即停止實(shí)驗(yàn)，檢查儀器狀態(tài)（如色譜柱壓力、質(zhì)譜離子源污染）；②重新檢測(cè)該批次樣本及QC，若問題持續(xù)則追溯前處理環(huán)節(jié)（如提取試劑批號(hào)、離心參數(shù)）；③記錄異常原因及處理措施，形成《質(zhì)量偏差報(bào)告》（QDR），由技術(shù)負(fù)責(zé)人簽字存檔。四、數(shù)據(jù)管理與安全（一）數(shù)據(jù)存儲(chǔ)與傳輸原始數(shù)據(jù)（.raw、.d格式）存儲(chǔ)于專用服務(wù)器（RAID5陣列，容量≥100TB），備份策略為“本地+云端”雙備份（云端采用阿里云OSS，加密等級(jí)AES-256），保存期限≥10年。數(shù)據(jù)分析中間結(jié)果（峰表、統(tǒng)計(jì)矩陣）采用標(biāo)準(zhǔn)化格式（mzTab、CSV），元數(shù)據(jù)遵循ISA-Tab規(guī)范，包含樣本屬性、儀器參數(shù)、處理步驟等126項(xiàng)字段。數(shù)據(jù)傳輸采用SFTP協(xié)議，客戶端與服務(wù)器雙向認(rèn)證（證書+動(dòng)態(tài)口令），傳輸日志保存≥3年。（二）隱私保護(hù)與合規(guī)性客戶信息加密存儲(chǔ)，樣本編號(hào)采用“項(xiàng)目代號(hào)+隨機(jī)數(shù)字”（如MET2025-001），去標(biāo)識(shí)化處理符合《個(gè)人信息保護(hù)法》要求。數(shù)據(jù)使用權(quán)限分級(jí)管理：技術(shù)員可訪問原始數(shù)據(jù)但不可修改，分析師可處理中間數(shù)據(jù)，負(fù)責(zé)人擁有審批權(quán)限。合作研究需簽訂數(shù)據(jù)使用協(xié)議，明確數(shù)據(jù)所有權(quán)（客戶）、使用權(quán)（雙方）及發(fā)表權(quán)益（共同署名），涉及人類樣本需提供倫理委員會(huì)批件（編號(hào)格式：EC-年份-序號(hào)）。（三）數(shù)據(jù)共享與標(biāo)準(zhǔn)化支持多中心研究數(shù)據(jù)整合，采用MIAPE-Metabolomics規(guī)范（MinimumInformationAboutaProteomicsExperiment），確保數(shù)據(jù)可交互。建立內(nèi)部數(shù)據(jù)庫（包含10萬+樣本的代謝組學(xué)數(shù)據(jù)），定期更新標(biāo)準(zhǔn)品譜圖（每年≥2次），共享數(shù)據(jù)需通過倫理審查并去除個(gè)人標(biāo)識(shí)，發(fā)布平臺(tái)需符合FAIR原則（Findable,Accessible,Interoperable,Reusable）。五、服務(wù)質(zhì)量保障（一）人員資質(zhì)要求實(shí)驗(yàn)人員需持《質(zhì)譜操作上崗證》（經(jīng)中國計(jì)量協(xié)會(huì)培訓(xùn)考核），定期參加技術(shù)培訓(xùn)（每年≥40學(xué)時(shí)），內(nèi)容包括儀器維護(hù)、方法開發(fā)、數(shù)據(jù)處理等。分析師需具備生物信息學(xué)背景（碩士以上學(xué)歷或3年以上經(jīng)驗(yàn)），熟悉MetaboAnalyst、SIMCA等軟件操作，通過“代謝組學(xué)數(shù)據(jù)處理能力認(rèn)證”（通過率≤70%）。質(zhì)量監(jiān)督員需具有5年以上實(shí)驗(yàn)室管理經(jīng)驗(yàn)，每周進(jìn)行2次現(xiàn)場(chǎng)質(zhì)控檢查，每月提交《質(zhì)量月報(bào)》。（二）設(shè)備維護(hù)計(jì)劃LC-MS系統(tǒng)：每日清潔離子源（甲醇沖洗），每周更換流動(dòng)相（有效期≤7天），每月校準(zhǔn)流速和柱溫，每半年更換色譜柱（使用次數(shù)≤500針）。GC-MS系統(tǒng)：每周老化色譜柱（程序升溫至最高溫度保持2小時(shí)），每月清潔進(jìn)樣口襯管，每季度更換隔墊（進(jìn)樣次數(shù)≤100次）。