免疫組化在腫瘤病理診療中應(yīng)用第1頁(yè)免疫組織（或細(xì)胞）化學(xué)技術(shù)是免疫學(xué)與組織化學(xué)兩種技術(shù)結(jié)合，它基本原理是應(yīng)用抗原與抗體特異性結(jié)合，再用顯色劑顯色到達(dá)標(biāo)識(shí)細(xì)胞某種抗原物質(zhì)定性與定位檢測(cè)技術(shù)，是一個(gè)方法簡(jiǎn)單，且有效腫瘤標(biāo)識(shí)技術(shù)。當(dāng)前在免疫組化技術(shù)圍繞著提升敏感性與特異性不停改進(jìn)和發(fā)展，但它仍有其不足——應(yīng)用于蛋白水平，敏感性與特異性不足，故應(yīng)與其它組織化學(xué)、電鏡及分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合。

第2頁(yè)一、免疫組化在診療中應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)1．預(yù)防假陽(yáng)性與假陰性，預(yù)防操作中污染，規(guī)范操作，設(shè)陽(yáng)性與陰性對(duì)照。2．選取2種以上同類抗體：當(dāng)前腫瘤均為相關(guān)抗原，特異性不足，各種同類抗體可提升陽(yáng)性率。3．正確評(píng)價(jià)免疫組化結(jié)果：其結(jié)果受抗體、特異性與質(zhì)量、操作、標(biāo)本固定等各種原因影響。第3頁(yè)4．合理選擇抗體：既要符合設(shè)計(jì)要求，價(jià)廉物美，分1、2、3線抗體。5．待檢標(biāo)本抗原保留要好：要求快速、新鮮、充份固定，適當(dāng)固定劑，福爾馬林液固定標(biāo)本要修復(fù)抗原。第4頁(yè)二、免疫組化在腫瘤診療中應(yīng)用（一）上皮性腫瘤標(biāo)識(shí)1．角蛋白（Keratin）：一個(gè)中間絲蛋白，分（1）表皮角蛋白（Epidermalkeratin，EK）——鱗狀上皮或高分化鱗癌標(biāo)識(shí)；（2）細(xì)胞角蛋白（cytokeratin，CK）——低分子角蛋白，對(duì)腺癌、移行細(xì)胞部及低分化鱗癌標(biāo)識(shí)。普通用廣譜型角蛋白抗體為好，慣用。第5頁(yè)2．上皮膜抗原（Epithelialmembraneantigen，EMA）：這亦是慣用上皮細(xì)胞標(biāo)識(shí)抗體，細(xì)胞膜陽(yáng)性，用Zanker’s、Bouin或B5固定液中固定為好。其在低分化和未分化上皮中表示好，但亦可在間變性大細(xì)胞淋巴瘤、惡性橫紋肌樣瘤中表示。

3．橋粒蛋白（Desmoplakin）：主要標(biāo)識(shí)上皮橋粒，DesmoⅡ僅表示于復(fù)層上皮。第6頁(yè)4．癌胚抗原（Carcinoembrgonicantigen，CEA）：是從結(jié)腸癌中分離而得一個(gè)球蛋白，定位于細(xì)胞膜上，對(duì)腸、胃、肺、胰、肝、乳腺等腺癌標(biāo)識(shí)陽(yáng)性，但個(gè)別非上皮腫瘤也可陽(yáng)性。

5．甲胎蛋白（AlphaFetoprotein，AFP）：由胎肝細(xì)胞提取一個(gè)酸性糖蛋白，細(xì)胞漿和膜上表示，它對(duì)肝細(xì)胞癌、卵黃囊癌特異性標(biāo)識(shí)。睪丸第7頁(yè)（二）間葉源性腫瘤免疫組化標(biāo)識(shí)間葉組織包含纖維結(jié)締組織、脂肪、肌肉、血管、骨、軟骨及外周神經(jīng)等，間葉組織腫瘤往往由多向分化原始間葉細(xì)胞產(chǎn)生，存在共性，標(biāo)識(shí)抗體特異性不足，有交叉反應(yīng)。

1．波紋蛋白（Vimentin，Vim）：是一個(gè)細(xì)胞中間絲蛋白抗體，在多數(shù)軟組織腫瘤均可表示，但纖維細(xì)胞較顯著，在一些上皮性腫瘤也有陽(yáng)性反應(yīng)。慣用作間葉源與上皮源腫瘤第一線判別抗體第8頁(yè)2．結(jié)蛋白（Desmin，Des）：平滑肌、橫紋肌均可陽(yáng)性。3．肌動(dòng)蛋白（Actin）：平滑肌、血管內(nèi)皮、肌上皮細(xì)胞標(biāo)識(shí)，HHF35特異。4．肌球蛋白（Myotlobin），肌紅蛋白（myosin）：對(duì)橫紋肌標(biāo)識(shí)很好。

