ICS67.120X04DB34 Determinationofresiduesofnitrofuranmetabolitesinaquatic2013-02-04發(fā)布2013-03-04實(shí)施安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局DB34/T1839—2013DB34/T1839—2013本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局、安徽省食品質(zhì)量安全檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由安徽省食品質(zhì)量安全檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：阜陽師范學(xué)院、亳州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：盛良全、陳明明、徐華杰、孫春蕾、黃艷梅、杜娜娜、胡曉娟。I1水產(chǎn)品中硝基呋喃類藥物代謝物殘留量檢測方法高效液相色譜熒光法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中硝基呋喃類藥物代謝物3-氨基2-唑烷基酮（AOZ）、5-嗎啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-乙內(nèi)酰脲（AHD）和氨基脲（SEM）殘留量的高效液相色譜熒光測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品中硝基呋喃類藥物代謝物3-氨基-2-唑烷基酮、5-嗎啉甲基-3-氨基-2-唑烷基酮、1-氨基-乙內(nèi)酰脲和氨基脲殘留量的測定。本標(biāo)準(zhǔn)適用于該產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警監(jiān)測及相關(guān)科學(xué)研究。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3原理樣品經(jīng)稀鹽酸水解，在50℃水浴下用2-羥基-1-萘甲醛衍生2h，然后，用乙酸乙酯提取。凈化后用高效液相色譜法（熒光檢測器）測定，外標(biāo)法定量。4試劑和材料4.1試劑：除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。4.2甲醇：色譜純。4.3乙腈：色譜純。4.4乙酸乙酯：色譜純。4.5濃鹽酸：優(yōu)級(jí)純。4.6氫氧化鈉：優(yōu)級(jí)純。4.7硼酸。4.82-羥基-1-萘甲醛（2-NAH含量≥99％。4.9氯化鉀。4.100.40mol/L鹽酸溶液：準(zhǔn)確量取33.30mL濃鹽酸(4.4)，用水定容至1L。4.110.50mol/L氫氧化鈉溶液：準(zhǔn)確稱取5g氫氧化鈉(4.5)，用水溶解并定容至250mL。4.120.025mol/L2-羥基-1-萘甲醛溶液：準(zhǔn)確稱取0.4305g2-羥基-1-萘甲醛（4.7)，用甲醇溶解并定容至100mL。4.13標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：3-氨基-2-惡唑酮、5-嗎啉甲基-3-氨基-2-惡唑烷基酮、1-氨基-乙內(nèi)酰脲、氨基脲，純度≥99％。2DB34/T1839—2013的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，-18℃冷凍避光保存，有效期3個(gè)月。4.15混合中間標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(4.13)各1mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成濃度為40mg/L的混合中間標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1個(gè)月。4.16混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：準(zhǔn)確移取0.5mL，混合中間標(biāo)準(zhǔn)溶液(4.14)于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成濃度為2mg／L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，4℃冷藏避光保存，有效期1周。建議現(xiàn)配現(xiàn)用。4.17微孔濾膜：0.45μm的有機(jī)系和水系濾膜。4.18氮?dú)猓杭兌取?9％。5儀器和設(shè)備5.1高效液相色譜儀：配備多波長熒光檢測器。5.2組織搗碎機(jī)。5.3分析天平：感量0.0001g、0.01g。5.4數(shù)顯恒溫水浴鍋。5.5pH計(jì)：測量精度±0.02pH單位。5.6高速冷凍離心機(jī)：10000r/min。5.7臺(tái)式離心機(jī)：4000r/min。5.8氮吹儀。5.9超聲波清洗機(jī)。5.10容量瓶：lL、100mL、50mL、25mL、10mL。5.11具塞塑料離心管：50mL。5.12刻度試管：l0mL。5.13微量進(jìn)樣器100μL、50μL、10μL。6試樣制備與保存從原始樣品取出有代表性樣品約500g，用組織搗碎機(jī)充分搗碎混勻，裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，將試樣置于-18℃冷凍避光保存。7樣品處理7.1水解和衍生化稱取約5.00g試樣（精確至0.0lg）于50mL塑料離心管中，加入10mL甲醇-0.40mol/L鹽酸混合溶液（7+3，體積比混勻超聲40min后，再加入0.20g氯化鉀，混勻后再超聲30min，然后，以7200r/min離心40min，傾倒上清液于10mL玻璃試管中，再加入2-羥基-1-萘甲醛溶液(4.7)200μL，振蕩搖勻后超聲10min，置50℃恒溫水浴鍋中反應(yīng)2h。7.2提取和凈化3DB34/T1839—2013取出樣品，冷卻至室溫，在60℃下用氮?dú)獯抵?mL，加入4mL超純水，再加入5mL乙酸乙酯，振蕩提取5min后，以10000r/min離心5min，收集乙酸乙酯層，殘留物用5mL乙酸乙酯再提取一次，合并乙酸乙酯層。收集液在40℃下用N2吹至近干后用1mL的乙腈水溶液(V乙腈:V水=8:2)重新復(fù)溶，用0.45μm有機(jī)濾膜過濾后,轉(zhuǎn)移入進(jìn)樣瓶待進(jìn)樣。7.3工作曲線移取適量AMOZ、AHD、AOZ、SEM混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，添加到10mL甲醇-0.40mol/L鹽酸混合按7.1～7.2測定步驟處理，用高效液相色譜儀測定，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線?；虿捎门c待測物相近濃度的標(biāo)樣進(jìn)行單點(diǎn)測定。8測定8.1液相色譜條件8.1.1色譜柱：YMC-PackPolymerC18，250×4.6mml.D.S-6μm，或相當(dāng)者；8.1.2柱溫：40℃;8.1.3流速；0.7mL/min；8.1.4進(jìn)樣量：20μL；熒光檢測條件：靈敏度（EUFS500，增益（Gain）:10；激發(fā)波長發(fā)射波長激發(fā)波長發(fā)射波長8.1.5流動(dòng)相及洗脫條件見70%30%50%50%15%85%15%85%70%30%70%30%表1流動(dòng)相及梯度洗脫條件8.2平行試驗(yàn)按照以上步驟對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測定。8.3空白試驗(yàn)除不稱取試樣外，均按照以上步驟進(jìn)行。9結(jié)果計(jì)算按式(1)進(jìn)行計(jì)算：DB34/T1839—20134ACSVCACSVASm式中：C——試樣中分析物的含量，單位為微克每千克(μg／kg)；Cs——從工作曲線中得到與被測組分相近的濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)；A——被測試樣的峰面積；As——對(duì)應(yīng)Cs標(biāo)準(zhǔn)的峰面積；V——樣液最終定容體積，單位為毫升(mL)；m——樣品溶液所代表最終試樣的質(zhì)量，單位為克(g)。10方法靈敏度、回收率和精密度10.1靈敏度本方法AMOZ、AOZ、AHD、SEM的檢出限（LOD）低于0.5μg／kg；最低定量限(LOQ):AMOZ、AOZ均<0.5μg／kg,AHD、SEM均<1.0μg／kg。10.2回收率添加濃度在1μg／kg、5μg／kg、10μ