NMR設(shè)備：每周進(jìn)行鎖場(chǎng)和勻場(chǎng)驗(yàn)證，每月檢查探頭匹配，每年由原廠工程師進(jìn)行性能校驗(yàn)。（三）客戶反饋與改進(jìn)建立“三級(jí)反饋機(jī)制”：①技術(shù)支持（24小時(shí)響應(yīng)）解答實(shí)驗(yàn)問題；②項(xiàng)目負(fù)責(zé)人（48小時(shí)內(nèi)）處理數(shù)據(jù)疑問；③質(zhì)量部門（5個(gè)工作日）解決投訴。每季度開展客戶滿意度調(diào)查，指標(biāo)包括報(bào)告準(zhǔn)確性（目標(biāo)值≥95%）、交付及時(shí)性（延期率≤5%）、技術(shù)支持滿意度（評(píng)分≥4.5/5分），調(diào)查結(jié)果納入年度服務(wù)質(zhì)量評(píng)審，持續(xù)改進(jìn)措施需形成《糾正與預(yù)防措施報(bào)告》（CAPA）。六、特殊樣本與場(chǎng)景規(guī)范（一）微量樣本處理針對(duì)單細(xì)胞、激光捕獲顯微切割（LCM）樣本（量<10mg），采用微升級(jí)提取方案：使用200μL離心管，提取液體積50μL，超聲時(shí)間縮短至10分鐘，離心轉(zhuǎn)速提高至16000×g，復(fù)溶后直接進(jìn)樣（進(jìn)樣體積5μL）。檢測(cè)采用納流LC-MS系統(tǒng)（流速300nL/min），色譜柱為capillaryC18（150mm×75μm，1.9μm），離子源為納米電噴霧（電壓1.8kV），靈敏度提升10倍（LOD≤0.1pg/μL）。（二）動(dòng)態(tài)代謝組學(xué)時(shí)間序列樣本（如藥物處理0h、1h、3h、6h）需嚴(yán)格控制采集間隔（誤差≤5分鐘），采用“冰浴-提取-檢測(cè)”流水線作業(yè)（從樣本取出到進(jìn)樣≤30分鐘）。同位素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)（如13C葡萄糖追蹤）需設(shè)置未標(biāo)記對(duì)照組，檢測(cè)前需去除未標(biāo)記代謝物（通過固相萃取柱富集標(biāo)記物），數(shù)據(jù)分析使用MetaboFlux軟件計(jì)算代謝通量（通路活性誤差≤15%）。（三）跨平臺(tái)整合多組學(xué)數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)（如代謝組-轉(zhuǎn)錄組）需統(tǒng)一樣本來源（同一批生物重復(fù)）和實(shí)驗(yàn)條件（如培養(yǎng)環(huán)境、處理時(shí)間），數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化采用z-score轉(zhuǎn)換，相關(guān)性分析使用Pearson系數(shù)（|r|≥0.7，P<0.01）。代謝通路與基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)整合采用Cytoscape軟件，節(jié)點(diǎn)包含代謝物豐度、基因表達(dá)量等多維度數(shù)據(jù)，邊權(quán)重基于通路注釋和文獻(xiàn)證據(jù)（置信度≥0.8）。七、爭(zhēng)議解決與追溯服務(wù)爭(zhēng)議處理流程：①客戶提出書面異議（需包含具體數(shù)據(jù)和質(zhì)疑點(diǎn)）；②技術(shù)團(tuán)隊(duì)在3個(gè)工作日內(nèi)復(fù)核原始數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)記錄；③若為方法學(xué)問題，免費(fèi)重新檢測(cè)（限1次）；若為樣本問題，協(xié)商解決方案（如折扣重做、補(bǔ)充分析）。重大爭(zhēng)議（如數(shù)據(jù)造假）由第三方機(jī)構(gòu)（如中國計(jì)量科學(xué)研究院）仲裁，仲裁費(fèi)用由責(zé)任方承擔(dān)。追溯體系覆蓋全流程：樣本從采集到報(bào)告生成共設(shè)置12個(gè)質(zhì)控節(jié)點(diǎn)，每個(gè)節(jié)點(diǎn)需雙人復(fù)核并簽字，關(guān)鍵步驟（如質(zhì)譜檢測(cè)、