5．第因子Ⅷ，CD34：對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫瘤標(biāo)識(shí)較特異。第9頁(yè)6．S-100蛋白：是一個(gè)周圍神經(jīng)雪旺氏細(xì)胞特異標(biāo)識(shí)抗體，后發(fā)覺(jué)對(duì)脂細(xì)胞、朗格罕氏細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、黑色素細(xì)胞及其腫瘤均可陽(yáng)性。

7．酸性或堿性磷酸酶：對(duì)骨與軟骨腫瘤標(biāo)識(shí)好。第10頁(yè)（三）雙向分化腫瘤標(biāo)識(shí)即有上皮與間葉兩種細(xì)胞分化腫瘤標(biāo)識(shí)，如滑膜肉瘤、間皮肉瘤、腦膜瘤、癌肉瘤、上皮樣肉瘤等，普通采取CK、EMA標(biāo)識(shí)上皮，Vim等標(biāo)識(shí)間葉細(xì)胞。另外有一個(gè)惡性纖維組織細(xì)胞瘤，由纖維細(xì)胞、肌纖維母細(xì)胞和組織細(xì)胞混合組成惡性腫瘤，故應(yīng)用Vim和組織細(xì)胞標(biāo)識(shí)來(lái)診療。第11頁(yè)（四）神經(jīng)細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)識(shí)1．神經(jīng)原特異性烯醇化酶（NeuronSpecificEnolase，NSE）：神經(jīng)原腫瘤標(biāo)識(shí)。2．膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GlialFibrillalyAcidicprotein，GFAP）：腦膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)識(shí)抗體。CD34+F8血管第12頁(yè)3．神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤標(biāo)識(shí)：包含類癌、胰島、垂體瘤、甲狀腺髓樣癌、皮膚Merkel細(xì)胞癌、原始神經(jīng)外胚層瘤（PNET）等，當(dāng)前應(yīng)用NSE、嗜鉻蛋白顆粒A（CgA）及觸突素（Syn）三種抗體同時(shí)或兩種一起用，因NSE不夠特異。第13頁(yè)（五）淋巴網(wǎng)狀組織腫瘤（淋巴瘤）標(biāo)識(shí)1．B細(xì)胞標(biāo)識(shí)抗體：CD20（L26），Ig重鏈（IgG、M、A、E）、輕鏈（λ、κ）、CD79a。2．T細(xì)胞標(biāo)識(shí)抗體：CD45RO（UCHL-1），CD3很好。CD56

3．組織細(xì)胞標(biāo)識(shí)抗體：Mac387、CD14、抗溶菌酶（lysozyme）、抗糜蛋白酶（α-1Antichymotrypsin）等。第14頁(yè)4．霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’slymphoma，HL）R-S細(xì)胞（Reed-Sternbergcell）標(biāo)識(shí)抗體：CD15、CD305．白細(xì)胞共同抗原（leucocytecommonAntigen，LCA）：它對(duì)淋巴網(wǎng)狀細(xì)胞均為膜陽(yáng)性，作第一線抗體為好。注：（1）國(guó)際上將百余種標(biāo)識(shí)抗體統(tǒng)稱為CD（ClusterDesignation）系列。（2）淋巴細(xì)胞標(biāo)識(shí)與R-S細(xì)胞多數(shù)為膜陽(yáng)性，而Ig與組織細(xì)胞標(biāo)識(shí)為胞漿陽(yáng)性。第15頁(yè)（六）腫瘤細(xì)胞增殖活性與細(xì)胞凋亡標(biāo)識(shí)抗體瘤細(xì)胞增殖指數(shù)反應(yīng)細(xì)胞增殖活性，是瘤細(xì)胞新生（惡性）情況客觀指標(biāo)，與凋亡指數(shù)呈反比關(guān)系。慣用抗體有：1．增殖細(xì)胞核抗原（proliferativeneuclearAntigen，PCNA），核陽(yáng)性。

2．Ki-67，Brdu抗體：原要求新鮮組織，新近有Ki-67石蠟切片標(biāo)識(shí)抗體問(wèn)世。第16頁(yè)3．細(xì)胞凋亡（Apoptosis）標(biāo)識(shí)抗體：開始發(fā)覺(jué)細(xì)胞凋亡發(fā)生于正常細(xì)胞受基因調(diào)控性自然性死亡。后發(fā)覺(jué)腫瘤細(xì)胞亦可發(fā)生，而且一些藥品放、化療亦可誘發(fā)細(xì)胞凋亡，故成了研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展、治療熱點(diǎn)。其標(biāo)識(shí)抗體有：（1）凋亡抑制基因蛋白抗體：Bcl-2、Bcl-XL、mtp53。（2）促凋亡基因蛋白抗體：Fas/FasL系統(tǒng)，wtp53、Bax、Bcl-xs、Fas等。Tunel標(biāo)識(shí)。第17頁(yè)（七）癌基因與抗癌基因，促轉(zhuǎn)移與轉(zhuǎn)移抑制基因蛋白抗體標(biāo)識(shí)。當(dāng)前應(yīng)用很多，因方法比分子生物學(xué)技術(shù)簡(jiǎn)單，不過(guò)這種結(jié)果不能直接反應(yīng)腫瘤基因活性，只能間接反應(yīng)